钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用

目的：观察钙调神经磷酸酶（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）信赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用。方法：通过腹主动脉缩窄复制大鼠压力超荷性心肌肥大模型，观察ＣａＮ特异性抑制剂－环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ，ＣｓＡ）对大鼠心系数以及血浆及心肌组织心钠素（ａｒｉｔｒｉａｌ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ，ＡＮＰ）水平的影响。     

钙调神经磷酸酶在心肌肥大中的作用

钙调神经磷酸酶在心肌肥大的病理生理过程中发挥着重要作用。钙调神经磷酸酶的结构、功能及抑制剂等各方面的研究对于探讨心肌肥大的发病机制、为心肌肥大的预防和治疗提供了一条新思路。本文就钙调神经磷酸酶在心肌肥大中的研究现状进行综述。     

钙调神经磷酸酶信号通路在心肌中的作用

钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）属丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员（又称蛋白磷酸酶2B,PP2B）,是一种受Ca^2＋／钙调素（Calmodulin）调节的丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸酶,在细胞信号传递过程中直接接受Ca^2＋的调节,然后发挥去磷酸化作用。CaN广泛分布于脑、心肌、骨骼肌、T淋巴细胞、血管平滑肌和心血管内皮等组织细胞中,目前认为它是一种参与多种细胞功能调节的多功能信号酶^[1]。在心血管方面的研究表明,CaN介导的信号通路除了在心血管的形态发生中起重要作用外,也参与心肌肥大的调节。本文就CaN的一般概况及其信号通路在心肌肥厚的发生发展过程中的作用进行简要综述。     

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用

目的：观察钙调神经磷酸酶（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣａＮ）依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用。方法：通过腹主动脉缩窄复制大鼠压力超荷性心肌肥大模型,观察ＣａＮ特异性抑制剂环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ,ＣｓＡ）对大鼠心系数以及血浆及心肌组织心钠素（ａｒｉｔｒｉａｌｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＡＮＰ）水平的影响。同时,在培养的大鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞上,观察ＣｓＡ 对血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ⅱ, ＡｎｇⅡ） 刺激的３Ｈ亮氨酸及３Ｈ胸腺嘧啶参入的影响。结果：腹主动脉缩窄大鼠心系数较假手术组增高３８％ （ Ｐ＜ ０．０１） 。应用ＣｓＡ 治疗的大鼠心系数下降了８５％ （ Ｐ＜０ ．００１）。同时,观察到腹主动脉缩窄大鼠心肌组织及血浆ＡＮＰ含量较对照组分别增高１３５ ％ 和１１７ ％ （Ｐ＜ ０ ．０１） ,ＣｓＡ 处理后,ＡＮＰ分别下降了１６ ％ 和１４％ 。在培养的大鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞上,观察到ＣｓＡ（０ ．１ ～１０μｍｏｌ·Ｌ－１）可以浓度依赖的方式抑制血管紧张素Ⅱ刺激的３Ｈ亮氨酸及３Ｈ胸腺嘧啶参入的增加。结论：ＣａＮ 依赖的信号通路可能参与了压力超负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心     

钙调神经磷酸酶在逼尿肌肥大发生中的作用研究

目的观察钙调神经磷酸酶(CaN)催化亚单位α、β、γ(CnAα、CnAβ、CnAγ)3种亚型在肥大逼尿肌的表达变化,探讨其在逼尿肌肥大发生中的作用.方法选用10周龄雌性Wistar大鼠实行膀胱出口部分梗阻手术.手术分别于2、4、6周取下大鼠膀胱.以RT-PCR检测3种亚型mRNA表达,Western blot测定亚型蛋白表达量的变化.肥大标志物肌球蛋白重链(MHC)表达变化通过考马斯亮蓝胶染色光密度测定.结果①RT-PCR可检测到CnAα、CnAβ,未检测到CnAγ.②Western blot检测,CnAα手术后2周比对照组表达显著增加(P＜0.01),4周、6周表达下降.CnAβ表达无显著变化.③肌球蛋白重链表达变化与CnAα表达变化具有相关性.结论CnAα在逼尿肌肥大发生中起重要的作用,CnAβ作用不明显.     

