小蜡树皮单体化合物—Esculin对MPP~+所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：在MPP^＋诱导的SH—SYSY细胞凋亡模型中，研究从小蜡树皮提取的单体化合物Esculin的神经保护作用。方法：应用MTF法检测Esculin对细胞存活率的影响。应用AnnexinV—FITC与H双染流式细胞仪检测Esculin对MPP^＋诱导的细胞凋亡的影响。此外，应用荧光染料DCFH—DA及Rhodamine123对细胞内活性氧簇（ROS）及线粒体膜电位（AWm）进行了检测。结果：在经过10^-7mol／L，10^-6mol／L，10^-5及10^-4mol／L浓度Esculin处理后，细胞存活率与MPP^＋处理组相比，有显著性提高。结果显示，Esculin具有显著的抗细胞凋亡作用。同时Esculin可明显改善MPP^＋引起的AWm下降，并可以逆转MPP^＋诱导的ROS水平升高。结论：Esculin对MPP^＋诱导的细胞损伤有明显保护作用，该化合物可以作为治疗退行性神经疾病如帕金森病等的候选化合物。     

MPTP/MPP~+诱导的帕金森病实验模型的研究进展

建立一个稳定可靠的实验模型对研究帕金森病(PD)的发病和治疗是尤其必要的。自从发现1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)能在人类诱发PD以来,人们对其神经毒性作了大量研究。MPTP及其有效成分1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对中脑黑质多巴胺能神经元有选择性的破坏作用,从而发挥其诱导PD的毒性作用。在过去的几十年里对MPTP/MPP+诱导的PD实验模型的研究取得了显著的进展,目前MPTP/MPP+诱导的PD实验模型已广泛地用于PD研究。     

MPP+对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨1－methyl-4-phenylpyridium iodide(MPP^ )对SHSY5Y细胞的毒性作用。方法 采用体外培养的SHSY5Y细胞,通过TUNEL染色、细胞超微结构观察和DNA倍体分析检测MPP^＋对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用。结果 MPP^ 可明显地抑制SHSY5Y细胞的生长,并诱导SHSY5Y细胞发生凋亡,主要表现为TUNEL染色阳性的细胞增多,细胞核异染色质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、消失,在DNA周期中的G0－G1期前出现明显的亚二倍体峰。结论 MPP^ 通过诱导SHSY5Y细胞凋亡的方式发挥毒性作用。     

灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用

[目的]观察灵孢多糖(GLPS)对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.[方法]将MPP+或GLPS加入体外培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;以乳酸脱氢酶(LDH)检测法检测培养上清液中LDH水平的改变;通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达.[结果]MPP+处理48 h后,细胞活力降至对照组的52%,经GLPS(100、200、300 μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,分别为65%,75%,79%(P＜0.05).MPP+处理48 h后,上清液中LDH水平较对照组明显提高,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中LDH水平有所下降(P＜0.05),且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP+组.[结论]灵孢多糖对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有保护作用.     

迷迭香酸对MPP~+导致MES 23.5细胞损伤保护作用

目的观察迷迭香酸对1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MPP+)所致MES 23.5细胞损伤的保护作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测方法,观察不同浓度的迷迭香酸对MPP+处理的MES 23.5细胞的保护作用。结果 10-9~10-6mol/L的迷迭香酸对MES 23.5细胞无毒性作用(F=0.581,P>0.05)。200μmol/L的MPP+可使细胞存活率降低(F=44.863,P<0.01),而应用10-9~10-6mol/L的迷迭香酸预孵育细胞后,能明显提高细胞的存活率(P<0.01)。结论迷迭香酸能拮抗MPP+对MES 23.5细胞的毒性作用,具有一定的神经保护作用。     

灵孢多糖对MPP^＋损伤PC12细胞的保护作用

【目的】观察灵孢多糖（GLPS）对甲基-苯基-吡啶离子（MPP^＋）诱导损伤的PCI2细胞的保护作用。【方法】将MPP＋或GLPS加入体外培养的PCI2细胞中，建立多巴胺能神经元损伤模型，用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活力的变化；以乳酸脱氢酶（LDH）检测法检测培养上清液中LDH水平的改变；通过酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达。【结果】MPP^＋处理48h后，细胞活力降至对照组的52％，经GLPS（100、200、300μg／mL）预处理后，细胞活力明显提高。分别为65％，75％，79％（P〈0．05）。MPP^＋处理48h后．上清液中LDH水平较对照组明显提高．经不同浓度的GLPS预处理后．上清中LDH水平有所下降（P〈0．05），且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP^＋组。【结论】灵孢多糖对MPP^＋诱导损伤的PCI2细胞具有保护作用。     

中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞凋亡的影响

目的:观察中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞凋亡的影响. 方法:采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP )建立PC12细胞凋亡模型,应用血清药理学方法,结合光镜荧光染色核形分析、透射电镜、流式细胞仪等检测,研究中药兔血清对PC12,细胞凋亡的保护作用. 结果:含1/2和2倍等效剂量组中药兔血清(ig剂量为肉苁蓉生药1.6, 3.2和6.4 g/kg)处理的PC12细胞经MPP 作用后,凋亡率分别为16.0%, 10.2%和2.8%,与空白组(18.6%)相比差异显著(P<0.05). 结论:肉苁蓉具有拮抗MPP 导致的细胞凋亡作用.     

