无排卵功血子宫内膜生长修复相关因素的研究进展

子宫内膜局部微环境在生理及病理过程中的作用越来越得到认同。本文就子宫内膜生长修复在分子水平研究取得的进展加以综述。     

子宫内膜异位症异位内膜细胞原代培养方法的改良

目的：建立一种简易的人异位子宫内膜细胞体外原代培养方法。方法：通过胰蛋白酶消化、贴壁纯化等技术,分离及培养10例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜细胞。在光学显微镜下观察细胞形态,以免疫细胞化学法鉴定细胞类型。结果：8份标本获得成功,培养的异位内膜细胞均有腺上皮细胞和间质细胞两种形态细胞。膜上皮细胞和基质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫组化染色为阳性,腺上皮细胞平均生长时间为5周,间质细胞平均生长时间为14周。结论：成功建立了子宫内膜异位症异位内膜细胞体外原代培养方法,该改良培养法经济、简单、高效。     

子宫内膜细胞的培养和侵袭性研究

为探讨不同子宫内膜细胞在子宫内膜异位症(EM）发病机制中的作用，体外分离培养EM患者和对照组子宫内膜共49例。观察间质和上皮细胞的形态学特点，并采用Transwell—Col Insert细胞培养板，比较不同细胞的侵袭行为。结果显示，间质细胞侵袭能力强于上皮细胞；EM组子宫内膜细胞侵袭力强于对照组。提示在子宫内膜异位种植过程中，间质和上皮细胞可能具有不同的功能；EM患者子宫内膜本身具有不同于对照组的特性，使其更易于异位种植生长。     

子宫内膜修整术后超排卵周期着床窗期子宫内膜基因表达谱

目的运用基因芯片技术探讨子宫内膜修整术改善子宫内膜容受性的机理,试图为子宫内膜修整术合理运用于临床提供可能的理论依据。方法根据纳入标准选取3例患者做为研究对象进行自身对照研究：①在自然周期的LH＋7日行子宫内膜微活检术;②子宫内膜修整术：A组和B组分别在超促排卵周期的D5天和D10天行子宫内膜修整术,C组做为对照组不行子宫内膜修整术;③各组在超排卵周期的HCG＋5天行子宫内膜微活检术;④所获得的全部标本送至专业的基因公司做基因芯片检测,并协助分析实验数据。结果①各组在自然周期着床期基因表达谱无明显差异性表达;②子宫内膜修整术A组和B组的自然周期与超排卵周期着床期基因表达谱无差异性表达,C组自然周期与超排卵周期着床期基因表达谱有显著差异;③未行子宫内膜修整术C组与D5天和D10天行子宫内膜修整术后超排卵周期HCG＋5天的基因表达谱有差异性。结论子宫内膜修整术可能通过改变某些基因的表达如整合素α6（integrin）基因,纠正高剂量雌孕激素对子宫内膜容受性的负面影响,使发育较自然周期提前的子宫内膜形态学表达延迟,使胚胎与子宫内膜发育同步。     

无排卵性功能失调性子宫出血患者VEGF与MVD的相关性研究

目的探讨无排卵性功血患者血管内皮生长因子（VEGF）及受体与子宫内膜微血管密度（MVD）的相关性。方法选择2011年1月～2012年1月32例无排卵功血患者为研究组,同时选择30例健康体检者为对照组。检测两组子宫内膜微血管密度、VEGF、碱性成纤维细胞生长因子、TNF-α及相关受体,讨论其相关性。结果VEGF及受体Flkl,bFGF及体FGFRl与MVD均呈正相关（r=O．516,0．623,0．573,0．474,P均〈0．05）;TNF-α及TNFRl与MVD呈负相关（r=0．552．-0．673,P均〈O．05）。结论VEGF及受体Flkl,bFGF及受体FGFRl,TNF—α及其受体TNFRl与MVD存在相关性,均参与了子宫内膜血管生成的调节。     

