DHCC受体的纯化

本文报告了正常雄性家兔小肠粘膜细胞核提取液，经３８％饱和度硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素层析、ＤＮＡ－纤维素层析、羟基磷灰石层析Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过，最终得到纯化５２００倍的ＤＨＣＣ受体４０μｇ，产率为９％。     

家兔肝低密度脂蛋白受体的提取和初步纯化

为了研究肝细胞LDL受体在细胞摄取、降解血浆LDL过程中的作用,我们从家兔肝脏提取并初步纯化了LDL受体。肝匀浆经离心分别除去细胞核、线粒体和溶酶体后,100000g离心获得质膜,在4℃、pH6和Ca~(2+)存在下加Triton X-100提取膜受体,再经DEAE纤维素柱层析初步纯化,用酶联免疫受体分析法检测LDL与受体结合活性。结果表明,提取和初步纯化的得率分别为29.7％和4.3％;纯化倍数分别为1.9和8.9倍。在提取、纯化受体的操作过程中,作者特别强调预先除去溶酶体的重要性。本文还比较了不同处理方法所得膜沉淀物的稳定性。     

蛇床子中喔斯脑、欧芹属素乙的提取分离及鉴定

从蛇床果实的乙醇提取物中经柱层析、薄板层析、高效液相层析证明有八种成分,已测定其中喔斯脑(Qsthol,欧芹酚—7—甲醚)及欧芹属素乙(imperatonin)为主要成分,并分离得到单体,其它六种化合物因含量少,未进一步进行分离。     

彩虹明樱蛤酸性多糖的提取与纯化

目的:优化彩虹明樱蛤酸性多糖的制备工艺.方法:采用碱提醇沉法,运用正交试验对彩虹明樱蛤多糖的分离过程进行优化,包括时间、温度、pH值和乙醇浓度4个因素;所获多糖经去蛋白、去色素、去离子后,用DEAE-纤维素离子交换柱纯化,以Sephadex G-100和醋酸纤维薄膜电泳鉴定及红外光谱初步研究.结果:优化的多糖提取制备工艺为:时间6h、温度70℃、pH8.0、乙醇浓度70％,获得纯白略带暗褐色的颗粒状固体;DEAE-纤维素离子交换柱分离洗脱后得到靶多糖组分彩虹明樱蛤酸性多糖(Moerella iridescens acidic polysaccharide,MIAP),经Sephadex G-100和醋酸纤维薄膜电泳鉴定,MIAP为均一多糖组分,呈乳白色绵柔絮状;红外光谱扫描,MIAP含α-D型吡喃葡萄糖.结论:正交试验法优化了MIP的提取工艺,分离纯化了MIAP.     

人血清补体Cl_r亚基的分离

人血清中补体第1成分业基的分离及抗血清的制备曾于前文报道,作者在分离了人Cl_s扩亚基制备了抗人Cl_s抗血清的基础上,设计了一个较简便的分离Cl_r亚基的方法,将抗人Cl_s抗血清经DEAE-纤维素层析纯化后,偶联到过碘酸活化的不溶性载体SephadexG-75上,制备成抗Cl_s免疫吸附剂,在Ca~(2 )存在下吸附人血清中的Cl_(rs)成分,再用EDTA螯合掉Ca~(2 ),使Cl_r解离下来,从而获得了电泳纯的活性Cl_r亚基成分。     

天花粉蛋白新有效组分的纯化及相对分子质量测定

目的：研究从新鲜栝楼块根中分离纯化天花粉蛋白新有效组分的方法,测定新有效组分的相对分子质量,并对野生型及人工培植型植物来源的新有效组分进行对比研究。方法：采用粉碎、盐析、透析和离子交换层析、分子筛层析方法分别从野生型及人工培植型新鲜栝楼块根中分离纯化天花粉蛋白新有效组分,应用LDI-1700激光解吸电离飞行时间质谱仪测定其相对分子质量。结果：从野生型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量为33 388.9,产率为1.2 mg•g^-1;从人工培植型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量为32 116,产率为0.3 mg•g^-1。两者的相对分子质量高于已应用于临床的天花粉蛋白针剂（相对分子质量为26 000）及从美国产的栝楼中分离纯化出的TAP29（相对分子质量为29 000）,野生型产率高于人工培植型的产率。结论：分别从野生型与人工培植型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量及含量不同,且两者的相对分子质量亦不同于天花粉蛋白针剂及TAP29。     

~1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。     

复方氯唑沙宗片中氯唑沙宗与对乙酰氨基酚含量测定

目的 研究复方氯唑沙宗片剂中氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的含量测定方法。方法 采用双波长倍增差示法。结果 氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的平均回收率与相对标准偏差分别为９９．５％、０．８２％、１００．６％,０．６６％（ｎ＝５）。结论 本法不经分离可同时测定两组分的含量。     

