真武汤HPLC-ELSD指纹图谱及13种成分含量测定研究

目的 建立真武汤HPLC-ELSD指纹图谱,采用化学模式识别法对其进行分析和筛选出真武汤的标志性成分,并以其为指标建立真武汤含量测定方法。方法 采用HPLC-ELSD法建立16批真武汤指纹图谱,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）进行相似度评价,确定共有峰及其归属,运用聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）,筛选出真武汤的指标性成分。结果 建立了真武汤指纹图谱,确认了38个共有峰,相似度均>0.95;CA、PCA、OPLS-DA结果一致,将样品分为3类;不同批次真武汤样品差异贡献较大的指标成分指认了11个,即苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、猪苓酸C、茯苓酸、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、羟基芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷;6-姜酚、6-姜烯酚为生姜主要活性成分,故将以上13个成分作为真武汤指标性成分,各色谱峰分离度较好,线性关系良好,平均加样回收率为96.46%～99.80%,RSD≤3.15%;16批次样品中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、猪苓酸C、茯苓酸、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、羟基芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、6-姜烯酚的质量分数分别为283.93～576.86、25.05～147.39、62.96～303.37、31.24～131.27、9.76～44.04、32.15～83.55、76.55～333.13、17.48～146.61、456.58～1554.14、3 322.48～5 590.01、158.21～556.50、525.85～582.92、68.52～74.73 mg/g。结论 指纹图谱与PCA、CA、OPLS-DA相结合可全面地评价真武汤质量,该方法稳定、可靠,为真武汤质量评价提供参考。     

柴胡疏肝散水提液HPLC特征图谱研究及指标成分的测定

目的建立柴胡疏肝散水提液高效液相色谱特征图谱,并定量测定其中主要指标成分。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Thermo Syncronis C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.2%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,检测波长230、277、283 nm,柱温25℃,体积流量1 mL/min。结果建立了特征图谱,包含17个共有峰,各峰分离度好,指认出8个特征成分,同时测定了5种成分,芍药苷、甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分别在0.215 9～2.159μg、0.028 13～0.281 3μg、0.630 9～6.309μg、0.432 0～4.320μg、0.361 0～3.610μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为96.5%、102.8%、98.0%、98.8%、99.6%。结论本实验建立的特征图谱可同时对柴胡疏肝散的5种主要成分进行分析,可全面评价该制剂的质量。     

HPLC同时测定乌七祛风散片中4种生物碱的含量

目的:建立乌七祛风散片(制草乌、三七、断节参、雪上一枝蒿、防风等9味中药组成)中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱的HPLC测定方法。方法:色谱条件,Hanbon-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相[乙腈-四氢呋喃(25∶15)](A)-0.1 mol·L-1醋酸铵溶液(每1 000 m L加冰醋酸0.5 m L)(B),流速1.0 m L·min-1,柱温30℃,检测波长232 nm。结果:4种生物碱分离良好,各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.999 0),加样回收率分别为101.10%(RSD 2.1%),101.09%(RSD 2.2%),102.04%(RSD 1.6%),97.83%(RSD 2.7%),最低检测限分别为3.4,1.7,2.2,0.8 ng。结论:该HPLC方法稳定可靠、简便易行,可用于同时测定乌七祛风散片中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱含量。     

HPLC同时测定四逆汤中4种指标性成分的含量

目的:建立四逆汤中苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚4种成分的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用Thermo Hypersil BDS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长235 nm。结果:苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸、6-姜酚均达到良好分离,线性范围分别为0.006～0.12(r=0.999 9),0.021～0.42(r=0.999 7),0.012～0.24(r=0.999 4),0.018～0.36 g.L-1(r=0.999 5);平均回收率分别为99.3%(RSD 1.5%),96.9%(RSD0.60%),100%(RSD 1.3%),100%(RSD 2.1%)。结论:该方法简便、准确、实用性强,可用于四逆汤中4种指标性成分的含量测定。     

HPLC法同时测定附子中6种单酯和双酯型生物碱

目的 建立附子中单酯及双酯型生物碱成分的高效液相色谱定量方法.方法 附子干燥粉末用氨水浸润后,以异丙醇一醋酸乙酯(1:1)超声提取30 min,提取液蒸干后溶于0.01%盐酸甲醇中,经微孔滤膜滤过后,20 pL进行HPLC分析,HPLC分析采用Zorbax Extend-C18柱(250 mmX 4.6 mm,5 μm),以乙腈-40 mmol/L醋酸铵缓冲液(氨水调pH 10.0)为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长230 nm.结果 6种被测生物碱成分,包括乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱分离良好,各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.999),重现性好,6种成分的RSD(n=5)均小于1.50%;平均加样回收率(n=5)为98.20%～100.47%;最低检测限分别为0.26、0.36、0.92、0.30、0.52、0.82 ng.结论 本研究所建立的HPLC方法稳定可靠、简便易行,可用于附子类药材中单酯型和双酯型生物碱的同时定量分析,为附子药材及其炮制品的质量评价和质量控制奠定了基础.     

