嗜盐隐杆藻胞外多糖抗肿瘤活性研究

目的探讨嗜盐隐杆藻胞外多糖(exopo lysaccharide of Aphanothece ha lophy tica,EPAH)的抗肿瘤活性。方法以S180肉瘤为肿瘤模型,检测EPAH对肿瘤生长的抑制活性;M TT法检测EPAH对S180肉瘤细胞、Sm cc7721肝癌细胞和H eL a细胞的体外抑制活性;以对荷瘤小鼠免疫器官、血液淋巴细胞数量及淋巴细胞增殖影响、NK细胞杀伤活性和巨噬细胞产生NO及其他细胞因子的影响评价EPAH对小鼠免疫功能的作用。结果EPAH对S180肉瘤生长有显著的抑制作用,其中预防给药和与肿瘤接种同时给药组最大抑瘤率分别达66.79%和47.93%。100μg/mL EPAH对Sm cc7721细胞、H eL a细胞以及S180细胞生长的抑制率达60%以上。EPAH显著提高荷瘤小鼠脾脏和胸腺质量以及血液淋巴细胞数量,促进淋巴细胞增殖反应,增加NK细胞杀伤活性,刺激巨噬细胞产生NO,分泌白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结论EPAH有显著的抗肿瘤活性,并能直接作用于肿瘤细胞,抑制肿瘤生长。EPAH可能是通过增加荷瘤小鼠免疫器官的质量和免疫细胞的数量、促进淋巴细胞分裂,提高NK细胞杀伤活性和巨噬细胞产生NO以及其他细胞因子实现其抗肿瘤活性。     

桑黄液体发酵生产多糖工艺研究

目的 考察不同培养条件对桑黄菌液体发酵生产多糖的影响。方法 通过正交试验设计,对不同培养基种类、起始pH值、发酵温度和摇床转速进行优化,在此工艺基础上,采用5 L发酵罐进行发酵放大试验。结果 采用添加0.3 g/L维生素B1和0.3 g/L维生素B2的PD培养基,起始pH值5,发酵温度28 ℃,摇床转速180 r/min条件下,桑黄菌摇瓶发酵液中胞内多糖和胞外多糖分别为5.80、2.37 g/L;5 L发酵罐发酵液中桑黄胞内多糖和胞外多糖分别为5.85、2.30 g/L。结论 桑黄液体发酵可获得桑黄多糖,本实验结果为桑黄液体发酵工业化生产提供参考。     

黑根霉胞外多糖硫酸酯的制备及其抗肿瘤活性

目的分析EPS硫酸酯化修饰中配料比对硫酸基取代度的影响及其硫酸酯化修饰对EPS抗肿瘤活性的影响。方法采用 氯磺酸-吡啶法修饰EPS,氯化钡-明胶浊度法测定硫酸基取代度,分析酯化剂配料比对硫酸基取代度的影响;红外光谱分析硫酸 基团是否与EPS结合形成硫酸酯;CCK-8法检测EPS硫酸酯（SEPS）抑制人结肠癌HCT 116增殖活性;Annexin V-FITC/PI双染 法检测SEPS 诱导HCT 116 细胞凋亡活性。结果酯化剂和EPS 配料比1∶1 和2∶1 条件下产物硫酸基取代度分别为0.98% （SEPS-1）和1.18%（SEPS-2）,增加酯化剂配料比可以提高产物取代度（P<0.05）。红外光谱分析发现1249 cm-1附近出现-OSO3 - 的S=O 伸缩振动吸收峰,表明硫酸基团与EPS 结合形成硫酸酯。CCK-8 实验表明,在0.02~0.10 mg/L 各浓度梯度范围内, SEPS-1对HCT 116细胞增殖的抑制率明显高于EPS（P<0.05）;在0.04、0.06、0.10 mg/mL浓度梯度水平时,SEPS-2活性高于EPS （P<0.05）;在0.04~0.08 mg/L 各浓度梯度水平,SEPS-1 活性高于SEPS-2（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示SEPS-1 诱导 HCT 116细胞凋亡活性较EPS明显增强,随着SEPS-1浓度的增加,发生早期凋亡的细胞与坏死细胞相应增加,并呈现剂量依赖 性,0.06、0.08、0.10 mg/mL处理组细胞早期凋亡率分别为6.38%、11.8%与12.5%,晚期凋亡和坏死细胞率分别为5.26%、8.04%、 6.80%。结论黑根霉EPS硫酸酯化修饰中,酯化剂配料比对产物取代度有直接影响,增加酯化剂配料比可以提高产物取代度。 黑根霉EPS硫酸酯化修饰可以提高其抗肿瘤活性,但取代度高低与活性高低没有直接关系。     

