用杂交瘤技术生产小鸡单克隆抗体的一种新细胞系

从小鸡获取的免疫球蛋白G(IgG)具有一定的共同特性,有利于免疫化学研究和临床应用,但由于生产这种单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系尚未建立,因此未能广泛应用。作者曾试图建立适合于生产McAb的小鸡B细胞系。但以往所选B细胞融合的杂交瘤细胞系在培养过程中很快便丧失分泌抗体的活性。本文报道一种新的杂交克隆(R27H4)可融合成稳定的杂交瘤细胞系,培养数月仍能持续分泌IgG抗体。     

四种抗人IgA单克隆抗体的特性研究

<正> 杂交瘤技术自1975年建立以来就引起了广泛的关注。目前抗免疫球蛋白的单克隆抗体(McAb)已是实验与临床研究的重要试剂,其中抗人IgA McAb国内外已开展了一定的工作。夏恺等报道,建立了四株分泌抗人IgA McAb的杂交瘤细胞系,并应用于鼻咽癌的早期诊断等。国外也有报道,应用其于巨细胞病毒感染的诊断及B细胞发育分化的研究等。 作者建立了二林分泌抗人IgA McAb的杂交瘤细胞系,5A6和2F7,其分泌抗     

单克隆抗体的简易酶标记技术

自从kohler和Milstein 1975年建立杂交瘤技术以来,我国已建立了针对不同抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系百余种。由这些细胞系分泌的单克隆抗体(McAb)是均一的蛋白质。目前McAb在临床上主要用于疾病诊断和了解人类疾病的发病机理。近年来许多学者进行了这方面的探讨。实验表明,纯化后的McAb不易标记酶和荧光素,往往采用标记第二抗体进行间接法检测,因而使实验研究和临床应用受到一定的限制。最近,我们直接用腹水型单克隆     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅳ、抗HSV-2淋巴细胞杂交瘤的建立及人脐带血清在杂交瘤建株中的作用

单纯疱疹病毒(HSV)有二个血清型(HSV-1和HSV-2),二型病毒具有不同的生物学特性。对HSV感染进行型别签定,有助于疾病的治疗、预后及流行病学研究。由于二型病毒间存在广泛的交叉反应,用常规抗血清难以鉴别。本文应用细胞杂交技术,建立了产生抗HSV-2型特异性McAb的杂交瘤细胞系,并对人脐带血清在杂交瘤细胞建株中的作用,以及McAb用于临床HSV分离株的分型做了初步探讨。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅲ、单克隆抗体的体外中和作用及动物体内保护作用

单克隆抗体(McAb)具有高度特异性,在病毒性疾病的诊断、防治及研究中具有广阔的应用前景。作者曾报道建立了产生抗单纯疱疹病毒(HSV)McAb的杂交瘤细胞系,并在临床检测HSV抗原中应用抗HSV McAb,发现其具有特异性强、敏感度高等优点。本文报道抗HSV McAb在体外及动物体内HSV感染中的中和作用及保护作用,旨在为研究抗HSV McAb的免疫学特性及临床治疗应用提供实验证据。     

人白细胞介素15单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :用rhIL 15与沙门氏菌裸菌相偶联制备IL 15单克隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,以便为疾病的诊断、治疗和发病机制的研究提供可靠的生物制剂。方法 :将纯化的rhIL 15蛋白与沙门氏菌裸菌相偶联制成免疫原 ,用脾内、腹腔、静脉三种途径相结合免疫BALB c小鼠 ,以PEG为促融剂 ,将脾细胞与SP2 0细胞进行融合 ,HAT选择培养 ,间接ELISA筛选阳性克隆 ,通过多次克隆化 ,获得稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞株 ,并对所获得的细胞株及分泌的McAb特性进行了分析。结果 :获得 4株能稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞系 (hybridomacell,Hc) ,ELISA法检测其效价分别为 1:10 6 、1:10 7、1:10 7、1:10 7。Dotblot检测IL 15的灵敏度为 1 5ng ,其中一株 (1 7E4 )尚可用于Westernblot检测。结论 :成功制备了 4株IL 15McAb杂交瘤细胞系。     

