利用核酸原位杂交技术对HSV－1角膜内潜伏感染的研究

研究单纯疱疹病毒Ｉ型（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＳＶ－１）在角膜内的潜伏感染，利用核酸原位杂交技术对１４只新西兰兔双眼角膜基质内注射接种ＨＳＶ－１Ｍｃｋｒａｅ株，２２只限出现典型的原发单疱病毒性角膜炎（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＫ）。病毒接种后６０天，取其中４个典型单疱角膜炎原发病变的角膜片交叉移植到４只未接种病毒的兔眼上，术后２周取下被病毒感染的角膜植片，利用ＨＳＶ－１单克隆ＩｇＧ抗体对植片行ＨＳＶ－１抗原检测，利用生物素标记的全长ＨＳＶ－１ＤＮＡ探针进行核酸原位杂交。结果术后４个角膜植片抗原检测均为阴性，而ＨＳＶ－１ＤＮＡ检测均为阳性。提示从分子水平上进一步证明角膜组织极可能是ＨＳＶ－１的潜伏感染地。     

单纯疱疹病毒I型潜伏感染的分子生物学研究

单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－１）在角膜发生原发感染后可在三叉神经节（ＴＧ）及角膜组织内发生潜伏感染。分子生物学研究发现潜伏期ＴＧ及角膜组织中都存在ＨＳＶ－１的ＤＮＡ片段及特异性ＲＮＡ的转录，它们与ＨＳＶ－１的潜伏和复发有着密切的关系。但ＨＳＶ－１在ＴＧ与角膜内的潜伏机制有所不同，对这一问题的进一步研究将有助于对ＨＳＶ－１潜伏和复发机理的彻底阐明。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染的分子生物学研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）在角膜发生原发感染后可在三叉神经节（ＴＧ）及角膜组织内发生潜伏感染。分子生物学研究发现潜伏期ＴＣ及角膜组织中都存在ＨＳＶ－１的ＤＮＡ片段及特异性ＲＮＡ的转录，它们与ＨＳＶ－１的潜伏和复发有着密切的关系。但ＨＳＶ－１在ＴＧ与角膜内的潜伏机制有所不同，对这一问题的进一步研究将有助于对ＨＳＶ－１潜伏和复发机理的彻底阐明。     

利用核酸原位杂交技术对HSV—1角膜内潜伏感染的研究

研究单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－１）在角膜内的潜伏感染，利用核酸原位杂交技术对１４只新西兰兔双眼角膜基质内注射接种ＨＳＶ－１ Ｍｃｋｒａｅ株，２２只眼出现典型的原发单疱病毒性角膜炎（ＨＳＫ）。病毒接种后６０天，取其中４个典型单疱角膜炎原发病变的角膜片交叉移植到４只未接种病毒的兔眼上，术后２周取下被病毒感染的角膜植片，利用ＨＳＶ－１单克隆ＩｇＧ抗体对植片行ＨＳＶ－１抗原检测，利用生物素标记的全长ＨＳＶ     

角膜与三叉神经节内HSV-1潜伏相关转录启动子的核苷酸序列分析

目的 比较角膜与三叉神经节（ＴＧ）的内单纯疱疹毒１型（ＨＳＶ－１）潜伏相关转化启动序列，进一步证实角膜为ＨＳＶ－１的另一潜伏地。方法 用寺白兔建立ＨＳＶ－１潜伏感染动物模型，提取并ＰＣＲ扩增角膜及ＴＧ ＬＡＴ启动子，比较ＬＡＴ启动子序列。结果 ６６．７％（４／６）的角膜组织扩增出ＨＳＶ－１ＬＡＴ妄动子，且与ＴＧ的电泳位置相同（２１６ｂｐ），其中在－２～１６１间的核苷酸序列完全相同。结论 ＨＳＶ－１     

用原位杂交法检测单纯疱疹病毒Ⅰ型在潜伏感染时的少量潜伏相关转录本表达

目的探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型在三叉神经节内潜伏感染时的基因表达。方法以 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备单纯疮疹性角膜炎,种毒后３６天取三叉神经节和角膜,用免疫组化法检测病毒的抗原表达。制备ｃＲＮＡ探针,用原位杂交法检测 ｍ－ＬＡＴ的表达。结果种毒后３６天,免疫组化结果为阴性,原位杂交结果为阳性。结论 ＨＳＶ－１在三叉神经节内潜伏感染时基因的转录并未静止,有ｍ－ＬＡＴ基因的表达。     

用原位杂交法检测单纯疱疹病毒Ⅰ型在潜伏感染时的少量潜伏相关 …

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型在三叉神经节内潜伏感染时的基因表达。方法 以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备单纯疱疹性角膜炎,种毒后３６天取三叉神经节和角膜,用免疫组化法检测病毒的抗原表达。制备ｃＲＮＡ探针,用原位杂交法检测ｍ－ＬＡＴ的表达。结果 种毒后３６天,免疫组化结果为阴性,原位杂交结果为阳性。结论 ＨＳＶ－１在三叉神经节内潜伏感染时基因的转录并未静止,有ｍ－ＬＡＴ基因的表达。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型眼部潜伏感染的实验研究

