光动力作用对人乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨光动力疗法（PDT）对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法：以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,以血卟啉衍生物（HpD）为光敏剂,630nm波长的激光为光源,MTT法绘制MDA-MB-231PDT后不同时间的生长曲线。流式细胞仪检测PDT对人乳腺癌细胞阻滞的细胞周期,免疫组化观察PDT对增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。结果：生长曲线示PDT对人乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用;PDT作用后早期（12h）G0/G1期比例明显高于对照组（P〈0.05）,且呈时间依赖性变化;免疫组化示：实验组PDT后各时间段PCNA阳性细胞蛋白表达率较对照组阳性表达率明显下降（P〈0.01）。结论：光动力疗法可阻滞人乳腺癌细胞增殖,其机制可能与PDT阻滞细胞于G0/G1期和降低PCNA的表达有关。     

光动力作用对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的：探讨光动力作用（PDT）对人乳腺癌细胞Bax和Bcl-2的影响。方法：体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB-231，分别在PDT作用不同时间后，用免疫组织化学法检测促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达情况。结果：Bax蛋白表达在所有组无明显差异（P〉0．05），Bcl-2蛋白表达自PDT后6h起显著下降（P〈0．01）；PDT后6hBax／Bcl-2比值依次递增，且有统计学意义（P〈0．05）。结论：光动力作用可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡，其机制可能与Bax和Bcl-2蛋白表达的比值有关。     

HpD—PDT对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的:研究血卟啉衍生物(hematoporphrphyrin derivative,HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制,为HpD-PDT治疗乳腺癌提供理论依据.方法:体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231分为4组:A组(空白对照)、B组(单纯激光)、C组(单纯光敏剂)、D组(激光+光敏剂).应用流式细胞术分析HpD-PDT对细胞周期的影响,免疫组织化学技术检测HpD-PDT对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:HpD-PDT作用后,乳腺癌细胞内G0/G1期细胞比显著高于对照组(P<0.05);PCNA阳性表达率明显低于对照组(P<0.01);Bcl-2蛋白的阳性表达率明显下降(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率各组间均无统计学差异;实验组HpD-PDT作用后Bax/Bcl-2比值增高,呈时间依赖性变化.结论:HpD-PDT的作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡有关.     

光动力疗法对人肺腺癌细胞系A549杀伤作用的实验研究

目的　探讨光动力疗法 (PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A5 49的杀伤效应。方法　以人肺腺癌细胞系A5 49作为研究对象 ,以血卟啉衍生物 (HPD)为光敏剂 ,以半导体激光器为光源 ,采用连续照射的方式 ,将经不同浓度HPD处理的A5 49细胞照射不同剂量的激光 ,用MTT法测定OD492 值。结果　HPD浓度为 5mg/L时基本无治疗作用 ;在相同的激光照射剂量下 ,10mg/LHPD即有治疗作用 ,再增大HPD浓度对细胞的杀伤效应增加不明显 ;在相同的HPD浓度下 ,激光剂量为 10J/cm2 时OD492 值降低达平台。综合两方面因素 ,在HPD浓度 10mg/L、激光剂量 10J/cm2 时PDT对A5 49细胞发挥有效的杀伤作用。当能量密度均为 10J/cm2 时 ,采取三组不同的功率时间组合 :2 14mw× 10min、42 8mw× 5min、714mw× 3min进行照射 ,测得的的OD492 值无统计学差异。结论　光动力疗法对体外培养的人肺腺癌细胞系A5 49有明确的杀伤效应 ,HPD浓度 10mg/L、激光剂量 10J/cm2 是本实验PDT的最佳作用参数。在该最佳能量密度下采取不同的功率时间组合对PDT效应无明显影响。     

光动力治疗早期喉癌

一个世纪以来,喉癌的治疗主要是手术切除,术后病人丧失了喉功能,致使正常的发音、呼吸、吞咽等遭到不同程度破坏,影响到正常社交、工作及生活,病人十分痛苦。本世纪六十年代起,国内外喉科专家为喉术后重建功能作了大量研究、先后采用人工喉、电子喉、喉移植及发音重建手术等各种方法,谋求代偿部份喉功能、但都距生理要求十分遥远。 1988年我院摆脱常规手术治疗喉癌方法,应用光动力疗法(photodynamic therapy)治疗早期喉癌,保全了正常喉功能,取得初步效果。     

