免疫表型与急性白血病的分型诊断

对426例急性白血病采用APAAP法23种单抗进行免疫分型研究.结果发现:(1)426例中,71.6%可确定为淋巴系或髓系或髓/淋混合型,28.4%不能确定细胞系列.FAB结果仅62.75%得到免疫表型证实,29.5%不能判断细胞起源,7.75%两者分型结果不一致;(2)ANLL140例中,44.29%免疫表型证实为髓细胞型,17.14%仅表达淋巴系标志,38.57%不能判断细胞起源,各髓系标志无明显FAB亚型特异性;(3)ALL260例中,72.67%进一步证实为淋巴细胞型,2. 69%单纯表达髓系标志或混合表达髓系和淋巴系抗原,另外24.62%不能确定细胞起源;(4)FAB不能分型26例中,23例可确定为ALL或ANLL,另外3例仍不能诊断.研究认为,免疫分型是FAB分型的必要补充.     

伴有22三体的t(5;17)变异易位急性早幼粒细胞白血病

目的 探讨一例核型为47,XY,t(5;17),+22的少见急性早幼粒细胞白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)的临床和实验特征.方法 在常规核型分析的基础上,应用荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization,FISH)和多重荧光原位杂交(multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术进一步检测该病例的细胞遗传学异常,并结合文献分析此类少见变异易位的临床特点.结果 FISH检测PML-RARa阴性,但77%的细胞显示存在17号RARa基因的重排或复制;BCR-ABL阴性,但74%的细胞显示有22号染色体的复制或重排.M-FISH明确RARa基因重排系5号与17号染色体易位所致,并证实了22号三体的存在.结论 变异型t(5;17)易位,形成NPM-RARa融合基因的急性早幼粒细胞白血病是APL中少见的类型.骨髓形态表现为奥氏小体缺如,核型中常伴有其它附加染色体异常,全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,ATRA)联合化疗有效,但易复发,合并弥漫性血管内凝血及高白细胞者预后凶险.     

多参数流式细胞术分析急性白血病免疫表型

为了探讨急性白血病免疫表型特征,利用流式细胞术三色荧光直接标记技术CD45/SSC多参数散点图设门方法,对162例急性白血病患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析.结果提示:急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者主要表达CD117(94.9%)、CD13(88.5%)和CD33(70.5%);急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中B-ALL主要表达cCD79a(100%)、CD19(92.1%),T-ALL表达cCD3(100%)、CD2(83.3%);ANLL伴淋系抗原表达(Ly ANLL),以CD7(56.2%)、CD19(31.2%)多见;ALL伴髓系抗原表达(My ALL),以CD13(88.9%)、CD33(27.8%)多见.为此用多参数流式细胞术三色荧光直接标记法进行免疫分型,对急性白血病的确诊、治疗和预后有重要的临床意义.     

高白细胞性急性白血病临床表现与免疫表型研究

目的分析、比较各型高白细胞性急性白血病患者临床症状和白细胞分化的免疫表型,为该疾病的诊断、预后等提供依据。方法采用流式细胞术,对高白细胞性急性淋巴细胞性白血病(HLALL)和高白细胞性急性骨髓系白血病(HLAML)(共25例)、非高白细胞性急性淋巴细胞性白血病(NHLALL)和非高白细胞性急性髓系白血病(NHLAML)(共85例)的临床表现及免疫表型做比较分析。结果与NHLA比较,HLAL发病呈现急性及髓外发展的临床特征;对白血病细胞表面免疫学标记研究发现CD13和CD33为髓系细胞较特异表型,而HLALL可以同时出现多种免疫表型。结论 HLAL发病呈现急性、髓外发展且预测性差,CD33和CD13在白细胞免疫分型的髓系细胞中为较特异标志。     

急性早幼粒细胞性白血病分子生物学研究进展

对急性早幼粒细胞性白血病维甲酸受体家族及ＰＭＬ／ＲＡＲα，ＰＬＺＦ／ＲＡＲα，ＮＰＭ／ＲＡＲα融合基因结构及功能的研究，在阐明独特的维甲酸反应机理，探讨ＡＰＬ发生机制，提高诊断水平，判断预后，监测疗效等方面具有深远意义。     

