Synphilin-1 siRNA对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质神经保护作用的研究

目的:观察synphilin-1 siRNA对6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺能神经元保护作用,从而探讨synphilin-1siRNA在帕金森病治疗中潜在的应用价值.方法:40只Wistar大鼠随机分成4组,假手术组、模型组、siRNA组、siRNA对照组,每组10只.模型组立体定向将6-OHDA注入左侧黑质制作PD模型,siRNA组、siRNA对照组立体定向将synphilin-1siRNA、阴性对照synphilin-1 siRNA分别注入到各组大鼠的左侧黑质,然后用与第一组相同的方法注入6-OHDA,假手术组注入生理盐水作为对照组,术后2周用阿朴吗啡(APO)(0.5 mg/kg)诱发旋转,进行大鼠行为学检测.术后4周取大鼠的术侧中脑黑质利用免疫组化检测synphilin-1,酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞(ir)的表达.结果:与假手术组比较,模型组synphilin-1-ir阳性细胞表达显著增加,而TH-ir阳性细胞显著减少;与模型组比较,siRNA组synphilin-1-ir阳性细胞表达显著减少,而TH-ir阳性细胞显著增加.结论:Synphilin-1在6-OHDA诱导的PD大鼠黑质神经元损伤机制中起一定作用,synphilin-1 siRNA具有神经保护作用,能为帕金森病的治疗提供新的思路和方法.     

6-OHDA诱导PD大鼠黑质神经细胞凋亡的观察

目的 探讨帕金森病发病过程中黑质神经元的缺失形式。方法 将6-OHDA立体定向微量注射于右侧内侧前脑柬(MFB)制备PD大鼠模型，观察大鼠的行为改变，并运用特殊染色，DNA原位末端标记技术检测黑质内多巴胺(DA)神经元凋亡的发生及其变化规律。结果 成功复制出符合临床特点的PD大鼠模型，且旋转行为与黑质区神经元数目呈反变关系。损伤侧黑质DA神经元存在着细胞凋亡。以术后两周最明显。结论 6-OHDA诱导的PD大鼠SNc中存在以凋亡为主的死亡方式。细胞凋亡在PD发病中可能起关键作用。     

基于文献数据库的6-OHDA帕金森病大鼠模型特点分析及在中药研究中的应用

目的 分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况,以期为6-OHDA模型在帕金森研究中的应用提供参考。方法 查阅近20年来中国知网(CNKI)和PubMed中应用6-OHDA建立PD大鼠模型的相关文献,分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况。结果 6-OHDA诱导的大鼠PD模型多选用雄性SD或Wistar大鼠,造模时注射部位多为单侧黑质、内侧前脑束或纹状体,多在造模4周后检测阿扑吗啡诱导旋转实验、脑组织形态学、分子生物学、生化指标以判断模型成功率及防治PD药物的有效性。结论 本文通过对6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况进行分析,为PD模型的造模和应用提供参考。     

PCBP1对神经毒素6-OHDA诱导的小胶质细胞凋亡的影响

目的 观察PCBP1对于神经毒素6-OHDA所介导小胶质细胞BV-2的细胞凋亡的影响。方法 将空载质粒pEGFP-N1与PCBP1构建重组质粒,经酶切、纯化、测序鉴定,采用脂质体转染法将PCBP1基因转入小胶质细胞BV-2细胞系24h时,用不同浓度6-OHDA于不同时间分别刺激BV-2细胞,采用流式细胞仪对细胞周期进行检测。结果 经测序鉴定显示成功构建PCBP1的真核表达载体。流式细胞仪检测:同等剂量6-OHDA对转染pEGFP-N1-PCBP1(实验组)和pEGFP-N1(对照组)的BV-2细胞作用不同时间后,实验组细胞的早期凋亡率较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而两组晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同剂量的6-OHDA对两组细胞作用24h后,实验组较对照组的细胞早期凋亡率明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而两组晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCBP1对6-OHDA所介导的细胞早期凋亡率有一定的影响,有利于PCBP1在帕金森病中进一步研究。     

