细胞周期和细胞凋亡的改变在X线辐射损伤后皮肤愈合延迟中的作用

目的：探讨细胞周期紊乱和凋亡在X线辐射损伤后创伤愈合延迟中的作用。方法：选用局部软X线辐射损伤合并创伤大鼠模型，应用病理形态观察、流式细胞术等方法观察不同时相点创面组织的病理改变、细胞周期及细胞凋亡的变化。结果：组织病理观察表明，肉芽组织的结构不规则，胶原组织排列紊乱，胶原合成减少，创伤愈合延迟。在伤后3d--9d时间段内，辐射侧G0／G1期细胞增加，S期和G2／M期细胞减少，表明软X线局部照射后细胞发生了严重的G1期阻滞。在伤后13d--22d时间段内，辐射侧S期细胞逐渐增加，6d时达到峰值，大量的细胞停留在S期，S期显著延长。在3d--9d时间段内，辐射侧伤口组织细胞凋亡增加，6d时达到峰值，之后逐渐减少。在创伤愈合的整个过程中，辐射侧的细胞凋亡呈由低到高再到低的时相变化。对照例伤口组织细胞凋亡百分数在整个愈合过程中变化并不显著。结论：提示细胞周期紊乱和细胞凋亡增加可能是导致愈合延迟的重要机制。     

不同剂量软X射线照射对大鼠伤口愈合影响规律的研究

目的 研究软X射线局部照射对创伤愈合的影响规律。方法 采用大体观察、组织病理学、免疫组化（胶原染色）和图像分析等方法，动态观察不同剂量软X线局部照射后大鼠伤口愈合的过程。结果 0．50、1．01、1．96、3．26、4．00、5．21Gy组照射侧的创面愈合时间比对照侧分别延长了1．6、4．2、5．4、6．6、8．2、9．4d，7．0及10．0Gy组则创面不愈（＞40d)。各组的已愈创面百分率在3－9d之间的变化幅度均比对照侧小，随着照射剂量的增大，变化的幅度亦减小，表明创面愈合速度减慢。照射后伤口组织胶原的合成降低，排列紊乱，肉芽组织的结构不规则。结论 局部软X线照射后，大鼠伤口愈合延迟，在0．50－5．21Gy之间延迟时间随照射剂量的增大而延长。     

5.21Gy软X射线局部照射伤口后组织细胞周期时相变化的研究

目的 研究软X射线局部照射后大鼠伤口组织细胞周期的时相变化。方法 PI染色，流式细胞术（FCM）检测细胞周期；BrdU掺入后采用SABC染色检测细胞增殖。结果 在伤后3－9d，对照侧G0／G1期细胞逐渐减少，S期细胞增加，9d时达到峰值；G2／M期细胞增加，15d时达到峰值。照射侧G0／G1期细胞增加，S期和G2／M期细胞减少。在伤后12－22d，照射侧S期细胞逐渐增加，22d时达到峰值，大量的细胞停留在S期。在整个愈合过程中，G2／M期细胞百分数均低于对照侧。BrdU掺入SABC染色阳性细胞主要为成纤维母细胞、血管内皮细胞以及平滑肌细胞。结论 5．21Gy软X射线局部照射后，细胞发生G1期阻滞和S期延长，G2／M转换障碍，细胞分裂增殖受抑，创伤愈合延迟与细胞周期的紊乱有关，G1期阻滞和S期延长越严重，愈合延长时间越长。     

硬X线局部照射对猪皮肤创伤愈合影响的研究

目的：研究硬X射线局部照射对创伤愈合的影响规律。方法：采用大体观察、组织病理学、免疫组化、TUNEL和图像分析等方法，动态观察不同剂量硬X线局部照射后大鼠伤口愈合的过程。结果：观察发现皮肤放创复合伤的愈合时间与照射剂量存在着密切关系，相关性非常显著，r=0．985。照射后伤口组织胶原的合成降低、排列紊乱，肉芽组织的结构不规则。放创复合伤皮肤伤口成纤维细胞凋亡较单纯创伤组显著增加，伤口局部增殖细胞较单纯创伤组显著降低。结论：局部硬X线照射后，猪皮肤放创复合伤伤口愈合延迟，在20-50Gy之间时，延迟时间随照射剂量的增大而延长。     

