叶酸缺乏孕鼠子代脑组织DNA甲基化水平的变化

目的 :探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响 ,研究叶酸缺乏孕鼠子代脑组织基因组DNA甲基化水平的改变 ,为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供分子和细胞水平的依据。方法 :雌性SD大鼠实验组 30只、对照组 2 0只 ,分别饲以不含叶酸和含 2mg叶酸 kg的纯合饲料 ,两周后与雄鼠交配 ,于怀孕第 2 0天对孕鼠剖腹取胎。对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响 ,高效液相色谱法检测胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平。对孕鼠妊娠晚期末血清叶酸、胎鼠血清叶酸及胎鼠脑组织DNA甲基化水平作相关分析。结果 :1 实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组 ,外周血出现多分叶核粒细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组 ,出现巨幼红细胞 ,RBC和Hb均低于对照组 ,且伴有宫内生长限制。 2 实验组胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平低于对照组 ,这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关。结论 :1 交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束 ,所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段 ,其胎鼠宫内生长受限制 ,红细胞出现巨幼变 ,但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的大鼠动物模型。 2 母体叶酸缺乏时胎鼠的脑组织基因组DNA甲基化水平降低 ,这种改变与孕鼠及胎鼠本身的     

叶酸缺乏孕鼠子代血细胞形态学改变及脑额区皮层超微结构表现

探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响、研究叶酸缺乏孕鼠子代胎鼠脑组织超微结构的改变及为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供细胞水平的依据，及采用雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只，分别饲以不含叶酸和含2mg叶酸/kg的纯合饲料，两周后与雄鼠交配，于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎，对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响，应用途射电镜观察胎鼠额区皮层超微结构的改变。结果显示：1．实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组，外周血出现多分叶核粒细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组，出现巨幼红细胞，RBC和HB均低于对照组，且伴有宫内生长限制。2．实验组胎鼠额区皮层超微结构观察示：神经元出现核切迹、局灶性核周腔扩张、异染色质减少、胞质内细胞器肿胀、核糖体减少；某些胶质细胞亦见类似改变；神经毡膜性结构不完整。结论：1．交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束，所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段，其胎鼠宫内生长限制，红细胞出现巨幼变，但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的孕鼠动物模型。2．母体叶酸缺乏能造成胎鼠皮层脑组织超微结构的改变，可能导致神经无功能的紊乱和丧失，以致防碍脑结构和脑功能的正常发育。3．受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束，以减少不良妊娠结局的危险。     

叶酸缺乏孕鼠子代血细胞形态学改变及脑额区皮层超微结构表现

探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响、研究叶酸缺乏孕鼠子代胎鼠脑组织超微结构的改变及为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供细胞水平的依据 ,及采用雌性SD大鼠实验组 30只、对照组 2 0只 ,分别饲以不含叶酸和含 2mg叶酸 kg的纯合饲料 ,两周后与雄鼠交配 ,于怀孕第 2 0天对孕鼠剖腹取胎 ,对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响 ,应用透射电镜观察胎鼠额区皮层超微结构的改变。结果显示 :1 .实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组 ,外周血出现多分叶核粒细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组 ,出现巨幼红细胞 ,RBC和HB均低于对照组 ,且伴有宫内生长限制。 2 .实验组胎鼠额区皮层超微结构观察示 :神经元出现核切迹、局灶性核周腔扩张、异染色质减少、胞质内细胞器肿胀、核糖体减少 ;某些胶质细胞亦见类似改变 ;神经毡膜性结构不完整。结论 :1 .交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束 ,所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段 ,其胎鼠宫内生长限制 ,红细胞出现巨幼变 ,但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的孕鼠动物模型。 2 .母体叶酸缺乏能造成胎鼠皮层脑组织超微结构的改变 ,可能导致神经元功能的紊乱和丧失 ,以致防碍脑结构和脑功能的正?     