新型光敏剂CPD4对人乳腺癌细胞体外光动力杀伤效应

目的:研究新型光敏剂叶绿素衍生物4(chlorophyll derivative,CPD4)对人乳腺癌细胞系T47D和MCF-7体外光动力杀伤效应,并对机理进行初步探讨.方法:采用激光共聚焦荧光显微镜结合荧光探针标记技术观察光敏剂在细胞内分布及亚细胞定位;将终浓度分别为2.5、2.0、1.5、1.0、0.5 μg/mL的CPD4加入到T47D及MCF-7细胞培养皿中,孵育2h后用670nm半导体激光治疗仪照射,光剂量为10J/cm2,照毕,继续培养24h后采用染料排斥实验测定细胞的存活率.流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞死亡方式和凋亡率.实验分为四组:空白对照组、单纯光敏剂组、单纯细胞光照组,光敏剂-细胞光照组.结果:光敏剂CPD4可穿过T47D及MCF-7细胞膜进入细胞,分布在细胞膜及胞浆中,线粒体是其亚细胞分布的主要位点之一.光动力组中光敏剂浓度分别为2.5、2.0、1.5、1.0、0.5μg/mL,T47D及MCF-7细胞死亡率分别为(76.77±6.41)%、(40.51±7.28)%、(38.4±5.35)%、(17.08±0.52)%、(11.16±0.28)%、(81.67±1.53)%、(69.67±4.51)%、(45.33±4.73)%、(17.67±2.52)%、(12.00±2.00)%.Annexin V-FITC/PI法检测PDT作用24h后凋亡率分别可达36.80%及40.90%.结论:新型光敏剂CPD4分布在人乳腺癌细胞T47D及MCF-7的细胞膜及细胞浆中,线粒体是其亚细胞分布主要位点之一;光敏剂CPD4对人乳腺癌细胞T47D和MCF-7具有良好的光动力杀伤效应,呈现量效关系,诱导细胞凋亡是其主要杀伤方式.线粒体途径促进细胞凋亡可能是其光动力杀伤机制.     

癌光啉对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的光动力杀伤效应及其机制研究

  目的  探讨癌光啉(PSD-007)在体外对于乳腺癌细胞株MDA-MB-231光动力杀伤效应, 并分析其分子机制。   方法  MTT法检测不同浓度PSD-007(0、2、4、6、8、10μg/mL)作用于MDA-MB-231细胞株后对其增殖的影响; 光学显微镜下观察光动力治疗后细胞形态的变化, 荧光显微镜分析PSD-007作用后细胞的死亡形式。应用RT-PCR和Western blotting技术分析其分子机制。   结果  当PSD007浓度为10μg/mL、光照能量为9.0 J/cm2时, 对乳腺癌细胞的光动力杀伤效应最大, 抑制率为97.01%。光动力治疗处理后的细胞逐渐变圆, 体积变小, 核质比增大, 折光性减弱, 贴壁能力下降, 细胞间隙增大, 直到细胞漂浮死亡。荧光显微镜分析结果显示, 光动力治疗后死亡细胞主要为坏死或晚期的凋亡细胞。RT-PCR和Western blot结果显示相比对照组, 实验组Caspase3、Caspase8、P65亚基和P53表达水平明显上调, 而Bcl-2和Bcl-x表达无明显改变。   结论  PSD-007在体外通过调控Caspase蛋白酶、P53、NF-KB通路对人乳腺癌MDA-MB-231细胞具有光动力杀伤效应, 可能成为未来乳腺癌治疗的一个新方式。      

血卟啉光动力对人胆管癌细胞转移潜能影响实验研究

目的：探讨血卟啉衍生物介导的光动力疗法（hematoporphyrinderivative,HPD-PDT）对人胆管癌细胞增殖和侵袭的影响。方法：体外培养人胆管癌细胞系QBC939,经系列浓度的HPD处理,并应用半导体激光治疗仪给予不同强度的光照,CCK-8试剂盒检测HPI〉PDT对人胆管癌细胞增殖的影响;Transwell小室（Matrigel侵袭实验）检测HPD-PDT对人胆管癌细胞体外侵袭能力的影响;酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）检测细胞培养上清液中分泌的VEGF-C浓度变化;RT-PCR检测细胞中VEGF_CmRNA的表达变化;SP免疫组化染色观察细胞中VEGF-C蛋白的表达变化。结果：CCK-8检测结果显示,HPD-PDT在体外能够抑制QBC939细胞生长,当HPD质量浓度4μg／mL和光照剂量5J／cm2时,实验组A450值为1．54l7±0．0983,明显低于空白对照组的2．0278±0．1986,P〈0．01;细胞生长抑制率达到23．97％,且随着激光能量密度及光敏剂浓度的增加,其抑制作用也越明显。体外侵袭实验结果显示,实验组穿过Matrigel胶的细胞数为13．33±1．155,明显少于空白对照组的31．67±2．517,P〈O,01;ELlSA结果显示,实验组上清液中分泌的VEGF-c浓度为（1558．24l7±97．）143）ng／L,低于空白对照组的（1716．3750±45．0472）ng／L,P〈0．05;RT—PCR结果显示,实验组VEGF_CmRNA／hGAPDH的比值为0．7009±0．1872,明显低于空白对照组的1．5425±0．1078,P〈0．01;SP免疫组化染色结果显示,实验组VEGF—C蛋白表达阳性的细胞百分率为24．52％±2．22％,明显低于空白对照组的56．94％±3．38％,P〈0．01。结论：HPD-PDT能够抑制人胆管癌细胞QBC939的增殖活性及体外侵袭能力,并有可能通过下调VEGF-C因子的表达进一步抑制胆管癌的生长和转移。     

