巢蛋白对维持足细胞形态作用的探讨

目的：观察细胞骨架蛋白巢蛋白（nestin）在体外培养的小鼠足细胞中的表达及在维持足细胞形态方面的作用。方法:〖HTSS〗 应用免疫荧光技术检测nestin在条件性永生的足细胞中的表达;应用RNA干扰技术抑制巢蛋白nestin在足细胞中的表达,观察足细胞形态的变化并计算nestin siRNA组和无关序列siRNA组中有足突的足细胞数量。结果:体外培养的足细胞中巢蛋白呈丝状分布于胞浆;转染nestin siRNA质粒的足细胞,足突变短或消失,而转染无关对照序列siRNA质粒的足细胞形态未见改变;无关对照组有足突的足细胞数为77.0%±6.3%,转染nestin siRNA序列质粒组有足突的细胞数为16.0%±4.6%,两组差异显著(n=3, P<0.01)。 结论:巢蛋白nestin对于维持足细胞正常形态具有重要作用。     

Podocalyxin与糖尿病肾病的关系

足细胞标记蛋白(podocalyxin)作为足突顶端质膜的主要构成部分,是足突顶膜区主要的带负电荷的唾液酸蛋白,参与维持足细胞的正常结构和滤过屏障。糖尿病肾病早期以肾脏肥大和肾小球高滤过为特征。在肾小球足细胞的检测中,podocalyxin作为最常用的标记蛋白之一,对监测肾小球疾病的发生和发展起到极其重要的作用。深入研究podocalyxin对糖尿病肾小球病变的早期诊断及治疗有着重要的指导意义。     

TRPC6 突变致足细胞病变机制的研究进展

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 (transient channel receptor potential cation 6, TRPC6) 是肾脏足细 胞裂孔隔膜 (slit diaphragm, SD) 的重要组成蛋白之一, 与肌动蛋白、 足细胞表面蛋白以及其他裂孔隔膜 蛋白分子相互作用, 共同维持足细胞的正常功能。 TRPC6 过表达或过度活动导致细胞内钙超载而损伤足细 胞。 目前报道 TRPC6 基因致病突变可导致局灶节段性肾小球硬化症。 近来研究发现, TRPC6 与以蛋白尿为 主要表现的肾小球疾病的发生发展密切相关, 但尚无特效靶向药物应用于临床。 文章主要对 TRPC6 基因突 变致足细胞病变的分子机制以及 TRPC6 基因型与临床表型之间的关系进行了综述。     

Expression of CD2AP on podocytes with different pathological types of nephrotic syndrome

目的 观察不同病理类型的原发性肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者肾小球足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)的表达,探讨其与足细胞损伤的关系.方法 选取原发性NS患者54例,10例同期肾肿瘤切除患者正常肾组织作为对照.肾活检后常规染色观察肾脏组织病理改变,肾组织行免疫荧光法CD2AP和肾小球上皮细胞蛋白-1(GLEPP1)双重标记,对肾小球CD2AP的表达进行定位;分别用real time PCR和免疫组化SP法检测组织中CD2AP的表达,采用real time PCR检测nephrin的表达,透射电镜观察足细胞的结构变化,并定量测量足突密度.结果 (1)NS患者肾小球中CD2AP的表达及nephrin的表达下调,足细胞足突不同程度融合,足突密度降低.(2)病理表现为微小病变性肾病(minimal change disease,MCD)、局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)和膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的NS患者CD2AP表达及nephrin表达较对照组明显降低,且CD2AP与nephrin表达呈正相关,病理表现为MCD和FSGS的NS患者CD2AP表达与足突密度呈正相关.结论 本研究首次发现原发性NS患者肾小球足细胞中CD2AP的表达降低,且在MCD和FSGS中与足细胞病变程度相关,提示CD2AP低表达在足细胞病变为主的肾小球疾病中发挥重要作用.CD2AP有利于诊断足细胞病变的早期检测,对CD2AP表达减低进行早期干预可能有助于延缓疾病进展.     

