如意珍宝片对血管性痴呆模型大鼠的保护作用

目的 研究如意珍宝片对血管性痴呆(VD)大鼠的保护作用。方法 采用改良双侧颈总动脉永久性结扎法制备大鼠VD模型,以Y迷宫为学习记忆评价指标,并测定VD大鼠脑内多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)3种单胺类神经递质水平。结果 如意珍宝片能显著的增加Y迷宫的正确次数和提高脑内3种单胺类神经递质水平。结论 如意珍宝片能提高VD大鼠学习记忆能力,升高脑内单胺类神经递质水平,从而改善大脑皮层的兴奋性,激活脑损伤后的学习记忆过程。     

如意珍宝丸对慢性神经源性疼痛大鼠炎症因子水平的影响

目的 观察如意珍宝丸对坐骨神经慢性缩窄损伤（chronic constriction injury,CCI）模型大鼠慢性神经病理性疼痛的保护作用及炎症因子水平的影响。方法 经热缩腿反射潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）检测合格的雄性SD大鼠,麻醉后手术分离坐骨神经主干,4-0含铬肠线环绕结扎坐骨神经三支分叉近端4次,每结间隔约1 mm,复制慢性神经病理性疼痛模型,选择建模成功的大鼠45只,随机分为5组,每组9只,分别为模型组,如意珍宝丸低（0.5g·kg^-1）、中（1.5 g·kg^-1）、高剂量组（4.5 g·kg^-1）,罗通定组（18 mg·kg^-1）,并设置假手术对照组,按15 mL·kg^-1给药体积,每日1次,连续灌胃给药10 d。在第5,7,10天给药30 min后测定TWL。末次给药次日,腹主动脉采血,检测细胞因子水平。结果 与模型组比较,给药10 d后如意珍宝丸低、中、高剂量组,罗通定组大鼠TWL明显延长,血清IL-10含量明显降低;如意珍宝丸高剂量组、罗通定组大鼠血清中TNF-α含量明显降低。结论 如意珍宝丸可能通过调节炎症因子水平,减轻疼痛炎症级联反应,抑制中枢神经敏化,而对坐骨神经CCI大鼠慢性神经源疼痛起到一定的保护作用。     

反相高效液相色谱法测定蒙药如意珍宝丸中栀中苷的含量

为建立蒙药如意珍宝丸中栀子苷的含量测定,用Hypersil-C18柱(4.6×200mm 5μm),柱温30℃,乙腈-水(15∶85)为流动相;流速:1.0ml/min,检测波长:238nm;外标法定量.结果:栀子苷组分与其它组分峰达基线分离,浓度在11.54～57.52μg/ml的范围内,峰面积值与进样量呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.21%,RSD=1.3%.该方法简便准确可靠,可用为本品质量控制方法.     

马钱子碱对体外培养的人软骨细胞增殖的影响

目的观察中药马钱子的提取物马钱子碱(strychnine)对体外培养的人软骨细胞增殖的影响。方法提取、分离人软骨细胞,用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在,将第2代软骨细胞以5×104个细胞的密度分别接种于高、中、低剂量组、对照组及硝普钠组,48h后用MTT比色法检测软骨细胞增殖。结果马钱子碱高、低剂量组软骨细胞的增殖率均低于对照组(P<0.05),中剂量组的增殖率高于对照组(P<0.05),并且中、低剂量组能够拮抗一氧化氮对人软骨细胞增殖的抑制作用,其中,中剂量组的作用最强。结论马钱子碱在一定浓度范围内能够有效促进人软骨细胞的增殖。     

透骨消痛颗粒含药血清对兔软骨细胞增殖影响的研究

目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清对兔软骨细胞增殖的影响。方法：取4周龄新西兰兔膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,体外培养第3代软骨细胞随机分为5组,分别加入培养液、空白血清和中药血清低、中、高剂量继续培养24、48、72 h后,采用流式细胞仪检测软骨细胞周期的变化。结果：流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清中、高剂量能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,干预48 h后G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与低量组、空白组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进软骨细胞的增殖。     

