中国遗传性耳聋大家系永生细胞系的建立与保存

目的建立我国遗传性耳聋大家系患者永久淋巴母细胞株以研究核基因结构对线粒体DNA突变的修饰效应.方法采用EB病毒转化外周血淋巴细胞同时加环孢霉素A法,建立该大家系永生细胞系,其中患者14例,配偶及正常同胞18例:男性17例,女性15例.结果建株成功率达到90%以上,对已建立的永生细胞株经复苏和冻存的成功率为100%.细胞染色体制备及G显带核型分析正常.结论通过建立永生细胞系保存这一具有重要研究价值的家系遗传资源,为在细胞和分子水平上进一步开展遗传性耳聋的基础研究提供了宝贵的资料.     

肺动脉瘘伴t（1；3）易位家系永生细胞库的建立与保存

[摘要]目的 建立肺动脉瘘伴t（1;3）易位家系永生细胞库,为肺动脉瘘发病及遗传机制的研究提供永久的研制材料。方法 用EB病毒（Epstein-Barr virus)转染肺动脉瘘患者外周血B淋巴细胞,采用20％FBS RPMI1640培养液,配合环胞霉素A和PHA,置37℃5％CO2培养箱内培养,及时加液或少量换液,当细胞增长到一定数量时分瓶传代,分瓶传代到16瓶及以上予以冻存,之后复苏以证明冻存成功情况,结果 成功地对肺动脉瘘伴t（1;3）易位家系中6个个体建立了永生细胞株,其中,肺动脉瘘患者2株,患者家属正常对照4株。结论 所有建成的细胞冻存后复苏的成功率为100％,经染色体G显带分析未见异常,表明建立细胞株的方法稳定。     

男性性腺发育不全患者外周血淋巴细胞永生细胞系的建立

目的建立男性性腺发育不全患者外周血永生细胞系以保存性腺发育不全患者特有的基因组资源,为进一步探讨性腺发育不全的发生机理提供材料.方法收集40例男性性腺发育不全患者的外周血样品,采用EB病毒转化技术,把患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系;用遗传学方法检测其建系前后的遗传稳定性.结果建系成功40例,所有建成的细胞系冻存后复苏成功率100%,核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的.结论性腺发育不全患者永生细胞系的建立,为进一步研究性腺发育不全导致的不育症分子水平发病机理提供随时可取的实验材料.     

中华民族永生细胞库的建立

目的 为保存中国不同民族基因组,完整建立中国各民族永生细胞库,供永久性研究需要。方法 按照严格的采样标准和“知情同意”原则,采集不同民族群体外周血样,利用EB病毒转化B淋巴细胞为永生细胞的技术,建立中国各民族永生细胞库。结果 已建立了47个民族70个群体（含民族支系）的3982株永生细胞株,并保存了7210份DNA样本。建立了较为成熟和稳定的利用EB病毒转化B淋巴细胞为永生细胞的技术。结论 这是目前规模最大的较为完整的中国国家级中国各民族永生细胞库,可供永久性研究需要。已向国内多家人类基因组相关单位提供了细胞株和 DNA,进行相关研究。     

脑海绵状血管瘤家系永生细胞株的建立

目的建立脑海绵状血管瘤家系永生细胞株,保存其特有的基因组资源。方法采用Ep-steinBarrvirus(EBV)转化技术,将患者外周血B淋巴细胞转化成永久生存的淋巴母细胞系。结果建立了一个脑海绵状血管瘤遗传家系3代12名成员的永生细胞株,其中包括5例患者。结论脑海绵状血管瘤遗传家系永生细胞株的建立,为在分子水平研究脑海绵状血管瘤的发病机理提供了可用的资源。     

脊髓小脑共济性失调2型家系永生细胞株的建立及遗传稳定性检测

目的 建立伴帕金森氏病症状的脊髓小脑共济性失调2型家系永生细胞株,提供永久性的实验研究材料.方法 采用EB病毒加入环胞霉素A的转化细胞技术,建立了该家系的永生细胞株.并检测传代细胞与家系血液中的微卫星标记有无改变,确定细胞株的遗传稳定性.结果 成功建立此家系25株永生细胞株,所检测的微卫星位点未发生变化.结论 所建永生细胞株染色体核型检测无异常,转化细胞株与血液中的微卫星的遗传稳定性无差异.     

肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系永生细胞系的建立与保存

目的 建立肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系永生细胞系,为肺动脉瘘发病及遗传机制的研究提供永久的研究材料.方法 用EB病毒(Epstein-Barr virus)转染肺动脉瘘患者外周血B淋巴细胞,在37℃ 5%CO_2培养箱内培养(培养液成分:20%FBS、RPM11640、环胞霉素A和PHA),当细胞增长到汇合状态时传代及冻存.结果 所有建立的细胞系冻存后复苏的成功率为100%,经染色体G显带分析未见异常,表明建立细胞系的方法稳定.结论 成功地对肺动脉瘘伴t(1;3)易位家系中6个个体建立了永生细胞系.其中2个为肺动脉瘘患者,4个为患者家属正常对照.     

