苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

 目的研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响。方法用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变。结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性。光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多。结论苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡。     

黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响

目的:探讨黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞株体外增殖的抑制作用。方法:选用人黑色素瘤A375细胞进行体外培养,以不同浓度的黄芩苷分别处理黑色素瘤A375细胞,连续6天使用倒置显微镜进行观察,计数,绘制生长曲线;以不同浓度(0.1～50μmol/L)的黄芩苷分别处理黑色素瘤A375细胞细胞24、48、72h后,用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:生长曲线及MTT法显示黄芩苷对黑色素瘤A375细胞有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测到细胞在黄芩苷作用后,细胞凋亡率增加。结论:黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞具有明显抑制作用,细胞凋亡可能是其机制之一。     

麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的 研究麻疯树叶提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响.方法 用MTT法测定不同浓度麻疯树叶提取物对体外培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用倒置显微镜观察细胞形态学的改变,并用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测细胞的凋亡.结果 麻疯树叶提取物能抑制A375细胞增殖,诱导其凋亡,引起细胞形态学的改变,这些影响呈药物浓度剂量依赖性,并与药物作用时间正相关.结论 麻疯树叶提取物在体外对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖具有显著的抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

中药天花粉对人恶性黑色素瘤细胞形态、增殖、周期和迁移的影响

目的:研究和探讨天花粉水煎剂在体外对人黑色素瘤A375细胞的形态、增殖、周期和迁移的影响。方法:用显微镜观察天花粉水煎剂作用前后的A375细胞形态的改变;利用MTT法检测天花粉水煎剂对A375细胞生长和增殖的影响;采用流式细胞术检测天花粉水煎剂对A375细胞周期的影响;利用划痕实验观察天花粉水煎剂对A375细胞迁移的影响。结果:显微镜观察结果和MTT结果显示,利用不同质量浓度的天花粉水煎剂处理后,正常形态的细胞明显减少,细胞死亡数量增加;而且对A375细胞的增殖有不同程度的抑制,抑制率呈质量浓度依赖性。流式细胞术分析结果发现,随着质量浓度的增加,细胞增殖周期中G2期中细胞所占百分数与对照组相比,有统计学差异;细胞划痕实验结果显示,640和2 560μg/m L天花粉水煎剂组划痕愈合率低。结论:天花粉水煎剂在体外可以改变A375细胞的正常形态,导致细胞死亡;对A375细胞的增殖周期具有抑制作用,同时诱导细胞周期中的G2期阻滞;一定浓度的天花粉水煎剂对A375细胞的迁移具有抑制作用,可以有效地抑制黑色素瘤细胞的恶化和转移,有利于黑色素瘤的预后。     

黄芪注射液影响人恶性黑色素瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨黄芪注射液在体外对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响。方法应用DAPI荧光染色观察黄芪注射液作用后A375细胞凋亡情况,设对照组;流式细胞仪检测黄芪注射液对A375细胞凋亡率的影响;分光光度法检测黄芪注射液作用后A375细胞中caspase-3蛋白活性情况。结果与对照组相比,黄芪注射液处理组荧光显微镜下可以见到明显的凋亡小体,且呈时间和质量浓度依赖;同时发现黄芪注射液可使A375细胞凋亡率明显升高,并呈浓度依赖性;caspase-3蛋白活性检测发现,100,200 mg/m L的黄芪注射液不影响Caspase-3的活性,300,400 mg/m L的黄芪注射液降低Caspase-3的活性。结论黄芪注射液有诱导人恶性黑色素瘤细胞A375细胞凋亡的作用,其诱导黑色素瘤凋亡是通过影响Caspase-3蛋白非依赖性途径实现的。     

穿心莲内酯对人黑色素瘤细胞A375凋亡的影响

目的研究穿心莲内酯对人的黑色素瘤细胞(A375)凋亡的影响。方法通过MTT方法检测穿心莲内酯对A375细胞增殖的抑制作用,并求出其半数抑制质量浓度(IC50),并以IC50的穿心莲内酯和衍生物4H-穿心莲内酯作用于A375细胞,并设定溶剂DMSO对照组,Western Blot检测人原癌基因bcl-6的表达,同时用Honechst 33342染液检测A375细胞的凋亡情况。结果穿心莲内酯抑制A375生长的半数抑制质量浓度为30μg/mL;Western Blot检测显示穿心莲内酯明显下调bcl-6的表达;Honechst 33342染色显示穿心莲内酯明显促进了A375细胞的凋亡。结论穿心莲内酯通过下调bcl-6促进A375细胞的凋亡。     