钙调神经磷酸酶的研究新进展

本文对CaN的分子结构、酶学特性、组织分布、信号传导及生物学功能方面的研究进展进行文献复习。     

钙调神经磷酸酶介导碱性成纤维细胞生长因子诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的:观察钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法:在原代培养的大鼠心肌细胞上,应用双波长荧光光度计检测心肌细胞游离Ca2+浓度;应用对硝基苯磷酸(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)作底物测定CaN活性;根据3H-亮氨酸参入水平评估各种信号通路阻断剂对bFGF刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的影响.结果:bFGF刺激心肌细胞24 h后,胞内游离Ca2+浓度较对照组增高272%(P＜0.01);同时,bFGF刺激的心肌细胞CaN活性较对照组增高173%(P＜0.01).bFGF(60μg·L-1)刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入较对照组增高106%(P＜0.01);CsA(0.1～10 μmol·L-1)可以浓度依赖的方式抑制bFGF刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入.此外H7(PKC抑制剂)和50 μmol·L-1PD98059(MAPK抑制剂)亦可完全阻断bFGF刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入.结论:Ca2+/CaN信号通路参与bFGF诱导心肌细胞肥大的信息传递.另外,丝裂素活化蛋白激酶及蛋白激酶C可能亦是bFGF刺激心肌细胞肥大的重要信号传递途径.     

丹参酮对肥厚心肌组织中钙调神经磷酸酶的影响

目的：通过腹主动脉缩窄所致心肌肥厚模型,探讨丹参酮的抗心室重构与钙调神经磷酸酶信号通路的关系。方法：SD大鼠通过腹主动脉缩窄建立高血压的心肌肥厚模型,4周后将手术大鼠分为手术组（B组）,丹参酮低剂量组[C组,10 mg/（kg.d）],丹参酮高剂量组[D组,20 mg/（kg.d）]及缬沙坦组[E组,10 mg/（kg.d）],每组各8只,另有8只SD大鼠作为假手术组（A组）。用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数（LVMI）,病理切片HE染色测量心肌纤维直径（MFD）,采用逆转录-聚合酶链式反应法检测AT1受体mRNA表达,采用免疫印迹法检测AT1受体和CaN的蛋白表达,通过Fura-2双波长荧光法检测心肌细胞内游离Ca2＋浓度。结果：与A组和E组比较,B、C、D组的血压值显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,B、C、D组间血压差异无统计学意义（P〉0.05）。C、D、E组的LVMI、MFD值均高于A组,且显著低于B组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。与其他各组相比,AT1受体蛋白和mRNA水平在B组中表达最高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,而C、D组间表达差异无统计学意义（P〈0.05）,但均高于E组,差异有统计学意义（P〈0.05）,C、D、E组的AT1受体mRNA表达水平均未降至A组水平,差异有统计学意义（P〈0.05）。B组的CaN蛋白表达水平较其他各组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）,且丹参酮对其表达的干预呈剂量依赖性,D、E组间CaN蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。B组细胞内Ca2＋浓度明显高于其他各组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,但D、A组间差异无统计学意义（P〉0.05）,E、C组Ca2＋浓度均高于A、D组,差异有高度统计学意义（P〈0.05）。结论：丹参酮可通过阻止心肌细胞的钙离子内流,减少钙调神经磷酸酶的表达,起到抑制心肌肥厚的作用。     