大鼠脊髓照射后细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的:评价大鼠脊髓照射后少突神经胶质细胞凋亡与细胞增殖的关系。方法:选择9～10周龄Fisher雌性大鼠,用氟烷吸入法麻醉,对2cm脊髓胸2～腰2(C2～T2)段行X射线照射。用2、8和22Gy单次剂量或2、8和22Gy初次剂量照射后1～63天间再次给予8Gy照射。大鼠在单次剂量22Gy照射前30分钟和照射后2小时给予腹腔注射环己酰亚胺(2mg/kg),以延迟细胞凋亡的出现。在不同剂量照射后0、4、8、12或24小时杀鼠,心脏用10%福尔马林灌注10分钟,取C2～T2段中部,石蜡包埋,染色,计算细胞凋亡指数和总凋亡产量(TAY,为照射后24小时内总凋亡细胞的百分数)。细胞增殖…     

软X线照射对体外培养大鼠成纤维细胞增殖的影响

目的观察软X射线照射对体外培养的成纤维细胞增殖的影响.方法观察培养的大鼠皮肤成纤维细胞照射后细胞计数的变化、划痕实验和"营救"实验.结果在0.5Gy～8Gy剂量范围内,剂量与成纤维细胞的增长成反比,而且0.5～4Gy剂量的量效关系经回归分析成直线型.0.5Gy、1Gy剂量照射后,在1～3天的增长的幅度明显比3～5天的小,而2Gy曲线在1～5天增长幅度明显低于5～7天.在0.1～0.025Gy的照射范围内成纤维细胞的增殖曲线和空白对照没有差别.划痕实验中对照的长满时间明显比照射的长满时间短,实施了"营救"措施的细胞照射与对照的长满时间没有明显差别.结论照射后成纤维细胞的增长与剂量成依赖关系,并且剂量越大细胞增殖恢复也越慢.照射对细胞的运动也有抑制作用.未照射细胞对照射成纤维细胞的增长有"营救"作用.     

X线不同剂量照射诱发C6细胞凋亡的研究

为研究体外X线不同剂量照射C6细胞可否诱发其凋亡,应用大鼠C6胶质瘤细胞系,以15、20、30及40GyX线分别照射体外C6细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察其细胞凋亡发生的情况.结果显示,15、20及30Gy组在照射后2h便出现明显的DNA降解(“梯形结构”),其中15Gy组持续到8h,20、30Gy组持续到24h.但对照及40Gy组无明显“梯形结构”出现,后者DNA小片段条带明显,表明该组细胞坏死明显.提示X线不同剂量照射体外C6细胞可诱使其早期产生凋亡,但若剂量增大(如40Gy)则可致其坏死.     

大鼠~(60)Coγ射线全身和局部屏蔽照射后外周血T_μ与T_γ淋巴细胞的改变

本文用细胞化学方法研究了大鼠~(60)Coγ射线照射后外周血T_μ和T_γ淋巴细胞的改变.辐射剂量分别为4.5和8.5Gy.研究结果指出,大鼠经~(60)Coγ射线全身与局部屏蔽照射4.5和8.5Gy后1、5、10及28天,外周血T_γ淋巴细胞百分数在骨髓严重损伤阶段明显增加,而T_μ淋巴细胞百分数则显著下降,以后随着损伤过程的逐渐减轻,T_γ淋巴细胞百分数的增高与T_μ淋巴细胞百分数的下降也逐渐减弱,最后在基本恢复阶段T_μ和T_γ淋巴细胞百分数基本接近对照水平.文中着重讨论了照射大鼠骨髓造血损伤过程中形态学改变与外周血T_μ和T_γ淋巴细胞改变间的关系.     