桑黄粗多糖抗肿瘤及对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的 研究桑黄粗多糖的抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 体外培养S180肉瘤细胞．接种健康小鼠，建立荷瘤小鼠模型。将小鼠随机分组，①蒸馏水组②桑黄粗多糖高、中、低剂量组。观察计算抑瘤率、腹腔巨噬细胞吞噬指数及吞噬率、外周血淋巴细胞转化率、血清溶血素水平、以及血清中细胞因子TNF-α、IL-4含量。结果 桑黄粗多糖高、中、低剂量组对小鼠S180肉瘤均有抑制作用，能明显提高荷瘤小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬指数与吞噬率、外周血淋巴细胞转化率及血清溶血素水平，并能提高血清中细胞因子TNF-α含量，对血清中细胞因子IL-4含量的影响作用不显著。结论 桑黄粗多糖具有抗肿瘤以及增强荷瘤小鼠免疫功能的作用。     

小分子Rhizobium sp.N613胞外多糖的羧甲基化及其抗肿瘤活性

目的建立小分子Rhizobium sp. N613胞外多糖羧甲基化的制备工艺并研究其抗肿瘤活性。方法以乙醇为溶剂,用一氯乙酸对小分子Rhizobium sp. N613胞外多糖(LREPS)进行羧甲基化修饰,通过正交试验考察了乙醇体积分数、一氯乙酸用量、氢氧化钠用量、醚化温度及时间对羧甲基化LREPS(CM-LREPS)羧甲基取代度(DS)的影响,并获得一系列CM-LREPS产物。红外图谱表征CM-LREPS分子结构。选取4组取代度(0.285,0.531,0.659和0.899)的CM-LREPS样品进行了小鼠肝癌腹水瘤H22抑瘤效果检验。结果红外图谱分析表明,实现了LREPS的羧甲基化。抗肿瘤试验表明,取代度为0.659的CM-LREPS效果最佳,抑瘤率高达59.2%。以取代度和抑瘤率为检测指标,确定CM-LREPS最佳制备工艺条件为:乙醇质量分数为90%,LREPS用量为2.0 g,一氯乙酸用量为3.0 g,氢氧化钠用量为4.0 g,醚化温度为40°C,反应时间为4 h。结论建立了CM-LREPS制备工艺并获取了相关抗肿瘤技术参数,为该多糖制剂的生产应用奠定了一定基础。     

不同相对分子质量的黑根霉胞外多糖的生物活性

目的 探讨不同相对分子质量黑根霉胞外多糖的抗氧化、抗肿瘤和免疫调节活性。方法 通过分级醇沉从黑根霉的发酵液中分离得到3种不同相对分子质量的多糖,分别命名为RPS-1,RPS-2和RPS-3,检测3种多糖对DPPH、ABTS和羟自由基的清除活性。体外培养小鼠前胃癌细胞MFC、人非小细胞肺癌细胞A549和小鼠巨噬细胞RAW 264.7,给药48 h或24h后CCK-8法检测各组细胞存活率,一氧化氮试剂盒检测RAW 264.7细胞上清液中的NO水平,流式细胞仪检测3种多糖对A549细胞凋亡率的影响。结果 RPS-1,RPS-2和RPS-3均具有较好的抗氧化活性,中等相对分子质量多糖RPS-1对DPPH和ABTS自由基的清除活性显著高于RPS-2和RPS-3（P<0.05）,低相对分子质量多糖RPS-3对羟自由基的清除活性显著高于RPS-1和RPS-2（P< 0.01）。3种多糖均能够抑制MFC细胞和A549细胞的增殖,激活巨噬细胞RAW 264.7,诱导A549细胞凋亡。高相对分子质量多糖RPS-2对MFC和A549细胞增殖的抑制活性高于RPS-1和RPS-3（P>0.05）,RPS-2处理后A549细胞的凋亡率显著高于RPS-1和RPS-3（P<0.05）。高相对分子质量多糖RPS-2促进RAW 264.7细胞增殖的活性显著高于RPS-1和RPS-3（P<0.05）,RPS-2处理后的RAW 264.7细胞释放的NO含量显著高于RPS-1和RPS-3（P<0.01）。结论 3种不同相对分子质量的多糖均具有抗氧化、抗肿瘤和免疫调节活性,低、中相对分子质量多糖RPS-1和RPS-3具有较好的抗氧化活性,高相对分子质量多糖RPS-2具有较好的抗肿瘤和免疫调节活性。     

灰树花胞外多糖(GFP)的降血糖活性检测

灰树花胞外多糖具有较好的降低血糖、改善糖耐量的功能,并且具有无毒副作用、不易反弹的良好效果.     