孕鼠叶酸缺乏对子鼠胰岛素样生长因子系统甲基化的影响

目的观察孕期叶酸缺乏对胎鼠生长发育及胰岛素样生长因子(IGF)系统甲基化的影响。方法将22只Sprague-Dawley雌鼠随机分为叶酸缺乏组(n=12)和正常对照组(n=10),分别喂养叶酸缺乏饲料和普通饲料,2周后与雄鼠交配,两组各8只雌鼠成功受孕,于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎,每组取32只胎鼠测量其头尾长、体重。两组分别另取8只胎鼠,采用ELISA法对其脑、肝脏组织中的叶酸、IGF-1、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)-3水平进行检测。两组分别另取3只胎鼠,使用全基因组甲基化测序方法检测其脑、肝脏组织IGF系统的甲基化情况。同时采用ELISA法对两组孕鼠血清IGF-1、IGFBP-3水平进行检测。结果叶酸缺乏组胎鼠头尾长、体重较正常对照组降低(P0.05);叶酸缺乏组孕鼠血清IGF-1、IGFBP-3与胎鼠脑、肝脏组织中的叶酸、IGFBP-3水平均低于正常对照组(P0.05);叶酸缺乏组胎鼠脑组织中IGF-1R、IGF-2R、IGFBP-2、IGFBP-5、IGFBP-6、IGFBP-7的甲基化水平均高于正常对照组(P0.05);而在肝脏组织中,相比于正常对照组,叶酸缺乏组胎鼠IGF-1R、IGF-2R、IGFBP-3、IGFBP-5甲基化水平增加,IGF-2甲基化水平则下降(P0.05)。结论孕鼠叶酸缺乏会影响胎鼠宫内的生长发育,其机制可能与胰岛素生长因子系统的甲基化异常有关。     

孕期叶酸影响胎鼠肛门直肠发育畸形的实验研究

目的 观察孕期叶酸对胎鼠肛门直肠畸形的发生和末端直肠DNA甲基化水平.方法 SD成年雌性大鼠80只,随机分为叶酸缺乏组、高叶酸组、正常叶酸组和对照组.妊娠10d,叶酸缺乏组、高叶酸组和正常叶酸组经胃管注入乙烯硫脲；妊娠20d,剖宫取胎鼠.观察肛门直肠畸形发生率,PCR方法检测胎鼠末端直肠组织GDNF甲基化水平.结果 叶...     

隐睾发生过程中DNA甲基化状态和甲基化转移酶表达的实验研究

目的研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯[Di—（2-ethylhexy）phthalate,DEHP]作用于孕鼠后,胎鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平的变化及3种DNA甲基化转移酶的表达情况;探讨DEHP所致表观遗传修饰改变在睾丸下降过程中的作用。方法妊娠昆明小鼠（KMmice）随机分为3组,即正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组,每组15只。玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠第12．5天到妊娠第18．5天分别持续经口予以玉米油和DEHP,用量按每日500mg／kg,正常对照组不予灌药。采用高效液相色谱仪检测基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR检测3种DNA甲基化转移酶的表达量。结果正常对照组和玉米油对照组DNA甲基化水平和3种甲基化转移酶的表达均无统计学意义（P〉0．05）：DEHP实验组DNA甲基化水平比对照组增高约10％。与对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．05）;实验组3种甲基化转移酶的表达量均比对照组高,与对照组相比,差异有显著统计学意义（Dnmt1,P〈0．05;Dnmt3a,P〈0．01;Dnmt3b,P〈0．05）。结论环境内分泌干扰物DEHP通过影响3种甲基化转移酶的表达而导致基因组DNA甲基化水平升高,从而抑制睾丸下降过程中多种基因的表达,发生隐睾。DNA甲基化等表观遗传学修饰的改变可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一。     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏中NKx2.5基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠子代心脏发育过程中NKx2.5基因和蛋白表达改变。方法成熟雌性36只SD大鼠随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5 d、孕17.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR检测NKx2.5基因mRNA表达。Western-blotting测GATA-4蛋白表达水平。结果NKx2.5基因mRNA及其蛋白在孕13.5 d、孕17.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论叶酸缺乏影响NKx2.5基因和蛋白表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,从而造成心脏功能缺陷。     