罗伯逊易位型21三体永生淋巴细胞株的建立

目的建立并鉴定13／21易位与21／21罗伯逊易位21三体永生淋巴细胞株,为21三体罗伯逊易位的遗传学研究提供实验材料。方法筛查获得易位型21三体患者并收集外周血,培养B95-8细胞制备EB病毒感染液,采用EB病毒转化法获得永生淋巴细胞株,对第10、15、20代细胞进行G显带染色体分析。结果筛检出1例罕见的13／21易位与4例121／21罗伯逊易位型21三体患儿并成功建立永生淋巴细胞株,传代至第10、15、20代细胞的核型无显著差异。结论明病毒转化法可用于易位型21三体永生淋巴细胞株的建立,早期转化的细胞可为该病的研究提供实验基础。     

免疫缺陷、着丝粒不稳定和面部异常综合征家系永生化淋巴细胞系的建立

目的 探讨建立免疫缺陷、着丝粒不稳定和面部异常(ICF)综合征家系永生化淋巴细胞系的方法,为保存这类罕见病家系完整的基因组进行长期研究提供材料.方法 应用EB病毒转染ICF综合征家系外周血淋巴细胞,光学显微镜下观察B95-8细胞系及永生化淋巴细胞系形态特征,流式细胞仪检测ICF综合征家系B细胞表达水平,用台盼蓝检测冻存...     

EB病毒转化B淋巴细胞建立的永生细胞株长期传代遗传稳定性的研究

目的 研究EB病毒转化外周血B淋巴细胞建成的永生细胞株在传代过程中遗传特性是否发生改变.方法 对10株永生细胞株进行30代的长期传代培养,采用染色体显带、微卫星DNA及端粒酶活性检测技术,观察不同传代次数的永生细胞株二倍性、染色体核型、微卫星DNA及端粒酶活性的改变.结果 永生细胞株在30代以内,在染色体二倍性、核型、微卫星DNA方面保持稳定,未检测出端粒酶活性.结论 经EB病毒转化的永生细胞株在有限代次内遗传特征是稳定的.     

汉族家族性高胆固醇血症患者永生化细胞株的构建及其LDL-R功能的研究

 目的：构建汉族家族性高胆固醇血症（FH）患者永生化细胞株;分析细胞表面低密度脂蛋白受体LDL-R活性。方法：将研究对象20例分为3组：（1）FH纯合组6人，为临床确诊的家族性高胆固醇血症纯合患者;（2）FH杂合组12人,为纯合患者的父母;（3）正常对照组2人，为血脂正常者；采用EB病毒转化外周血淋巴细胞；免疫组化法观察细胞表面LDL-R分布；流式细胞技术观察淋巴细胞LDL-R功能，4 ℃时检测其对LDL结合能力，37 ℃时检测其对LDL内化功能。结果：免疫组织化学法，在光镜下可见淋巴细胞表面散在分布的LDL-R，呈现棕褐色颗粒样；流式细胞技术对3组细胞株检测证实LDL-R功能存在差异，EB病毒转化的细胞株具有永生化特性;正常组LDL-R平均表达量111.35，高于杂合组（97.17）及纯合组（60.62）；纯合组37 ℃内化量228.61，4 ℃ 结合量95.20，结合量为正常人的41.6%，杂合组37 ℃内化量91.28，4 ℃结合量67.42，结合量为正常人的73.8%。结论：采用EB病毒转化外周血淋巴细胞，成功地构建了汉族家族性高胆固醇血症患者的永生化细胞株，此细胞株的功能研究表明其具有稳定的永生化特性，完整地保存了FH患者的细胞种质。     

EB病毒转化的B淋巴细胞染色体制备及核型分析

目的　本文通过对 4个EB病毒转化的B淋巴细胞株的染色体核型进行分析 ,探讨以这种方法建立的B淋巴细胞株作为细胞遗传学研究材料的可行性。方法　EB病毒转化的B淋巴细胞株用含 2 0 %胎牛血清的RPMI - 16 4 0培养液传代培养。选择细胞分裂旺盛期 ,调整细胞浓度为 2～ 4× 10 6/ml时 ,加入秋水仙碱 37℃处理 2～ 3h ,常规收获细胞 ,气干法制片 ,GTG法显带。显微镜下计数分析 30～ 5 0个中期分裂相 ,显微照相分析 5个中期分裂相。结果　发现 4个B淋巴细胞株都存在染色体异常。染色体结构发生了复杂易位 ,产生了衍生染色体。亚二倍体分裂相增加 ,四倍体分裂相明显增多 ,甚至出现了八倍体分裂相 ,但均未见到染色体有规律性的异常。结论　表明EB病毒的基因组已整合到B淋巴细胞的染色体上 ,并造成B淋巴细胞染色体组的损伤。建议在用EB病毒转化B淋巴细胞建株做细胞遗传学研究时应慎重。     