利用pcDNA 3.0裸质粒探讨创伤愈合动物模型中转入基因的分布规律

目的 通过在Wistar大鼠皮肤伤口局部应用含半乳糖苷酶（LacZ）报告基因的裸peDNA3．0重组质粒,建立创伤愈合转基因治疗动物模型并评价其应用价值。方法 通过建立大鼠全层皮肤切割伤模型,采用自身对照,在治疗侧伤口周围局部注射重组转染裸pcDNA3．0-LacZ质粒,通过B-gal原位染色检测注射3、30、100μg剂量后1、3、6、15天及愈合时的伤口组织标本中报告基因LacZ的表达,确定目标基因表达效率。结果 报告基因LacZ主要表达于皮下成纤维细胞中,100μg剂量有较高表达,表达效率为10．3％,表达时间主要在注射后3-6天,15天时仍可检测到少量表达细胞,愈合时及对照侧各个时相点均未检测到表达。结论 重组的裸pcDNA3．0-LacZ质粒能成功转染伤口的成纤维细胞等修复细胞,表达效率及时间适用于动物创伤愈合的转基因治疗。     

全身γ射线照射后大鼠伤口巨噬细胞功能的变化及苯妥因钠的影响

巨噬细胞在创伤愈合中起重要的作用。本实验以大鼠背部置入聚乙烯醇海绵的切口为模型，研究了６０Ｃｏγ射线６Ｇｙ全身照射后伤口巨噬细胞功能的变化和苯妥因钠的影响。结果表明在照射后３，５，８天的伤口不但巨噬细胞数明显下降，而且巨噬细胞的吞噬功能、ＴＮＦα和ＩＬ－１的释放都明显下降，而苯妥因钠对正常伤口和照射后的伤口的巨噬细胞数量及其功能都有明显的提高。说明了创伤愈合早期伤口巨噬细胞数量和功能的下降是照射造成愈合延迟的重要原因之一；苯妥因钠促进创伤愈合的作用与其提高巨噬细胞数量和功能有关。     

创伤和放创复合伤愈合过程中c-ski的变化及其与创面愈合结局的关系

目的观察c-ski在创伤和放创复合伤愈合过程中的表达规律，探讨其与创伤愈合和辐射伤组织修复延迟的关系。方法在大鼠创伤和放创复合伤后3，6，9，15d和愈合时，免疫组化和原位杂交检测肉芽组织c-ski表达．5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入检测组织增殖，TdT介导的dUTP缺口末端际记（TUNEL）检测细胞凋亡率、结果创伤后3d c—ski开始表达，9d达到峰值，愈合后显著下降；多种细胞均有高峰度表达．并以成纤维细胞最为显著；辐射侧伤后3～9d的表达显著低于创伤对照侧、辐射导致细胞增殖下降（3～9d）和高峰滞后（15d），与c—ski变化类似。辐射后3～9d的凋亡率显著高于对照侧结论c-ski可能是一新的组织修复相关基因，它可能通过凋节增殖和凋亡的平衡促进创伤愈合辐射导致c-ski表达下降可能是其延缓愈合的原因之一。     

VEGF和Ang-1在皮肤创伤和放射性烧伤愈合过程中的表达

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）和促血管生成素-1（Ang-1）在皮肤单纯性创伤和放射性烧伤中表达的动态变化,了解其在血管再生中的作用,为深入探讨放射性烧伤的愈合机制及其治疗提供有意义的实验资料。方法在大鼠背侧切开皮肤全层制备大鼠创伤模型（单创组）,应用电子线照射臀部皮肤,建立放射性烧伤模型（放伤组）。于伤后1-60d不同时间活体伤口取材,HE染色组织病理学观察,应用Western blot法检测VEGF和Ang-1蛋白的表达。结果在单纯性皮肤创伤愈合过程中,VEGF和Ang-1蛋白表达变化均在伤后第1天开始上升,伤后第5-7天达高峰,然后逐渐下降到接近正常水平。在放射性烧伤愈合过程中,VEGF是先降低后升高然后再降低,而Ang-1的变化与此相反。与单创组比较,放烧组VEGF蛋白表达在第1、7和14天明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;在第1、7、14、21、28和35天Ang-1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）,此后渐升高。结论放射性烧伤愈合早期阶段VEGF和Ang-1的蛋白表达明显降低,是放射性烧伤愈合延迟的重要原因之一。     