孕鼠铅暴露对胎鼠铅负荷的影响

目的研究孕鼠长期铅暴露时对胎鼠组织铅负荷的影响，探索铅经胎盘转运的情况。方法用大鼠作动物模型，观察不同染毒剂量下孕鼠铅暴露对胎鼠铅负荷的影响。断乳２周的雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠１２０只，随机分为４组，饮水中含铅离子的浓度分别为０、１０、５０、２００ｍｇ／Ｌ。１０周后与正常雄鼠交配。将各组交配成功的孕鼠再随机分为４个亚组，分别将各亚组的孕鼠于妊娠第１０、１４、１７、２０天时处死。取孕鼠的心脏血、股骨；胎鼠的脑、肝及胎盘，测其铅浓度。结果不同染毒剂量组同一妊娠期孕、胎鼠组织铅浓度差异有极显著意义（Ｆ＞７．９５，Ｐ＜０．０１），孕鼠组织铅浓度随着染毒剂量增加而增加（ｒ＞０．９４，Ｐ＜０．０１），胎鼠及其组织铅浓度则随着孕鼠组织铅浓度增加而增加（ｒ＞０．９０，Ｐ＜０．０１），胎鼠各组织铅浓度的增加程度各不相同。结论孕鼠体内组织铅负荷过高可能导致胚胎或胎鼠组织铅负荷的增加，引起胎鼠的宫内铅暴露。胎鼠脑组织铅浓度增加程度明显高于胎肝等组织。     

孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路关键信号分子表达的影响

目的 观察孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限(IUGR)胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho-ROCK)通路中关键信号分子及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,以探讨牛磺酸是否可通过该信号途径促进IUGR胎鼠皮质神经元增殖.方法 采取低蛋白饮食法建立IUGR模型,将30只孕鼠按妊娠顺序分为对照组、IUGR模型组(IUGR组)及IUGR+孕鼠补充牛磺酸组(IUGR+牛磺酸组),牛磺酸组自妊娠第12天开始于饲料中添加牛磺酸300 mg/(kg·d)直至自然分娩.采用实时定量(Real-time)-PCR法检测各组胎鼠脑组织中Ras同源基因(Rho基因)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶基因(ROCK2基因)及PCNA基因mRNA水平,同时采用免疫组织化学法检测各组胎鼠脑组织PCNA蛋白的表达.结果 1.IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织RhoA、ROCK2及PCNA mRNA水平:RhoA mRNA分别为1.757±0.041、1.498 ±0.011和1.000 ±0.000(P ＜0.05),ROCK2mRNA分别为1.548±0.231、1.094±0.049和1.000 ±0.000(P ＜0.05),PCNA mRNA分别为2.007±0.800、3.034±0.670和1.000 ±0.000(P ＜0.05).2.IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织PCNA免疫组织化学阳性细胞数分别为(22.24 ±6.17)、(77.80±14.60)和(11.30±3.18)个/高倍视野(P＜0.05).结论 孕鼠补充牛磺酸可能通过抑制Rho-ROCK信号途径而发挥对IUGR胎鼠的脑保护作用及促进IUGR胎鼠脑发育,为产前补充牛磺酸促进IUGR脑发育提供了理论依据.     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏发育中糖原合成酶激酶3β表达影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏（FD）对子代心脏发育过程中GSK3β基因表达的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5、17.5d胚胎鼠及新生鼠心脏。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测GSK3β基因mRNA表达。结果GSK3βmRNA在孕13.5、17.5d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组（Pa〈0.05）。结论叶酸缺乏可影响GSK3β基因表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,造成心脏功能缺陷。     

