补肾活血汤通过抑制Wntβ-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠疗效及血管形态、VEGF的影响

目的:探究补肾活血汤通过抑制Wntβ-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠疗效及血管形态、血管内皮生长因子受体(VEGF)的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型组和干预组。通过臀肌下注射醋酸泼尼松龙建立模型组模型。干预组在建模后使用补肾活血汤灌胃。HE染色被用于检测股骨头组织学情况。CT扫描股骨头血管情况。Western Blot检测股骨头组织中Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平。结果:建模后骨小梁稀疏变细,并出现明显的断裂和缺损,骨细胞数目少;干预组骨小梁缺损显著轻于模型组。模型组骨小梁面积显著降低而空骨陷窝率显著增加(P0.01),干预组的骨小梁面积显著高于模型组而空骨陷窝率显著低于模型组(P0.01)。Sham组大鼠股骨头血管呈现网状,分布较为均匀,结构清晰;模型组大鼠股骨头内血管明显减少,微结构不清晰;干预组股骨头内血管呈现网状,部分呈网状。模型组血管体积分数和血管厚度显著低于sham组(P0.01),干预组血管体积分数和血管厚度显著高于模型组(P0.01)。模型组的Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平显著低于Sham组(P0.01),干预组的Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平显著高于模型组(P0.01)。结论:补肾活血汤具有上调Wntβ-catenin信号通路以及VEGF表达的作用,进而促进骨骼组织血管的生成,治疗模型组。     

健脾活血方对激素性股骨头坏死血管内皮生长因子表达的影响

目的:通过观察健脾活血方对激素性股骨头坏死(SONFH)鸡股骨头内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其防治SONFH的作用机制。方法:胸肌注射甲基氢化泼尼松建立SONFH模型,64只来航鸡随机平均分为正常组、模型组、洛伐他汀组和健脾活血组;实验8周和16周翼下静脉采血测定血清总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)的含量,并取双侧股骨头行HE染色观察其组织病理学改变,用免疫组织化学法检测股骨头内VEGF的表达水平。结果:实验8周和16周,模型组股骨头出现空骨陷窝率和脂肪面积明显增多等病理改变,与正常组相比,股骨头内VEGF表达明显减少(P0.05),血清CHO、TG水平明显升高;洛伐他汀与健脾活血方能不同程度改善由激素引起的股骨头坏死组织形态学改变,升高股骨头内VEGF的表达,减低血清TG、CHO水平(与模型组比较P0.05)。结论:健脾活血方可上调股骨头内VEGF的表达,这可能是其有效改善股骨头微循环障碍,防治SONFH的作用机制之一。     

金骨片防治激素性股骨头坏死对VEGF和BMP-2表达的影响

目的:探讨金骨片防治激素性股骨头坏死过程中血管内皮生长因子和骨成型蛋白2表达的影响及促进骨折愈合的作用机理。方法:将日本大耳兔分为5组,正常组、模型组、阳性对照组、高剂量组、低剂量组;除正常组外,其余各组给予甲基强的松龙10mg/kg注射,同时对阳性对照组、高剂量组、低剂量组给予相应的药物防治干预,7周后处死动物采用组织病理学观察和免疫组织化学方法检测,分析5组动物股骨头VEGF和BMP-2的表达。结果:免疫组织化学染色显示,正常组VEGF和BMP-2的表达高于其他组,差异有显著性意义(P<0.05);高剂量组和阳性对照组的VEGF和BMP-2的表达明显强于低剂量组和模型组,差异有显著性意义(P<0.05);低剂量组强于模型组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:金骨片防治激素性股骨头坏死过程中促进VEGF和BMP-2表达,这可能是金骨片防治激素性股骨头坏死作用的机制之一。     

温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死血清OPG、RANK、RANKL的影响

目的：探讨温阳补肾方对兔激素性股骨头坏死血清OPG、RANK、RANKL表达的影响,进一步揭示温阳补肾方对激素性股骨头坏死的作用机制。方法：136只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、中药低、中、高剂量组。造模成功后,分别于给药后第4、8、12周取血清,用酶联免疫法检测OPG／RANK／RANKL含量。结果：第4周时,正常组、中药中、高剂量组RANK、RANKL明显低于模型组（P〈0．01）,而OPG明显高于模型组（P〈0．01）。第8周时,正常组、中药低、中、高剂量组RANK、RANKL明显低于模型组（P〈0．01）,而OPG明显高于模型组（P〈0．01）。第12周时正常组、中药低、中、高剂量组RANK、RANKL明显低于模型组（P〈0．01）,而OPG明显高于模型组（P〈0．01）。结论：大剂量激素使用可上调RANK、RANKL的表达,下调OPG的表达,使骨过度吸收从而破坏骨质导致股骨头坏死。温阳补肾方可以提高OPG表达,降低RANK、RANKL的表达,抑制破骨细胞的活化,促进新骨的形成,是治疗激素性股骨头坏死的作用机制之一。     