抗人IgM重链McAb的研制和应用 Ⅱ.在临床检测中的应用

抗人IgM抗血清是早期诊断临床感染的重要试剂。近年来,国内外先后制备成抗人IgM McAb。我们为配制全套抗人Ig试剂,也建立了16株分泌抗人IgM McAb杂交瘤细胞株,并对其特性进行了详细的分析,本文着重报道该类McAb的实用价值。     

抗白细胞介素-2受体单克隆抗体制备及其应用研究的进展

自1981年Uchiyama等建立第一株抗白细胞介素 2受体(IL_2R)杂交癌抗Tac以来,国外从事这方面的研究工作越来越多。在早期,研究者门试图得到以下几种类型的抗iL_2R的单克隆抗体(McAb)杂交瘤:(1)可以阻断IL_2对IL_2R的作用。(2)有类似于IL_2作用。(3)不同于前两种作用的抗体。目前,所获得的抗IL_2R的杂交瘤细胞系主要是小鼠抗人IL_2R、大鼠抗小鼠iL_2R及小鼠抗大鼠IL_2R。应用这些杂交瘤细胞系分泌的McAb对上述三个种源的IL_2R的分子结构、基因组成及定位、受体的分布与疾病的关系,以及某些免疫学疾病的诊断和治疗方面的研究都取得了重大的进展。并且展示了远大的发展前景。本文就这方面的研究进展作以下综述。     

森林脑炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及实验研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备高纯度抗体国内外已有不少报道、在病毒学方面的应用更为普遍。但是,有关森林脑炎病毒(简称TBEV)的的单克隆抗体目前国内尚未见有报道,国外仅见M.Novak(1982)建立了一株分泌IgM的S—16杂交瘤细胞系。本文建立了一株稳定分泌抗TBEV杂交瘤细胞系。经辣根过氧化物酶和异硫氰酸荧光素标记初步证实可供TBEV的实验诊断,经小鼠实验性治疗证实有一定效果。     

鼠源性JEV-McAh用于快速诊断及免疫治疗的实验研究

本文综合报道了本室近年来在鼠源性JEV-McAb用于快速诊断及免疫治疗方面的研究结果。(1)应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了6株稳定分泌JEV-McAb杂交瘤细胞系,并鉴定了它们的生物学和免疫学特性;(2)建立了用单抗快速检出JEV抗原、抗体及免疫复合物的方法;(3)对3株有中和活性     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_3,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养巳6个多月,仍能稳定地分泌单克隆抗体。冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。应用血凝抑制(Hl)试验证明其中9株为特异性分泌抗HFRSVHHAN McAb 的杂交瘤细胞系,1株(2A_(11))是抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系,其中(1:81920)和3G_1(1:40960)具有高滴度的血凝抑制活性。应用微量细胞培养中和试验(NT)证明其中6抗1A_8,1B_3,3D_8,1G_4,3G_1,3G_(11))具有中和活性.尤其3D_8(1:5120)和3G_1(>1:10240)有较高的中和效价。IFA测定了10株杂交瘤细胞的McAb与HFRSV陈株抗原片反应的抗体效价,其中培养上清为1:40～1:320,杂交瘤腹水为1:1万～1:8万。10种单克隆抗体与JEV、HSV-I和正常Vero-E_6细胞抗原片均无交叉反应。但均能与不同疫区、不同宿主分离的HFRSV陈株81-14A,A9和R_(22)抗原片反应,说明HFRSV血凝素McAb具     

杂交瘤细胞的复苏及分泌单克隆抗体稳定性的观察

单克隆抗体(McAb)杂交瘤技术已在医学生物学各个领域中得到广泛应用。为了解杂交瘤细胞冻存一般时间复苏后产生McAb的稳定性,我们复苏了30株杂交瘤细胞,并用其中一部分细胞株制备McAb腹水。本文就杂交瘤细胞复苏后的生长情况及细胞冻存后分泌McAb的稳定性等进行了探讨。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的研制和初步应用

本文采用体细胞杂交瘤技术和酶联免疫吸附试验筛选技术,获得了6株持续分泌抗人甲状腺球蛋白 McAb 的杂交瘤细胞系。这6种 McAb 对人 T_3/T_4、及家兔、小牛、大鼠的甲状腺球蛋白均无交叉反应,但其中4种 McAb 对狗甲状腺球蛋白有不同程度的交叉反应,包括2种 McAb对人甲状腺微粒体也有交叉反应,余2种 McAb 均无交叉反应。将所得杂交瘤细胞接种 BALB/c鼠腹腔,获得高效价的腹水 McAb。本文还以这些 McAb 用免疫组化法,研究和检测病理甲状腺组织中甲状腺球蛋白的可能性进行了初步探索,并讨论了其临床意义。     