Augmentation of wound healing by ascorbic acid treatment in mice exposed to gamma-radiation

PURPOSE: Because of the crucial practical importance of acute radiation exposure associated with combined injuries, the study was undertaken to investigate the effect of various doses of ascorbic acid on the survival and healing of wounds in mice exposed to whole-body gamma-radiation. MATERIALS AND METHODS: Animals were given double-distilled water or different doses of ascorbic acid by intraperitoneal injection before exposure to 0 or 10 Gy whole-body gamma-radiation to evaluate the effect of ascorbic acid on radiation-induced mortality. The animals were monitored daily for the symptoms of radiation sickness and mortality. In a separate experiment, animals were administered with either double-distilled water or different doses of ascorbic acid before exposure to 0 or 6 Gy whole-body gamma-radiation to investigate the effect of ascorbic acid on the irradiated wound. A full-thickness skin wound was created on the dorsum of the irradiated mice and the progression of wound contraction was monitored by capturing video images of the wound at various post-irradiation periods. RESULT: Treatment of mice with various doses of ascorbic acid elevated survival of mice and a highest number of survivors (67 and 33% for 10 and 30 days post-irradiation) was observed for 250 mg kg(-1) (p<0.002 and<0.02 for 10- and 30-day survival, respectively). Ascorbic acid treatment caused a dose-dependent elevation in the wound contraction and highest contraction was observed for 250 mg kg(-1). The wound contraction was significantly greater at 3 (p<0.005), 6 (<0.05) and 9 (<0.05) days post-irradiation with 250 mg kg(-1) ascorbic acid. The complete healing of the wound was effected by day 22.8 post-irradiation in the ascorbic acid-treated irradiation group. CONCLUSION: Administration of ascorbic acid protected mice against radiation-induced sickness, mortality and improved healing of wounds after exposure to whole-body gamma-radiation. Additional studies will be directed toward analysing the role of successive administration of ascorbic acid to protect non-target tissues during radiotherapy and in initiating and supporting the cascade of tissue repair processes in radiotherapy delayed wounds.     

中子及γ线照射小鼠肠组织中TNF-α的表达及其意义

目的 研究经中子及γ线照射后小鼠肠组织中TNF-α的表达情况及其意义.方法 350只二级雄性BALB/c小鼠,经不同剂量的中子和γ线照射,于照后6、12h及1、2、3、4、5、7、10、14、21、28天分批活杀,采用免疫组化染色等技术观察TNF-α在肠组织中的表达情况.结果 在正常肠黏膜中,TNF-α主要见于肠绒毛间质、黏膜下及淋巴组织中的巨噬细胞浆内; 2.5Gy中子照后2天内,上述阳性部位TNF-α的表达进行性减少;3～7天其在巨噬细胞及隐窝细胞胞质内的表达明显增加,5天达高峰,14天恢复至正常水平.4.0Gy、5.5Gy中子及12Gyγ线照射后4天内,TNF-α的表达进行性减少;5.5Gy γ线照后6～12h,TNF-α的表达增多,照后1天减少,2～5天增加,3天达高峰,10天恢复至正常水平.TNF-α的表达在肠黏膜损伤时减少,于损伤后恢复的早期增多.结论 中子和γ线照后肠内源性TNF-α表达具有不同的变化规律,并参与了肠放射损伤及修复的病理生理过程.     