如意珍宝丸对斑马鱼神经损伤的保护及促再生作用研究

目的 观察如意珍宝丸对斑马鱼神经损伤的保护与促再生作用。方法 用吗替麦考酚酯诱导斑马鱼中枢神经损伤模型;用乙醇诱导建立斑马鱼外周运动神经损伤及轴索损伤模型;用溴化乙锭诱导建立斑马鱼髓鞘损伤模型。分别在荧光显微镜下观察高、中、低质量浓度（10.0、33.3和100.0 μg/mL）的如意珍宝丸对模型斑马鱼的中枢神经、轴索荧光强度、外周运动神经长度以及髓鞘荧光强度变化的影响,利用NIDS-Element''s软件分别进行图像分析,计算如意珍宝丸对斑马鱼中枢神经、轴索的保护率、对外周运动神经及髓鞘再生的促进率。结果 质量浓度分别为10.0、33.3和100.0 μg/mL的如意珍宝丸对斑马鱼中枢神经损伤保护率分别为-2%、24%和50%（P<0.001）;轴索损伤的保护率分别为3%、29%和48%（P<0.05）;外周神经再生促进率分别为44%（P < 0.05）、49%（P < 0.01）和93%（P < 0.001）;髓鞘再生促进率分别为36%（P < 0.01）、37%（P < 0.001）和41%（P < 0.001）。结论 如意珍宝丸对斑马鱼中枢神经及轴索损伤具有保护作用,对斑马鱼外周运动神经损伤及髓鞘损伤具有促再生作用。     

乌梅丸含药血清对胰腺癌细胞增殖及糖酵解的影响

目的:探讨乌梅丸含药血清对人胰腺癌SW1990细胞增殖及糖酵解的影响.方法:制备乌梅丸含药血清,MTT法检测乌梅丸含药血清对SW1990细胞增殖的影响,并筛选最佳含药血清浓度;检测不同作用时间(0,12,24 h)乌梅丸含药血清对SW1990细胞乳酸累积的影响及细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、6-磷酸果糖-2-...     

巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及分化的影响

目的：观察巴戟天寡糖（Morinda Officinalis How Oligosacchalide,MOO）对成肌细胞增殖分化的影响。方法：采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法,制成浓度为1&#215;10^5／mm3的成肌细胞悬液,接种到25ml培养瓶中培养。实验分为5组：空白对照组5．氮杂胞苷（5-Aza）（10μmol／mL）对照组;MOO小、中、大剂量（100μg／ml、300μg／ml、500μg／m1）组;并检测以下指标：1．成肌细胞形态学变化。2．免疫细胞化学法鉴定结蛋白（Desmin）。3．免疫细胞化学法测定转化生长因子β1（TGF—β1）和增殖细胞核抗原（PCNA）。4．四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测巴戟天寡糖对成肌细胞增殖的影响。5．绘制生长曲线。结果：1．倒置显微镜下,成肌细胞培养24h后,可见大量折光率强的圆形细胞贴壁,且有极少量细胞有小突起;48h后,细胞呈梭形并出现单个细胞核;72h后,成肌细胞变得细长,并相互拉网,从单核期进入合体细胞阶段;继续培养,成肌细胞相互融合,形成多核性长管状初生肌管;培养第5天后,可观察到分化状态较好的肌管有自发性搏动的收缩;用desmin抗体对分裂增殖4～5天的成肌细胞进行间接免疫酶染色,细胞核外周及胞浆呈棕黄色的desmin阳性反应,表明培养的细胞为成肌细胞;成肌细胞生长曲线显示原代成肌细胞生长培养48h后开始增生,早期增殖较快,倍增时间为5d,6～7d进入平稳期。     

中药单体及其有效成分对骨髓间充质干细胞向软骨细胞增殖和分化的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有多个方向的分化潜能,成为干细胞领域的热点研究对象。许多科研人员将各种中药单体及其提纯物对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响进行了探索。研究结果显示,部分中药及其提纯物能有效诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。当下使用的诱导剂多为激素和细胞因子之类,长期以来中医药治疗骨折,愈合疗效显著,具有较高安全性;并且目前对于中药对骨髓间充质干细胞向软骨细胞诱导的研究比较少,现对中药诱导BMSCs向软骨细胞分化的研究做一总结。     

脂多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,采用免疫细胞化学法鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度LPS干预组,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察其增殖情况。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44阳性,CD34、CD45阴性。MTT检测结果显示,与对照组(0.190±0.037)相比,0.01、0.1及1μg/mlLPS干预组吸光度(A)值均增高,其中0.01μg/mlLPS干预组(0.253±0.030)增高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。而10、100μg/mlLPS干预组A值则较对照组下降,其中10μg/mlLPS干预组(0.159±0.042)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度LPS可以提高BMSCs的增殖能力,但随着LPS浓度的增大,BMSCs增殖能力反而下降。     