小金丸中制草乌单酯型生物碱类成分的含量测定

目的:通过比较不同厂家及批号小金丸中单酯型生物碱类成分的含量,为该制剂的临床用药安全提供参考。方法:建立小金丸中制草乌单酯型生物碱类成分(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱)的HPLC含量测定方法,流动相乙腈-20 mmol·L-1磷酸二氢钠(用三乙胺调节pH 6.5)(47∶53),检测波长235 nm。比较4个厂家生产的8批样品中3种生物碱类成分含量。结果:3种生物碱类成分线性范围均为4~60 mg·L-1,加样回收率分别为98.42%,101.79%,102.13%。3种单酯型生物碱总质量分数最高达214.718μg·g-1,最低值18.452μg·g-1。结论:不同厂家和同一厂家不同批次样品中3种生物碱的含量存在较大差异,可能与原材料质量、制剂工艺及生产设备等因素有关。     

HPLC同时测定附子理中丸中3种单酯型生物碱含量

目的:建立附子理中丸中3种单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法.方法:色谱柱Alltimate C18(4.6 mm ×250 mm,5μm);保护柱Alltimate C18(4.6 mm ×7.5 mm,5μm);流动相40 mmol·L-1乙酸铵(加氨水调pH 10.00 ±0.5)-乙腈梯度洗脱;流速1.0 mL· min-1,检测波长240 nm,柱温35℃.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在进样量0.212 ～1.272 μg,0.0116～0.0696 μg,1.035 ～6.210 μg线性关系良好,r分别为0.9996,0.9997,0.9996,在8h内稳定性良好.同时,针对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱,附子理中丸(河南宛西)平均加样回收率依次为97.59％ (RSD 1.90％)、98.81％(RSD 2.00％)、98.37％(RSD 1.72％),附子理中丸(安徽东芝堂)平均加样回收率依次为98.18％ (RSD 2.39％)、103.06％(RSD 1.77％)、98.23％(RSD 2.05％),而附子理中丸(北京同仁堂)仅含苯甲酰新乌头原碱的平均加样回收率100.17％(RSD 2.29％).结论:方法结果准确可靠、快速,适用于构建附子理中丸成方制剂的多指标质量评价模式.     

浸泡程度对川乌炮制品传统质量及生物碱成分的影响

目的:考察川乌2010年版《中国药典》炮制法中"浸泡至内无干心"的科学性。方法:制备浸泡不及、适中和太过的川乌浸泡品及其蒸制品,观察性状,按2010年版《中国药典》方法测定各样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量。结果:浸泡适中炮制品易于切制,饮片片型平坦,不易破碎。浸泡使生物碱类成分含量降低,随浸泡程度加深,双酯型生物碱总量的降低率分别为28.7%,36.8%,44.9%,单酯型生物碱总量的降低率分别为21.8%,25.5%,40%。蒸制使双酯型生物碱含量显著降低,较生品均降低>98%;单酯型生物碱含量显著增加,约为生品2倍。结论:川乌浸泡至"内无干心"蒸制品中生物碱类成分变化适中,饮片质量较佳,川乌浸泡至"内无干心"具有一定科学性。     

HPLC法同时测定痹通药酒中4种生物碱成分

目的建立HPLC法同时测定痹通药酒中4种生物碱的含有量。方法该药物乙醚提取液分析采用Agilent C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相[乙腈-四氢呋喃(25∶15)]-0.1 mol/L醋酸铵,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;检测波长235 nm。结果新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、苯甲酰新乌头原碱分别在39.87~199.36、99.63~498.13、13.87~69.33、39.65~198.27μg/m L范围内线性关系良好(r0.999 0),平均加样回收率分别为98.24%(RSD=0.75%)、99.54%(RSD=0.50%)、97.60%(RSD=1.54%)、99.52%(RSD=1.32%)。结论该方法简便、准确、可靠,可用于痹通药酒的质量评价和控制。     

