TUNEL法检测体外培养细胞凋亡的体会

ＴＵＮＥＬ(ＴｄＴ ｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ ,ＴｄＴ介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记 )是用于原位检测细胞凋亡情况的一种基本方法。作者在绿茶儿茶素 (ＧＴＣ)诱导ＢＥＬ 740 2人肝癌细胞凋亡的研究中 ,对培养于盖玻片的ＢＥＬ 740 2细胞 (盖片培养细胞 )和ＢＥＬ 740 2细胞涂片 (培养细胞涂片 )进行了ＴＵＮＥＬ染色效果的比较。1　材料和方法1.1　材料　原位细胞死亡检测试剂盒 ,ＰＯＤ为ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。ＧＴＣ :日本产品 ,由中国医学科学院肿瘤研究所程书钧院士惠赠 ,实…     

TUNEL法与EnVision法多重染色技术的应用

我们在酒精性肝病及慢性病毒性肝炎的病理研究中 ,采用ＴＵＮＥＬ法原位检测凋亡细胞 ,选用简便而敏感的ＥｎＶｉ ｓｉｏｎ法免疫组化染色 ,分别显示肝星状细胞、枯否细胞及肝相关淋巴细胞 (Ｐｉｔ细胞 )以改良Ｍａｓｓｏｎ三色染色法做对比染色以显示肝纤维化程度。其结果背景清晰、反差鲜明 ,取得了较好的效果。1　材料和方法1.1　标本　尸检肝组织 2例 ,病毒性肝硬化尸检肝组织 3例 ,组织取材于日本医科大学多摩永山医院。1.2 　试剂　ＴＵＮＥＬ检测试剂盒 (ＡＰ)ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品 (现为罗曼公司 ) ;免疫组…     

TUNEL复合染色显示肝内细胞凋亡

已知肝内除肝细胞可以发生凋亡外 ,增生的小胆管上皮细胞、肝非实质细胞如星状细胞、枯否细胞等均可发生细胞凋亡。它们对维持肝内细胞间的平衡 ,胶原纤维的沉积与降解均发挥着重要的作用[1] 。为了研究肝病组织中各种细胞凋亡的发生发展及形态学改变 ,我们应用较为灵敏的ＴＵＮＥＬ法在石蜡切片中原位检测细胞凋亡。由于肝窦中细胞成分较多 ,为了同时鉴别发生凋亡细胞的类别 ,在ＴＵＮＥＬ法基础上附加显示相应细胞的特异免疫组织化学或辅以特殊染色 ,并以 2种ＴＵＮＥＬ试剂盒与免疫组织化学做对应的染色 ,选择具最佳显示效果的方法。一、…     

TUNEL技术改良

细胞凋亡的研究已成为当今国内外形态学和分子生物学研究的新热点[1] 。检测细胞凋亡的主要方法有形态学和基因组ＤＮＡ的分析。原位检测法由于可在组织原位同时显示凋亡细胞的形态和分布而被广泛采用[2 ] 。原位检测法主要包括 :①末端脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记 (ＴＵＮＥＬ) ;②ＤＮＡ聚合酶Ｉ或Ｋｌｅｎｏｗ大片段介导的原位缺口平移(ＩＮＳＴ)。我们采用Ｉｎｔｅｒｇｅｎ公司生产的原位末端标记试剂盒 ,对福尔马林固定、石蜡包埋的脑组织进行ＴＵＮＥＬ染色 ,在操作手册和已有文献的基础上进行方法改进 ,旨在比较酶消…     

Annexin V联合PI染色法定量检测凋亡细胞

为评价ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双参数法在凋亡检测中的价值,用ＰＩ染色法、ＴＵＮＥＬ法及双参数ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法定量检测地塞米松处理小鼠胸腺细胞凋亡发生率。结果发现其凋亡检出率分别为ＰＩ法２７１９％,ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法３２２８％,ＴＵＮＥＬ法５０１７％。三者之间均有显著差异（Ｐ＜００１）。但ＴＵＮＥＬ法不能将死亡细胞、凋亡细胞区分开来。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法可将正常细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＰＩ ）、凋亡细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ＋ＰＩ ）、死亡细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ＋ＰＩ＋）分开来。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法能检出早期凋亡细胞且更为简单、灵敏、特异,是较为理想的凋亡定量检测方法。     