孕鼠叶酸缺乏对新生大鼠肺发育及其表面活性蛋白C的影响

目的 寻找叶酸缺乏对大鼠肺发育影响的形态学证据,探讨肺表面活性蛋白C(SP-C)在孕鼠叶酸缺乏引起新生大鼠肺发育障碍中的作用.方法 采用去叶酸RHAA配方饲料喂养大鼠,建立叶酸缺乏大鼠模型.叶酸缺乏组和对照组各18只大鼠,孕早期及孕晚期分别测定其血清叶酸水平;取各组出生14 d新生大鼠右肺,常规石蜡包埋切片,用HE染色及免疫组织化学染色分别比较2组肺组织及SP-C阳性细胞的病理改变.结果 叶酸缺乏组孕鼠孕早期及孕晚期血清叶酸水平均显著低于对照组(Pa<0.05),表明叶酸缺乏孕鼠模型建立成功.HE染色显示新生大鼠叶酸缺乏组肺组织结构明显被破坏;免疫组织化学染色显示,叶酸缺乏组与对照组比较,SP-C阳性的Ⅱ型细胞明显减少,黄色染色较淡,特异性显色区域较少.出生14 d叶酸缺乏组新生大鼠SP-C阳性的Ⅱ型肺泡细胞免疫组织化学染色平均吸光度显著低于对照组(P<0.05).结论 孕期叶酸缺乏对新生大鼠肺发育造成一定影响,其机制可能是通过减少胎鼠肺组织SP-C的表达,进而影响肺表面活性物质的生成.     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏超微结构及心脏发育相关基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠的子代心脏发育过程中GATA-4、NKx2.5基因表达和超微结构的改变。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组,分别喂以缺乏叶酸和含叶酸饲料2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5d（E13.5d）、孕17.5d（E17.5d）胚胎及新生鼠心脏。用实时扩增聚合酶链反应（RT-PCR）检测胚胎及新生鼠心脏GATA-4、NKx2.5基因3个时期的表达。电镜观察新生鼠心脏的超微结构。结果1.经切片观察E13.5d胚胎实验组发现明显发育延迟占35.14%,E17.5d胚胎实验组发现明显心脏畸形占43.24%,新生鼠实验组发现明显心脏畸形占69.44%。2.GATA-4、NKx2.5基因在3个时期相对表达量实验组低于对照组（Pa〈0.05）。3.实验组新生鼠心脏电镜下肌细胞胞浆内膜性结构退行性变、肌丝明暗带（z带）不清、线粒体内基质凝结、肌浆网扩张;对照组正常或破坏很轻。结论孕鼠叶酸的缺乏影响子代心脏GATA-4、NKx2.5基因水平的表达,并导致心脏超微结构和大体结构的改变,从而造成心脏发育缺陷。     

急性缺血缺氧对胎鼠血清IGFs水平和宫内发育的影响

为探讨急性缺血缺氧对胎儿血清IGF-Ⅰ、-Ⅱ水平的影响和IGFs在胎儿发育中的作用,对21只SD孕鼠被随机分为对照组9只,实验组12只.钳夹实验组孕鼠双侧子宫动、静脉20分钟建立胎鼠缺血缺氧模型,对照组仅行开腹和关腹术.比较两组胎鼠血清IGFs、血糖水平及生长参数和器官重量.结果显示,实验组血清IGF-Ⅰ、-Ⅱ及血糖浓度分别为117.92±26.58ng/ml,233.19±33.35ng/ml及41.67±5.61mg/dl,明显低于对照组(分别为234.43±70.65ng/ml,397.74±23.69ng/ml及66.4±4.95mg/dl,P均＜0.001),其生长参数和器官重量亦明显低于对照组(P均＜0.001).因此,宫内短期的急性缺血缺氧即可致胎儿宫内发育迟缓(IUGR);IGFs水平的降低可能是IUGR发生中的重要因素.     

孕鼠叶酸缺乏对子代心脏叶酸结合蛋白1基因及WNT信号转导途径的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏(FD)对子代心脏发育过程中叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因表达及WNT信号转导途径的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.51、7.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR方法检测Folbp1基因及WNT信号转导途径中Wnt和-βcatenin基因mRNA表达。结果Folbp1、Wnt及-βcatenin基因mRNA在孕13.51、7.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论FD影响Folbp1、WNT及-βcatenin基因表达,可能引起叶酸受体功能低下和WNT信号转导途径障碍,从而可能导致心脏发育中形态异常,造成心脏功能缺陷。     