超排卵着床期小鼠子宫内膜LIF表达与雌孕激素的关系

目的研究超排卵对围着床期小鼠子宫内膜LIF表达的影响及其与雌孕激素的关系,探讨超排卵是否影响子宫内膜容受性的形成。方法将实验动物随机分为超排卵妊娠组和正常妊娠对照组,分别选取动情周期当天、合笼后发现阴道栓第2天、第4天、第6天、第8天共五个时间点取小鼠子宫内膜,用免疫组化和原位杂交法测定小鼠子宫内膜LIF的蛋白表达和LIF mRNA的表达,同时分别测定小鼠血清雌、孕激素水平。结果正常妊娠组小鼠LIF蛋白在围着床期子宫内膜上的表达动情周期较低,在妊娠之后开始上升,在妊娠第4天（即小鼠孕卵着床当天）达到最高峰（P〈0.05）,继之在子宫内膜的表达下降,在妊娠第8天降到非孕期水平;超排卵组小鼠围着床期子宫内膜LIF蛋白随着妊娠天数而表达增加,在妊娠第2天达到最高峰（P〈0.05）,继之在子宫内膜的表达下降,在妊娠第8天降至非孕期水平。超排卵组与对照组相比较,其在妊娠第2天的表达明显高于对照组（P〈0.05）,在妊娠第4天的表达明显低于对照组（P〈0.05）;超排卵组和对照组小鼠血清雌、孕激素浓度均随妊娠天数的增加逐渐升高,在各时间点超排卵组的雌、孕激素水平明显高于对照组（P〈0.05）。小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达与雌激素水平在一定范围内成正相关,超过一定临界水平后呈负相关（P〈0.05）,而与孕激素未发现有相关性（P〉0.05）。结论超排卵可能对小鼠围着床期子宫内膜LIF蛋白的表达有影响,使其表达峰值提前,由此推测影响子宫内膜容受性的建立;体内雌激素水平与围着床期子宫内膜LIF蛋白的表达有相关性,但尚不能排除孕激素水平与其有相关性,说明LIF蛋白的表达与雌激素的调控有关,并且可能存在一定的数量关系。     

外源性FGF9对体外肺泡Ⅱ型上皮细胞作用的实验研究

目的观察外源性成纤维细胞生长因子9（fibroblast growth factor 9,FGF9）对体外大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ细胞）生长的影响。方法体外原代分离、纯化、培养成年大鼠ATⅡ细胞,锥虫（台盼）蓝拒染法测定细胞活力,透射电镜鉴定细胞,碱性磷酸酶（AKP）染色法确定细胞纯度。实验组分别用10,30,50 ng/ml FGF9和200μg/ml肝素处理细胞24 h,对照组为未经药物处理的ATⅡ细胞。选择30 ng/ml FGF9浓度后,再通过噻唑蓝检测法（MTT法）分别检测24,48,72和96 h的细胞存活率。结果原代培养ATⅡ细胞的产量约为2×107个/鼠,细胞活力〉90%,电镜下观察到ATⅡ细胞典型细胞结构——板层小体,细胞纯度〉90%。采用30和50 ng/ml浓度FGF9刺激细胞24 h,ATⅡ细胞存活率明显增高（P〈0.01）。采用30 ng/ml FGF9刺激ATⅡ细胞不同时间（24,48,72和96 h）发现,24,48,72和96 h细胞存活率均明显高于对照组（P均〈0.01）。结论利用弹性蛋白酶消化分离和大鼠IgG免疫黏附纯化,可获得高产量、高纯度及高活力的原代ATⅡ细胞。FGF9以浓度和时间依赖的方式促进ATⅡ细胞增殖。     

排卵障碍患者用来曲唑与尿促性腺激素方案促排卵对子宫内膜形态的影响的比较

目的:探讨排卵障碍患者用来曲唑方案与尿促性腺激素方案对子宫内膜形态的影响。方法:回顾性分析2009年1月-2011年4月我院门诊就诊的排卵障碍患者60例,共计80个促排卵周期,其中,来曲唑组34个周期,尿促性激素组46个促排卵周期。比较hCG日两组间子宫内膜厚度,形态,优势卵泡数目、排卵数及妊娠结局。结果hCG日来曲唑组子宫内膜厚度为8.700±2.6952mm,尿促性腺素组子宫内膜厚度为9.463±1.9537mm,P>0.05,差异无统计学意义,但在形态上,来曲唑组子宫内膜A、A-B型为52.9%,而尿促性腺激素组为16.5%两组间差异有统计学意义。来曲唑组平均优势卵泡个数为1.4706±1.3311,尿促性激素组为3.5217±4.0756个,两者比较,P<0.05,差异有统计学意义。结论:排卵障碍患者用来曲唑方案与尿促性腺激素方案相比并不降低周期妊娠率,且来曲唑方案有更明显的单卵泡发生率,可获得更好的子宫内膜形态。     