CD2相关蛋白在肾病综合征中的表达及意义

目的观察不同病理类型的原发性肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者肾小球足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)的表达,探讨其与足细胞损伤的关系。方法选取原发性NS患者54例,10例同期肾肿瘤切除患者正常肾组织作为对照。肾活检后常规染色观察肾脏组织病理改变,肾组织行免疫荧光法CD2AP和肾小球上皮细胞蛋白-1(GLEPP1)双重标记,对肾小球CD2AP的表达进行定位;分别用real time PCR和免疫组化SP法检测组织中CD2AP的表达,采用real time PCR检测nephrin的表达,透射电镜观察足细胞的结构变化,并定量测量足突密度。结果 (1)NS患者肾小球中CD2AP的表达及nephrin的表达下调,足细胞足突不同程度融合,足突密度降低。(2)病理表现为微小病变性肾病(minimal change disease,MCD)、局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)和膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的NS患者CD2AP表达及nephrin表达较对照组明显降低,且CD2AP与nephrin表达呈正相关,病理表现为MCD和FSGS的NS患者CD2AP表达与足突密度呈正相关。结论本研究首次发现原发性NS患者肾小球足细胞中CD2AP的表达降低,且在MCD和FSGS中与足细胞病变程度相关,提示CD2AP低表达在足细胞病变为主的肾小球疾病中发挥重要作用。CD2AP有利于诊断足细胞病变的早期检测,对CD2AP表达减低进行早期干预可能有助于延缓疾病进展。     

CD2AP在足细胞中的生理功能研究

CD2相关蛋白(CD2 associated protein,CD2AP)是新近发现的足细胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)分子。近年来的研究发现,CD2AP在足细胞内与多种结构蛋白相互作用,参与了足细胞多种重要的生理过程,并在蛋白尿的发生、发展中发挥着重要作用。文章综述了CD2AP的分子结构及其在肾脏足细胞中的表达分布,深入探讨CD2AP的生理功能及作用机制。     

CD28/B7-1与儿童肾病综合征

CD28/B7-1是一对参与机体特异性免疫应答极其重要作用的分子.CD28主要存在于T淋巴细胞表面,而B7-1为CD28的配体之一,可表达于肾脏足突细胞.初步研究显示,B7-1分子参与了足突细胞病变的发生发展,而肾脏足突细胞参与了肾病综合征病理免疫反应过程,尤其在微小病变型肾病综合征中起主导作用.国内外学者已经着手相关动物实验及少量临床试验的研究,并取得一定成果.通过阻断CD28/B7-1信号而抑制肾病综合征的发生发展过程,将为儿童肾病综合征的临床治疗提供新的思路.     

SGK1超表达对人足细胞合成纤连蛋白的影响

目的： 研究高糖刺激对人足细胞血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）和纤连蛋白（FN）表达的影响，以及SGK1超表达和灭活条件下FN的合成变化，揭示SGK1介导的信号转导途径在高糖诱导足细胞细胞外基质聚集，引发早期糖尿病肾损害过程中的作用。方法: 高糖刺激人足细胞24 h，Western blotting方法检测SGK1和FN蛋白水平的表达。利用构建好的SGK1激活型质粒（pIRES2-EGFP-SGK1SD）、灭活型质粒（pIRES2-EGFP-SGK1KN）和空载体（pIRES2-EGFP）分别转染人足细胞，免疫荧光方法检测足细胞合成FN的水平。结果: 人足细胞中存在SGK1的表达，高糖刺激SGK1表达上调(50±4 vs 35±3)，与此同时，FN合成亦明显增加(19±4 vs 12±2)。SGK1SD转染的足细胞中FN合成明显增加，相反，SGK1KN转染的足细胞中FN合成明显减少。结论: SGK1参与了高糖诱导的人足细胞FN的合成，可能在糖尿病肾病早期足细胞的受损活化过程中发挥重要作用。     

足突裂孔隔膜相关蛋白分子研究进展

肾小球足细胞的足突裂孔隔膜是肾小球滤过屏障的重要结构 ,其特异的结构及功能蛋白分子是维持肾小球滤过屏障功能的基础 ,已获得的裂孔隔膜相关蛋白的信息资料增进了对足细胞及其足突裂孔隔膜生物学作用的认识 ,有利于进一步揭示蛋白尿的发生机制 ,为肾脏病基础与临床研究开辟了新的广阔的前景。     

微小RNA-193a调控Wilms瘤基因1促进小鼠糖尿病肾病足细胞凋亡

目的 探讨微小RNA（miR）-193a对糖尿病肾病（DN）足细胞凋亡的影响及作用机制。 方法 通过体外高糖培养足细胞和体内小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,将细胞或60只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、miR-193a抑制阴性对照组、miR-193a抑制组、miR-193a过表达阴性对照组和miR-193a过表达组。使用流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光、TUNEL、Real-time PCR和Western blotting检测DN小鼠和小鼠足细胞凋亡情况。 结果 DN小鼠和高糖诱导的小鼠足细胞中Nephrin、Podocin表达减弱,细胞凋亡率显著升高,miR-193a高表达,小鼠肾脏和足细胞中cleaved-Caspase-3和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著下降,而miR-193a 抑制剂(inhibitor)可改善这一过程。DN小鼠和高糖培养的小鼠足细胞中Wilms瘤基因1（WT1） mRNA和蛋白表达水平显著降低,miR-193a inhibitor干预后WT1蛋白表达显著升高。上调WT1可降低miR-193a对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告实验证实了miR-193a和WT1之间的靶向关系。 结论 MiR-193a下调WT1的表达,促进DN足细胞凋亡。     