急性白血病患者骨髓细胞形态和免疫表型同步检测的比较分析

目的 探讨骨髓细胞免疫表型在急性双表型白血病中的诊断价值以及与骨髓细胞形态学的比对研究.方法 利用流式细胞仪四色免疫荧光直接标记技术对230例急性白血病患者进行细胞免疫表型、骨髓细胞形态学分型检测及分析.采用流式细胞术四色免疫荧光直接标记技术与CD45/SSC设门分析技术检测13例双表型急性白血病患者,根据欧洲白血病免疫分类组(EGIL)积分标准进行免疫学分型.结果 230例急性白血病患者免疫分型诊断结果与骨髓细胞形态学和组织化学诊断具有高符合率,其中免疫分型诊断为急性双表型白血病的13例(5.7％).此外,急性双表型白血病患者高表达CD34胞膜抗原(84.6％),提示预后不良.结论 急性双表型白血病发病率较低,骨髓细胞免疫表型对诊断及鉴别双表型急性白血病极为特异,以髓系和B淋巴系抗原共表达为主.应用骨髓细胞形态学和流式细胞术联合检测急性双表型白血病可以提高诊断的准确性,有效地指导临床制定治疗方案和预后判断.     

急性白血病免疫表型分析

目的 用免疫细胞化学法检测急性白血病(AL)的免疫表型特征,从而研究其在AL诊断及分型中的意义.方法 取70例AL患者骨髓或外周血涂片,采用生物素-亲和素桥联碱性磷酸酶酶标法(ABC-AP法)检测14种单克隆抗体(McAb)的表达情况.结果 形态学无法分型的病例通过免疫细胞化学法获得明确诊断.抗原MPO、CD68、CD14、CD41均具有较强的系列特异性.HLA-DR表达率在B细胞急淋中高于T细胞急淋,在M3中低表达.CD7发生交叉表达率最高.伴有淋系抗原表达的急性髓细胞白血病(Ly+AML),易见于年龄轻的男患且贫血程度重.结论免疫表型的测定可提高AL诊断的准确性,有助于AL分型,并为治疗及判断预后提供重要依据.     

白血病相关免疫表型与难治性急性髓细胞白血病的关系

分析白血病相关免疫表型（LAIP）与难治性急性髓细胞白血病（AML）的关系。回顾性分析45例经两个疗程化疗未缓解的难治性白血病患者在发病时经多色流式细胞术检测的免疫表型结果,分析其抗原跨阶段表达（CD34/CD11b、CD34/CD14、CD34/CD15）和抗原跨系列表达（CD7/CD13、CD19/CD13、CD56/CD13）,以54例经两个疗程化疗达到完全缓解（CR）的患者为对照。结果显示,白血病细胞CD34与CD11b共表达在难治组AML表达率为37.8%,而非难治组为13.0%（P=0.004）,其它抗原跨阶段表达（CD34/CD14、CD34/CD15）及抗原跨系列表达（CD7/CD13、CD19/CD13、CD56/CD13）在两组病例中无显著差异（P〉0.05）。结论：CD34/CD11b共表达与难治性AML相关。对这类患者可加大化疗剂量或考虑骨髓移植,以提高患者的长期生存率。     

111例急性T淋巴细胞白血病免疫表型分析

选用一组抗人白细胞表面分化抗原单克隆抗体和基因探针,依靠间接免疫荧光技术、Ap-AAP桥联酶标免疫组化染色和分子杂交手段.对111例急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)进行了免疫分型研究。本研究所观察到的T-ALL细胞表型绝大多数反映着正常胸腺细胞分化发育阶段或某些少见类型细胞的表型特征,亦有少数病例则无正常淋巴细胞相对应的表型,表明T-ALL细胞的高度异质性。对T-ALL表型的研究为今后深入探讨胸腺内淋巴细胞的分化成熟以及T-ALL发生学提供了良好的研究模式。     