葛根异黄酮对MPP＋诱导的PC12细胞P53mRNA表达的影响

目的观察葛根异黄酮对甲基-苯基-吡啶离子诱导的帕金森病细胞模型P53基因表达的影响。方法将葛根异黄酮溶解在培养基使终浓度为50mg·L-1、100mg·L-1和200mg·L-1。并设不加药物的阴性对照组。PC12细胞与葛根异黄酮共孵育30min后,加入含250μmol·L-1MPP＋的DMEM培养基,继续孵育96h。采用实时定量RT-PCR法检测P53基因表达。结果与对照组比较,MPP＋组P53 mRNA表达上调（P〈0.05）,各浓度的葛根异黄酮组P53 mRNA表达下调（P〈0.05）。结论葛根异黄酮对甲基-苯基-吡啶离子诱导的帕金森病细胞模型P53 mRNA的表达具有下调作用。     

乌梅总黄酮对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究乌梅总黄酮(Fructus mume,FMF)对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的修复作用,同时探讨其可能机制.方法:采用体外细胞培养的方法,MPP+诱导损伤建立SH-SY5Y细胞模型,将细胞分为5组:正常对照组、模型组(250μmol/L MPP+)、FMF...     

Minocycline protects the apoptosis of PC12 cells induced by 1-methyl-4-phenylpyridinium

Objective： To explore the protective effect of minocycline on the apoptosis of cellular parkinsonism models induced by MPP^＋ . Methods： Using PC12 cells as the apoptotic model of dopaminergic neurons, MC and MPP^＋ were added into the culture medium of PC12 cells, and using MTr to assay the cell viability and metabolic state; The cells apoptosis was assayed by electrophoresis method and using flow cytometry FACS to assay the apoptosis ratio. Results： Added the MPP^＋ to get the concentration of 10μmol/L, the cellular parkinsonism model of apoptosis had been prepared. The pre-treatment of MC （ 100/μmol/L） could significantly increase the PC12 cell viability. The apoptosis ratio of MC＋MPP^＋ group was significantly lower than that of MPP^＋ group, but was still significantly higher than that of control group. Conclusion： MC may protect the cell apoptosis induced by MPP^＋ to some extent.     

银杏叶提取物对鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba leaves,EGB)对PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用细胞培养的方法,建立PC12细胞的鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )损伤的模型.用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测胞外多巴胺(DA)水平.结果:同毒物组比较,EGB在0.35、0.70、1.40 mg/ml浓度下能减轻MPP 引起的PC12细胞损伤,在1.40 mg/ml浓度下能减轻鱼藤酮引起的损伤,明显提高细胞的存活率, 增高胞外DA水平:2 mmol/L MPP 和10 μmol/L鱼藤酮作用下胞外DA分别为(6.875±0.201)和(5.321±0.167) ng/ml,而1.40 mg/ml EGB分别与2 mmol/L MPP 或10 μmol/L鱼藤酮共同作用,DA升高至(7.595±0.139) ng/ml(P<0.05)和(6.917±0.201) ng/ml(P<0.01).结论:EGB对鱼藤酮和MPP 体外诱导PC12 细胞的损伤具有明显的保护作用.     

姜黄素通过抗氧化作用拮抗鱼藤酮致PC12细胞损伤的研究

目的 探讨姜黄素(Cur)对鱼藤酮(Ro)致PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用鱼藤酮建立PC12细胞损伤模型;用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活力;苏木精-伊红染色观察细胞形态学变化;比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)的活性;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平;流式细胞术(Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法)检测PC12细胞的凋亡.结果 0.5 μmol/L姜黄素和1.0 μmol/L姜黄素均可减轻0.1 μmol/L鱼藤酮对PC12 细胞增殖活力的抑制,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P＜0.01);明显减轻了细胞损伤的形态学改变;明显增加了 PC12 细胞内SOD的活性,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P＜0.05);明显降低了PC12细胞内ROS的含量,明显抑制了鱼藤酮对PC12 细胞凋亡的诱导作用,与鱼藤酮组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 姜黄素可拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关.     