补肾活血汤干预骨-血耦连改善大鼠激素性股骨头坏死的作用机制研究

目的：探讨补肾活血汤改善激素性股骨头坏死大鼠的作用机制。方法：64只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、阳性药物组和补肾活血汤低、中、高药物组（简称低、中、高剂量组）。除对照组外，其余组别均建立激素性股骨头坏死疾病模型，药物组分别给予对应的药物及剂量干预8周，干预后收集大鼠股骨组织，采用micro-CT检测股骨形态；HE染色观察股骨头形态；Western blot、RT-qPCR检测BMP2、VEGFA、DLL4蛋白表达；免疫荧光检测股骨髓组织Osterix、vWF表达情况。结果：与对照组相比，模型组大鼠股骨内骨小梁紊乱，骨小梁面积比明显减小（P <0.05），空骨陷窝率明显增加（P <0.05）,BMP2、VEGFα蛋白表达明显下调（P <0.05）,DLL4蛋白表达明显上升（P <0.05），免疫荧光下可见骨髓中Osterix、vWF分泌减少；各治疗组骨小梁紊乱改善，除低剂量组外骨小梁面积比明显增大（P <0.05），空骨陷窝率明显增加（P <0.05）,BMP2、VEGFα蛋白表达明显上调（P <0.05）,DLL4蛋白表达明显下调（P ...     

不同治法方药对激素性股骨头坏死鸡股骨头OPGRANKLmRNA表达的影响

目的:观察比较健脾化痰、活血通络(简称健脾)与补肾壮骨、活血通络(简称补肾)2种治法对激素性股骨头坏死鸡股骨头骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)mRNA表达的影响,探讨2者防治股骨头坏死的分子机制。方法:64只来杭鸡,随机分为对照、模型、健脾和补肾组,除对照组外均胸肌注射甲基泼尼松琥珀酸钠(5.2 mg·kg-1),健脾及补肾组在造模同时ig给予相应中药(6,9 g·kg-1.d-1),连续16周。给药8周和16周后,分批处死动物,取双侧股骨头,原位杂交法检测股骨头内OPG,RANKL mRNA的表达情况,并计算其比值。结果:与正常组相比,模型组8周和16周时股骨头内OPG阳性细胞数显著减少,分别为(778±189),(696±108)个,RANKL分别为(717±164),(519±162)个,明显增多(P<0.01);与模型组相比,健脾方在8周就可以明显上调OPG阳性细胞数达(1 049±211)个,同时也降低RANKL阳性细胞数至(454±166)个(P<0.05或P<0.01),升高OPG/RANKL比值(P<0.05),而补肾组此时作用不明显,16周时作用比健脾组强(P<0.05)。结论:健脾化痰、活血通络和补肾壮骨、活血通络2种不同治法方药均可调节股骨头内OPG和RANKL的基因表达,这可能是其有效抑制破骨细胞分化、防治激素性股骨头坏死的作用机制之一;健脾化痰、活血通络方药起效时间相对较早。     

不同中药干预对激素性股骨头坏死与VEGF表达相关性影响的研究进展

对不同中药在干预激素性股骨头坏死与血管内皮生长因子(VEGF)表达相关性的作用及原理进行归纳总结。根据国内外近10年的研究报道,按治法不同,分为活血补肾法、活血化瘀法、补肾壮骨法、活血健脾法4部分进行分述,发现不同的中药汤剂、胶囊、注射液、提取物在治疗激素性股骨头坏死中,可通过提高VEGF的表达,促进血管新生,改善血运,达到骨修复重建作用,可为临床提供有效的治疗方案参考。并对其深入研究机制等提出展望。     