激光损伤视网膜后神经元凋亡及GFAP表达的研究

目的 观察兔视网膜激光损伤后神经元细胞有无凋亡改变及视网膜Ｍｕｌｌｅｒ细胞胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达变化。方法 应用末脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ－Ｘ切口末标记法（ＴＵＮＥＬ法）标记凋亡细胞。应用免疫组化染色显示视网膜Ｍｕｌｌｅｒ细胞ＧＦＡＰ表示。结果伤后６ｈ、１、３、７ｄ视网膜各层可见散在分布的ＴＵＮＥＬ阳性凋亡细胞,尤以外核层多见,伤后３ｄ,视网膜可见Ｍｕｌｌｅｒ细胞ＧＦＡＰ表达;伤     

急性缺血诱导大鼠心肌细胞凋亡的时间演变和空 …

目的：探讨急性缺血诱导大鼠心肌细胞凋亡的时间演变和空间分布规律。方法：以ＤＮＡ电泳和ＴＵＮＥＬ分析检测ＳＤ大鼠心肌的细胞凋亡情况。结果：缺血２ｈ开始出现ＤＮＡ梯形条带和ＴＵＮＥＬ阳性细胞，ＤＮＡ条带和凋亡指数随缺血时间延长而显著增加（Ｐ〈０．０１）。ＴＵＮＥＬ阳性心肌细胞在缺血区散在分布、缺血边缘区凋亡指数显著高于缺血中央区（Ｐ〈０．０５），缺血区内膜下凋亡指数显著高于外膜下（Ｐ〈０．０１）。结论     

EB病毒LMP1促鼻咽癌细胞生长与CD23、bcl-2表达和凋亡的关系

目的 :探讨ＥＢ病毒ＬＭＰ1表达的促鼻咽癌细胞生长作用与ＣＤ2 3、ｂｃｌ- 2表达和细胞凋亡的关系。方法 :用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＬＭＰ1、ＣＤ2 3和ｂｃｌ- 2蛋白的表达 ;用ＭＴＴ法测定鼻咽癌细胞的生长能力 ;用ＤＮＡ电泳法、流式细胞仪测定法和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标志 (ＴＵＮＥＬ)法检测癌细胞凋亡 ;用ＭＴＴ法观察ＣＤ2 3单克隆抗体对鼻咽癌细胞生长能力的影响。结果 :用含ＬＭＰ1基因质粒转染并表达ＬＭＰ1的鼻咽癌细胞 (Ｌ -ＣＮＥ1 )在 1 5%血清和无血清培养液培养下的生长能力均明显增强 ,并表达ＣＤ2 3蛋白 …     

慢性压力负荷性心衰大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的探讨慢性心衰时是否有心肌细胞凋亡。方法利用末端转移酶介导的切口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及ＴＥＭ法,检测慢性压力负荷性心衰大鼠左、右心室心肌的凋亡细胞。结果在心衰大鼠的左、右心室心肌组织中存在有凋亡的心肌细胞,而在对照组大鼠心肌组织中未见到心肌细胞调亡。结论慢性心衰与心肌凋亡之间有紧密联系。     