来曲唑对体外培养子宫内膜异位细胞增殖的影响

目的探讨来曲唑对体外培养的子宫内膜异位症患者在位内膜细胞的增殖影响。方法MTT比色法检测来曲唑对位内膜细胞（Eutopic Endometrium,EE）/正常内膜（normal endometriumNE）抑制情况,并采用蛋白印迹法与RT-PCR方法检测芳香化酶及其转录调节因子SF-1的蛋白与mRNA表达情况。结果NE细胞用药组与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）;EE细胞在来曲唑作用下呈现较强的抑制增殖效应,抑制作用随浓度增加而加强,细胞增殖活力明显降低,有显著性差异（P〈0.01）,不同浓度的来曲唑均可明显抑制细胞内芳香化酶及其转录调节因子SF-1的蛋白与mRNA表达,且呈剂量依赖性,有显著性差异（P〈0.01）。结论芳香化酶抑制剂-来曲唑对内异症在位内膜细胞具有抑制其增殖作用,明显抑制EE细胞内芳香化酶及其转录调节因子SF-1的蛋白与mRNA表达。     

人食管上皮细胞原代培养方法的改良研究

目的探讨适合应用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法。方法对比食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM及含血清培养基DMEM中的生长情况。结果食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染。结论应用无血清培养基K-SFM培养食管上皮细胞,方法简便,适合推广应用。     

青春期功能失调性子宫出血临床治疗观察

目的对比分析妈富隆与雌激素治疗青春期功能失调性子宫出血的疗效。方法将63例青春期功血患者分为A组（32例）和B组（31例）,A组采用妈富隆治疗,B组采用雌激素为主的治疗方案,对两组的临床疗效进行对比观察。结果在控制出血时间上A、B两组对比无明显差异（P〉0．05）。在出血完全停止时间上A组、B两组比较有差异（P〈0．05）。A组药物副反应小、无突破性出血的表现,无停药后大出血发生,有效率达100％。结论妈富隆治疗青春期功能失调性子宫出血方法简便、安全性好、疗效明显,副作用少、依从性好,值得临床推广应用。     

育龄期功血患者子宫内膜中雌二醇和孕酮水平及其受体表达的变化

目的探讨育龄期功血患者子宫内膜中雌二醇（E2）和孕酮（P）水平及其受体表达的变化。方法回顾性分析60例育龄期功能失调性子宫出血（功血组）患者临床资料,并选择30例健康体检育龄妇女为对照组,比较两组子宫内膜组织中雌激素、孕激素以及相关受体的差异。结果功血组子宫内膜E2水平显著升高,P水平显著下降（P〈0．05）。血清E2和子宫内膜E2水平呈正相关,r=0．684,P〈0．01,血清P与子宫内膜P呈正相关,r=0．584,P〈0．01。功血组雌二醇受体（ER）、孕酮受体（PR）和凋亡指数均显著升高（P〈0．01）。结论育龄期功血患者子宫内膜组织中雌激素水平升高、孕激素水平下降,其相应的受体表达升高。     

射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血临床疗效对比

目的比较超声引导下射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血的疗效。方法选择2006年1月～2013年1月确诊为功能性子宫出血的110例患者,根据手术治疗方式分为射频消融术组（观察组）和宫腔镜电切术组（对照组）,比较两组手术时间、术中出血、住院天数、治疗效果等。结果手术时间：观察组6～15（7.5±2.2）min,对照组16～45（25.4±4.3）min;术中出血：观察组0～5（1.0±0.5）ml,对照组10～50（30.0±6.5）ml;住院天数：观察组0～2（0.3±0.1）d,对照组3～6（4.2±1.1）d。两组均有显著性差异（P〈0.01）。治疗效果：观察组55例中,治愈46例,有效9例;对照组55例中,治愈25例,有效15例,好转10例,无效5例,观察组疗效显著优于对照组（P〈0.01）。结论与宫腔镜电切术比较,射频消融术治疗功能性子宫出血具有手术时间短、术中出血少、治愈率高、无需住院等优点,并且操作简单,易于掌握。     

米非司酮与妈富隆治疗围绝经期功能失调性子宫出血的临床疗效观察

目的:评价米非司酮与妈富隆治疗围绝经期功能失调性子宫出血的临床疗效。方法:将围绝经期功能失调性子宫出血患者120例随机分为米非司酮组和妈富隆组,治疗随访3个月,比较两组治疗前后调经效果、激素水平变化、子宫内膜厚度、药物副作用等。结果:治疗3个月后,米非司酮组在治疗期间均有效止血,无复发;妈富隆组停药后有撤退性出血,复发率为21.7%;米非司酮组血清激素水平FSH、LH、E2、P较治疗前有所下降,妈富隆组E2、P较治疗前下降;两组子宫内膜厚度均较治疗前变薄,治疗前后比较具有统计学差异(P<0.05)。结论:米非司酮治疗绝经期功能失调性子宫出血较妈富隆疗效确切,值得推广。     