硫化氢对高糖诱导的小鼠足突细胞损伤的影响*

 目的： 观察硫化氢对高糖诱导的小鼠足突细胞损伤的影响并探讨其作用机制。方法: 将体外培养的小鼠足突细胞系MPC5分为高糖组、正常糖组、正常糖+DL-炔丙基甘氨酸(PPG)组和高糖+NaHS组。处理后,用Western blotting检测各组细胞胱硫醚γ-裂解酶（CSE)、紧密连接蛋白2（ZO-2）、裂孔蛋白（nephrin）及β-连环蛋白（β-catenin）蛋白水平表达差异。结果: （1）高糖显著降低CSE、nephrin和ZO-2表达（P＜0.05）,而β-catenin的水平明显增高（P＜0.05）,4种蛋白变化均表现出时间依赖性;（2）正常糖培养加不同浓度PPG可显著抑制ZO-2和nephrin的表达（P＜0.05）,显著提高β-catenin的水平（P＜0.05）,3种蛋白变化呈浓度依赖性;（3）高糖诱导的足突细胞加NaHS培养后,ZO-2和nephrin表达可部分恢复（P＜0.01）,β-catenin表达可被部分抑制（P＜0.01）。结论: 本研究结果提示高糖诱导的足突细胞CSE表达降低可能是足突细胞损伤的重要机制之一。而外源性硫化氢对高糖诱导的足突细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与增加ZO-2表达、抑制Wnt/β-catenin通路有关。     

Nephrin稳定血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞细胞骨架改变的机制研究

 目的：研究足细胞裂孔膜分子nephrin调节血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的足细胞骨架分布改变的分子机制。方法：用AngⅡ及AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦或Akt抑制剂LY294002刺激足细胞,FITC-phalloidin染色标记F-actin,分析足细胞骨架运动。Real-time RT-PCR、RT-PCR和Western blotting检测nephrin mRNA和蛋白表达。转染nephrin全长表达质粒（pcDNA3.1-mNPHS1）,建立稳定转染足细胞系,Western blotting检测转染细胞的Akt磷酸化水平,FITC-phalloidin染色分析高表达nephrin对F-actin分布影响。结果：AngⅡ和LY294002刺激后,足细胞的F-actin重组,应力纤维减少,形成F-actin外周环。氯沙坦显著抑制F-actin重排。AngⅡ刺激后nephrin mRNA和蛋白表达显著降低,Akt磷酸化水平降低。pcDNA3.1-mNPHS1转染显著上调足细胞Akt磷酸化水平,促进足细胞短线状足突形成,部分抑制AngⅡ诱导的骨架重排。结论：PI3K/Akt是nephrin和AngⅡ的共同下游通路。Nephrin能通过PI3K/Akt途径部分稳定AngⅡ诱导的足细胞细胞骨架改变。     

儿童激素耐药肾病综合征相关致病基因及其临床检测策略

肾病综合征（NS）是因肾小球滤过屏障受损而引起的一绀临床综合征。肾小球滤过屏障由内皮细胞、基底膜和足细胞构成。多项研究表明,足细胞在肾小球滤过屏障中起关键作用,特别是足细胞相邻足突构成的裂隙膜（slitcliaphragm,SD）[1-4]。依据对激素治疗的反虚可将Ns分为激素敏感型（SSNS）和激素耐药型（SRNS）[5]。     

足细胞上皮间质转分化研究

足细胞是肾小球滤过膜的重要组成部分,在维持肾小球正常滤过功能方面起着至关重要的作用。足细胞上皮间质转分化（EMT）是多种慢性肾脏疾病蛋白尿产生及疾病进展的重要病理机制。减轻足细胞EMT已经成为慢性肾脏疾病防治研究的热点。基于此,本文主要就足细胞的生理特点、EMT病理过程及相关信号通路作一综述。     