人用鼠源性单克隆抗体中鼠源性病毒的检测

加强对人用鼠源性McAb中的鼠源性病毒的检测,对加强McAb人体内应用的质量控制,促进体内应用单抗于临床诊断,预防和治疗均有重要意义。按照我国目前制定的《人用鼠源性McAb生产和质量控制要点》(简称要点)的要求,我们对不同来源的8株分泌McAb杂交瘤细胞株进行了鼠源性病     

基因重组制备鼠/人嵌合McAb研究进展

利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。     

分泌抗HTG(人甲状腺球蛋白)单克隆抗体的杂交瘤细胞系

<正> 内分泌病是免疫介导性疾病中极为复杂的一组疾病,单克隆抗体(McAb)的制备为深入研究该组疾病的发病机制、诊断和防治提供有力的工具。我们选择了与甲状腺炎有关的抗原,于1984年6月建立了一株分泌高效价 HTG McAb 的杂交瘤细胞系。以纯化的 HTG 免疫 BALB/c 小鼠共4次,末次免疫后3天取脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,融合剂的分子量为1,000的聚乙二醇。融合率为6.3%(5.2%～7.3%)。融合后7天用间接血凝试验测定细胞上清液,阳     

人单隆克抗体技术的现状和展望

单克隆抗体(McAb)技术问世13年了,McAb的应用已涉及生物医学的每个领域。但鼠单抗是异种蛋白,注入人体内会诱发免疫反应,临床应用受限,发展人单抗(HMab)势在必行。1977年Steinitz等首次报告用EB病毒(EBV)转化人的B细胞,建立了产生特异性HMab的细胞系。1980年美国的两个实验室几乎同时报告用人一人杂交瘤技术产生特异性HMab,1982年Kozbor等用EBV—杂交瘤技术制备了HMab,由于HMab在医学实践中用途更广,HMab技术为生物医学界普遍关注。但HMab的制备,不能简单地照搬小鼠淋巴细胞杂交瘤技术,其方法和技术要复杂得多,11年来,HMab技术有所改进和发展。一些病毒、细菌、寄生虫,细胞及可溶性抗原的人单抗陆续制备成功,但抗体产量低而不稳定,还有许多难题要解决。     

抗人巨细胞病毒单克隆抗体的建立及初步临床应用

应用人巨细胞病毒AD169株(HcMV-AD169)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得两株(1F9 2H10)分泌抗HCMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。经鉴定,两株McAb的Ig亚类为IgG1,腹水效价间接ELISA法为10~(-5)和10~(-6)。两株McAb仅与HCMV反应,而与其他疱疹病毒无反应,2H10有中和病毒作用而1F9则无。用HCMV-McAb建立抗体捕获ELISA法测定150例孕妇血清中HCMV-IgM抗体,阴阳性总符合率与间接ELISA法相比较,为99.3％(149/150)。文中尚对HCMV-McAb用途作了讨论。     

持久稳定分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

杂交瘤技术创立以来,在生物、医学各领域已广泛应用,各地陆续报导建立了分泌抗白细胞抗原、肿瘤抗原和微生物抗原的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。但在内分泌免疫病方面,有关报导还不多。内分泌免疫病是免疫介导性疾病中尤为复杂的一组疾病,单克隆抗体技术为诊断和深入细致研究其发病机制提供了有力工具。我们选择了     

低血清条件下杂交瘤细胞系生长和McAb产生的研究

本文报告了肾综合症出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)3G1/3F8杂交瘤细胞系在无/低血清条件细胞生长和McAb产生的实验结果,首先将3G1/3FB细胞系培养于小牛血清(CFS)浓度为20％、10％、7.5％、5％、2％、1％和0％的RPMI-1640中观察血清浓度对细胞生长和McAb产生的影响。结果显示在2％～7.5％CBS中培养96h细胞系生长达到最大密度,10％～20％CBS中培养72h即可达到最大密度,CBS低