人精浆免疫抑制因子的分离、提取及生活活性测定

目的 从人精浆中分离提取精浆免疫抑制因子（SPIF）。方法 取常规检测正常精液50份，离心分离精子和精浆，将精浆低温高速离心，取上清液，经Sephadex G-100层析，收集第1峰，作DEAE纤维素离子交换层析，收集第2峰，浓缩，经SDS－PAGE分析呈单带。在体外对其生物活性进行了测定，并以其为抗原经ELISA间接法对100例不育男子和50例生育男子精浆中抗SPIF IgG和IgA进行了测定。结果 测定分子量为52kd。当浓度分别为50、100、200μg/ml时，对PHA诱导的人外周血淋巴细胞转化抑制率、NK细胞活性抑制率分别为27．1％、33．9％、66．9％和23．7％、32．4％、57．4％。ELISA结果，不育组与生育组间抗SPIF IgG和IgA分别为38％、26％和6％、2％。结论 该实验提取的52kd的蛋白达到电泳纯且在体外具有一定的生物活性。ELISA间接法结果显示，不育组与生育组间存在显著性差异（P＜0．05）。     

缩醛磷脂的分离 纯化和鉴定

目的　研究从猪心中提取和纯化缩醛磷脂 ,并测定其纯度 ,以利于进一步研究其生物学作用。方法　取新鲜猪心切块 ,绞碎 ,制成匀浆后 ,再经一系列过程包括①总脂的提取 ;②通过硅酸柱层析和硅胶薄板层析从总脂提取物中分离出磷脂酰乙醇胺 (PE)、磷脂酰胆碱 (PC)、磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰丝氨酸 (PS)和鞘磷脂 (SM ) ,并从含PE浓度最高的柱层析液中分离出PE ;③碱水解制备缩醛磷脂酰乙醇胺 (plas PE) ;④通过硅酸柱层析和硅胶薄板层析从碱水解物中进一步纯化和鉴定 plas PE ;⑤分别用Iodinedisappearance法和Bartlett法检测 plas PE制剂中plas PE的含量及无机磷的含量 ,并计算出其纯度。 结果　①从总脂提取液中分离出下列几种磷脂并经标准品鉴定出为PE、PI+PS、PC和SM ,其Rf值分别为 0 .87、0 .75、0 .54和 0 .37;②从含PE浓度最高的柱层析液中分离出PE ,并经碱水解 ,制备出plas PE ,其在薄板层析板上的Rf值为 0 .81 ;③plas PE制剂中无机磷含量为 3 .1 61 μmol/ml,plas PE含量为 3 .0 0 6μmol/ml,经计算 plas PE的纯度为 95 .1 0 %。 结论　猪心是缩醛磷脂含量丰富的器官 ,采用硅酸柱层析及碱水解分离是制备缩醛磷脂的有效流程     

血红素及原卟啉Ⅸ的制备

用动物血粉或全血在含卤化物的碱性甲醇中分离出血红素和蛋白质.从血红素转变为原卟啉IX及其二钠盐,取得收率高、纯度好的结果.     

霍乱肠毒素的纯化与鉴定

本法纯化的肠毒素有下列特点:1.纯化毒素与粗制毒素对抗血清呈现单一线条,并与标准抗血清完全融合。2.经免疫电泳、等电点聚焦电泳等方法测定其结果与美国制备肠毒素一致。3.本法所纯化的毒素与自然类毒素未分开,其家兔兰斑试验为IBD/0.002μg,回收率达35%,且杀弧菌抑制试验为阴性。     

重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的分离纯化工艺建立

目的 建立大肠杆菌高密度表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(STH)分离纯化工艺.方法 高密度培养重组大肠杆菌并诱导表达STH,离心收集菌体,反复冻融后收集上清液经超滤、两步阴离子交换层析,分离纯化STH目的 蛋白.结果 纯化后的STH纯度为98%以上,纤溶比活性2.6×104IU/mg,活性回收率56%.结论 建立了STH的纯化工艺,该纯化工艺简便,时程短,重复性好,适合于大规模生产.     

大肠杆菌表达的rhIL－8的分离纯化

目的：探索人重组白细胞介素－８（ｒｈＩＬ－８）的分离纯化的路线。方法：用Ｓｅｐｈａｃｒｙ１－Ｓ－２００凝胶过滤和Ｑｓｅｐｈａｒｏｓｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｑｓｅｐｈａｒｏｓｅｂｉｇｈｅａｄｘ两步连续阴离子交换层析纯化。结果：两种方法纯化的ｒｈＩＬ－８纯度分别达９５．６％、９８．６％。氨基酸组份分析推算值基本与理论值相符。纯化的ｒｈＩＬ－８对小鼠和人中性粒细胞具有明显的体内体外趋化作用。结论：本法为ｒｈｌＬ－８提供了快速高效的纯化路线。     