一例急性早幼粒细胞白血病同时伴有ins(15;17),t(2;17;20)和三体8异常

目的 对1例伴有ins(15;17),t(2;17;20),+8复杂异常的急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytie leukemia,APE)病例进行细胞和分子遗传学研究.方法 按常规制备染色体,以R显带技术进行核型分析,并先后作多色荧光原位杂交(multiplex fluoresence in situ hybridization,M-FISH)、染色体涂染和PML-RARa双色FISH检测.结果 R显带核型分析为47,XY,2q-,+8,17q+,20p+;M-FISH检测为:47,XY,t(2;17;20)(q24;q21;p13),+8;染色体涂染证实了2qZ4以下片段易位到17q21上和17q21以下片段易位到20p13上;双色FISH示17号染色体上RARa(retinoic acid receptora,RARe)基因部分片段插入到15号染色体形成PNL-RARa融合基因,即ins(15;17)(q22;q21.1q21.3).结论 FISH技术是明确隐匿/插入易位的可靠手段,凡形态学拟诊为APL而常规核型分析未发现t(15;17)者均应进行FISH检测.     

应用FISH、FCM检测APL PML/RARA融合基因及临床应用的研究

目的　研究应用荧光原位杂交技术 (FISH)、流式细胞技术 (FCM)检测急性早幼粒细胞白血病 (APL)PML/RARa融合基因及残留白血病细胞的意义。方法　应用CG、M -FISH、FCM对 30例APL患者初发和缓解期的骨髓标本进行分析 ,分别检测t(15 ;17)易位和PML/RARa融合基因及残留白血病细胞的存在。结果　对初发期骨髓标本进行CG和FISH分析发现 ,10 0 %具有t(15 ;17)易位 ,阳性核型占 6 8%～ 10 0 % ,其中有 8例还伴有其他异常 ;10 0 %具有PML/RARa融合基因 ,且阳性中期相的比例高达 96 %～ 10 0 % ;结果具有显著差异 (P <0 0 0 1)。对CR期的骨髓标本进行CG、FISH分析 ,CG为正常核型 ,FISH仍可检出 0 %～ 4 5 %的PML/RARa融合基因。对CR后 12个月的标本进行CG、FISH分析 ,CG均为正常核型 ;FISH仍可检出 0 %～ 37%的PML/RARa融合基因 ,较CR期有所降低。对这 30例APL患者初发期、完全缓解期及完全缓解后 12个月时进行了FCM检测 ,并得出定性结果。完全缓解期检测结果与M -FISH分析一致 ;对完全缓解后 12个月时M -FISH结果进行定性分析发现 30例患者中有 6例为融合基因阴性 ,相应的FCM定性分析结果却发现只有其中的 2例呈现阴性 ,其余 4例仍然为阳性。随访至CR后 2年 ,发现 7例PML/RARa融合基因阳性中期相比例较高 (CG分     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的研究

目的建立荧光原位杂交技术平台,应用FISH技术检测在CML检测BCR/ABL融合基因,探讨FISH技术在在CML中应用的价值。方法应用FISH对BCR/ABL探针进行前期的验证,建立正常阈值,再应用该探针检测CML中BCR/ABL融合基因,进行临床检测评估。结果主要假阳性信号模式的正常阈值为1G1R1F 11%、1G1R2F 2%。75例样本FISH检测出48例阳性,15例经细胞遗传学检测,12例检测结果与FISH结果一致,3例CG为阴性,FISH检测为阳性。结论荧光原位杂交技术应用于临床检测之前应进行探针的前期验证,制定一套规范实验流程,且FISH技术在CML诊断、分型、临床治疗方案的制定、预后的判断以及微小残留病变检测上均有重要的价值。     