基于指纹图谱结合化学计量法对乌头属藏药材榜那的多指标成分分析

目的建立常用乌头属藏药材榜那的指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为多基原药材的质量标准制定和临床安全用药提供参考。方法采用HPLC建立榜那药材的指纹图谱并进行相似度评价;测定30批榜那药材中7种生物碱成分含量,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)评价榜那药材的2种不同基原植物的生物碱成分的差异。结果建立的指纹图谱确认17个共有峰,指认出12-表-欧乌头碱、雪上一枝蒿庚素、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、3-乙酰乌头碱7个色谱峰。基于相似度分析,铁棒锤和伏毛铁棒锤种内化学指纹图谱均一,种间指纹图谱存在一定差异。PCA和OPLS-DA结果表明铁棒锤和伏毛铁棒锤2种基原物种在这7种化学成分含量上存在一定差异;且依据OPLS-DA和t检验分析结果可确定伏毛铁棒锤中主要差异成分12-表-欧乌头碱和乌头碱含量显著高于铁棒锤(P0.01)。结论本实验所建立的指纹图谱和多组分定量分析方法简便、易操作、信息量大,可用于榜那药材的质量和临床用药安全性控制;有必要建立和完善榜那的双酯型生物碱限度测定。     

甲嘎松汤HPLC特征指纹图谱

目的: 建立甲嘎松汤的HPLC特征指纹图谱。 方法: 选择6-姜辣素和去氢二异丁香酚为对照成分,采用HPLC测定,色谱条件为Platisil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-甲醇-0.3%磷酸水梯度洗脱,检测波长274 nm,柱温25 ℃,流速1.0 mL·min^-1,进样量10 μL。利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"2004年A版分析10批甲嘎松汤样品的HPLC指纹图谱。 结果: 共获得15个共有峰,指认了其中2个共有峰分别为6-姜辣素和去氢二异丁香酚。10批样品的指纹图谱相似度均>0.9,表明相关性较好,所含化学成分基本一致。 结论: 该法操作简便、灵敏度高、准确可靠,为甲嘎松汤的质量评价提供科学依据。     

真武汤对渗透泵恒释ADR肾病综合征大鼠的干预作用

目的:通过渗透泵恒释技术建立阿霉素肾病综合征(NS)模型,以真武汤干预治疗,评价真武汤对NS大鼠的治疗效果。方法:阿霉素(14.5 mg.kg-1)按渗透泵灌注要求填充,手术植入大鼠腹腔,通过渗透压恒释阿霉素诱发肾病综合征模型,将大鼠随机分为真武汤高、低剂量组(24,12 g.kg-1.d-1),地塞米松组(0.9 mg.kg-1.d-1),给药4周,观察动物一般情况,尿蛋白、血压、血脂、血清蛋白及肾功能指标变化,肾小球IgG表达,评价阿霉素渗透泵肾病综合征模型以及真武汤的干预作用。结果:阿霉素渗透泵NS大鼠成活率显著提高,实验过程中无动物死亡;模型组大鼠第2周出现典型的肾病综合征症状,与空白组比较,24 h尿蛋白、血压、血脂明显升高,血清蛋白及肾功能明显降低(P<0.01);与模型组比较,真武汤高、低剂量组能显著改善NS大鼠精神、活动、摄食量、毛色等状况,明显减轻NS大鼠24 h尿蛋白(109.85±14.65),(49.75±5.14),(51.43±4.46)mg,恢复大鼠血清总蛋白(TP):(57.64±3.64),(61.26±2.21),(60.85±1.91)g.L-1,白蛋白(ALB):(21.70±2.18),(25.93±2.74),(25.00±2.64)g.L-1水平,降低大鼠血清总胆固醇(2.91±0.50),(2.17±0.26),(2.12±0.31)mmol.L-1、甘油三酯(1.05±0.29),(0.49±0.12),(0.61±0.15)mmol.L-1水平,降低大鼠血压、血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)(P<0.05或P<0.01);减少大鼠肾小球系膜区IgG的沉积。结论:通过渗透泵恒释阿霉素建立肾病综合征模型,可提高造模成功率和模型稳定性,真武汤能减少NS大鼠尿蛋白,提高血浆蛋白水平,减少血液高凝状况,恢复肾功能及肾小球结构,改善NS症状。     

真武汤治疗慢性心力衰竭的实验动物模型研究进展

为研究适合真武汤治疗慢性心力衰竭的实验动物模型,本文通过文献检索的方法 ,以"真武汤"、"慢性心力衰竭"、"实验"为关键词进行检索,对现有真武汤治疗慢性心力衰竭动物实验中造模方法进行总结。实验动物包括Wistar大鼠、SD大鼠、健康成年杂种犬、新西兰兔,造模方法主要为手术法、药物法、手术与药物结合法,其中手术法又分为腹主动脉缩窄法、动静脉造瘘法、结扎冠状动脉法,药物法分为腹腔注射阿霉素、静脉缓注戊巴比妥钠、普萘洛尔合维拉帕米等,药物结合手术法即灌服寒凉药、结扎左冠脉、缩窄升主动脉结合,模拟符合中医少阴阳虚证的心力衰竭模型。然而,目前的文献检索结果只有一篇兼顾真武汤病证结合的实验动物模型,多数按照西医病理机制进行造模,不适合中医药自身的发展特点。参考文献24篇。     