中药天花粉对人恶性黑色素瘤细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的:探讨天花粉水煎剂在体外对人恶性黑色素瘤A-375细胞凋亡的影响。方法:应用DAPI荧光染色观察天花粉水煎剂作用后A-375细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测天花粉水煎剂对A-375凋亡率的影响;利用分光光度法检测不同质量浓度的天花粉水煎剂处理A-375细胞后,A-375细胞中Caspase-3蛋白活性情况。结果:与对照组相比,实验组荧光显微镜下可见典型凋亡小体,且呈时间和质量浓度依赖。同时,发现天花粉水煎剂可使A-375细胞凋亡率和Caspase-3活性明显升高,并呈时间和质量浓度依赖性。结论:天花粉有诱导人恶性黑色素瘤细胞A-375细胞凋亡的作用,其诱导黑色素瘤凋亡是通过影响凋亡因子Caspase-3蛋白活性途径实现的。     

三叶青脂溶性提取物对A375细胞增殖及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青三氯甲烷提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量;采用光学显微镜法观察其对细胞形态的影响。结果三叶青三氯甲烷提取物在6～500μg/ml浓度范围内对A375细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.01),且呈时间-剂量依赖性;浓度小于50μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;在100～500μg/ml时,对A375肿瘤细胞有较强的抑制作用;光学显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。结论三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成具有抑制作用。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

黄芪注射液影响人恶性黑色素瘤细胞增殖和迁移的实验研究

目的:探讨黄芪注射液对人恶性黑色素瘤A375细胞生长、增殖、细胞周期和迁移的影响。方法:利用细胞培养技术对恶性黑色素瘤A375细胞进行培养,光学显微镜下观察黄芪注射液对A375细胞形态的影响;利用MTT法比较实验组和对照组A375细胞的生长抑制率,研究黄芪注射液对A375细胞生长增殖的影响;利用流式细胞术和细胞划痕实验检测黄芪注射液对黑色素瘤A375细胞周期和迁移的影响。结果:光学显微镜下观察发现,与对照组相比,不同剂量的黄芪注射液在处理细胞72h后均影响黑色素瘤A375细胞的形态,细胞死亡增加,且呈质量浓度依赖性;MTT结果显示,黄芪注射液对A375细胞生长抑制作用明显,且抑制率呈时间和剂量依赖性。流式细胞术和划痕实验结果显示,黄芪注射液可以使A375细胞的细胞周期各个时相发生改变,其中G2期和S期的细胞百分数明显增加,且呈剂量依赖性的;影响A375细胞划痕的愈合。结论:黄芪注射液可以有效地抑制A375细胞的生长和增殖,可以将A375细胞阻滞在G2/M期,有效的阻滞了细胞的分裂进程,导致细胞死亡。同时发现一定浓度的黄芪注射液可抑制A375细胞的迁移运动,有利于黑色素瘤患者的预后。     

芒柄花黄素对人黑色素瘤细胞株A375凋亡的影响

目的研究芒柄花黄素对人黑色素瘤细胞A375凋亡的影响。方法以人黑色素瘤细胞A375为研究对象,MTT法检测不同浓度的芒柄花黄素对A375细胞活性的影响,并用流式细胞术检测芒柄花黄素导致的细胞凋亡率;用Western blot方法检测cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-XL的蛋白表达水平,从而初步探讨其凋亡的机制。结果芒柄花黄素可降低A375细胞的活力并增加其凋亡率,Western blot结果显示芒柄花素增加了A375中cleaved Caspase-3蛋白的表达,减少了抗凋亡蛋白Bcl-XL的表达,并增加促凋亡蛋白Bax表达。结论芒柄花黄素可抑制A375细胞的活力并诱导细胞凋亡,其机制与减小Bcl-XL/Bax蛋白表达比例,从而启动Caspase-3介导的凋亡途径有关。     

三七总苷抑制黑色素瘤A375细胞增殖的作用及机制研究

目的:探讨三七总苷(PNS)对黑色素瘤A375细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用终浓度为100、200、400μg/m L的PNS处理A375细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术、定量聚合酶反应(q PCR)法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞增殖抑制率、凋亡率、上皮间充质转化(EMT)相关标记分子mRNA表达、凋亡蛋白及信号通路蛋白表达等指标。结果:与对照组比较,A375细胞经各浓度PNS作用24、48、72 h增殖抑制率均显著升高(P0.05);PNS处理48 h后的A375细胞早期、晚期凋亡率及活化型caspase-3、Bax蛋白和E-钙黏蛋白mRNA表达均显著升高,p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白及波形蛋白、N-钙黏蛋白mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:PNS具有抑制黑色素瘤A375细胞增殖、诱导凋亡、抑制EMT等作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