光动力疗法治疗乳腺癌27例

 目的 探讨光动力疗法在乳腺癌治疗中应用的方法和临床意义。方法 2005年6月至2005年12月，应用光动力疗法治疗术前通过淋巴结显像证实有内乳区淋巴结转移的乳腺癌12例、乳腺癌术后胸壁复发15例。结果 术前淋巴结显像测定内乳区淋巴结直径在0.5 ~ 1.0 cm者，术后3个月复查完全消失。乳腺癌术后胸壁复发的病例，直径在1.0 cm以下的小病灶完全缓解。结论 光动力疗法对协助清除内乳区转移的淋巴结和治疗乳腺癌术后胸壁复发有确切疗效。     

光动力疗法治疗乳腺癌的研究进展

光动力疗法(Photodynamic Therapy,PDT)是使用激光照射被化学物质染色的生物组织,产生光化学反应,属于光化学疗法的一种。早在1900年,Raab发现光敏细胞毒反应,20世纪70年代,PDT在各种肿瘤及良性疾病治疗中取得了令人瞩目的成就[1]。与此同时,随着人们对乳腺癌的生物学特性的认识,尤其是传统观念的改变,既力求治愈,又保功能,而且美观,乳腺癌传统的治疗方法如手术、化疗、放疗和内分泌治疗,已不能完全满足患者的要求。PDT以创伤小、副作用少、疗效肯定等优点,特别在乳腺癌复发的治疗上,取得了较好的疗效[2]。本文就此作一简要综述。1PDT…     

Effect of Photodynamic Therapy with BPD-MA on the Proliferation and Apoptosis of Human Bladder Cancer Cells

OBJECTIVE To explore the effect of photodynamic therapy with benzoporphyrin derivative monoacid ring A (BPD-MA) on the proliferation and apoptosis of human bladder cancer cells.METHODS Rhotosensitization of BPD-MA was activated with a red light laser (632.8 nm) delivered at 10 mw/cm2 to give a total dose of 2.4 J/cm2.Cellular proliferative activity was measured using the 3-(4,5-dimethylethiazil-2-yl)-2,5-Diph3-eyl tetrazolium bromide (MTT) assay and 3H-thymidine incorporation. Cell apoptosis was determined with flow cytometry analysis and the terminal deoxyuridine nicked-labeling (TUNEL) assay.RESULTS At 24 h post photodynamic treatment, photodynamic therapy significantly decreased cellular proliferative activity. The rate of apoptosis in BIU-87 cells 8 h after photodynamic treatment significantly increased up to 26.11± 2.59% as analyzed with flow cytometry. In situ labeling of DNA cleavage products with the terminal deoxyuridine nicked-labeling (TUNEL) assay reinforced these observations, BPD-MA-mediated photosensitization increased the number of TUNEL-positive cells compared to the controls. However, laser irradiation alone, BPD-MA alone and sham radiation did not affect cellular proliferative activity or apoptosis of the human bladder cancer BIU-87 cells.CONCLUSION Photodynamic therapy with BPD-MA significantly decreases cellular proliferative activity and enhances apoptosis. Therapy using this method might be a promising approach to treat patients with bladder cancer.     

不同浓度洋地黄对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究不同浓度洋地黄对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,不同浓度洋地黄处理,MTT法观察洋地黄对MDA-MB-231细胞活性、增殖的影响;Hoechst 33342染色观察洋地黄促细胞凋亡作用,细胞色素C含量及caspase 9活性变化检测线粒体损伤程度;生长曲线法观测洋地黄对细胞增殖的影响,Western blot检测细胞周期蛋白表达。结果:高浓度的洋地黄（≥100nmol/L）引起MDA-MB-231细胞凋亡,促进细胞色素C释放,增加caspase 9活性。低浓度洋地黄（30nmol/L）不引起肿瘤细胞凋亡,但是抑制细胞增殖,抑制细胞周期素D1和细胞增殖抗原PCNA的表达,增强p21cip1蛋白的表达。结论:高浓度洋地黄通过线粒体损伤通路促进乳腺癌细胞凋亡,低浓度洋地黄通过干扰细胞周期抑制乳腺癌细胞的生长。     

Effective treatment of chemoresistant breast cancer in vitro and in vivo by a factor VII-targeted photodynamic therapy

Background:

The purpose of this study was to test a novel, dual tumour vascular endothelial cell (VEC)- and tumour cell-targeting factor VII-targeted Sn(IV) chlorin e6 photodynamic therapy (fVII-tPDT) by targeting a receptor tissue factor (TF) as an alternative treatment for chemoresistant breast cancer using a multidrug resistant (MDR) breast cancer line MCF-7/MDR.

