细胞毒性T淋巴细胞在乙型肝炎中的作用研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染后，决定病情严重程度及病程转归的一个主要因素是机体的免疫反应能力。由于患者体内抗病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)在清除病毒方面发挥重要的功能，下面就CTL在乙型肝炎中作用研究近况综述如下。     

抗原致敏树突细胞激活细胞毒性T淋巴细胞的体外抗肿瘤作用

目的 利用新型诱导剂钙离子载体(CI)A23187联合重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)体外诱导人外周血单核细胞(PBMC)生成树突细胞(DC),观察DC刺激细胞毒性T细胞(CTL)对人白血病细胞K562细胞产生的特异性杀伤作用.方法 采用密度梯度离心法及黏附法分离出PBMC,分2组培养:传统方法组,加人rhGM-CSF+重组人白细胞介素4+重组人肿瘤坏死因子-α;新型诱导剂组,加入rhGM-CSF+CI A23187.培养开始前,予K562细胞冻融抗原致敏,培养96 h后收集负载抗原的DC.光镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测DC细胞的表面标志;四甲基偶氮唑盐比色法检测各组DC刺激同种异体外周血T细胞增殖的能力、DC对K562细胞的抑制作用和DC激活的CTL细胞对K562细胞的杀伤作用.结果 与传统方法相比,A23187联合rhGM-CSF 诱导培养的DC具有更加典型的树突形态;DC 表面分子CD83、CD1a、CD86、CD40表达(45.2%±1.8%、31.5%±3.9%、40.1%±7.8%、36.4%±6.3%)较传统方法组(16.9%±1.3%、20.4%±3.4%、26.5%±2.2%、22.3%±3.0%)明显高(均P<0.05),且CD14表达(5.7%±0.8%比19.0%±1.6%)明显低(P<0.05);负载K562细胞冻融抗原后的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖作用;对K562细胞有明显抑制作用,效靶比为1:1及10:1时,抑瘤率分别为(25.3±3.8)%比(15.6±2.4)%、(35.6±5.2)%比(22.9±3.2)%(均P<0.05);刺激的CTL对K562细胞有明显的杀伤作用,效靶比为10:1及40:1时,杀瘤率分别为(44.3±6.2)%比(29.9±2.8)%、(61.0±5.2)%比(43.1±4.8)%(均P<0.05).结论 新型诱导剂CI A23187联合rhGM-CSF能更有效地诱导PBMC生成强效成熟DC,K562细胞冻融抗原冲击该DC激活CTL能够获得较强的杀伤K562细胞的能力.     

强直性脊柱炎患者细胞毒性T淋巴细胞变化

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞(T-lymphocytes,Tc)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者中的表达变化.方法 筛选42例AS患者作为研究对象(病例组),20例同时期健康查体者作为对照(对照组).检测2组血小板计数、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-neactveprotein,CRP)水平并记录强直性脊柱炎病情活动指数调查表(bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)评分.应用流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞表型(CD3+CD8+)、胞浆内细胞因子γ干扰素、白细胞介素4的表达.采用t检验分析两组间外周血中Tc、Tc1、Tc2、Tc1/Tc2比值的差异;相关分析采用Pearson检验.结果 病例组与对照组外周血中Tc分别为(21.22±4.27)％ vs (14.23±4.15)％ (t=6.177,P＜0.01),Tc1分别为(0.35±0.08)％vs(1.45±0.27)％(t=24.640,P＜0.01),Tc2分别为(0.53±0.12)％vs(0.41±0.12)％(t=3.608,P＜0.01),Tc1/Tc2比值分别为0.72±0.29vs3.93±1.63(t=6.431,P＜0.01).相关分析显示AS患者外周血中Tc、Tc1、Tc2、Tc1/Tc2比值与血小板计数、ESR、CRP、BASDAI均无相关性.结论 AS患者外周血中Tc1细胞减少,Tc2细胞增多,的确存在Tc1/Tc2细胞的失衡,而且是Tc2细胞占优势.     

负载食管癌抗原肽树突状细胞诱导的细胞毒性T淋巴细胞的杀伤效应

目的:研究负载食管癌抗原肽树突状细胞(DC)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对人食管癌细胞株 TE 1的杀伤效应。方法:用弱酸洗涤TE 1细胞获得抗原肽,将此负载到树突状细胞并与淋巴细胞混合培养,制备 CTL,用Cr51释放法测定其对TE 1细胞的杀伤活性。结果:负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对TE 1细胞的杀伤 率为(78.62±3.51)%,未负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对TE 1的杀伤率为(10.52±5.51)%,二者差异有统 计学意义(P<0.05);负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对酸洗前TE 1杀伤率为(60.63±7.24)%,对酸洗后 TE 1的杀伤率为(8.64±4.12)%,两者差异有统计学意义(P<0.05);负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对 Eca 109的杀伤率为(56.21±8.76)%,而对K59和786 0的杀伤率分别为(15.89±11.80)%和(3.95±2.99)%。 结论:酸洗可以从TE 1细胞上获得有效的抗原肽;负载食管癌抗原肽的DC可以诱导生成高效特异的CTL。     