子宫平滑肌肿瘤的细胞凋亡及增殖活性研究

一、材料和方法1.材料 :主要取自本教研室 1981～ 1998年诊断子宫平滑肌肿瘤的存档蜡块 79份 ,按Ｂｅｌｌ等[1] 标准进行组织学分型。其中子宫平滑肌肉瘤 2 6例 ,子宫平滑肌瘤 5 3例 (奇异型 8例、上皮样型 3例、核增生活跃型 9例、富于细胞型 19例、普通型 14例 )。2 .末端脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记(ＴＵＮＥＬ)法检测细胞凋亡 :采用德国宝灵曼公司凋亡检测试剂盒。设阳性和阴性对照。阳性细胞核呈棕黄色。以目镜测微网为面积单位在 40 0倍下 (面积为 0 .0 15ｍｍ2 )计数网格中的阳性细胞 ,每例计数 10个网格 ,取其均值…     

胸腺细胞凋亡的电镜观察和DNA裂解原位标记

目的：观察胸腺细胞凋亡的超微结构及其与ＤＮＡ裂解的相互关系。方法：对大鼠进行腹腔内糖皮质激素注射，对胸腺进行光、电镜观察，并作ＴｄＴ介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴｄＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ－ｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ，ＴＵＮＥＬ）。结果：皮质胸腺细胞出现凋亡的超微结构改变，少数细胞出现管网状结构。ＴＵＮＥＬ可标记不同阶段的凋亡细胞。结论：糖皮质激素可引起胸腺皮质细胞凋亡，上皮性网状细胞对凋亡细胞具有活跃的吞噬和降解作用。ＴＵＮＥＬ可选择性标记石蜡切片中的凋亡细胞，但对凋亡的判定需结合形态特点并与坏死鉴别     

胸腺肿瘤组织中EB病毒、细胞增殖和凋亡的检测

目的 研究胸腺肿瘤在广州５所医院的发病情况,与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染是否相关以及肿瘤细胞增殖和凋亡的等级,方法 以４３例胸腺肿瘤和７例胸腺增生组织主研究对象,采用原位分子杂交检测ＥＢ病毒编码的ＥＢＥＲｓ,免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＥＢＮＡ－１,ＬＭＰ－１,ＰＣＮＡ,ｂｃｌ－２和ｐ５３原位细胞凋亡（ＴＵＮＥＬ）方法检测细胞凋亡,结果 （１）胸腺疾病在广州５所医院活检中仅占有０．０５７％,其中肿瘤占７４．     

流式细胞术定量检测细胞凋亡3种方法的比较研究

目的：探讨流式细胞术定量检测细胞凋亡３种方法的价值。方法：同时使用ＰＩ染色，ＴＵＮＥＬ及Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ３壹量检测地塞米松处理小鼠的胸腺细胞凋亡发生率。结果：ＰＩ染色，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ，ＴＵＮＥＬ３种方法凋亡检出率分别为２７．１９％，３２．２８％，５０．１７％，两者之间均有显著差异。     

地塞米松对致敏大鼠气道炎性细胞凋亡及Fas/FasL表达的影响

支气管哮喘是以气道大量炎性细胞浸润为特点的慢性炎症性疾病 ,其中淋巴细胞功能异常占主要地位 ,继而引起多种炎性细胞气道浸润。糖皮质激素是目前治疗哮喘的主要药物之一 ,为探讨其抗炎作用中对炎性细胞凋亡的影响 ,本文采用原位末端终止法 (ＴＵＮＥＬ)对致敏大鼠支气管肺组织炎性细胞凋亡进行原位标记 ,同时用免疫组化 (ＡＢＣ)法观察其支气管肺组织Ｆａｓ/ＦａｓＬ表达的变化 ,并对地塞米松处理后气道的上述变化同步进行比较。实验大鼠 2 4只均分为正常组、阳性对照组和地塞米松处理组 ,采用每日超声雾化吸入 1%卵蛋白致敏建立大鼠过敏…     

生发中心淋巴细胞凋亡与小结树突细胞关系的研究

研究人淋巴结和扁桃体生发中心内的凋亡细胞与小结树细胞之间的关系。方法用ＴＵＮＥＬ和免疫化学方法分别检测凋亡细胞,ＦＤＣ和Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果在生发中心有散在的凋亡细胞且多被巨噬细胞所吴噬;     