PCBP1对6-OHDA作用的SH-SY5Y 细胞凋亡影响的研究

目的 研究核不均一核糖核蛋白(PCBP1)对6-OHDA作用的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法 构建含PCBP1的真核表达载体pEGFP/N1-PCBP1,转染SH-SY5Y细胞,用不同浓度6-OHDA对转染后SH-SY5Y细胞刺激不同时间后,流式细胞仪检测分析细胞凋亡率。结果 不同浓度的6-OHDA对转染PCBP1重组质粒的实验组和转染空质粒的对照组细胞作用24h后,实验组细胞早期凋亡率低于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);但实验组和对照组细胞晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。另外,25μmol/L 6-OHDA分别对实验组和对照组细胞作用不同时间后,同样,实验组细胞早期凋亡率低于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);该浓度6-OHDA作用不同时间后,实验组和对照组细胞晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 过表达PCBP1基因可抵抗6-OHDA对SH-SY5Y细胞的早期凋亡作用,降低细胞凋亡率。     

6-羟基多巴胺对帕金森病大鼠GDNF表达影响的实验研究

目的 :研究 6 -羟基多巴胺 (6 - OHDA)诱发的大鼠帕金森 (PD)模型 GNDF表达。方法 :通过脑内立体定向术注射 6 -羟基多巴胺建立大鼠 PD模型。采用免疫组化的方法观察损伤侧脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)表达。结果 :6 - OHDA诱发的 PD鼠 GDNF蛋白表达减低 (P <0 . 0 5 )。结论 :神经营养因子表达减少可能是 6 - OHDA诱发的 PD大鼠发病机制之一     

Ghrelin对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞线粒体损伤和细胞凋亡的影响

目的 观察Ghrelin能否保护人神经母细胞癌细胞(SH-SY5Y细胞)抵抗6-OHDA所致的线粒体损伤和细胞凋亡.方法 培养SH-SY5Y细胞,随机分为对照组、Ghrelin组、6-OHDA组和6-OHDA+Ghrelin组.通过6-OHDA处理SH-SY5Y细胞构建帕金森病(Parkinson's Disease,...     

睾丸内注射15M-PGF2_α对大鼠抗生精作用的研究

用睾丸注射的方法,研究了15M-PGF2α的抗生精作用。结果1,光镜和电镜观察,注射后4h～50d曲细精管精子发生受到明显抑制,管腔内有大量脱落、变性的生精细胞,主要是精子细胞和精母细胞。界膜中的类肌细胞呈过度收缩形态。2.注射后4h～3d血睾酮浓度显著降低。3.注射后15d～40d产生完全避孕效果。     

6-OHDA致大鼠不同程度黑质损伤与黑质感觉门控P50关系的研究（摘要）

目的观察帕金森病进程中不同程度黑质损伤时黑质感觉门控P50和黑质内DA神经元的变化,研究黑质感觉门控P50和不同程度黑质损伤的关系·方法给予大鼠6-OHDA药物毁损单侧黑质,根据给药时间的不同将其分为五组,D7、D11、D17、D22组和D30组,即分别于给药后第7、11、17、22天和30 d测定6-OHDA毁损大鼠和正常对照组大鼠感觉门控P50(sensory gating,SG P50)以及用APO诱发行为学变化·根据行为学的变化将每组大鼠继续分组:0 r/m in组,1~3 r/m in组,4~6 r/m in组和≥7 r/m in组·之后取大鼠黑质作免疫组化对黑质内DA神经元进行检测·结果(1…     

Effect of Formaldehyde on Spermatogenesis and Testicular Morphology in Adult Rats

Objective To study the effects of formaldehyde （FA） on spermatogenesis and testicular morphology in adult rats. Methods The rats were divided at random into two experimental groups and one control group, each comprising 10 individuals. Rats in two experimental groups were respectively exposed to FA at concentrations of 0.5mg.m^-3 and 10mg.m^-3 （12h per day） for 2 weeks. After the treatment, the testicular weight and morphology, as well as the quantity and quality of sperm were evaluated. Results compared with the control, the testicular weight, sperm count, the percentage of motile sperm significantly decreased （p〈0.05）, while the percent of abnormal sperm significantly increased （p〈0.05） in rats of 10mg.m^-3 FA exposure group. Microscopy with HE staining showed that seminiferous tubules atrophy, spermatogenic cells decreased, seminiferous epithelial cells disintegrated and shed in rats of 10mg.m^-3 FA exposure group. Conclusion FA has a harmful effect on the spermatogenesis; it induces tubular atrophy and sperm abnormality at a dose-dependent manner.     