钙调神经磷酸酶对心肌凋亡作用研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)是目前所知的惟一依赖于Ca2 钙调素的SerThr磷蛋白磷酸酶,在分类上属于磷蛋白磷酸酶2B(PP2B)。20世纪70年代末80年代初由加拿大籍华人王学荆教授,美籍华人张槐耀教授及美国的Klee教授分别在猪脑中发现并纯化成功[1]。CaN在细胞信号传递过程中直接受Ca2 的调节,起去磷酸化作用,参与多种细胞功能调节。在细胞因子介导的T细胞活化中起调节枢纽作用,在神经递质和激素的释放、神经突触的生长发育和突触可塑性方面亦具有重要的调节作用,与学习记忆和老年性痴呆有关[1]。CaN介导的信号通路在心血管的形态发…     

人参总皂苷抑制钙调神经磷酸酶信号通路参与其抗血管平滑肌细胞增殖作用

目的 我们先前报道人参总皂苷(total ginsenosides,TG)具有抗血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用,本工作重点探讨该作用是否与其抑制钙调神经磷酸酶( calcineurin,CaN)信号通路有关.方法 采用来自大鼠胸主动脉的培养VSMCs,以real time RT- PCR检测CaN的mRNA表达,并用Western blotting检测CaN的催化亚基CnA的蛋白表达.结果 TG在抑制VSMC增殖的浓度(0.05 mg/mL和0.1 mg/mL)能显著抑制AngⅡ所引起的CaN mRNA和CnA蛋白表达的升高.结论 TG抑制CaN信号通路可能是其抗VSMC增殖的分子机制之一.     

神经肽Y经Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶途径诱导心肌细胞肥大

目的 观察神经肽Y(NPY)诱导心肌细胞肥大效应,及Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)途径在其中起的作用.方法 用NPY(10、100nmol)刺激心肌细胞,用环胞索A(CsA)特异性抑制CaN活性.测定心肌细胞蛋白合成速率(3H-Leu掺入量)、CaN-蛋白表达、c-jun mRNA表达、CaN酶活性、细胞内游离钙含量.结果 (1)在100nmol NPY作用下,心肌细胞3H-Leu掺入量及c-jun mRNA表达量均较对照组显著增高(P<0.05,P<0.001).NPY+CsA组和对照组相比无显著差别.(2)在100 nmol NPY作用下,NPY组心肌细胞内CaN酶比活力、CaN-α表达、胞浆及核内钙含量较对照组显著增高(P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.001).结论 NPY可刺激心肌细胞肥大,CaN信号途径在其中起重要作用.     

钙调神经磷酸酶的纯化及其亚基分离

报道一种从牛脑中纯化钙调神经磷酸产分离其亚基的方法，牛脑匀浆液经ＤＥ－５２纤维素离子交换层析，Ａｆｆｉ－ｇｅｌ－Ｂｌｅ层，６０％饱和（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀，ＧａＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲合层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００凝胶过滤，从１Ｋｇ牛脑中可得到３０ｍｇ电泳纯的钙调神经磷酸酶，回收率为４１％，比活力提高２８５倍，纯的钙调神经磷酸酶经含６Ｍ尿素和８０ｍｍｏｌ‘Ｌ ＬｉＢｒ缓冲液透析，过ＤＥＡＥ－Ｓｅ     

吴茱萸总碱抑制大鼠左室肥厚及对钙调神经磷酸酶信号通路的影响

目的 观察吴茱萸总碱对大鼠腹主动脉缩窄术后压力超负荷所致心肌肥厚的抑制作用,及对钙调神经磷酸酶信号通路的影响.方法 采用腹主动脉缩窄制备SD大鼠左室肥厚模型.实验分为假手术组,模型组,吴茱萸总碱低（10 mg/kg）,中（20 mg/kg）、高剂量组（40 mg/kg）和L-arg（200 mg/kg）阳性药对照组.模型制备次日大鼠灌胃给药4周,记录大鼠体重（BW）,测量左室重量（LVW）,计算左室肥厚指数（LWHI）,行病理切片观察心肌肥厚,以明确吴茱萸总碱防治左室肥厚效应.检测左室血流动力学参数,实时荧光定量PCR检测心肌ANF、CaN mRNA的表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠明显增加LVW和LWHI（P＜0.05）,病理学见左室心肌结构和心肌细胞严重受损,左室内压峰值（LVSP）和舒张期末压（LVEDP）明显升高（P＜0.05）,而±dp/dt max显著降低（P＜0.01）.与模型组比较,吴茱萸总碱中、高剂量明显抑制大鼠因腹主动脉缩窄所致LVW、LWHI增加,LVSP、LVEDP的升高和±dp/dtmax降低,明显减轻心肌病理损伤,下调ANFmRNA和CaN mRNA的表达（P＜0.01）.结论 吴茱萸总碱20 mg/kg和40 mg/kg可防治腹主动脉缩窄所致大鼠心肌肥大,其机制可能与抑制钙调磷酸神经酶信号通路有关.     