孕前接种人巨细胞病毒pp65 DNA疫苗对阻断小鼠人巨细胞病毒宫内传播的效果

目的探讨构建的人巨细胞病毒(HCMV)pp65 DNA疫苗能否阻断HCMV宫内垂直传播及其免疫机制。方法24只6～8周龄健康雌性Balb/c小鼠随机分为A、B二组,每组12只。A组为疫苗组,B组为对照组。A组于0、2、4周各注射pp65DNA疫苗200μg,B组同期注射9g/L盐水0.3mL。末次接种后,各组与雄鼠配笼,妊娠d3孕鼠分别注射HCMVAD169株悬液,d20仔鼠经剖宫产娩出。荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定孕鼠血清HCMVDNA载量,应用流式细胞仪技术、放射免疫法、酶联免疫吸附(ELISA)法测定其血清CD3 、CD4 、CD8 及IL-2、IFN-γ水平,比较二组间差异;比较二组孕鼠死胎率及1周内仔鼠病死率、仔鼠脑组织病理改变及血清HCMVDNA检出率。结果1.A组孕鼠死胎率及1周内仔鼠病死率分别为13.4%、3.45%,明显低于B组(54.2%、40.74%),其差异有显著性(Pa<0.01);2.A组孕鼠血清HCMVDNA拷贝数(100mg)-1为932.80±89.62,明显低于B组(387547.6±49721.07)(P<0.01);3.A组孕鼠血清CD3 、CD4 、CD8 、IL-2、IFN-γ水平明显高于B组,差异均有显著性(Pa<0.01);4.B组仔鼠脑组织有明显病理改变,A组则无;5.A组仔鼠血清HCMVDNA检测均阴性,B组检出8/12例阳性。结论pp65DNA疫苗可能通过增强孕鼠的免疫功能,尤其是细胞免疫水平阻断HCMV宫内垂直传播。     

急性缺血缺氧对胎鼠血清IGFs水平和宫内发育的影响

为探讨急性缺血缺氧对胎儿血清IGF Ⅰ、 Ⅱ水平的影响和IGFs在胎儿发育中的作用 ,对 2 1只SD孕鼠被随机分为对照组 9只 ,实验组 1 2只。钳夹实验组孕鼠双侧子宫动、静脉 2 0分钟建立胎鼠缺血缺氧模型 ,对照组仅行开腹和关腹术。比较两组胎鼠血清IGFs、血糖水平及生长参数和器官重量。结果显示 ,实验组血清IGF Ⅰ、 Ⅱ及血糖浓度分别为 1 1 7 92± 2 6 58ng ml,2 33 1 9± 33 35ng ml及 41 6 7±5 6 1mg dl,明显低于对照组 (分别为 2 34 43± 70 6 5ng ml,397 74± 2 3 6 9ng ml及 6 6 4± 4 95mg dl,P均 <0 0 0 1 ) ,其生长参数和器官重量亦明显低于对照组 (P均 <0 0 0 1 )。因此 ,宫内短期的急性缺血缺氧即可致胎儿宫内发育迟缓 (IUGR) ;IGFs水平的降低可能是IUGR发生中的重要因素     

宫内感染对早产新生大鼠脑发育的影响

目的：本实验通过对孕鼠腹腔内注射脂多糖（LPS）制备宫内感染动物模型,探讨宫内感染对胎鼠脑神经细胞凋亡及其对早产新生大鼠远期脑发育的影响。方法：妊娠18 d孕鼠随机分为对照组、低剂量感染组和高剂量感染组,对感染组分别给予0.3 mg/kg和0.6 mg/kg LPS腹腔内注射,对照组腹腔注射生理盐水,24 h后处死部分大鼠（n＝7）,取胎盘组织行苏木精-伊红染色观察其病理变化、TUNEL法观察胎鼠脑神经细胞的凋亡情况,部分孕鼠继续怀孕至21 d前诱导分娩,将新生早产鼠饲养至42 d行迷宫试验。结果：与对照组比较,宫内感染组孕鼠胎盘组织可见明显的炎性细胞浸润,血管充血等病理改变,感染组胎鼠脑组织神经细胞的凋亡增加（对照组8.00±0.36 vs低剂量感染组32.41±5.36,高剂量感染组66.41±7.61,P＜0.01）,且神经细胞的凋亡随着宫内感染的程度加重而增多。感染组大鼠Y型迷宫试验达标所需的训练次数较对照组明显增多（对照组56.8±3.7 vs低剂量感染组117.8±8.7和高剂量感染组194.4±13.7,P＜0.01）,记忆保持中正确反应次数明显低于对照组（对照组0.92±0.06 vs低剂量感染组0.62±0.09和高剂量感染组0.37±0.09,P＜0.05）。结论：宫内感染可导致胎鼠脑神经细胞的凋亡,并损伤新生大鼠的学习记忆功能,影响其远期智能发育。［中国当代儿科杂志,2010,12（7）：569-572］     