经阴道超声和宫腔镜检查对异常子宫出血病因的诊断价值

目的：探讨经阴道超声（TVS）和宫腔镜（HS）检查在异常子宫出血（AUB）病因诊断中的价值。方法：分析246例异常子宫出血患者的经阴道超声和宫腔镜结果,并与病理检查结果作对比分析。结果：TVS诊断宫内病变的敏感性、特异性分别为88.9%、57.1%,HS分别为100%、90.9%。结论：TVS及HS对AUB病因诊断的敏感性都较高,但HS的特异性明显高于TVS。HS结合直视下活检的病理诊断已成为诊断AUB患者宫内病变的金标准。     

兔原代胸主动脉平滑肌细胞培养方法及不同浓度血清培养基对其增殖的研究

目的探讨体外分离培养兔原代胸主动脉平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）技术及在不同浓度血清培养基下生长情况。方法采用组织贴块法进行原代培养,分别用不同浓度血清培养基（10％、15％、20％）对原代VSMCs进行培养．胰酶消化法传代,用倒置显微镜对原代培养兔平滑肌细胞进行形态学观察并鉴定,MTT法测定增殖能力。结果体积分数20％血清的DMEM培养液培养的原代细胞生长出现明显对数期。培养5代的兔平滑肌细胞纯度达97％以上：镜下可见平滑肌细胞生长,免疫组化提示平滑肌细胞肌动蛋白阳性表达,细胞生长第4～5d内光密度值变化较明显。结论本法能有效提高兔动脉平滑肌细胞原代培养的成功率,为研究血管平滑肌细胞生物学行为提供了有效模型。     

阴道超声与宫腔镜检查对异常子宫出血的诊断价值

目的观察阴道超声与宫腔镜检查在异常子宫出血患者中的诊断价值。方法对56例异常子宫出血患者分别行阴道超声检查和宫腔镜检查,并将其检查结果分别与患者手术、病理检查结果进行对照比较并进行分析。结果将病理检查结果作为金标准,宫腔镜诊断组诊断符合率为91.07%,其敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为94.44%、62.50%、94.44%、62.50%,阴道超声诊断符合率为71.43%,阴道超声检查的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为87.93%、41.67%、87.93%、33.33%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论阴道超声与宫腔镜检查对异常子宫出血均有重要的诊断价值,但宫腔镜检查应用于异常子宫出血的诊断,检查时间短,对患者损伤小,而且与手术、病理诊断符合率更高,更利于异常子宫出血的诊断。     

人类小肠上皮细胞原代培养方法探讨

 介绍一种人类小肠上皮细胞原代培养方法.采用16～24周引产胎儿小肠,比较3种小肠上皮细胞分离方法,探讨最佳培养条件.结果发现应用胶原酶/中性蛋白酶消化可获满意的上皮细胞分离效果,细胞贴壁良好.培养10～12d细胞达到融合,并保持对碱性磷酸酶的表达.提示小肠上皮细胞繁殖十分依赖于培养基和底物质量.     

人真皮微血管内皮细胞的体外分离和原代培养

目的：建立体外分离及培养人真皮微血管内皮细胞的方法，为进一步开展创面愈合及相关领域的细胞和分子生物学研究提供物质基础和实验模型。方法：健康成人中厚皮组织经中性蛋白酶消化后去除表皮；然后，采取薄片真皮组织胰蛋白酶低湿慢速灌注法消化微血管内皮细胞；将获取的微血管内皮细胞于不同条件的培养基内连续培养５～１５ ｄ，观察其基本生物学生长特征，并采用免疫细胞化学方法行Ⅷ因子相关抗原染色鉴定。结果：①采用中性蛋白酶及胰蛋白酶分步消化法，所分离获得的细胞体外具有很强的增殖能力；该细胞呈现Ⅷ因子相关抗原阳性，说明为真皮微血管内皮细胞；②细胞单层培养时显示活跃的形成类管腔状结构的生物学特征；③真皮微血管内皮细胞在不同培养基内生长状态不同，含８％ 胎牛血清、２ ％ 人分娩前母体血清及适量ｃＡＭＰ等添加物的ＩＭＤＭ 为其较理想的培养基。结论：经体外分离及培养获得了生长性良好的人真皮微血管内皮细胞。