毛蕊花糖苷对新生大鼠体外培养成骨细胞增殖与分化作用研究

目的研究毛蕊花糖苷对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖、分化作用的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法分离制备新生大鼠颅骨ROB细胞,MTT法测定ROB细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒法测定ROB细胞内ALP活性,以细胞的增殖率和ALP活性作为考察指标,观察不同浓度的毛蕊花糖苷对ROB细胞增殖和分化作用的影响。结果 1×10-7～1×10-9mol·L-1的毛蕊花糖苷对ROB细胞的增殖具有显著的促进作用(P<0.05),且终浓度为1×10-7mol·L-1的毛蕊花糖苷在作用72h后能显著提高ROB细胞内碱性磷酸酶的活性(P<0.05)。结论一定浓度的毛蕊花糖苷能显著的促进ROB细胞的增殖和分化。     

肝素和碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞体外培养的作用研究

目的探讨肝素与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔软骨细胞的增殖影响及其协同作用。方法体外培养3周龄的新西兰大白兔的原代关节软骨细胞。将第二代软骨细胞加入不同浓度的肝素、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及肝素 bFGF联合应用,于48及72小时分别进行MTT检测软骨细胞的成活数。结果bFGF浓度在10ng／ml时即可显著促进软骨细胞增殖,当浓度增至50ng／ml,其促进作用达到最大值;单纯使用肝素并不促进软骨细胞增殖,当联用bFGF,bFGF浓度为50ng／ml、肝素浓度为1250ng／ml时协同作用最明显。结论bFGF可明显促进软骨细胞增殖,单用肝素对细胞增殖无明显影响,与bFGF联用时呈现协同效应,具有增强bFGF促软骨细胞增殖作用。     

X H-211对3T3-L1细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的：研究异黄酮脂肪酸酯类化合物 XH‐211对前脂肪细胞株3T3‐L1增殖、分化和凋亡的影响。方法体外培养3T3‐L1细胞,加入不同浓度XH‐2111×10‐4、1×10‐5、1×10‐6和1×10‐7 mol／L ;同时另设DMSO空白对照组。采用MTT法和流式细胞术分别检测3T3‐L1细胞增殖和凋亡情况,油红染色法观察3T3‐L1细胞分化过程产脂量的变化。结果与空白对照组相比,XH‐211呈浓度依赖性地抑制3T3‐L1细胞增殖和油脂的产生,诱导3T3‐L1细胞和分化成熟的3T3‐L1细胞凋亡（P＜0．05）。结论 XH‐211通过诱导3T3‐L1细胞凋亡,抑制细胞增殖,减少分化过程中的产脂量,从而减少脂肪堆积,降低血脂。     

含驱白巴布期胶囊血清对人黑素瘤细胞A375增殖和迁移的影响

目的探讨驱白巴布期胶囊(QBC)对白癜风的治疗作用。方法大鼠ig给予QBC 0.54,2.7和5.4g·kg-1组,每天2次,连续3 d,末次给药2～3 h后腹主动脉采血,分离血清。用MTT比色法测定含QBZ血清体外对人黑素瘤A375细胞增殖的影响,酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定黑素含量,Transwell微孔膜法观察A375细胞迁移;显微镜下观察划痕后A375细胞伤痕愈合的能力。结果与正常对照组比较,给予QBC0.54 g·kg-1大鼠的30%含药血清,2.7 g·kg-1的10%含药血清和5.4 g·kg-1的20%含药血清均能促进A375细胞增殖。QBC 0.54 g·kg-1组的5%含药血清及QBC 5.4 g·kg-1组的5%,10%和20%含药血清均有促进酪氨酸酶活性的作用。QBC 2.7和5.4 g·kg-1组的20%含药血清具有显著促黑素含量增加的作用(P<0.01),且QBC5.4 g·kg-1含药血清促黑素含量增加的能力明显高于QBC 0.54和2.7 g·kg-1(P<0.05)。QBC 0.54,2.7和5.4 g·kg-1的20%含药血清均能显著提高A375细胞的迁移能力,且QBC 5.4 g·kg-1组促A375细胞迁移的能力明显高于QBC 0.54和2.7 g·kg-1组。划痕实验结果表明,QBC 0.54,2.7和5.4 g·kg-1组的含药血清均能明显促进A375细胞伤痕愈合,QBC 5.4 g·kg-1组促伤口愈合能力明显高于QBC 0.54和2.7 g·kg-1。结论 QBC可促进黑素细胞增殖,提高酪氨酸酶活性,促进黑素细胞迁移,对白癜风可能具有一定的治疗作用。     