Gli2基因在胎鼠后肠发育后期的表达

目的探讨胎鼠后肠发育与sonichedgehog(Shh)基因转录因子Gli2基因表达水平的关系。方法48只妊娠Wistar大鼠随机分成2组,实验组(n=24)在孕11d按125mg/kg胃管注入1%乙烯硫脲(ethylenethiourea,ETU),对照组(n=24)给予等量蒸馏水。两组分别于孕12d、14d和16d各处死8只母鼠,每只母鼠取4只体重相似的胎鼠,取其直肠1cm提取RNA,采用半定量RT_PCR法检测Gli2基因表达。结果实验组胎鼠直肠Gli2基因表达水平明显低于对照组(P<0.05),实验组Gli2基因表达呈一低水平线,而对照组随妊娠时间呈一下降的曲线。结论Gli2基因表达水平在胎鼠后肠发育中具有重要的作用。     

邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯导致隐睾症发生跨代遗传的机制研究

目的 探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)于性腺发育的关键时期作用于孕鼠(0),研究F1-F3代隐睾跨代遗传的演变情况及各代睾丸基因组DNA甲基化转移酶水平的改变情况.方法 妊娠SD大鼠随机分为两组:正常对照组和DEHP实验组,实验组自妊娠第七天(GD7)到第十九天(GD19)持续经口予以DEHP 750 mg·kg-1 ·d-1灌胃,观察子代隐睾发生情况,雌鼠受孕率;记录大鼠体重和睾丸、附睾重量以及AGD值,观察精子数量和质量;观察连续三代大鼠睾丸组织形态的演变情况,检测DNA甲基化转移酶变化情况.结果 孕鼠在孕期(GD7-GD19)暴露于DEHP,第一代(F1)隐睾发生率为30％,第二代(F2)隐睾发生率为12.5％,第三代(F3)未见隐睾发生;交配实验F1代受孕率50％,F2代75％,F3代100％;HE染色发现F1代睾丸生精上皮明显萎缩,生精细胞少,F2代有所改善,F3代形态趋于正常.Real Time-PCR、免疫组化和Western Blot表明DNA甲基化转移酶的表达随着遗传代数的增加而上调,差异有统计学意义.结论 DEHP损伤大鼠雄性生殖功能,通过改变DNA甲基化转移酶的表达,继而导致基因组印记甲基化修饰模式改变并遗传给下一代,从而使子代雄性生殖系统发育的关键性印记基因作用失衡,并最终导致子代产生隐睾,可能是导致生殖系统损害的重要毒理机制之一.     

乙肝疫苗联合CpG-ODN或单独应用对孕鼠及新生鼠的影响

目的 探讨CpG-ODN作为免疫佐剂对乙肝疫苗诱导孕鼠及其新生鼠体液免疫功能影响,并观察注射CpG-ODN是否导致妊娠并发症发生。方法 用CPG1826联合乙型肝炎病毒疫苗免疫孕期BALB／c小鼠,ELISA法检测孕鼠及其新生鼠血清IgG抗体。结果 CpG-ODN可明显提高正常成年鼠IgG抗体水平（P〈0．05）,对孕鼠及其子鼠血清IgG水平无影响（P〉0．05）;20μg／只的CPG1826剂量未影响新生鼠体重以及胎脑重量。结论 以20μg／只的CPG1826剂量免疫孕鼠,孕鼠及其新生鼠没有出现免疫增强作用,也未导致胎儿宫内发育迟缓（1UGR）等妊娠并发症。CpG-ODN是一种新型免疫佐剂,有较大的开发价值及广泛的临床应用前景,但在妊娠群体应用尚待进一步研究。