Re-establishment of Spermatogenesis by Diethyistilbestrol after 2,5-Hexanedione-induced Irreversible Testicular Atrophy in Rats

To investigate the effects of diethylstilbestrol (DES) in reestablishing spermatogenesis and the mechanism by which estrogen works on spermatogenesis, rats were exposed to 1% 2,5-HD for 5 week. Then 0.1 mL of DES was given (s.c.) at a rate of 0.3 μg/kg, 30 μg/kg, 3 ms/kg every other day for 2 weeks respectively (DES group) while the other rats received ethyldeate only. Plasma testosterone (T) and LH were measured on the 8th week after the treatment. The rats were killed at the 18th week. The left testis was histopathologieally examined. In all the rats in the DES groups, spermatogenesis was re-established and the rats in the 30 μg/kg group showed the best results. Serum T was suppressed markedly in rats of 30 μg/kg and 3 mg/kg groups while T was only mildly inhibited in 0.3 μg/kg group, without significant difference found in serum LH. It is concluded that the nearly complete testicular atrophy could be reversed by DES treatment in rats. Estrogen plays an important part in spermatogenesis, and the role of estrogen in spermatogenesis is more than suppressing the hypothalamo-pituitary-testis axis.     

5-HT_(3/4)受体在内源性多巴胺调节胃动力中的作用

目的研究5-HT3/4受体在内源性多巴胺调节胃动力中的作用,探讨帕金森病(Parkinson's disease,PD)胃轻瘫发病的可能机制。方法用6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损毁大鼠中枢黑质多巴胺能神经元,建立此模型。采用实时荧光聚合酶链反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印记法(Western blotting),检测5-HT3/4受体在6-OHDA处理模型大鼠胃体的表达。采用Power lab生物信号采集系统记录离体大鼠胃体纵行肌的收缩活动。结果在基础状态下,6-OHDA处理模型组大鼠离体胃体纵行肌的收缩强度明显弱于对照组。加入5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)后,6-OHDA处理模型大鼠肌条的收缩强度上升幅度明显小于正常对照组。Real-time PCR结果显示6-OHDA处理模型大鼠胃体5-HT3/4受体的基因表达水平显著高于正常组大鼠。Western blotting结果显示6-OHDA处理模型大鼠胃体5-HT4受体蛋白水平下调,5-HT3受体蛋白水平变化不明显。结论损毁中枢黑质多巴胺能神经元可引起外周胃肠道内源性多巴胺(dopamine,DA)含量升高,胃动力减弱,5-HT4受体蛋白水平下调。6-OHDA处理模型大鼠胃动力减弱可能与5-HT受体蛋白水平下调有关。     

重组Persephin腺病毒对6-OHDA损伤神经干细胞的保护作用

[目的]探讨Persephin对6-羟基多巴(6-OHDA)损伤神经干细胞的保护作用.[方法]用RT-PCR法从人胚胎脑获得Persephin cDNA,构建重组Persephin腺病毒.用Western blot方法分析Persephin基因的表达,Hoechst染色和流式细胞术测定6-羟基多巴对神经干细胞凋亡的诱导作用.[结果]从人胎脑成功克隆了人Persephin cDNA,构建了其腺病毒载体.Western blot证实重组Persephin腺病毒在神经干细胞中的表达,表达的Persephin可抑制6-羟基多巴诱导的神经干细胞凋亡.[结论]Persephin对6-羟基多巴损伤神经干细胞具有保护作用.     

宝生汤对生精障碍小鼠睾丸及精子的影响

探讨宝生汤对生精障碍模型小鼠睾丸的影响。造模并分组，检测精子密度、活动率，睾丸、附睾重量，小鼠体重，睾丸组织病理切片。结果显示：宝生汤能明显促进损伤睾丸病理修复，提高小鼠精子活动率，增加小鼠睾丸和附睾重量。说明宝生汤有明显的促生精子，修复睾丸病理的作用。     