MMP1，TIMP1在单纯及放射复合伤口愈合过程中的表达及对伤口愈合和组织改建的影响

目的：观察基质金属蛋白酶1（MMP1）、金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）在放射复合伤口愈合过程中表达的变化及对伤口愈合和组织改建的影响。方法：利用放射复合伤口动物模型,采用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交等方法,动态观察伤口愈合有明显的损害作用,照射组织口较对照组伤口延迟6d愈合,在伤口愈合的炎症期和肉芽组织生长期,照射组新生表皮细胞中MMP1表达与对照组相近,在后期随着照射组伤口愈合的延迟其表达相对较高,在伤后3－14d,TIMP1在对照组新生表皮细胞中呈弱阳性,表皮覆盖皮呈阴性,而在照射组表皮覆盖前呈阴性或弱阳性。MMP1,TIMP1在照射组肉芽组织成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞中表达明显降低,在愈合后期因辐射所致伤口愈合的延迟同样表现为表达时相拖后,结论：MMP1,TIMP1在放射复合伤口肉芽组织中表达明显降低直接影响细胞纤维、血形成和基质改建等病理过程,是辐射影响伤口合的重要机制之一。     

Vascularization of free myocutaneous gracilis flaps in replacement transplantation after preoperative radiotherapy. An experimental study]

BACKGROUND: Following preoperative radiotherapy prior to ablative surgery of squamous epithelial carcinomas of the head and neck region, inflammatory changes to the connective tissue and vascular endothelium are observed. These processes may lead to a delay in healing of free flaps in the irradiated transplant bed. The aim of the study was to investigate qualitative and quantitative changes in vascularization in irradiated and regular transplant beds. MATERIAL AND METHODS: In Wistar rats (male, weight 300 to 500 g) undergoing preoperative irradiation of the neck region with 3 times 10 Gy (30 animals) and 5 times 10 Gy (30 animals) and non-irradiated rats (42 animals), a free myocutaneous gracilis flap taken from the groin was transplanted to the irradiated region of the neck. The time interval between irradiation and transplantation was 4 weeks. On day 3, 4, 5, 7, 14 and 28 post operation, the capillary sprouting, structural changes and the distribution patterns were analyzed by H & E and immunohistochemical staining (goat-F[ab]-2-anti-von Willebrand factor antibody). Three histological sections (2 to 4 microns) per sample were investigated histomorphometrically, qualitatively and quantitatively (ratio capillary area/total area, and capillary lumen) by NH-image-digitized measurement. A statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test. RESULTS: In contrast to non-irradiated rats, irradiated animals showed a qualitatively reduced and a more irregular capillary distribution with more marked pericapillary fibrosis in the irradiated transplant bed. Quantitatively, the ratio capillary area/total area, as a marker of improved capillarization was significantly reduced in the transition area transplant/irradiated transplant bed and in irradiated transplant bed tissues in contrast to the non-irradiated control group (p = 0.004). Also, from day 14 to 28 a significant decrease was found in the transition area between transplanted tissues and irradiated transplant bed tissues in irradiated animals (p = 0.005). The median capillary lumen size also decreased significantly in the transition area and transplant bed in 30 Gy and 50 Gy irradiated animals (p < 0.001 and p = 0.003). CONCLUSIONS: Following irradiation, vascularization of the soft tissue flaps is both reduced and delayed. This is evidence of delayed healing of soft tissue transplants in transplant beds irradiated prior to surgical interventions. Further optimization of the time interval between radiotherapy and surgery and the total radiation dose are therefore needed.     

5Gy全身照射对创面几种愈合成分的影响及康复新的促愈合作用

目的 研究全身放射操作对创面愈合的影响及康复新的促愈合作用。方法 大鼠５Ｇｙγ线全身照射后,于背部造成２个直径１．６ｃｍ圆形全层皮肤创伤（放射创伤复合伤）,观察伤后５,１０,１５,２０,２５于创面组织的干湿重比 白质、ＤＮＡ与羟脯氨酸含量的变化。结果 与单纯创伤相比较,复合伤创面组织的干湿重比和羟脯胺酸含量在伤后各时相点、蛋白质含量在伤后５￣２０天、ＤＮＡ含量在伤后第５,１０,１５天显著降低,使用