温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔股骨头形态学的影响

目的:观察温阳补肾方对激素性股骨头坏死模型兔股骨头形态学的影响。方法:136只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、中药低、中、高剂量组。造模成功后,分别于给药后第4、8、12周取双侧股骨头行常规苏木精-伊红染色,计算空骨陷窝率。结果:第4、8、12周时,正常组、中药中、高剂量组空骨陷窝率均明显低于模型组(P0.01)。结论:大剂量激素使用可增加股骨头空骨陷窝率,使骨过度吸收从而破坏骨质导致股骨头坏死。温阳补肾方可以降低空骨陷窝率,抑制破骨细胞的活化,促进新骨的形成。     

基于中医“治未病”理论探讨骨蚀灵胶囊预防激素性股骨头坏死的实验研究

目的:探讨激素诱导股骨头坏死发生发展过程中脂质代谢的变化规律,以及早期给予中药干预的作用效果及机制,寻求有效预防激素性股骨头坏死的新思路。方法:通过激素诱导股骨头坏死实验兔模型,实验分正常组、模型组、西药组、中药组,分组给药,于给药后3、5周测定各组家兔血脂;同时观察局部股骨头骨组织形态学的相应改变。结果:3周时,与正常对照组比较,模型组、中药组、西药组兔血清TC、TG、LDL均明显升高(P0.01),HDL明显降低(P0.05),与模型组比较,中西药组血脂无明显变化;5周时,中药组、西药组血清中的TC、TG、LDL开始明显降低,明显低于模型组(P0.05),但仍高于正常组(P0.05)。光镜观察模型组兔股骨头骨组织有骨坏死表现,中西药组病变不明显。结论:脂质代谢是激素诱发股骨头坏死的重要病理基础之一;中药通过调节脂质代谢可以早期预防激素性股骨头坏死;体现其多"靶点"整合调节作用,且毒副作用小。     

活血通络汤对激素性股骨头坏死模型VEGF、TNF-α影响的研究

目的通过研究活血通络汤对激素性股骨头坏死(steroid induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)模型中VEGF(vascular endothelial growth factor,血管内皮因子)、TNF-α(Tumor necrosis factor,肿瘤坏死因子α)的表达变化,来阐述活血通络汤对激素性股骨头坏死的作用机制。方法将192只日本大耳兔随机分组,模型组A、模型组B、模型对照组C、空白对照组D各48只,A、B、C组运用贺西京造模法造模。A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料,并于第2、5、8周末检测血中VEGF、TNF-α的含量,观察股骨头病理,计算空骨陷窝率。结果在不同时期比较,随实验时间的延长,在骨陷窝率方面,A组有下降趋势,B、C组均逐渐上升,但B组上升幅度小于C组;在血清VEGF方面,C组呈逐渐下降趋势,A组呈上升趋势,B组虽然呈下降趋势,但其下降幅度要明显小于C组;在血清TNF-α方面,C组逐渐上升,A、B组血清中TNF-α呈现下降趋势(第5周有升高)。结论激素可以导致血中VEGF的表达减弱,TNF-α的表达增强,活血通络汤具有抑制激素使VEGF表达减弱的趋势,下调TNF-α,从而缓解股骨头坏死进展,促进股骨头坏死的修复。     

介入配合骨复活汤对激素性股骨头缺血性坏死股骨头局部血管内皮生长因子表达的影响

目的：观察股动脉药物灌注配合骨复活汤治疗实验性激素性股骨头缺血性坏死（SANFH）股骨头局部血管内皮生长因子（VEGF）的表达。探讨介入配合骨复活汤对骨坏死再血管化和再骨化的机理。方法：新西兰兔24只,利用大肠杆菌内毒素和大剂量甲基强的松龙造成兔股骨头坏死模型,造模后第2周随机分为3组：介入组：经左侧股动脉注射尿激酶3万U和丹参注射液2mL;介入配合骨复活汤组：给药同介入组,同时每天给予骨复活汤灌胃给药;对照组：经股动脉注射生理盐水4mL。在治疗后4周,对股骨头标本进行VEGF免疫组化染色。计数VEGF阳性成骨细胞率、阳性软骨细胞率和阳性血管率,并进行统计学分析。结果：介入配合骨复活汤组比介入组能提高VEGF阳性成骨细胞率、阳性软骨细胞率和阳性血管率（P〈0．05）,改善骨坏死。结论：介入配合骨复活汤能改善骨坏死,其机理在于促进VEGF等细胞因子的分泌从而加速股骨头的再血管化和再骨化进程。     