白藜芦醇对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用研究

目的:观察白藜芦醇对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用。方法:使用不同浓度白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HT-29后,运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测白藜芦醇对HT-29细胞生长的影响,流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇对HT-29细胞凋亡率的影响。结果:CCK-8法检测显示白藜芦醇对HT-29细胞的增殖有明显抑制作用,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性(P0.01)。FCM法检测结果提示,与阴性对照组比较,不同浓度的白藜芦醇可以提高HT-29细胞凋亡率(P0.05)。结论:白藜芦醇对人结肠癌HT-29细胞的增殖有抑制作用,且能诱导HT-29细胞凋亡,是一种高效低毒的药物,其具体机制有待进一步探讨。     

白藜芦醇联合放疗对肝癌Bel-7404细胞体外凋亡的影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇联合不同剂量放疗对肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测不同浓度白藜芦醇(0,25,50,100μmol/L)对肝癌Bel-7404细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测不同浓度白藜芦醇细胞凋亡情况,寻找恰当的白藜芦醇的浓度进行下一步实验。按照不同的放射治疗剂量分组如下:A组予单纯白藜芦醇干预组;B组行放射治疗剂量2 Gy+白藜芦醇干预;C组行放射治疗剂量4 Gy+白藜芦醇干预;D组行放射治疗剂量6 Gy+白藜芦醇干预;检测肿瘤细胞的增殖、运动侵袭、细胞凋亡及各组细胞MMP-2、VEGF的表达情况。结果检测结果显示,白藜芦醇可以有效抑制肝癌Bel-7404细胞生长、促进肝癌Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖关系。根据实验结果,选择25μmol/L白藜芦醇进行体外放疗的实验。与A组相比,B、C、D组对肝癌Bel-7404细胞的增殖凋亡作用均有显著性差异(P均0.05);B组与C、D组有显著性差异(P均0.05),C组与D组无显著性差异(P0.05)。结论不同剂量放疗联合25μmol/L白藜芦醇均可提高放射治疗后肝癌Bel-7404细胞凋亡率,降低肿瘤侵袭性;白藜芦醇可能具有放疗增敏的作用。     

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导入黑色素瘤A375—S2细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的作用机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375-S2细胞生长的影响及各种Caspase抑制剂、佛波酯(PMA)、PKC抑制剂H-7对冬凌草甲素作用的影响；DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡；LDH法测定乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果 冬凌草甲素对A375-S2细胞生长有显著抑制作用，并能显著诱导A375—S2细胞发生凋亡，其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成，琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带；Caspase家族抑制剂，Caspase-9抑制剂能显著抑制冬凌草甲素诱导A375-S2细胞的凋亡。大剂量PMA(400ng／mL)显著抑制34．3μmol／L冬凌草甲素诱导A375-S2细胞凋亡，而小剂量PMA(10ng／mL)与冬凌草甲素有协同杀死细胞的作用，且PKC抑制剂H-7也可下调这种凋亡作用。Caspase-3的抑制剂可抑制Caspase-3的活力升高。结论 适宜浓度的冬凌草甲素(34．3μmol／L)诱导A375-S2细胞凋亡，这种作用是通过线粒体调节Caspase的激活来实现的。     

白藜芦醇诱导卵巢癌细胞SKOV-3的凋亡作用

目的探讨白藜芦醇对卵巢癌SKOV-3细胞形态学的影响及诱导其凋亡的可能机制。方法不同浓度白藜芦醇复合培养液作用于人卵巢癌SKOV-3细胞24 h后,通过MTT法以检测白藜芦醇对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响,并在光学显微镜下观察细胞形态学变化;应用Annexin-V/PI双标记法染色后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot检测Caspase-3及Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果与对照组比较,白藜芦醇可诱导SKOV-3细胞形态变化,细胞变圆、变小,折光度增加。流式检测结果显示白藜芦醇导致SKOV-3细胞凋亡明显增加。Western blot检测发现随白藜芦醇浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达增加。具有剂量依赖特性。结论白藜芦醇能够抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖并诱导其凋亡;白藜芦醇诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的机制可能与抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达,增强凋亡因子Bax的表达,并通过激活Caspase凋亡通路而引发凋亡有关。     