联合间期和中期荧光原位杂交检测发现11q23异常伴D13S319缺失急性髓系白血病一例

目的对1例出现11q23异常伴D13S319缺失的罕见急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者进行多途径细胞遗传学分析,为诊断、治疗及预后分层提供依据。方法应用G+R显带技术对患者24 h培养后的中期分裂相进行染色体核型分析,联合分裂间期和中期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对患者染色体的特定位点进行检测,明确复杂易位和微小缺失片段。结果患者存在混合系白血病基因(mixed lineage leukemia,MLL)重排,形成了MLL-AF10融合基因,并伴有13号染色体D13S319位点的缺失。结论MLL基因重排合并D13S319位点缺失在急性白血病中是否具有双重打击效应应引起临床的重视。在AML患者核型中发现13q-、del(13)(q14)、-13或der(13)任意一种克隆性异常时,应行FISH检测论证及明确缺失片段的大小,以便进行靶向治疗。     

Chromogenic in situ Hybridization is a Reliable Alternative to Fluorescence in situ Hybridization for Diagnostic Testing of 1p and 19q Loss in Paraffin‐Embedded Gliomas

Recent studies imply the importance of rapid and reliable diagnostic assessment of 1p/19q status in oligodendroglial tumors. To date, fluorescence in situ hybridization (FISH) is the most commonly applied technique. FISH, however, has several technical shortcomings that are suboptimal for diagnostic applications: results must be viewed in a fluorescence microscope, results are usually evaluated by a single investigator only, and signal fading excludes physical archiving. Also, in gliomas, the distinction of diffusely infiltrating tumor cells from reactively altered normal tissue may be challenging in fluorescence microscopy. Dual‐color chromogenic in situ hybridization (CISH) has started to replace FISH in some diagnostic tests performed in pathology. Here, we present the first single institute experience with a side‐by‐side analysis of 1p/19q FISH and CISH in a series of 42 consecutive gliomas. FISH and CISH produced identical results for 1p and 19q in 93% of cases (n = 39/42). Discrepant results were reevaluated by repeated FISH and a polymerase chain reaction (PCR)‐based microsatellite marker analysis for loss of heterozygosity. Reevaluation confirmed CISH data in all three cases. We conclude that CISH is a reliable alternative in 1p/19q testing in paraffin‐embedded tissues likely to be more sensitive to detect 1p/19q status than FISH analysis.     

荧光原位杂交技术检测慢性粒细胞白血病微小残留病

目的 研究应用荧光原位杂交技术(FISH)检测慢性粒细胞白血病微小残留病，及用FISH技术对缓解期慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血进行检测，评价其体内微小残留病的意义。方法 应用CG和I-FI舛对30例CML(13例给予化疗、17例移植后)患者初发和／或缓解期的骨髓及外周血标本进行分析，分别检测Ph染色体和BCR/ABL融合基因的存在。结果 对13例临床给予化疗的患者初发期的外周血和骨髓进行CG分析，Ph检出率分别为15％(2／13)、100％(13／13)。同时进行I-FISH分析，均可检出BCR/ABL融合基因。对初发期骨髓的CG、I-FISH分析结果进行统计学分析，两组无显著差异；对外周血的CG、I-FISH分析结果进行统计学分析，两组有显著差异。对其缓解期骨髓CG、I-FISH分析结果进行统计学分析，两组有显著差异；对缓解期外周血CG、I-FISH结果进行统计学分析，两组有显著差异；对缓解期外周血I-FISH和骨髓I-FISH结果进行统计学分析，两组呈显著相关。对17例移植后患者CG、I-FISH结果进行统计学分析，两组有显著差异。结论 FISH技术检测慢性粒细胞白血病微小残留病敏感性大大高于常规细胞遗传学分析；采集缓解期外周血进行荧光原位杂交分析，可作为一种方便易行的手段评价微小残留病。     

应用着丝粒探针检测40例卵巢癌患者8号染色体数目的异常增多

目的 确定卵巢癌中8号染色体数目异常改变的频率，分析此改变与卵巢癌临床参数之间的相关性。方法 应用着丝粒探针通过荧光原位杂交技术对40例卵巢癌标本进行8 号染色体数目检测。结果 40例卵巢癌患者中23例（57.5%）出现8号染色体数目增多，其中8号染色体数目变化与各临床参数之间存在相关性，但无统计学意义。结论 8号染色体数目数目异常增多是卵巢癌特征性遗传改变，有可能成为卵巢癌分子诊断的标志物。     