复方巴戟天合剂对激素性股骨头坏死大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨复方巴戟天合剂对激素性股骨头缺血性坏死大鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF mRNA)表达的影响。方法:SD大白鼠72只,随机分成正常组、模型组、对照组、治疗组。除正常组外,第1～4周各组均每周2次im醋酸强的松龙24.5 mg.kg-1,第4～8周每周1次im醋酸强的松龙24.5 mg.kg-1,建立大鼠激素性股骨头缺血性坏死模型,每日给药1次,于实验后第4,8,12周分3批处死动物,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达。结果:模型组造模第4,8周时VEGF mRNA的表达逐渐减弱,第12周稍有升高,但仍较正常组低(P<0.05);治疗组在各时期与模型组比较均有升高(P<0.05),治疗第12周与第8周比较有显著性差异(P<0.05)。结论:复方巴戟天合剂可增加股骨头内VEGF mRNA的表达,可起到与仙灵骨葆胶囊相近的治疗效果。     

右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头血管修复的实验研究

目的：观察右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头的血管修复及疗效,探讨该方法在治疗冷冻坏死股骨头的作用机理。方法：毕格犬24只,随机分为4组：A组（模型组）、B组（右归饮组）、C组（干细胞介入组）、D组（干细胞介入加右归饮组）。液氮冷冻法造模;分离、培养、增殖骨髓基质干细胞（MSCs）;造模完成,C、D组行动脉灌注MSCs 1mL（细胞密度：5×10^6-1×10^7/mL）;术后,B、D组每天予以右归饮100mL;治疗4周及8周后分批处死。采用DSA、病理学,免疫组织化学和RT-PCR观察股骨头坏死修复、血管修复及VEGF、TGF-β表达情况。结果：DSA观察：D组的血管数量及直径较C组明显改善（P〈0.01）;组织病理学及免疫组织化学：各治疗组较A组的结构有明显改善,D组较其他各组的VEGF、TGF-β阳性表达率都明显增高（P〈0.01）;RT-PCR：D组VEGF、TGF-β较其他各组表达量增多（P〈0.01,P〈0.05）,各治疗组的表达都高于A组（P〈0.01）。讨论：右归饮联合干细胞介入法能够促进VEGF、TGF-β的表达增强,能够有效地改善坏死股骨头的血供,促进坏死修复。     

补气益肾活血法对股骨头坏死模型大鼠血浆及血清指标的影响

目的:研究补气益肾活血法对股骨头坏死模型大鼠血浆凝血酶原时间(PT)、组织性纤溶酶原激活剂(t-PA)及血清血管内皮生长因子(VEGF)、总胆固醇(TCH)、低密度脂蛋白(LDL)的影响。方法:以随机抽签法将60只SD大鼠分成对照组、模型组以及观察组。模型组与观察组制作股骨头坏死模型,成功后,观察组另实施补气益肾活血法治疗。比较3组股骨头密度,血清磷、钙水平,血浆PT、t-PA,血清VEGF、TCH、LDL。结果:模型复制后模型组股骨头密度低于对照组,观察组高于模型组(均P<0.05)。模型复制后模型组血清磷、钙低于对照组,观察组高于模型组(均P<0.05)。模型复制后模型组血浆PT、t-PA低于对照组,观察组高于模型组(均P<0.05)。复制后模型组血清VEGF低于对照组,而TCH、LDL高于对照组;观察组血清VEGF高于模型组,而TCH、LDL低于模型组(均P<0.05)。结论:补气益肾活血法可显著改善股骨头坏死模型大鼠的股骨头密度,同时可改善血浆PT、t-PA及血清VEGF、TCH、LDL,值得推广。     

骨蚀汤对股骨头坏死保髋术后髋关节影响的临床观察

目的 探讨自制骨蚀汤对早期股骨头缺血性坏死保髋术后髋关节影响的临床疗效.方法 将90例早期股骨头坏死患者以就诊先后顺序随机分为观察组和对照组,观察组48例,对照组42例.2组均行股骨头坏死病灶切除人工骨植入术,术后予常规预防感染、镇痛等治疗,观察组加用自制骨蚀汤,连续治疗3个月,随访至术后9个月,观察2组Harris评...     

健脾补肾方调控激素性股骨头坏死大鼠促成骨分化因子的研究

目的 观察健脾补肾方对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞定向分化成骨细胞相关细胞因子的影响,为健脾补肾方治疗激素性股骨头坏死提供相应的分子学基础.方法 将健康成年雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、健脾补肾方组,模型组及健脾补肾方组建立激素性股骨头坏死模型.造模后健脾补肾方组每天灌胃健脾补肾汤,模型组和空白组每天...     