细胞毒性T淋巴细胞在乙型肝炎中的作用研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染后,决定病情严重程度及病程转归的一个主要因素是机体的免疫反应能力。由于患者体内抗病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在清除病毒方面发挥重要功能,CTL通过非细胞裂解机制控制HBV感染,本文就CTL在乙型肝炎中作用,针对HBV的主要组织相容性复合体Ⅰ类分子的CTL反应特异性,CTL的细胞效应机制以及慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL反应低下的原因等几方面的研究近况进行了综述。     

肺癌患者T淋巴细胞亚群NK细胞活性检测的临床监控

观察肺癌者外周血Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞活性。；方法：采用流式细胞分析法检测肺癌者血中Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞活性，结论肺癌患者外周血Ｔ细胞亚群及ＮＫ细胞活性联合测定可反映机体免疫能状态。     

WT1基因肽诱导细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗白血病的实验研究

目的探讨肾母细胞瘤基因(WT1)肽负载树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病细胞体外靶向免疫治疗作用。方法合成一段针对HLA-A0201锚位的WT1特异性九聚肽(CMTWNQMNL),体外负载来源于HLA-A0201阳性健康志愿者的DC后,诱导产生WT1肽特异性、HLA-A0201限制的CTL(A组),四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察其对白血病细胞株及原代白血病细胞体外杀伤效应。采用流式细胞术直接免疫荧光标记法,检测DC表面抗原CD83、CD1α、CD80、CD86、CD14、HLA-DR和T细胞表面的CD3、CD4、CD8、CD56等的表达。设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照组。结果K562细胞不表达HLA-A0201但高表达WT1基因(1.111±0.128);U937细胞表达HLA-A0201,但极低表达WT1基因(0.006±0.001);NB4细胞表达HLA-A0201,且高表达WT1基因,NB4/WT1D、NB4/WT1A及NB4细胞株中WT1表达水平分别为1.42±0.07、3.20±0.19和1.14±0.09,均显著高于U937细胞株(P均<0.01)。A组CTL能够通过HLA-A0201限制方式杀伤HLA-A0201阳性,WT1+NB4白血病细胞株和白血病患者原代骨髓单个核细胞,而不能特异性杀伤HLA-A0201阳性,WT1-U937细胞胞株及白血病细胞,HLA-A0201-,WT1+K562细胞株及白血病细胞,对HLA-A0201阳性或阴性正常骨髓细胞也无杀伤活性;A组CTL对NB4/WT1D、NB4/WT1A和NB4细胞株杀伤活性无统计学意义(P=0·065,P=0·621)。结论WT1肽特异性CTL能够以HLA-Ⅰ类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病细胞,而对正常骨髓细胞无杀伤作用,WT1基因的表达产物可以作为白血病免疫治疗靶点。     

bcr-abl基因免疫诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能

目的：研究bcr-abl融合基因免疫在慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia CML)中的作用以及探讨CML基因免疫治疗的可行性。方法：设计两条引物扩增bcr-abl融合位点两侧约490bp大小的cDNA,经测序鉴定正确后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1,通过电穿孔法转染至p815细胞,应用G418筛选建立稳定的靶细胞,同时将重组真核表达载体肌肉免疫BALB／c小鼠以获取特异的效应细胞,乳酸脱氢酶（LDH）法检测特异性杀伤率。结果：（1）PCR扩增出可用于基因免疫的位于Bcr-alb融合基因位点两侧的490bp大小的cDNA,序列测定除第452位碱基C突变为T外其余序列均正确;（2）构建了重组真核高效表达载体,命名为pcDNA/bcr-abl;(3)G418梯度筛选建立了稳定表达该融合基因的细胞系,逆转录－聚合酶链反应;（4）bcr-abl基因免疫后的小鼠能有效诱导出特异性细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphcyte,CTL),结论：位于融合位点两侧的bcr-abl基因肌肉免疫小鼠能够诱导特异性CTL,杀伤bcl-abl融合基因转染的靶细胞。     

乳腺癌干细胞的树突状细胞疫苗对细胞毒性T淋巴细胞增殖的影响

目的探讨加载人类乳腺癌干细胞（BSC）的树突状细胞（DC）疫苗对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活化效果的影响。方法从11例乳腺癌患者中分离并评价BSC,探讨BSC作为DC疫苗抗原的适用性,并在体外评估了杀伤BSC的能力。结果BSC表达高水平的干细胞相关分子CD44+、CD24-和CD133+,乳腺癌贴壁细胞表达CD44+、CD24＋和低CD133+。在体内,富集的乳腺癌细胞球表现出比贴壁细胞更强的致瘤能力。使用BSC裂解物的DC疫苗接种引发针对BSC的特异性T细胞应答。DC疫苗接种刺激Th1应答并诱导IFN-γ产生,与活化的CTL数量呈正相关。结论乳腺癌细胞球细胞具有干细胞特性和强致瘤功能,使用BSC抗原的DC接种可引发有效的抗原特异性Th1应答,进一步激活抗原特异性CTL并诱导IFN-γ产生。     