胃癌细胞凋亡与巨噬细胞浸润的关系及其意义

有研究表明细胞凋亡与肿瘤发生、发展及治疗有关 ,有资料证实多种基因参与了细胞凋亡调控[1,2 ] 。我们应用原位ＤＮＡ末端转移酶标记法 (ＴＵＮＥＬ)和免疫组织化学技术 ,就细胞凋亡与巨噬细胞浸润的关系进行研究 ,为胃癌治疗和预后预测提供帮助。一、材料和方法1 病例及取材 :6 7例胃癌根治术标本 ,其中 11例乳头状腺癌 ,2 1例管状腺癌 (乳头状腺癌和管状腺癌以下简称为分化腺癌 ) ,2 8例低分化腺癌和 7例未分化癌。分别在癌灶中心和癌灶四周 (癌和癌旁组织各半 )切取 4块。患者中男42例 ,女 2 5例。标本经 4%甲醛固定 ,石蜡包埋 ,4μｍ厚…     

多视场多参数形态定量分析模块在神经研究领域中的应用

缺血性神经元损伤的性质是神经研究关注的热点。但目前用于区分凋亡与坏死细胞的ＴＵＮＥＬ技术,较易受主观因素的影响。本实验和图像分析技术对缺血动物脑的ＴＵＮＥＬ染色切片进行多场多参数形态定量分析,即细胞形态这亘参数（核面积、周长、直径、形状因子）和含 密度（平均光密度、积分光密度）。本实验结果显示图像分析能提高ＴＵＮＥＬ鉴别凋亡与坏死的灵敏度和精确性,并提供了一种简便快捷的形态定量方法,是在神经研究中     

全脑缺血再灌流后海马神经元凋亡的初步研究

目的 :观察大鼠全脑缺血再灌流后脑组织细胞的死亡是否以凋亡的形式出现 ,分析凋亡在海马神经元死亡中的意义。方法 :选用雄性ＳＤ大鼠 ,随机分为二组 :假手术对照组和缺血再灌流组。全脑缺血采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ -Ｂｒｉｅｒｌｅｙ四血管阻塞 ( 4ＶＯ)模型。ＴＵＮＥＬ(Ｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ -ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰ -ｆｌｕｏｒｅｓｅｉｎｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄ)标记主要根据试剂盒的说明进行。免疫组化采用ＣＤＮ -ＡＢＣ漂浮法。结果 :1 ＴＵ…     

双歧杆菌表面分子对LPS在小鼠体内调节胸腺细胞凋亡？…

目的 研究双歧杆菌表面分子细胞壁肽聚糖（ＷＰＧ）、脂磷壁酸（ＬＴＡ）对ＬＰＳ体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡的调节。方法 用ＤＮＡ凝胶电泳、ＴＵＮＥＬ法检测ＷＰＧ、ＬＴＡ对ＬＰＳ体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡的影响,并分别用生物活性和Ｇｒｉｅｓｓ反应测定ＷＰＧ、ＬＴＡ、ＬＰＳ体外诱生ＴＮＦ－α、ＮＯ２的含量。结果 ＷＰＧ,ＬＴＡ可显著抑制ＬＰＳ体内诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡。ＷＰＧ、ＬＴＡ单独刺激巨噬细胞时所诱生     

BXSB小鼠外周B淋巴细胞凋亡的初步研究

外周Ｂ细胞异常增生是系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）突出的免疫学异常表现之一。近年来愈来愈多的研究表明淋巴细胞凋亡异常与包括ＳＬＥ在内的多种自身免疫病的发生有关。本文采用ＴＵＮＥＬ法结合流式细胞分析技术，对ＳＬＥ模型－ＢＸＳＢ小鼠脾脏中Ｂ细胞凋亡的情况进行了检测，发现该小鼠脾脏Ｂ细胞凋亡发生率明显高于正常对照小鼠。提示Ｂ细胞凋亡异常可能与ＳＬＥ小鼠Ｂ细胞的异常增生有关。