肾小球滤过屏障超微结构改变与Alport综合征蛋白尿的关系

 目的:探讨肾小球滤过屏障超微结构改变与Alport综合征（AS）蛋白尿发生的关系。方法:AS患者35例,男24例,女11例,肾活检的年龄为1.17~24岁。根据尿蛋白结果将患者分为2组：无/间歇性蛋白尿组（13例）和持续性蛋白尿组（22例）。测量AS肾小球基底膜（GBM）变薄、增厚和致密层撕裂分层的长度,计算其各占GBM总长度的百分比;根据平均足突宽度（FPW）= π／4×（∑基底膜长度／∑足突个数）计算患者足突宽度。分析比较2组患者GBM变薄、增厚、致密层撕裂分层比例和平均FPW及其与AS蛋白尿的关系。结果:持续性蛋白尿组GBM增厚、致密层撕裂分层比例和平均FPW较无/间歇蛋白尿组高（均P<0.05）。平均FPW与GBM增厚、致密层撕裂分层及肾活检年龄均呈正相关（均P<0.01）。结论: AS患者GBM病变程度越重,足突融合越严重,蛋白尿越严重,提示AS基底膜异常有可能通过影响足突及裂孔膜的结构和功能导致蛋白尿发生。     

糖尿病大鼠肾脏nephrin表达的动态观察

目的从不同时间点动态观察足细胞相关分子nephrin在糖尿病大鼠肾组织中的表达,探讨nephrin在DN蛋白尿发生发展中的改变及意义。方法将SD大鼠分为健康对照组(C组)、糖尿病组(DM组)。SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型,正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液。分别于0、2、4、6、8、12周动态检测尿白蛋白(UA),血糖(BG)及肾功能,取肾组织行常规病理检查,免疫组化、Western blot分析技术检测肾脏nephrin的表达。结果 (1)与NC组相比,DM组随着病程的延长,尿白蛋白、BUN、Ccr均逐渐出现明显的变化,而白蛋白尿早于BUN、Ccr异常的出现;(2)与NC组相比,DM组足细胞相关分子nephrin蛋白于第2周出现表达下调,随着时间的进展,nephrin蛋白的表达进一步减少,直至第12周,各周间比较差异有显著性(P0.05);(3)相关分析显示:尿白蛋白排泄与足细胞相关分子nephrin呈负相关。结论糖尿病大鼠早期(2周)出现足细胞相关分子nephrin表达下调,是糖尿病肾病早期损伤指标,nephrin参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生及发展。     

足细胞自噬与蛋白尿

终末期分化的足细胞,也称肾小球脏层上皮细胞,是一种高度特殊的细胞,起关键性机械及电荷屏障作用,阻止蛋白尿的发生。在肾疾病中足细胞受损,其标志性的临床特征即蛋白尿。然而,足细胞损伤的发生机制尚未完全阐明,本文对足细胞自噬与足细胞损伤及所致蛋白尿的可能机制作一综述。     

雷公藤,强的松治疗阿霉素肾病超微结构的体视…

用阿霉素引起大鼠微小病变型肾病分别予以雷公藤片或强的松片治疗，采用形态结构的立体计量分析方法，观察肾小球超微结构的改变。结果显示：雷公藤和强的松均能明显减少肾小球上皮细胞足突的平均直径和平均面积，增加单位长度及单位面积的足突数目，提示雷公藤和强的松均能明显促进阿霉素肾病的超微结构的恢复。     

雷公藤、强的松治疗阿霉素肾病超微结构的体视学分析

用阿霉素引起大鼠微小病变型肾病分别予以雷公藤片或强的松片治疗,采用形态结构的立体计量分析方法,观察肾小球超微结构的改变。结果显示:雷公藤和强的松均能明显减少肾小球上皮细胞足突的平均直径和平均面积,增加单位长度及单位面积的足突数目。提示雷公藤和强的松均能明显促进阿霉素肾病的超微结构的恢复。     

277例肾病患者足细胞相关分析

目的 分析肾脏疾病患者不同类型的病理改变与足细胞数量的关系,研究二者之间的相关性,寻找足细胞在判断疗效与预后方面的积极意义.方法 对277例肾穿病人肾组织进行常规病理染色及免疫荧光、电镜检查进行病理分型,同时进行肾脏足细胞计数,对二者进行相关性分析,了解肾小球足细胞数量与肾脏病病理分型及预后是否相关.结果 局灶节段性肾小球肾炎(FSGS)、膜性肾病(MN)与搪尿病肾病(DN)和足细胞病变有绝对关系:肾小球足细胞数目与尿蛋白多少呈负相关;尿蛋白是临床判断肾脏病活动与否的依据之一.结论 故肾小球足细胞可以作为判断临床肾病活动的依据之一.