大鼠肥厚心肌组织CaN Aβ基因沉默的实现及对细胞肥大抑制作用

目的 诱导钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)Aβ基因沉默,探索防治心肌肥厚的新方法.方法 成年Wistar 大鼠(30只) 随机分为假手术组,"一肾一夹"模型组,CaN Aβ心包腔内干扰组,心包腔干扰阴性对照组,CaN Aβ舌下静脉干扰组,舌下静脉干扰阴性对照组.转染6d 后,处死大鼠并取材,测定血浆常规肝肾功能、心肌酶指标,RT-PCR 法检测心肌组织CaN Aβ、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF) 及β- 重链肌球蛋白(myosin heavy chain,β-MHC) 基因mRNA 水平,免疫荧光检测CaN Aβ蛋白表达.结果 模型组心肌CaN Aβ、ANF、β-MHC 基因mRNA 水平高于假手术组(P<0.05) ;切取左心室前壁心外膜下薄层心肌组织,心包腔内干扰组CaN、ANF、β-MHC mRNA 水平明显低于模型组及心包腔内阴性对照组(P<0.05) ;CaN Aβ蛋白免疫荧光显示心包腔内干扰组较模型组心外膜下心肌细胞荧光减弱;各手术组之间血浆GPT/GOT,Ua/Cr/UN,CK/CK-MB/LDH 无明显差异.结论 心包腔内注射辅以微泡+酶类的使用及超声导入,可改善质粒在动物水平心肌组织的转染效率,CaN Aβ干扰可抑制肥大相关基因ANF、β-MHC 的表达,对心、肺、肝及肾等组织无明显损伤.     

钙调神经磷酸酶在心血管系统的生物学功能

钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）是典型的Ca^2＋／CaM结合酶和调节酶。CaN在Ca^2＋信号传递系统中起举足轻重的作用,参与多种生物学效应。新近的研究表明,CaN介导的信号通路在心血管的形态发生中起重要作用,并参与心肌肥大、血管平滑肌细胞增殖和内皮细胞功能的调节。本文对CaN的分子结构、酶学特性及在心血管系统的生物学功能方面的研究进展进行介绍。     

钙激动剂对心肌肥大有关信号转导的作用

目的 探讨钙激动剂对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性,ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白核转位表达,及蛋白核酸合成的影响。方法 应用血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ,１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激原代培养的心肌细胞钙内流,雷尼丁（ＲＹ,１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激胞内钙释放;刺激５ｍｉｎ时测ＭＡＰＫ活性,免疫组化方法检测刺激５、１０、２０、３０ｍｉｎ时ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白定位表达;＾３Ｈ－Ｌｅｕ和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测刺激２４ｈ心肌细胞蛋白核酸合成。结果 ＡｎｇⅡ和ＲＹ刺激心肌细胞５ｍｉｎ时ＭＡＰＫ活性均明显增高,与对照心肌细胞相比差异显著（Ｐ〈０．０１）。免疫组化结果显示,ＲＹ刺激心肌细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白核转位表达早于ＡｎｇⅡ。ＡｎｇⅡ和ＲＹ刺激２４ｈ,心肌细胞蛋白核酸合成显著增高,与对照组心肌细胞相比差     