Characterization of three cell lines derived from color carpCyprinus carpio

Summary The establishment and partial characterization of continuous cell lines fromCyprinus carpio is described. Three new cell lines designated CCT, CCG, and CCF, were established from testis, gill, and fin tissue of color carp,C. carpio, respectively. These cell lines have been subcultured more than 500 times since their initiation in May 1984. The optimal incubation temperature for growth is 31° C for CCT and 37° C for CCG and CCF. The modal chromosome numbers for CCT, CCG, and CCF cell lines are 38, 200, and 100, respectively. The duration of the cell cycle at 31° C for each cell line is 10.18 h (CCT), 15.28 h (CCG), and 18.76 h (CCF). All three cell lines are refractory to chum salmon virus. The CCT cell line is susceptible to three serotypes (Ab, Sp, and VR-299) of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), eel virus european, milkfish birnavirus, hard clam birnavirus, and eel herpesvirus from Formosa. In contrast, both CCG and CCF cell lines possess a very strict viral susceptibility. Only the IPNV Sp. serotype was seen to infect those two cell lines in vitro.     

CpG基序联合EB病毒建立永生化B淋巴母细胞系

目的 体外建立慢性乙型肝炎患者永生化的B淋巴母细胞系(LCLs).方法 用EB病毒感染自慢性乙型肝炎患者外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CpG DNA免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性.光学显微镜下观察LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析LCLs膜表面分子CD19和CD23的表达水平.结果 46例患者PBMC经EBV感染4周后,42例转化成永生化B淋巴母细胞系,成功率为91.3%.转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养.结论 CpG免疫调节基序联合EBV感染人PBMC,提高转化效率,转化后的LCL保持了成熟B淋巴细胞的生物学特性,可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.     

Epstein-Barr virus-induced lymphoblastoid cell lines derived from the peripheral blood of patients with X-linked agammaglobulinemia can secrete IgM

We have established lymphoblastoid cell lines (LCL) from the peripheral blood of three individuals with X-linked agammaglobulinemia as well as three of their immunodeficient first-degree relatives. Lines could be induced with Epstein-Barr virus only when T lymphocytes were depleted from total mononuclear leukocytes. The LCLs derived from XLA patients expressed characteristics of IgM-secreting plasmacytes, including intense cytoplasmic fluorescence after staining with anti-, easily detectable amounts of IgM in culture supernatants, and radiolabeled IgM with both heavy and light chains in culture media and cell lysates. The cell lines induced from blood of the first-degree relatives of these patients were more varied. They often exhibited multiple isotypes for both heavy and light chains in different cells or expressed a B-lymphocyte phenotype (easily detectable surface Ig but no Ig secretion). These studies suggest that B-cell precursors are present in peripheral blood of individuals with classical XLA. Differentiation of such cells to mature cells of the B lineage can be accomplished using Epstein-Barr virus after removal of T cells.     

云南苗族Bardet-Biedl综合征家系外周血B淋巴母细胞系的建立

目的 建立云南苗族巴德-毕氏综合征(Bardet-Biedl syndrome,BBS)家系外周血B淋巴母细胞系,为研究BBS的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源.方法 取1个BBS核心家系成员新鲜肝素抗凝全血,采用EB病毒转化技术,并加入环孢霉素A(cyclosporine A,CyA)抑制T淋巴细胞,将B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系.结果 成功建立了苗族BBS核心家系中12个个体的永生细胞株.结论 EB病毒转化技术可有效保存原来个体完整的基因组,为以后的相关研究提供了长期的DNA资源.

Abstract：

Objective To establish immortalized lymphoblastoid cell lines of a Miao core pedigree with Bardet-Biedl syndrome (BBS), in order to provide a long-term source of material for research. Methods With Epstein-Barr virus transformation of B cells and addition of cyclosporine A to inhibit the activity of T cells, fresh anticoagulated blood samples with heparin were collected from 12 members of the core pedigree,and were used to establish the immortalized lymphoblastoid cell lines of B lymphocytes. Results Twelve immortalized lymphoblastoid cell lines of the core BBS pedigree were obtained successfully. Conclusion The immortalized B lymphoblastoid cell lines of the Miao pedigree with BBS can preserve the whole genome information and provide long-term research materials for BBS study.     

Three decades of fish cell culture: A current listing of cell lines derived from fishes

Summary Cultured fish cells currently have application in many fields of biological research, and teleost cell lines have been initiated from a broad range of tissues and organs. Lines reported in the literature represent 74 species or hybrids from 34 families of fishes. A listing of these fish cell lines is provided.     

Human lymphoblastoid cell lines established from peripheral blood lymphocytes secreting immunoglobulins directed against herpes simplex virus

Peripheral blood lymphocytes (PBL) from genital herpes simplex virus type 2 (HSV-2) patients were transformed with Epstein-Barr virus. Using conditions optimized for successful transformation, two lymphoblastoid cell lines (LCL) have been established, which secrete immunoglobulin G (IgG) to HSV. These results suggest that PBL from patients suffering recurrent herpes virus infections can be used to establish LCL secreting HSV antigen specific human immunoglobulins.