纯系新西兰大白兔经角膜接种ＨＳＶ－ｌｓｔｏｋｅｋ株，成功建立单疱病毒性角膜炎模型。自愈后４５天，以原病变角膜为供体，健康新西兰白兔为受体，行穿通性角膜移植术（ＰＫＰ）同时，取患侧１０份及健侧１０份三叉神经节，应用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测ＨＳＶ－１ＤＮＡ。术后５０天，取术侧角膜植片１０只及术侧三叉神经节１０份作相同检测。结果表明，患侧三叉神经节１０份中８份ＨＳＶ－１呈阳性，而健侧１０份中３份阳性；角膜植片１０只有７只阳性，术侧三叉神经节未检测到ＨＳＶ－１ＤＮＡ。由此提示，单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－１）既可在同侧三叉神经节形成潜伏感染，又可能在对侧三叉神经节形成潜伏，而且角膜极可能为ＨＳＶ－１的另一潜伏部位     

复发性单疱病毒性角膜炎稳定期角膜内潜伏病毒活化的研究

应用免疫组织化学染色技术，对２０例稳定了４个月至５年的单疱病毒性角膜炎（ＨＳＫ）的每片病变角膜片的一半行单疱病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）抗原检测，结果均为阴性。另一半角膜片经组织活化培养３～４周后再做ＨＳＶ－Ⅰ抗原检测，１８／２０（９０％）为阳性。２０例活化后的角膜片与ＲＫ细胞共同培养１周后，有３份ＲＫ细胞出现ＣＰＥ，且ＨＳＶ－Ⅰ抗原检测呈阳性。结果表明：ＨＳＫ稳定期的病毒很可能潜伏到角膜组织细胞内，使抗原表达阴性而未被检出。免疫病理学和病毒学观点提示，ＨＳＫ稳定３个月以上，即可考虑在需要时行穿透性角膜移植术。     

单纯疱疹性角膜炎发病机制研究的新进展

单纯疱疹性角膜炎（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｋｅｒａｔｉｔｉｓ，ＨＳＫ）是主要的致盲眼病之一，主要由单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）感染眼部引起。近１个世纪以来，有关ＨＳＶ－Ⅰ眼部感染的研究吸引着众多的科学家。早在１８７３年，人们就认识到ＨＳＶ－Ⅰ是导致眼部感染的致病因素之一，Ｇｕｎｔｅｒ和Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ曾经推测ＨＳＶ－Ⅰ感染很可能与中枢神经系统有关，自从１９７１年首次通过器官培养从潜伏感染的三叉神经节（ｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎ，ＴＧ）中分离出ＨＳＶ－Ⅰ之后，人们正在运用各种技术对ＨＳＫ的发病机制尤其是ＨＳＶ－Ⅰ在感觉神经和中枢神经系统中的潜伏状态和复发机制进行研究和说明。对有关的研究进行综述，供参考。     

复发性单疱病毒性角膜炎稳定期角膜内潜伏病毒活化的研

应用免疫组织化学染色技术，对２０例稳定了４个月至５年的单疱病毒性角膜炎的每片病变角膜片的一半行单疱病毒Ｉ型抗原检测，结果均为阴性。另一半角膜片经组织活化培养３－４周后再做ＨＳＶ－Ｉ抗原，１８／２０（９０％）阳性。２０例活化后的角膜片与ＲＫ细胞共同培养１周后，有３份ＲＫ细胞出现ＣＰＥ，且ＨＳＶ－Ｉ抗原检测呈阳性。结果表明：ＨＳＫ稳定期的病毒很可能潜伏到角膜组织细胞内，使抗原表达阴性而未被检出，免疫病     

McAbELISA双夹心法对泪液HSV抗原的检测与探讨

应用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）作为包被抗体以捕捉ＨＳＶ抗原，再以抗ＨＳＶ免疫血清作为检出抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双夹心法检测实验性单疱角膜炎泪液中ＨＳＶ抗原，并用于评价不同药物对其疗效的观察指标，结果：接种病毒后第１日，泪液ＨＳＶ抗原阳性检出率１００％，序贯检测显示出良好的连续性和稳定性，ＭｃＡｂＥＬＩＳＡ敏感性为２０～３０ＴＣＩＤ５０／０．１ｍｌ，具有特异，敏感，快速的性质，适用于临床对     

复明Ⅱ号抑制HSV—1再活的实验研究

通过已建立ＨＳＶ—１潜伏感染的动物模型，比较了复明Ⅱ号和无环鸟苷治疗后ＨＳＶ—１的激活率。结果表明：在ＨＳＶ—１角膜感染及给予复明Ⅱ号和无环鸟苷（ＡＣＶ）三十天的全身治疗后，经角膜肾上腺素电离子导入激活潜伏于三叉神经节中的ＨＳＶ—１，复明Ⅱ号组三叉神经节中抗原阳性率和泪液中病毒释放率均低于无环鸟苷组。证明了复明Ⅱ号对潜伏感染之后的再活具有较好的抑制作用，应于临床进一步观察     