双色间期荧光原位杂交定量监测治疗中CML患者的肿瘤细胞负荷

目的　研究双色间期荧光原位杂交 (I-FISH)技术监测CML治疗过程中肿瘤细胞负荷的灵敏度及特异性。方法　应用I-FISH、常规细胞遗传学 (CCG)G显带技术和筑巢式逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR)技术对 2 0例治疗中CML患者骨髓中的肿瘤负荷进行检测。结果　对照组骨髓细胞假阳性率为 0 6 %～2 0 % ,分界值为 2 4 5 % ;2 0例患者经IFN -α治疗或骨髓移植后 9/18例(5 0 % )CCG检测到Ph( )细胞 ,阳性细胞率 16 7%～ 10 0 % ;结合正常分界值 ,16 /2 0例 (80 % )经I-FISH检测到BCR -ABL( )肿瘤细胞 ,阳性细胞率 2 8%～ 99 6 %。 16例患者行RT -PCR检查 ,13/16例 (81 3% )融合基因转录本阳性。结论　I -FISH技术可高度灵敏、特异地监测CML患者治疗过程中肿瘤细胞负荷的变化 ,与CCG及RT -PCR相比 ,检测所得结论更加科学、合理和具有说服力。     

Fluorescent in situ hybridization diagnosis of extramedullary nodal blast crisis

The t(9;22)(q34;q11) translocation between bcr and abl genes plays a pivotal role in the pathogenesis and diagnosis of chronic myelogenous leukemia (CML). Fluorescence in situ hybridization (FISH) using specific DNA probes provides a useful and accurate way for the detection of bcr/abl fusion gene in single cell. Here, we report an unusual case of a patient with no prior hematologic disease who initially manifested lymphadenopathy. The lymph node findings were suspicious for T‐lineage lymphoblastic lymphoma, however, his blood and bone marrow at that time were in chronic phase of CML. This presented difficulty for accurate discrimination between CML blast crisis (BC) and non‐Hodgkin's lymphomas (NHLs). To discern where the extramedullary nodal malignancy originated from, we cytologically analyzed lymph node biopsies and bone marrow with FISH to detect bcr/abl fusion signals. Together with the morphology, immunohistochemistry, cytogenetics as well as molecular analysis, the patient was diagnosed as extramedullary T‐lymphoid BC of Ph+ CML. In conclusion, this case is unusual at three levels: first, extramedullary nodal BC as a presenting manifestation of CML is rare and the blasts are of precursor T lymphoblastic lineage, rather than the more common B‐cell lineage; second, this case suggests that extramedullary lymphoid nodal BC of CML can exist independently without the bone marrow developing into BC; and third, FISH analysis on the single neoplastic cell is an accurate way to confirm that the neoplasm is either extramedullary localized blasts of CML or genetically distinct neoplasm. Diagn. Cytopathol. 2013. © 2011 Wiley Periodicals, Inc.     

Fluorescence in situ hybridization (FISH) in the microbiological diagnostic routine laboratory: a review

Early identification of microbial pathogens is essential for rational and conservative antibiotic use especially in the case of known regional resistance patterns. Here, we describe fluorescence in situ hybridization (FISH) as one of the rapid methods for easy identification of microbial pathogens, and its advantages and disadvantages for the diagnosis of pathogens in human infections in the laboratory diagnostic routine. Binding of short fluorescence-labeled DNA or nucleic acid-mimicking PNA probes to ribosomes of infectious agents with consecutive analysis by fluorescence microscopy allows identification of bacterial and eukaryotic pathogens at genus or species level. FISH analysis leads to immediate differentiation of infectious agents without delay due to the need for microbial culture. As a microscopic technique, FISH has the unique potential to provide information about spatial resolution, morphology and identification of key pathogens in mixed species samples. On-going automation and commercialization of the FISH procedure has led to significant shortening of the time-to-result and increased test reliability. FISH is a useful tool for the rapid initial identification of microbial pathogens, even from primary materials. Among the rapidly developing alternative techniques, FISH serves as a bridging technology between microscopy, microbial culture, biochemical identification and molecular diagnostic procedures.