C57BL／6小鼠树突状细胞的培养及其诱导细胞毒性T淋巴细胞对FBL-3细胞杀伤效应的研究

目的探讨C57BL／6小鼠树突状细胞（DC）的培养及其诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对FBL-3细胞的杀伤效应。方法应用GM—CSF和114培养C57BL／6小鼠骨髓DC,用冻融法制备FBL-3细胞抗原致敏DC,用3H—TdR法检测T细胞增殖反应的能力,标准的4h51cr释放测定法检测CTL杀伤活性。结果用IL4和GM—CSF联合培养小鼠骨髓细胞3天后,可见细胞形态发生改变,细胞形态不规则。培养第6～8天,细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的DC特征。流式细胞仪检测DC表面分子有CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad表达。FBL-3细胞冻融组和PBS组的DC在体外均可以诱导T细胞增殖,冻融组的DC体外诱导T细胞增殖能力明显高于PBS组。冻融组DC体外诱导的CTL对FBL-3细胞有明显的细胞毒作用。结论应用IL-4联合GM—CSF培养C57BL／6小鼠骨髓细胞,可大量扩增成熟DC,培养的DC符合其自身的特性;用冻融法制备FBL-3细胞抗原致敏DC,可以诱导T细胞细胞大量增殖,并能诱导出杀伤效应较强的CTL。     

恶性肿瘤患者T细胞亚群和可溶性白介素-2受体检测及意义

目的 :了解恶性肿瘤患者免疫功能的改变。方法 :对 2 0 0例恶性肿瘤患者及 30例正常人的T淋巴细胞亚群和可溶性白介素 - 2受体 (SIL - 2R)进行了同步检验及相关性研究。结果 :肿瘤患者CD3、CD4 、CD4 /CD8均低于正常人 (P <0 .0 5) ,SIL - 2R、CD8均高于正常人 (P <0 .0 5) ,其中CD4 /CD8与SIL - 2R呈负相关。结论 :恶性肿瘤患者的免疫功能是低下的。     

慢性炎症和T淋巴细胞活性与心绞痛的相关研究

目的测定冠心病心绞痛患者外周静脉血中白细胞介素-18(IL-18)、C-反应蛋白(CRP)浓度及外周血辅助性T淋巴细胞(Th)功能的改变,观察心绞痛与非感染性炎症及细胞免疫功能之间的关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定外周血清IL-18浓度,速率散射比浊法测量CRP浓度;采用流式细胞分析法检测外周血CD4 细胞内干扰素γ(IFNγ-)和白细胞介素4(IL-4)的表达。同时分离外周血单个核细胞,经植物血凝素刺激培养后,应用ELISA检测培养上清液中IFNγ-和IL-4水平以测定辅助性T淋巴细胞的功能改变。结果与对照组比较,心绞痛组患者炎性因子(IL-18和CRP浓度)和辅助性T淋巴细胞因子(IFNγ-)水平以及IFNγ-/IL-4比值明显高于对照组;IFNγ-染色阳性的细胞占CD4 T细胞的比率为15.34%,明显高于对照组的12.09%。而两组间IL-4水平及IL-4染色阳性细胞比率在两组间未见显著统计学差异。在心绞痛分组中,不稳定型心绞痛(UAP)组的IL-18、CRP、IFNγ-水平以及IFNγ-/IL-4比值明显高于稳定型心绞痛(SAP)组。结论IL-18、CRP、IFNγ-浓度随冠状动脉病变的程度而升高,且与动脉粥样硬化斑块的稳定性有关。提示炎性因子和辅助性T淋巴细胞功能的失调可能参与了心绞痛患者冠脉粥样硬化斑块形成的过程。IL-18与CRP、IFNγ-浓度可能对冠心病心绞痛患者的诊断及预后有重要参考价值。     

新型效应T细胞亚群Th17细胞及其与炎症关系

CD4＋T细胞分化成两个亚型,Th1和Th2细胞。2006年新发现的Th17细胞是一新型的T细胞亚群。它与调节性T细胞在功能上互为相反,与炎症关系密切。现就其分化和调节及其与炎症的关系进行综述。     