灵芝孢子油干预治疗6-羟多巴帕金森病大鼠模型的实验研究

[目的]研究灵芝孢子油对6-羟多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨该药对黑质多巴胺能神经元的保护作用.[方法]100只SD大鼠随机分为正常对照组20只、6-OHDA组40只、灵芝孢子油 6-OHDA组40只.通过脑部立体定向法将6-OHDA注射到SD大鼠一侧黑质致密部建立6-OHDA大鼠PD模型,灵芝孢子油 6-OHDA组在造模前3 d开始给灵芝孢子油每天500 mg/kg,连续10 d.6-OHDA组喂食生理盐水做对照.造模后每周给予阿朴吗啡观察大鼠旋转行为的变化,4周后用高效液相色谱法检测大鼠纹状体多巴胺及其代谢物含量,免疫组织化学法检测黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,western blot法对TH蛋白进行半定量测定.[结果]①灵芝孢子油 6-OHDA组出现旋转行为的大鼠比例为10%,6-OHDA组为45%,两组比较有显著性差异.②纹状体多巴胺及其代谢物含量在两组间存在差异,多巴胺手术侧含量/手术对侧含量在灵芝孢子油 6-OHDA组为(60.12±7.5)%,在6-OHDA组为(38.58±7.26)%.③在黑质致密带区灵芝孢子油 6-OHDA组的TH免疫阳性细胞及TH蛋白表达量均较6-OHDA组显著增多.[结论]灵芝孢子油能明显改善6-OHDA大鼠模型行为学,增加纹状体多巴胺及其代谢物含量并提高黑质多巴胺能神经元的残存率,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用.     

脑室注射6-羟多巴胺后电针对大白鼠丘脑内侧区超微结构的影响

6-羟多巴胺(6-OHDA)和6-OHDA 电针组大白鼠丘脑内侧区可见变性终末内电子密度增加,囊泡处于不同的变性阶段或聚积成团,以及嗜锇性物质出现。变性终末可属突触前也可属突触后成份。关于囊泡与痛阈的关系,无论何组加用电针后都可使痛阈在原有的基础上增高,尽管升高的值各组不一。与此同时,囊泡的数量及线粒体断面随着痛阈的升高亦增加。     

药物干预对6-羟基多巴胺处理后大鼠多巴胺神经元、多巴胺及其代谢产物的影响

目的:研究古拉定、川芎嗪、丹参对6-羟基多巴胺(OHDA)处理后大鼠的黑质多巴胺(DA)神经元及纹状体细胞外液DA的影响。方法;将6-OHDA注射入大鼠黑质,饲养2周后用阿朴吗啡(APO)诱发其旋转行为并计数,饲养2个月时利用微透析法采集大鼠纹状体细胞外液,然后大鼠灌注取脑,酪氨酸羟化酶(TH)单抗染色,观察正常对照组、单纯手术组、古拉定治疗组(古拉定12mg/kg腹腔注射每天1次,共14天)、川芎嗪治疗组(川芎嗪50mg/kg腹腔注射每天1次,共14天)、丹参治疗组(丹参2.5ml/kg腹腔注射每天1次,共14天)的黑质DA神经元的变化,用高效液相色谱电化学法检测细胞外液的DA及代谢产物的含量变化。结果:TH单抗免疫组化染色可见4个手术组的黑质DA神经元计数明显低于正常对照组,差异有极显著性(P<0.001),而4组组间无统计差异;4个手术组纹状体DA的含量低于对照组,差异有显著性(P<0.001),4组的二羟苯乙酸(DOPAC)/DA低于对照组(P<0.001),4组组间均无差异。结论:古拉定、川芎嗪、丹参不能阻止6-OHDA对黑质DA神经元的毒性作用,亦不能增加损伤侧纹状体的DA含量。     

Co-administration of Mixed Steroid Hormones can Enhance the Recovery of Spermatogenesis Damaged by Gossypol Acetic Acid in Adult Rats

Objective To determine whether co-administration of mixed steriod hormones can enhance the restoration of spermatogenesis damaged by gossypol acetic acid ( GA ).Methods Adult male Wistar rats were trea...     

不同年龄人睾丸组织及精液中ALR表达研究

目的研究人不同年龄睾丸组织和精液中肝再生增强因子(ALR)的表达. 方法临床收集小儿、青年男性,有过生育的老年男性的睾丸以及正常精液,用S-P法免疫组化检测睾丸组织中ALR的表达,用ELISA法检测精液ALR.结果睾丸组织中hALR表达呈胞浆、胞膜型,hALR广泛分布于各级生精细胞、间质细胞和支持细胞,以精原细胞、初级精母细胞表达最强;小儿睾丸各种细胞均有表达且强,成人以间质细胞表达最强;不同年龄段间睾丸组织ALR的表达有显著差异(P<0.05),小儿最强、成年次之、老年较弱.正常生育组精液的ALR检测结果呈阳性.结论人不同年龄睾丸的hALR表达、作用可能不一样,睾丸ALR的表达与睾丸的发育以及精子生成可能相关.正常精液中存在ALR,可能参与了生殖过程.