Methods:

The TF expression by the MCF-7/MDR breast cancer cells and tumour VECs in MCF-7/MDR tumours from mice was determined separately by flow cytometry and immunohistochemistry using anti-human or anti-murine TF antibodies. The efficacy of fVII-tPDT was tested in vitro and in vivo and was compared with non-targeted PDT for treatment of chemoresistant breast cancer. The in vitro efficacy was determined by a non-clonogenic assay using crystal violet staining for monolayers, and apoptosis and necrosis were assayed to elucidate the underlying mechanisms. The in vivo efficacy of fVII-tPDT was determined in a nude mouse model of subcutaneous MCF-7/MDR tumour xenograft by measuring tumour volume.

Results:

To our knowledge, this is the first presentation showing that TF was expressed on tumour VECs in chemoresistant breast tumours from mice. The in vitro efficacy of fVII-tPDT was 12-fold stronger than that of ntPDT for MCF-7/MDR cancer cells, and the mechanism of action involved induction of apoptosis and necrosis. Moreover, fVII-tPDT was effective and safe for the treatment of chemoresistant breast tumours in the nude mouse model.

Conclusions:

We conclude that fVII-tPDT is effective and safe for the treatment of chemoresistant breast cancer, presumably by simultaneously targeting both the tumour neovasculature and chemoresistant cancer cells. Thus, this dual-targeting fVII-tPDT could also have therapeutic potential for the treatment of other chemoresistant cancers.     

Estradiol enhances osteolytic lesions in mice inoculated with human estrogen receptor-negative MDA-231 breast cancer cells in vivo

The effect of 17--estradiol (E₂) on the induction of osteolytic lesions by estrogen receptor (ER)-negative breast cancer cells was investigated in 4-week-old female nude mice. Exposure to exogenous E₂ was found to increase osteolytic areas on radiographs up to 5.3 times in mice inoculated intracardially with MDA-231 human breast cancer cells. The MDA-231 cells were ER-negative, both before inoculation, and after isolation from osteolytic lesions, and the corresponding cell cultures were insensitive to E₂. The induction of skeletal lesions by E₂ in this mouse model was mainly effectuated at the early development of bone metastases, since exposure to E₂ for 8 days around MDA-231 inoculation increased osteolysis to the same level, as did E₂ given throughout the entire 31-day experimental period, and because E₂-exposure for just the final 14 days had no effect. Independently of exposure to E₂, histology revealed cancer cells in hind limp long bones of approximately 80% of the mice, and tumors were absent in non-skeletal organs. In vitro studies showed that the number and activity of osteoclasts generated from mouse bone marrow cells were increased 5–6 times when co-cultured with MDA-231 cells. Addition of 0.1–10 nM E₂ further dose-dependently increased the osteoclastogenesis and associated bone resorption in these co-cultures. In conclusion, E₂ was found to increase the morbidity in mice inoculated with ER-negative MDA-231 cells, and to stimulate osteoclast formation and bone resorption in co-cultures of bone marrow cells and MDA-231, suggesting that the progression of osteolytic metastases by ER-negative breast cancer cells can be induced by E₂ due to stimulation of osteoclastogenesis.     

致康胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨致康胶囊对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:采用0（对照组）、0.5、1.0、2.0 mg/ml 致康胶囊培养液分别处理乳腺癌细胞MCF-7,分别于培养后24、48和72 h计数MCF-7细胞数。采用MTT法检测致康胶囊对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期;PI 单染流式细胞仪检测致康胶囊对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:不同浓度致康胶囊能有效地抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度增加和作用时间延长,细胞的增殖抑制率增加。0.5、1.0、2.0 mg/ml的致康胶囊作用MCF-7细胞72 h后,G0/G1期细胞所占细胞周期的比例分别为19.33%±10.38%、14.12%±5.37%和26.84%±2.13%;而对照组G0/G1期比例为51.83%±1.90%。0.5、1.0、2.0 mg/ml致康胶囊处理48 h后细胞的凋亡率分别为2.09%±0.74%、3.84%±0.78%和 5.35%±0.83%。结论:致康胶囊能抑制MCF-7细胞的体外增殖,且抑制作用表现为时效和量效关系;并能通过阻滞细胞周期于G2/M期,促进乳腺癌细胞凋亡。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。