钙调神经磷酸酶信号通路在AngⅡ刺激的大鼠VSMCs增殖中的作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）刺激的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖中的作用。方法:采用组织贴块法,体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;Ang Ⅱ刺激培养的大鼠 VSMCs增殖;CaN特异性抑制剂环孢素 A（CsA）阻断Ang Ⅱ刺激的大鼠VSMCs中CaN依赖的信号转导通路;观察各因素对CaN活性、细胞增殖活度、增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响。结果:在一定范围内,Ang Ⅱ（10-8～10-6mol/L）以浓度依赖性方式增加VSMCs的CaN活性,同时细胞增殖活度（AMTT值）增高,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01或P<0.001）。CsA（1 μmol/L）抑制CaN活性后,明显降低Ang Ⅱ（10-7mol/L）刺激的VSMCs增殖活度及核内PCNA的表达水平（OD值）,与Ang Ⅱ组比较,差异显著（P<0.001）。结论:CaN依赖的信号通路在Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖中发挥重要作用。     

IGF-1介导的钙调神经磷酸酶信号通路在心肌肥厚中的作用及人参皂苷Rb1的干预效应

目的 通过建立大鼠心肌肥厚模型观察人参皂苷Rb1对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)介导的心肌肥厚的影响.方法 采用手术缩窄腹主动脉的方法建立大鼠心肌肥厚模型.40只大鼠随机分为手术组(模型组、Rb1组、缬沙坦组,每组10只)及假手术组(10只).4组大鼠分别给予相应处理,常规饲养6周后:测定颈动脉收缩压,计算左心室肥厚指数(LVMI),ELISA法测定大鼠血清IGF-1水平,Masson染色观察心肌组织变化,Western blot法测定大鼠心肌组织钙调神经磷酸酶(CaN)的含量.结果 与假手术组比较,手术组大鼠的颈动脉收缩压、LVMI、IGF-1及CaN均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,Rb1组的颈动脉收缩压、LVMI、IGF-1及CaN均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 人参皂苷Rb1能有效抑制大鼠的心肌肥厚,其作用可能与降低IGF-1及其下游通路CaN的表达有关.     

大蒜素对腹主动脉缩窄大鼠左室肥厚及钙调神经磷酸酶信号通路的影响

目的探讨大蒜素对腹主动脉缩窄大鼠左室肥厚及钙调神经磷酸酶信号通路影响。方法行腹主动脉部分缩窄术制作压力负荷左室肥厚模型,40只大鼠随机分为假手术组、模型组、大蒜素组和缬沙坦组,每组10只。饲养6周后测量体重（BW）,通过测量左室重量（LVW）及计算左室肥厚指数（LVMI）,行病理切片以证明心肌肥厚。检测左室血流动力学参数及血浆内血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素1（ET1）水平,Western Blot法检测心肌钙调神经磷酸酶（CaN-A,其活性亚基）、C-fos蛋白的表达。结果与假手术组相比较,各手术组（模型组、大蒜素组和缬沙坦组）LVW及LVMI明显增加（P〈0.05）,病理切片示心肌细胞肥大,组织结构紊乱,各手术组血浆内AngⅡ、ET1明显增高（P〈0.05）,其中缬沙坦组血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平升高最为明显（P〈0.01）。与模型组相比较,大蒜素组、缬沙坦组心肌CaN、C-fos蛋白表达明显受抑制（P〈0.05）。结论大蒜素对延缓腹主动脉缩窄所致的心肌肥厚有一定的作用,其机制可能是减少对CaN信号通路的激活。     

钙调神经磷酸酶信号途径参与大鼠PTA术后再狭窄的形成

目的 研究钙调神经磷酸酶(CaN)信号途径在经皮血管成形术(percutaneous transluminal angioplasty,PTA)后再狭窄血管中的表达,探讨该途径在血管再狭窄发生中的作用.方法 雄性SD大鼠16只,随机分为对照组(n=10)和实验组(n=6).实验组球囊损伤术后30 d取材,对照组仅行颈部...