龙胆苦苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响

目的 观察龙胆苦苷对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）增殖、迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞,将血管平滑肌细胞随机分为分为control组、GPS处理组、PF-3758309+GPS组。采用噻唑蓝(MTT)法观察各组细胞增殖能力,计算细胞增殖抑制率;采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力,计算细胞迁移率。采用Western blotting法检测各组细胞Pak4及MMP-2表达情况。结果 与对照组相比,龙胆苦苷处理组细胞增殖率及迁移率明显降低（P<0.01）,GPS组细胞内Pak4、MMP-2 表达水平明显降低（P<0.01）;而与GPS组相比,PF-3758309+GPS组可明显增加细胞增殖率及迁移率（P<0.05）,血管平滑肌细胞内 MMP-2 表达水平明显上调（P<0.05）。 结论 龙胆苦苷具有抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移,其机制可能与抑制Pak4相关。     

GM-1对新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察不同剂量神经节苷脂(GM—1)对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:从新生大鼠海马组织分离出神经干细胞,分别培养于基础培养液(阴性对照组) ,加入三种不同剂量GM—1(实验组)及含有b FGF(阳性对照组)的神经干细胞培养液。采用神经干细胞球直接计数法测定细胞的增殖能力,并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果:3个实验组神经干细胞的增殖能力较阳性对照组无明显差异,较阴性对照组差异显著,贴壁培养细胞分化发现3个实验组分化能力明显低于阳性对照组。结论:GM—1对新生鼠神经干细胞的增殖起促进作用,对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响

目的探讨破坏中间纤维对体外软骨细胞代谢功能的影响。方法 2个月龄新西兰大白兔双膝关节全层软骨消化为原代软骨细胞,培养3d贴壁后,分为对照组和实验组,对照组用原代培养基继续培养,实验组在原代培养基中加入中间纤维破坏剂丙烯酰胺(终浓度为2.5mmol/L)。加药后第1、2天利用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞早期凋亡率,第6天用细胞爬片苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态的改变,第3、6、9天用实时定量聚合酶链反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、糖胺多糖以及基质金属蛋白酶(MMP)-13mRNA的表达量。结果实验组在加药后第2天软骨细胞的早期凋亡率高于对照组(P<0.05);和对照组相比较,实验组在加药后第6天HE染色观察到细胞形态不规则,呈多角形,胞核深染且分裂像增多,细胞基质减少;在加药后第3、6、9天检测到实验组Ⅱ型胶原和糖胺多糖的mRNA表达相对于对照组下降(P<0.05);在加药后第6、9天MMP-13mRNA表达显著增加(P<0.01)。结论中间纤维破坏后可以诱导软骨细胞的早期凋亡,致Ⅱ型胶原和糖胺多糖产生减少,而炎性因子MMP-13表达增多,可能是骨关节炎产生的一个重要环节。     

茶多酚有效成分对淋巴细胞增殖的抑制和抗氧化作用

研究表明,茶多酚具有很强的消除有害自由基、抗衰老等多种药理作用[1],茶多酚临床治疗白癜风具有较明显的效果,但其各类组分在临床治疗白癜风所发挥的作用还未见报道。1材料与方法1.1动物C57BL/6(B6)小鼠,体质量(20±2)g,由浙江中医药大学实验动物中心提供。1.2主要药品与试剂H2O2、EGCG均购自美国Sigma公     

三氧化二砷对成纤维细胞的生长抑制及细胞周期的影响

目的探讨三氧化二砷(AS2O3)对成纤维细胞的增殖及细胞周期的影响。方法用含AS2O3浓度分别为0、2、4μmol/L的培养液分别作用于成纤维细胞,24 h和48 h后,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布。结果 AS2O3可显著抑制成纤维细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性(P<0.01);AS2O3可使细胞周期G0/G1期比例增加(P<0.01),G2/M期减少(P<0.01)。结论 AS2O3具有抑制成纤维细胞的增殖及阻止细胞周期进展的作用。