单纯疱疹病毒1功能性基因在角膜内潜伏感染的实验研究

目的 研究角膜中是否有单纯疱疹病毒１型功能性基因的潜伏。方法 在新西兰白兔角膜上制作典型的单纯疱疹病毒１型引发的角膜炎模型,然后将进入稳定期的病变角膜移植到健康兔眼上,术后２周取下植片。每下植片标本均分为三部分,一部分角膜片先行ＨＳＶ－１抗原检测,另一部分采用多聚酶链反应技术检测ＨＳＶ－１潜伏相关转录、胸苷激酶和ＤＮＡ聚合酶基因,第三部分经器官培养３周后,再与兔原代肾细胞一起培养１周,再检测培养后     

实验性单纯疱疹性角膜炎的免疫组织化学研究

研究单纯疱疹Ⅰ型病毒感染后疾病的严重性与宿主遗传因素的关系，分析ＨＳＶ－１感染后鼠角膜中炎症细胞的亚群分布，检测角膜三层细胞中病毒抗原的表达及其临床意义。方法以单克隆抗体和常规组织学技术作免疫组织化学研究。结果ＨＳＶ－１感染后疾病取决于宿主的遗传因素，在角膜基质炎中，Ｔ地引发疾病起导作用，炎症细胞的数量与抗原量相关，病毒抗原沉积于角膜三层细胞，而ＢＬＡＢ／ｃ中的频率高于Ｃ５７ＢＬ／６（１１％－５６     

原位聚合酶链反应检测角膜组织中HSV—1型DNA

为研究单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＶＳ－Ⅰ）在角膜内的潜伏感染情况。采用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）定位检测２１例角膜标本中的ＨＳＶ－Ⅰ，其中７例活动期ＨＳＫ，１３例静止期ＨＳＫ，１例圆锥角膜。结论：在ＨＳＫ活动期及静止期中，角膜各层细胞内均有ＨＳＶ－Ⅰ的存在，极可能整合于细胞核内     

rhIL—2治疗单纯疱疹性角膜炎实验研究

目的 应用人重组白细胞介素Ⅱ（ｒｈＩＬ－２）配合常规药物治疗兔单纯疱疹性角膜炎（ＨＳＫ）预防复发。方法 给兔接种ＨＳＶ前１０天应用ｒｈＩＬ－２提高免疫功能治疗。待形成ＨＳＫ配合常规药物治疗,同时设对照组。应用ＰＣＲ技术检测观察兔感染ＨＳＶ－１体内动态变化,依据ＨＳＫ诊断标准观察其疗效。结果 实验组与对照组相比有延长潜伏感染期,发病轻,病程短,恢复快,ＨＳＶ在三叉神经节潜伏率低,结论 应用ｒｈＩＬ－     

体外培养牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β及其受体蛋白

从蛋白质水平了解体外培养牛眼小梁细胞是否表达转化生长因子β及其受体。方法采用Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ法对体外培养第３代牛眼小梁细胞进行ＴＧＦ－β１，ＴＧＦ－βＲ免疫组化的检测。结果小梁细胞ＴＧＦ－β，－β２和ＴＧＦ－βＲⅠ，ＲⅡ，ＲⅢ免疫组化染色的阳性信号分别位于胞浆内和胞膜上，阴性对照未见阳性信号。结论牛眼小梁细胞表达ＴＧＦ－β，ＴＧＦ－βＲ蛋白。较之猪眼小梁细胞，牛眼小梁细胞更适用于今后研究ＴＧ     

单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染复发的分子机制研究进展

单纯疱疹病毒Ⅰ型引起的屯疱疹性角膜炎，是角膜病中的主要致盲原因。因潜伏感染和反复发作作而致盲。ＨＳＶ－１可引起急性感染和潜伏感染。在潜伏期间ＨＳＶ－１的基因表达和物理状态与在急性感染期间均不相同。     

异搏定对培养角膜基质细胞分泌转移生长因子—β1的影响

目的 探讨异搏定对体外培养兔角膜基质细胞分泌ＴＧＦ－β１的影响。为预防或减轻ＰＲＫ后混浊形成提供线索。方法 将传代细胞，在加药培养后４８ｈ，应用ＴＧＦ－β１Ｆｍａｘ＾ＴＭＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ试剂盒和培养上清中ＴＧＦ－β１含量进行检测，根据标准曲线分别计算出各孔ＴＧＦ－β１的浓度。结果 Ｖｅｒａｐａｍｉｌ浓度５μｇ／ｍｌ和１０μｇ／ｍｌ，作用４８ｈ，培养上清中ＴＧＦ－μ１含量明显降低。