T淋巴细胞与新生隐球菌免疫

T淋巴细胞在新生隐球菌的免疫中有重要的地位,通过多种机制发挥抵御新生隐球菌的作用。本文就T淋巴细胞与新生隐球菌免疫的研究进展和作用机制进行综述。     

肺癌与T淋巴细胞亚群关系的研究进展

大量证据显示肺癌的发生、发展与机体的免疫状态有关,正常的免疫系统在机体抗肿瘤的免疫监视功能中起重要作用。在维持机体免疫平衡中T细胞及其亚群起了重要作用,当T细胞亚群在数量上和功能上发生改变时,就可能导致机体免疫功能紊乱而出现一些病理现象。现就肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群变化的研究进展做一综述。     

中晚期肿瘤患者T淋巴细胞和NK细胞检测的临床意义

目的分析中晚期恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞表型和NK细胞测定值的特点、影响因素及其临床意义。方法采用流式细胞术（FCM）检测60例实体肿瘤患者和30例健康人外周血中T淋巴细胞表型和NK细胞的变化。结果中晚期恶性肿瘤患者CD3^＋、CIM^＋、NK16＋56^＋百分率下降，CD8^＋百分率升高，CIM^＋／CD8^＋比值降低，上述指标与健康人比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；患者性别、年龄、肿瘤的部位及病理类型不影响其表达，差异无统计学意义（P〉0．05），结论中晚期肿瘤患者存在细胞免疫功能下降，临床上应对中晚期肿瘤患者提供积极的免疫辅助治疗。     

慢性支气管炎性急性发作期危重病人外周血B和T细胞CD分子的检测

目的 对慢性支气管炎急性期和缓解期患者外周血B细胞和T细胞CD分子检测并了解其变化。方法 用荧光单抗CD19^ 、CD4^ 、CD8^ ／CD28^ 对B细胞和T细胞亚群进行标记和记数。结果 慢性支气管炎急性发作期患者与缓解期患者相比,体内辅助性T淋巴细胞无明显变化,抑制性T淋巴细胞增加,细胞毒性T淋巴细胞减少,B淋巴细胞二者间无差异。结论 因慢性支气管炎急性期危重病人T淋巴细胞亚群变化,造成免疫功能紊乱。因此,在治疗疾病过程中,除对症处理外,另须配合使用提高免疫功能的药物,改善免疫功能。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4单克隆抗体对小鼠结肠炎及IL-17m RNA表达的影响

目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)单克隆抗体(anti-CTLA-4mAb)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性期小鼠结肠炎及IL-17mRNA表达的影响。方法:24只BALB/c小鼠分为普通组(A)、溃疡性结肠炎模型组(B)、CTLA-4单抗干预组(C)和同型对照组(D)。A组小鼠饮用蒸馏水7d;B、C、D组小鼠均饮用5%DSS水溶液7d,C组和D组同时分别予以CTLA-4单抗和同型对照抗体腹腔注射。7d后处死小鼠,观察疾病活动指数(DAI),结肠组织学评分,髓过氧化物酶(MPO)活性,用逆转录-聚合酶连反应(RT-PCR)检测鼠结肠黏膜IL-17mRNA表达。结果:①C组小鼠DAI、结肠组织学评分和MPO活性均显著高于B组,差异有统计学意义(均P<0.05)。②C组小鼠肠黏膜IL-17mRNA表达显著高于B组(P<0.05)。结论:CTLA-4单克隆抗体可加重结肠炎症并使肠黏膜IL-17mRNA表达增加。     

慢性肺心病T淋巴细胞亚群、NK细胞活性及红细胞免疫功能的初步观察

目的:了解慢性肺心病T淋巴细胞亚群、NK细胞活性及红细胞免疫功能变化及临床意义.方法:测定30例肺心病患者急性发作期和缓解期外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞活性及红细胞免疫功能,并与25例正常人对照.结果:肺心病患者急性发作期CD3、CD4、CD4/CD8比值、C3bRR及NK细胞活性均明显低于正常人(P＜0.01),CD8则明显高于正常人(P＜0.01),肺心病伴明显缺氧和高碳酸血症者变化最明显.治疗缓解期上述指标均有不同程度的恢复,但与正常人相比仍有差异(P＜0.05).结论:肺心病病人存在原发性免疫功能障碍,测定T淋巴细胞亚群、NK细胞活性及红细胞免疫功能对了解肺心病病人免疫力、指导治疗有一定临床意义.     

胃癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞检测的临床意义

目的：探讨胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法：采用流式细胞仪测定胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照分析。结果：胃癌患者外周血CD3^＋、CD4^＋、NK细胞数量及CD4^＋／CD8^＋比值较正常对照组均明显下降（P〈0．05）,而CD8^＋细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞业群和NK细胞数量的改变与胃癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3^＋、CD4^＋及NK细胞数量CD4^＋／CD8^＋细胞比值越低,CD8^＋细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异（P〈0．05）。结论：检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于胃癌患者的免疫状态监测。