K562细胞DNA聚合酶α—DNA引物酶复合物的纯化

用磷酸纤维素、DEAE纤维素、单链DNA纤维素和AMP-Sepharcse的顺序柱层析法从人慢性骨髓细胞性白血病K562细胞中纯化了DNA聚酶α与DNA引物酶的复合物。纯化过程经多次重复,结果稳定。DNA聚合酶纯化了117倍,DNA引物酶纯化了4583倍。共纯度足以满足研究化疗药物对这两种酶的抑制作用的需要。     

合欢皮的脂溶性成分

目的：研究合欢皮（ＣｏｒｔｅｘＡｌｂｉｚｉａ）的化学成分及其生物活性。方法：用色谱法和光谱解析方法对树皮的亲脂性化学成分进行分离和结构测定。结果：共得６个化合物：（１）１（２９羟基二十九碳酸）甘油酯,（２）１（２４羟基二十四碳酸）甘油酯,（３）乙酸Δ１２乌苏烯３β醇酯,（４）二十二碳酸乙酯,（５）β谷甾醇,（６）α菠甾醇３ＯβＤ葡萄糖甙。结论：化合物（１）为新化合物,（２）为首次以单体形式获得,（３）为首次从合欢属植物中获得的乌苏烷型三萜,（４）为首次从合欢属植物中获得。     

小量人血清中补体成份5的分离

以100ml的小量人血清经用低张透析,离子交换层析及亲和层析等步骤,得到具有生物活性的纯化C_5,得率约为23％。纯化C_5在SDS-PAGE上呈均一带。以该纯化的C_5免疫家兔得到相应的兔抗人C_5抗血清。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

目的 分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）检测方法及其耐药性。方法 采用头孢西丁、苯唑西林纸片法和PCR3种方法检测2005年安徽地区12家医院临床分离133株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株;琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果头孢西丁、苯唑西林纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为52．63％、54、13％、51．87％,3种方法对MRSA检出率差异无显著性。以PCR法检出mec—A基因为判断MRSA的金标准,头孢西丁纸片法灵敏度为100％、特异度为98．44％、符合率为99、24％,r（正确诊断指数）=0．9844。苯唑西林纸片法的灵敏度为98．55％、特异度为93、75％、符合率为96．24％,r=0．923。除了青霉素-G、氨苄西林、替考拉宁、万古霉素以外,其余抗生素的耐药率,MRSA组均明显高于MSSA组（P〈0．01）。结论 头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法;MRSA为多重耐药菌株,临床应加强检测。     

人巨细胞病毒蚀斑实验条件的优化及在抗病毒物质活性测定中的应用

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）的蚀斑形成实验最适工作条件,建立稳定易行的HCMV蚀斑技术,用于HC-MV的定量测定及体外抗病毒物质活性测定的研究。方法HCMV病毒悬液接种至人胚成纤维细胞（HF）单层,37℃吸附1h,分别用含0.463‰、0.925‰NaHCO3及0.5%、1%DMSO琼脂糖覆盖,1周后加盖第2层;2周后用0.5%结晶紫染色5min,计数、计算pfu/ml,采用PCR法对蚀斑培养物进行鉴定;分别用患者血清及HCMVAD169株兔免疫血清进行蚀斑抑制实验,计算中和抗体滴度;蚀斑减少实验测定不同浓度更昔洛韦（GCV）的抗HCMV活性。结果HCMV对照孔在5d出斑,蚀斑为圆形、实心、不透明状;两种浓度NaHCO3对蚀斑形成数量、大小有明显影响且病毒滴度差异有显著性（P〈0.05）。在含0.463‰NaHCO3培养孔内,出斑时间提前至3d;但不同浓度的DMSO对蚀斑数量、大小以及病毒滴度的影响差异无显著性（P〉0.05）。HCMV患者血清及HCMVAD169株兔免疫血清均可以抑制蚀斑形成。利用蚀斑减少实验测定GCV抗HCMV活性,可在7d内获得结果。结论HCMV蚀斑形成实验条件经优化后,可以方便稳定地对HCMV进行定量测定以及抗病毒活性物质的筛选和评价。     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG-CSF-Ala-17的纯化及部分理化性质

目的:建立高效简便的人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG-CSF-Ala-17纯化工艺,并对其进行鉴定.方法:大肠杆菌表达的rhG-CSF-Ala-17经包涵体洗涤、变性复性后,采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdex75凝胶过滤层析分离纯化.经SDS-PAGE和FPLC检测纯度,并进行N端氨基酸序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光谱分析、内毒素检测等指标对其进行鉴定.结果:纯化后的rhG-CSF-Ala-17纯度可达99.64%,比活为1×108 U*mg-1.其N端19个氨基酸分析与预期序列一致,紫外最大吸收光谱位于280 nm,氨基酸的组成与预期结果一致,内毒素含量低于部颁标准.结论:两步层析即可获得高纯度的rhG-CSF-Ala-17重组蛋白质,为进一步的rhG-CSF-Ala-17临床前和临床研究打下了基础.