黄精多糖的抗肿瘤活性研究

目的 研究黄精多糖的抗肿瘤活性.方法 对黄精中的多糖进行了提取、分离、纯化,取得黄精粗多糖,采用动物在体实验,进行黄精多糖对动物移植性肿瘤Heps、Eac的活性研究.结果 黄精多糖各剂量组的瘤质量均小于对照组,均可显著抑制小鼠移植瘤Heps、Eac的生长(P<0.01),抑瘤率均较高,100及50 mg/kg剂量组对动物体质量影响较大(P<0.01).结论 黄精多糖对Heps和Eac瘤株有显著抗肿瘤作用,具有很好的抗肿瘤应用前景.     

桑黄多糖对S180的直接抑制作用

目的研究桑黄多糖对肿瘤S180细胞的直接抑制作用。方法用MTT比色法检测用有无桑黄多糖的培养基培养的肿瘤细胞S180的增殖活性,用流氏细胞仪检测其作用机制是否与凋亡有关及用药后细胞周期的变化。结果与对照组相比,桑黄多糖能直接抑制S180增殖,流式细胞计量术分析显示,桑黄多糖主要通过促进肿瘤细胞凋亡,使瘤细胞增殖周期停滞于G2/M期来抑制肿瘤细胞增殖。结论桑黄多糖能直接诱导肿瘤细胞S180凋亡发挥直接抑制肿瘤作用。     

药用植物桑黄抑制高血糖症的研究

目的了解桑黄抑制高血糖的作用。方法以桑黄菌丝体多糖为实验材料，设计浓度梯度（100、200、400rag／（kg·d）处理链脲佐霉素所导致的糖尿病小鼠7d，结果表明：桑黄菌丝体多糖能降低链脲佐霉素所导致的糖尿病小鼠的血糖浓度。结果桑黄菌丝体多糖高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降糖率分别是0．93％、0．90％和1．99％。结论数据显示桑黄菌丝体多糖高剂量组降糖效果要优于中、低剂量组。     

缝裂层孔菌对小鼠的抑瘤及免疫调节作用

目的：研究缝裂层孔菌（PL）的抗肿瘤作用，初步探讨其抑瘤作用的机理。方法：建立小鼠实体瘤动物模型，连续10 d灌胃给予PL，处死后同时检测治疗组及对照组皮下瘤重、胸腺重、脾重；采用MTT法检测荷瘤小鼠脾T淋巴细胞及B淋巴细胞对ConA及LPS刺激的转化能力；采用绵羊红细胞作为抗原，检测荷瘤鼠抗体生成细胞功能；采用L₉₂₉为靶细胞 ，检测NK细胞杀伤L₉₂₉细胞功能；荷瘤鼠腹腔注射诱导剂诱生巨噬细胞，体外检测巨噬细胞 吞噬中性红功能。结果：PL 2.0、1.0 g•kg^-1可抑制小鼠肝癌、胃癌和S₁₈₀细胞的生长，其对肝癌的抑制率分别为38.19%和37.15%，对胃癌的抑制率分别为32.46%和30.91%，对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制率分别为36.09%和34.16%，与对照组比较差异有显著性（P<0.05）；PL 2.0 g•kg^-1可明显提高小鼠T、B淋巴细胞对ConA及LPS的反应性，提高淋巴细胞转化功能（P<0.05）；抗体生成细胞实验结果显示，PL 2.0及1.0 g•kg^-1剂量组A值高于对照组，说 明其溶血红细胞释放血红蛋白量多于对照组，其抗体生成细胞溶解绵羊红细胞能力强于对照组（P<0.05， P<0.001）；PL 2.0 g•kg^-1也可提高小鼠NK细胞杀伤L₉₂₉细胞功能， 杀伤率为67.82%，明显强于对照组（P<0.01）；PL 2.0及1.0 g•kg^-1还可明显增强小鼠腹腔 巨噬细胞的吞噬功能，与对照组比较差异有显著性（P<0.05，P<0.01）。结论：PL能增强免疫细胞功能 ，提高机体免疫力，其抗瘤作用与激活体内免疫系统有关。     