保元汤合真武汤联合常规西药治疗慢性心衰的临床观察

目的观察保元汤合真武汤联合常规西药治疗慢性心衰的临床疗效。方法选择大连市中医医院心病科病房患者50例,随机分为对照组和治疗组。治疗组予中药汤剂联合常规西药治疗,对照组单纯应用西药治疗。治疗三周后观察两组患者治疗前后心衰临床症状,6分钟步行试验,血BNP指标及左室射血分数、左室舒张及收缩末期内径大小。结果两组患者经过治疗显示:治疗组显效12例,有效12例,无效2例,总有效率92.3%,治疗组优于对照组(P0.05);并且治疗组血BNP值明显下降,6分钟步行试验距离较前增加,左室射血分数明显上升,左室舒张及收缩末期内径明显下降,治疗组的治疗效果明显优于对照组,两组差异有统计学意义(P0.05)。结论保元汤合真武汤联合常规西药治疗心衰临床疗效显著,优于单纯应用常规西药治疗患者,值得临床推广应用。     

正交试验优选四逆汤机械煎煮工艺

目的:优化四逆汤机械煎煮工艺。方法:以苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚的含量为考核指标,采用RP-HPLC法测定指标成分含量,通过单因素试验和正交设计考察加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等影响因素,优选四逆汤机械煎煮工艺。结果:四逆汤最佳机械煎煮工艺为浸泡时间60 min,煎煮时间60 min,加水量10倍,煎煮2次。结论:优化的煎煮工艺合理可行,为提高四逆汤剂质量与临床疗效提供实验基础。     

真武汤加减治疗老年2型糖尿病视网膜病变

目的:观察真武汤加减治疗老年2型糖尿病视网膜病变的临床疗效.方法:选择80例老年2型糖尿病视网膜病变患者并随机分为观察组和对照组各40例,对照组采用传统的2型糖尿病视网膜病变西医治疗,观察组在此基础上联合采用真武汤加减治疗,均治疗3个月,观察两组患者视力改善及眼底病变的情况,治疗前后测定其血浆内皮素水平.结果:治疗后两组患者内皮素均较治疗前明显下降,且观察组治疗后明显低于对照组(P＜0.01).观察组总有效率为80.00％,对照组总有效率为50.00％,观察组疗效明显优于对照组(P＜0.05).结论:真武汤加减联合西药治疗老年2型糖尿病视网膜病变,可明显提高疗效,并有效降低血浆内皮素水平,对于微血管病变并发症的防治具有重要意义.     

真武汤对慢性肾衰竭大鼠肾功能影响的实验研究

目的:观察真武汤对实验性慢性肾衰竭大鼠肾功能的影响。方法:采用“单肾切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠慢性肾衰竭模型。予真武汤灌胃治疗。每周测体重2、4h尿量和24h尿蛋白,给药4周后处死取血测SCr、BUN、血钙、血磷、红细胞计数、血红蛋白含量。结果:真武汤在24h尿蛋白量、SCr、BUN、血磷、血钙、血红蛋白方面的作用与模型组对比有改善。结论:真武汤对单侧肾切除后腺嘌呤性慢性衰竭大鼠的肾功能具有一定的改善作用。     

真武汤对心肾综合征患者肾微循环及肾功能的影响

目的观察真武汤对心肾综合征患者肾微循环及肾功能的影响。方法将80例心肾综合征患者随机分成两组,每组40例。并选取20名健康体检者作为健康组。治疗组与对照组均采用常规西药治疗,治疗组加用真武汤治疗,观察两组临床症状、中医证候积分改善情况,测定两组血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、B型钠尿肽（BNP）水平,对患者右肾进行超声造影,评估肾微循环灌注情况,并与健康组比较。结果治疗组临床疗效和中医证候疗效总有效率（85.0%和95.0%）明显高于对照组（60.0%和25.0%）。两组患者治疗前血Scr、BUN及BNP明显高于健康组（P〈0.01）;治疗后两组上述指标均下降（P〈0.05）,但治疗组下降幅度大于对照组,达峰时间、峰值强度减半时间缩短,两组差异具有统计学意义。结论心肾综合征患者常规西药联合真武汤治疗,可增强肾微循环灌注及肾功能,改善临床症状。