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤 A375 - S2细胞凋亡的作用机制。方法　 MTT法检测冬凌草甲素对 A375 - S2细胞生长的影响及各种 Caspase抑制剂、佛波酯 (PMA)、PKC抑制剂 H- 7对冬凌草甲素作用的影响 ;DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡 ;L DH法测定乳酸脱氢酶 (L DH)活力。结果　冬凌草甲素对 A375 - S2细胞生长有显著抑制作用 ,并能显著诱导 A375 - S2细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的 DNA梯带 ;Caspase家族抑制剂 ,Caspase- 9抑制剂能显著抑制冬凌草甲素诱导 A375 - S2细胞的凋亡。大剂量 PMA(4 0 0 ng/m L)显著抑制 34.3μmol/L 冬凌草甲素诱导 A375 - S2细胞凋亡 ,而小剂量 PMA(10 ng/m L)与冬凌草甲素有协同杀死细胞的作用 ,且 PKC抑制剂 H- 7也可下调这种凋亡作用。 Caspase- 3的抑制剂可抑制 Caspase- 3的活力升高。结论　适宜浓度的冬凌草甲素 (34.3μm ol/L )诱导A375 - S2细胞凋亡 ,这种作用是通过线粒体调节 Caspase的激活来实现的。     

白藜芦醇对A549肺腺癌细胞促凋亡机制的研究

目的:观察白藜芦醇对A549肺腺癌细胞生长的影响并对促凋亡机制进行初步研究。方法:使用MTT方法观察不同浓度与作用时间的白藜芦醇对A549细胞增殖的影响,采取流式细胞技术观察白藜芦醇对A549细胞促凋亡情况与细胞周期的影响,选用Western-blot技术观察不同浓度白藜芦醇作用下A549细胞凋亡相关蛋白p53、Bcl-2家族及Caspase的变化。结果:白藜芦醇对A549细胞增殖的抑制呈浓度/时间双重依赖,作用24 h IC50值是29.3μM,这种抑制作用有凋亡机制的参与。A549细胞发生了S期阻滞,凋亡相关蛋白中p53浓度增加,Bcl-2家族蛋白中促凋亡蛋白/抗凋亡蛋白比值上调,Caspase-3、-9发生剪切。结论:白藜芦醇能通过促凋亡作用抑制A549肺腺癌细胞的增殖,诱导出现S期细胞阻滞,与细胞凋亡线粒体途径相关的p53、Bcl-2家族蛋白、Caspase-3、-9等多种凋亡相关因子也参与促凋亡作用中,白藜芦醇对A549的促凋亡效应可能是一个多靶点多层次的作用机制。     

PTEN在白藜芦醇对体外直肠癌细胞生长和凋亡的影响

分析第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在直肠癌细胞系中的相对表达水平,以及白藜芦醇对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。利用Western blot检测PTEN在人直肠癌细胞株Caco-2和SW480及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;不同浓度的白藜芦醇作用体外SW480细胞后,CCK-8法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响;Western blot检测Caspase-3,PTEN,p53以及AKT蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建慢病毒介导特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调SW480细胞中PTEN的表达,检测下调PTEN的表达后是否影响白藜芦醇对体外直肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。结果表明,与NCM460细胞相比较,PTEN在Caco-2和SW480中的表达量均显著下调,差异有统计学显著性(P0.001);白藜芦醇对体外直肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇对SW480细胞中Caspase-3,PTEN和p53蛋白的表达均有明显上调作用,而抑制磷酸化AKT的表达;shRNA PTEN可明显下调PTEN在SW480细胞中的表达,同时降低白藜芦醇对SW480细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。提示白藜芦醇可通过上调PTEN的表达从而调控体外直肠癌细胞增殖和凋亡。     

扶正抑瘤方醇提物对人肺癌A549细胞增殖和调亡的影响

目的:探讨扶正抑瘤方醇提物对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导调亡的作用。方法:将人肺癌A549细胞在体外加入不同浓度的扶正抑瘤方醇提物72小时后,采用CCK8法检测该方的增殖抑制作用,以Annexin V-EGFP标记法,通过流式细胞术检测该方对人肺癌A549细胞凋亡的影响。结果:扶正抑瘤方醇提物能抑制人肺癌A549细胞的增殖,与浓度相关,与空白对照组比较有明显差异(P0.05);显微镜下可见到明显的凋亡细胞,流式细胞检测结果提示随着浓度的增加,细胞凋亡率增加。结论:扶正抑瘤方醇提物能显著抑制人肺癌A549细胞增殖,可能与诱导细胞凋亡有关。