药用真菌桑黄菌丝体多糖提取工艺的研究

目的筛选药用真菌桑黄菌丝体多糖的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,对影响桑黄菌丝体多糖的提取工艺因素进行了研究。以煎煮液中水溶性多糖的含量为对照,用苯酚一硫酸法对煎煮液中的桑黄多糖进行含量测定。结果桑黄菌丝体多糖的最佳提取工艺为：用50倍量水,温度为90℃,煎煮2h／次,共2次。结论用此工艺提取水溶性多糖简单、易行,方法重现性好,适合于工业化生产来提取多糖。     

桑黄正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的 探讨桑黄正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Phellinus igniarius decoction,BAEP）体外对白念珠菌（Candida albicans）标准株SC5314生物膜形成的影响。 方法 采用二倍稀释法测定BAEP对白念珠菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和抑制50%生物膜形成的最低浓度(sessile minimal inhibitory concentration,SMIC50);采用XTT还原法测定BAEP对白念珠菌生物膜代谢的影响;固体培养基上观察BAEP对白念珠菌菌落形态的影响;倒置显微镜与荧光显微镜下分别观察BAEP对白念珠菌生物膜形态与活性的影响;扫描电镜下观察BAEP对白念珠菌生物膜形态结构的影响;实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测生物膜相关基因ALS1和HWP1的转录水平变化。结果 BAEP对白念珠菌生物膜的SMIC50为1 024 μg/mL;菌落形态实验观察结果显示,1 024 μg/mL BAEP可影响白念珠菌菌落;倒置显微镜、荧光显微镜下显示1 024 μg/mL BAEP可抑制白念珠菌生物膜的形态和活性;扫描电镜下显示1 024 μg/mL BAEP对白念珠菌生物膜有明显的抑制作用;qRT-PCR检测结果显示BAEP可明显下调HWP1的表达水平和上调ALS1基因的表达水平。结论 BAEP对白念珠菌SC5314生物膜的形成有一定的抑制作用。     

桑黄菌丝体多糖对胶原诱导性关节炎大鼠的治疗作用

[目的]研究桑黄菌丝体多糖对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的治疗效果,并探讨其作用机制.[方法]采用永提醇沉法提取桑黄菌丝体多糖.将60只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、桑黄菌丝体多糖低（1 00 mg· kg-1）、中（200 mg·kg-1）、高（400 mg·kg-1）剂量组,每组10只.给药期间采用足趾肿胀容积法测定大鼠非致炎足关节肿胀程度.30 d后麻醉大鼠,截取非致炎足做关节组织病理切片,显微镜下观察.ELISA法检测血清中白介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-10（IL-10）的表达水平.[结果]与模型组比较,阳性对照组和桑黄菌丝体多糖各剂量组均能显著抑制非致炎足足趾肿胀（P＜0.05）,改善关节组织病理情况,降低IL-17、TNF-α、IL-1β的表达（P＜0.05）,升高IL-10的含量（P＜0.05）.[结论]桑黄菌丝体多糖通过抑制炎症细胞因子IL-17、TNF-α、IL-1β的表达,促进抑炎因子IL-10的表达对CIA大鼠起到治疗作用.     

桑黄酸性多糖对胆管结扎所致小鼠肝纤维化的改善作用及其机制

目的：探讨桑黄酸性多糖（PIP）对胆管结扎（BDL）所致小鼠肝纤维化的改善作用,阐明其可能的作用机制。方法：60只4周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组和PIP给药组（PIP组）,每组15只。对照组小鼠只绕胆总管穿过手术线但不结扎,模型组、阳性药组和PIP组小鼠结扎胆管。术后给药3周,末次给药12 h后眼球取血,处死小鼠。称量小鼠体质量和肝脏质量,并计算肝脏指数;微板法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平;双抗体夹心法检测各组小鼠血清中Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和Ⅳ型胶原（ColⅣ）水平;HE染色和天狼猩红染色观察各组小鼠肝组织病理形态表现和肝纤维化程度;检测各组小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平。Western blotting法检测各组小鼠肝组织中核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素加氧酶1 (HO-1)和醌氧化还原酶1 (NQO1)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠体质量差异无统计学意义（P>0.05）,肝脏质量和肝脏指...     