Mechanisms of MPP+-induced PC12 cell apoptosis via reactive oxygen species

Apoptosis of dopaminergic neurons in the nigrostriatal projection plays a crucial role in the pathogenesis of Parkinson’s disease (PD). Although the detailed mechanisms responsible for dopaminergic neuron loss are still under investigation, oxidative stress is identified as a major contributor for neuronal apoptosis. In the current study, we studied the effects of MPP+, a substrate that mimics oxidative stress, on neuron-like PC12 cells and the underlying mechanisms. PC12 cells were cultured and treated by 100 μmol/L MPP+ for 4, 8, 16, 24 and 48 h, respectively. For drug pretreatment, the PC12 cells were incubated with N-acetyl-l-cysteine (NAC, 5 mmol/L), an antioxidant, SP600125 (20 μmol/L) or PD98059 (100 μmol/L), two pharmacological inhibitors of JNK and ERK1/2, for 1 h before addition of MPP+. Cell apoptosis was measured by flow cytometry. The mRNA expression of Cu2+/Zn2+-SOD, GSH-Px, Bcl-2 and Bax was detected by RT-PCR. The protein expression of p-ERK1/2 and p-JNK was determined by Western blotting. Our results showed that MPP+ exposure could induce substantial PC12 cell apoptosis. The pretreatment of SP600125 or PD98059 could effectively reduce the apoptosis rate by reducing the ratio of Bax/Bcl-2 mRNA levels. MPP+ exposure also induced high level of reactive oxy-gen species (ROS), marked by dramatic increase of Cu2+/Zn2+-SOD and GSH-Px mRNA levels. The elevated ROS was strongly associated with the activation of JNK and ERK1/2 signal pathways after MPP+ exposure, since the pretreatment of NAC significantly reduced the upregulation of p-JNK and p-ERK1/2. Finally, the pretreatment of SP600125, but not PD98059, alleviated the increase of Cu2+/Zn2+-SOD and GSH-Px mRNAs induced by MPP+, suggesting that the activation of the JNK signal pathway, but not the ERK1/2 signal pathway, could, in some degree, antagonize the generation of ROS induced by oxidative stress. In conclusion, our results suggest that JNK and ERK1/2 signal pathways, which are activated via ROS, play a crucial role in neuronal apoptosis ind     

EGb对MPP^＋诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的 观察EGb对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的细胞。方法 MPP^ 诱导PC12细胞凋亡,AO／EB染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞。结果 EGb50、100μg/ml在6h、12h、24h可抑制细胞凋亡,而EGb25μg/ml则无效。结论 EGb在6h、12h、24h时呈剂量依赖性降低细胞凋亡率,提示EGb有可能通过抑制DA能神经元凋亡而相对增加DA含量。     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡的免疫组织化学及超微结构分析

目的 研究帕金森病（PD）多巴胺能神经元的死亡机制,方法在免疫组织化学基础上,采用流式细胞仪,电泳及电镜技术观察不同浓度多巴胺（DA）诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的超微结构及生化改变。结果 适当浓度DA可诱导PC12细胞凋亡,早期表现为线粒体结构及功能的改变并有抗凋亡蛋白bcl-2的达,后期电镜下可见亡特征性核结构改变及典型的DNA阶梯状电泳带,结论 细胞凋亡参与了PD的病变过程,线粒体在早期细胞凋亡中起着重要的调节作用。     

神经节苷脂对PC-12细胞的抗凋亡作用

目的　探讨神经节苷脂 (ganglioside GM1)对帕金森病 (Parkinson's disease,PD)的治疗机制 .方法　以左旋多巴(L - dopa)处理的 PC12 (大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤 )细胞为多巴胺 (Dopam ine,DA)神经元的细胞凋亡模型 ,应用透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及免疫组化等技术 ,观察GM1对凋亡中的 PC12细胞的影响 .结果　 2 4h后空白对照组凋亡率为 2 .5 % ,2 0 0μm ol· L- 1 L - dopa处理组的凋亡率为 6 1.6 % ;10 0 ,5 0和 10μmol· L- 1 的 GM1各加 2 0 0μmol· L- 1L - dopa处理组 2 4h的凋亡率分别为 2 9.7% ,5 2 .3% ,5 5 .7% ,与 L - dopa处理组比较有显著差异 (P<0 .0 5 ) .结论　在一定浓度范围内的 GM1可抗 L- dopa诱导的 PC12细胞的凋亡 ,并提示 GM1抗凋亡作用可能在于其对神经细胞膜的保护     

多巴胺诱发PC12细胞凋亡的研究

研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制 。方法：用脱氧核糖核酸标记法，借助荧光显微镜观察多巴胺对ＰＣ１２细胞凋亡的影响。