密集型针刺配合药物治疗股骨头缺血性坏死的疗效观察

目的观察密集型针刺配合口服股骨头坏死愈胶囊治疗股骨头缺血性坏死的临床疗效及其对髋关节功能和血管内皮细胞生长因子(VEGF)、骨形态发生蛋白(BMP-2)的影响。方法将82例股骨头缺血性坏死患者随机分为治疗组和对照组,每组41例。治疗组采用密集型针刺配合口服股骨头坏死愈胶囊治疗,对照组采用单纯口服股骨头坏死愈胶囊治疗。观察两组治疗前后髋关节功能(Harris评分)及VEGF、BMP-2的变化情况,并比较两组临床疗效及复发情况。结果治疗组优良率为90.2%,对照组为68.3%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗1个疗程后及治疗后Harris评分和血清VEGF、BMP-2水平与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗1个疗程后及治疗后Harris评分和血清VEGF、BMP-2水平与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后3个月、6个月复发率分别为6.4%和8.5%,对照组分别为12.5%和25.0%。两组治疗后6个月复发率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论密集型针刺配合口服股骨头坏死愈胶囊治疗股骨头缺血性坏死疗效确切,可有效改善患者髋关节功能,促进血清VEGF、BMP-2合成,且复发率较低。     

活骨Ⅱ方加不同引经药对股骨头坏死兔股骨头内血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察比较活骨Ⅱ方配伍不同引经药对股骨头坏死(0NFH)兔股骨头内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其防治ONFH的作用机制.方法:84只兔经液氮冷冻法建立股骨头坏死模型后,随机分为以下6组:模型组活骨Ⅱ方组、活骨Ⅱ方加不同引经药组(牛膝、独活、细辛和桔梗),另14只设为伪手术组.造模后中药组立即分别给予活骨Ⅱ方(6 g·kg-1·d-1)、活骨Ⅱ方(6 g·kg-1·d-1)加引经药(牛膝0.75 g·kg-1·d-1,细辛0.15 g·kg-1·d-1,独活0.75 g·kg-1·d-1,桔梗0.75 g·kg-1·d-1,分别相当于临床等效量)灌胃,连续4周;模型和伪手术组给予生理盐水灌胃,所有动物均皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF) 30 μg· kg-1 ·d-1,连续7d.实验2周和4周时取左侧股骨头,分别行苏木精-伊红(HE)染色观察其组织病理学改变和墨汁灌注染色观察股骨头内血管形态变化,并经免疫组织化学法检测股骨头内VEGF的表达水平.结果:与伪手术组相比,模型组实验2周和4周时股骨头空骨陷窝率显著增多,血管面积及VEGF表达明显减少(P ＜0.01或P ＜0.05).活骨Ⅱ方能显著降低股骨头空骨陷窝率,并提高血管面积及VEGF的表达(P＜0.01或P＜0.05).与活骨Ⅱ组相比,牛膝组4周时空骨陷窝率显著减少,血管面积明显增多(P＜0.01或P＜0.05),2周和4周VEGF表达均明显增多(P＜0.01);桔梗组4周时VEGF表达显著降低;细辛和独活组无显著变化.结论:引经药牛膝具有进一步提高活骨Ⅱ方上调股骨头内VEGF表达的作用,这可能是其有效改善股骨头血循环、防止坏死的机制之一.     

恒古骨伤愈合剂促进兔坏死股骨头内核心结合因子α1基因表达的实验研究

目的 研究中药恒古骨伤愈合剂（简称中药合剂）对兔坏死股骨头内核心结合因子α1（cbfα1）基因表达的影响。方法 用大肠杆菌内毒素（LPS,10μg／kg体重）间隔24h两次静脉注射加甲基泼尼松3次肌肉注射制作的兔股骨头坏死模型,用中药合剂治疗后取股骨头行免疫组化,并提取总RNA行实时荧光定量多聚酶链反应（PCR）,观察兔股骨头内cbfα1基因表达的动态变化特点。结果 给药第4周时,中药组与模型组股骨头内cbfα1基因表达均为阴性,至第8、12周时,中药组免疫组化结果为弱阳性,模型组为阴性;至第12周时中药组股骨头内cbfα1mRNA的表达量是模型组的2．87倍。正常给药组与空白组比较差异无显著性。结论 中药恒古骨伤愈合剂可促进坏死α股骨头内源性cbfα1基因的表达,以用药时间长者效果明显。