药用真菌桑黄液体发酵工艺的研究

目的：研究不同培养基、不同培养条件对桑黄菌丝生长的影响。方法：通过液体发酵培养,并利用L9(3^4)正交试验筛选出了桑黄液体发酵的优化培养基。结果与结论：玉米粉为最佳碳源,麸皮为最佳氮源,优化培养基配方为：玉米粉5％、麸皮3％、磷酸二氢钾0．3％、硫酸镁0．15％、维生素B1 20μg／100mL、维生素B2 30μg／100mL;最适菌丝体生长的液体发酵条件为：培养温度为26℃,摇瓶转速130r／min,pH值6．5,接种量15％～20％,种子液培养时间为5d,装液量(500mL三角瓶)为140mL．发酵时间为7d。     

氟尿嘧啶白蛋白微球抗瘤作用

目的观察氟尿嘧啶白蛋白微球（FUAM）对荷瘤小鼠的抗肿瘤作刚。方法S180瘤株荷瘤小鼠30只和肝腹水瘤荷瘤小鼠19只各随机分为FUAM组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组和牛理盐水绀。连续给药10d后,s180瘤侏移植小鼠观察和记录小鼠死亡率;记录肝腹水瘤荷瘤小鼠腹水中瘤细胞数及白细胞数。结果第18天时,s180瘤株移植小鼠生理盐水组全部死亡,FuAM组存活67％;第26天时,5-Fu组只存活10％,FUAM组存活达62％。肝腹水瘤株移植小鼠注射FUAM后,活瘤细胞数明显减少,白细胞数无明最减少。结论FUAM町显著延长小鼠的存活期,同时具有明显抗荷瘤小鼠白细胞降低作用。     

双歧杆菌细胞壁抗肿瘤机理的研究

目的:观察双歧杆菌细胞壁(B- CW)的抗肿瘤作用,并探讨其作用机理。方法:把临床新分离的肿瘤细胞加入含B- CW 的培养孔中,用四基偶氮唑盐比色法(MTT法) 测各孔杀伤率。体内法用荷S180 肿瘤小鼠经B- CW 治疗后,分别检测抑瘤率,及其对TNF- α、NO、ANAE、巨噬细胞、IFN、NK 细胞的影响。结果:B- CW 不仅能够在体外抑瘤,而且使巨噬细胞、NK细胞、IFN、NO、ANAE水平均明显升高。结论:B- CW 具有抗肿瘤作用     

姜黄素转化产物抗肿瘤的研究

目的 利用红曲霉菌对姜黄素进行微生物转化,研究姜黄素转化总产物对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及其可能机理,为进一步筛选新型高效的姜黄素类抗肿瘤新药奠定基础.方法 昆明种小鼠腋下接种H22细胞造成荷瘤小鼠模型,姜黄素红曲霉菌转化产物组、菌体对照组、底物对照组,分别以高、中、低剂量(2、1、0.5 g/kg)进行干预治疗;设立正常对照组、荷瘤模型组、环磷酰胺对照组.连续治疗12d,于末次给药后12 h,取血分离血清,测定肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-2 (IL-2);剥取肿瘤,称重,计算抑瘤率;取肝脏、胸腺、脾脏,称重计算脏器指数.结果 姜黄素转化产物高、中、低剂量组的抑瘤作用分别为37.08％、48.91％、26.55％,明显高于同剂量的菌体对照组和底物对照组,但并未高于环磷酰胺对照组.小鼠脏器指数结果显示转化产物各剂量组均高于荷瘤模型组,而菌体对照组、底物对照组与荷瘤模型组比较没有显著差异(P＞0.05).姜黄素转化产物各剂量组血清TNF-α和IL-2水平均高于荷瘤模型组,且高于菌体对照组及底物对照组,并有显著差异(P＜0.05).结论 姜黄素转化后对肿瘤的抑制作用增强,能够增加机体主要免疫器官的脏器指数,提高机体的免疫功能.姜黄素转化后可能是通过提高体内TNF-α水平来直接杀伤肿瘤,或提高IL-2水平增强T细胞免疫应答来抑制肿瘤生长.     

苦参碱对胃癌抑制作用的实验研究

目的 建立稳定的裸鼠胃癌模型,观察苦参碱的抗肿瘤作用.方法 将20只胃癌模型裸鼠随机分为4组,分别为对照组、高浓度苦参碱(100 mg/kg·d-1,HM)组、低浓度苦参碱(50 mg,/kg·d-1,LM)组、环磷酰胺(20 mg/kg·d-,CTX)组.测定各组胃癌成瘤和区域淋巴结肿大情况,并采用病理学检查来明确有无癌肿浸润生长及区域淋巴结转移.结果 建立裸鼠胃癌模型的成功率为100％.大体样本观察发现,HM组、LM组和CTX组胃癌成瘤肿物大小明显小于对照组;并无明显的区域淋巴结肿大;差异有统计学意义(P＜0.05).镜下观察发现,HM组无腹腔内区域淋巴结转移并无癌肿浸润生长,与CTX组无明显差异,但与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05).结论 苦参碱有良好的抗肿瘤和抗转移活性;苦参碱对人胃癌潜在抑制作用提供理论基础.