对小鼠具有保护作用的PT单克隆抗体

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌最重要的保护性抗原,PT的各种生物活性和毒性作用是由5个亚单位S_1～S_5组成的六聚体结构所致。为探求亚单位抗体在百日咳病中所起的保护作用,作者对20个抗PT单克隆抗体(McAb)进行了PT保护性决定簇的研究。作者采用20个McAb,其中10个抗S_1;1个抗S_2;2个抗S_3;4个抗S_(23);3个抗S_4,制备了鼠抗FHA抗体和兔抗Agg2抗体,并用抗PT多克隆抗体(PcAb)M6和M5作为对     

编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用[英]／Kamachi K，Konda T，Arakawa Y／／Vaccine.

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌的主要致病因子，由5个亚单位组成，S1亚单位具有酶活性，而S2～S5亚单位参与靶细胞的结合。研究发现抗S1亚单位的单克隆抗体可以预防百日咳杆菌感染，源自S1亚单位的重组蛋白和合成肽能诱导机体产生抗PT的保护性免疫应答，提示S1亚单位能用于百日咳疫苗的研制。     

百日咳毒素S1亚单位的抗原异质性

百日咳毒素(PT)由A原体(S1)和B低聚体两个功能部分组成,而B低聚体又由S2、S3、S4和S5四个亚单位组成。1984年,Watanabe报道用多克隆抗体双向扩散法检查5株百日咳杆菌的PT,发现其抗原性相同。本文作者旨在用单克隆和多克隆抗体弄清4株百日咳杆菌PT(尤其是S1亚单位)之间的抗原关系,便用单克隆抗体进行百日咳的免疫学诊断。在环糊精培养基中振荡培养百日咳Ⅰ相     

编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用

百日咳毒素 ( PT)是百日咳杆菌的主要致病因子 ,由 5个亚单位组成 ,S1亚单位具有酶活性 ,而 S2～S5亚单位参与靶细胞的结合。研究发现抗 S1亚单位的单克隆抗体可以预防百日咳杆菌感染 ,源自S1亚单位的重组蛋白和合成肽能诱导机体产生抗PT的保护性免疫应答 ,提示 S1亚单位能用于百日咳疫苗的研制。日本国立传染病研究所 Kamachi构建了编码 PT S1亚单位的 DNA质粒 ( pc DNA/S1 ) ,并评价了其在小鼠中诱导抗 PT或百日咳杆菌攻击的保护性免疫应答的能力。　　用基因枪将 pc DNA/S1质粒或 pc DNA质粒射入 BALB/c小鼠皮内 ,分别于 0…     

合成的百日咳毒素操纵子在大肠杆菌中的表达

百日咳毒素(PT)是百日咳杆菌的主要毒力因子,为典型的A/B型细菌毒索,由S1～S5 5个亚单位组成,其构成比为1:1:1:2:1。编码PT亚单位的基因构成一个操纵子,野生型操纵子不能在大肠杆菌中表达。为此,作者通过替换野生型的转录和翻译起     

百日咳毒素ADP核糖基化活性的定量分析

百日咳毒素 ( PT)的主要生物学作用是通过在毒素催化条件下 ,将腺苷二磷酸 -核糖( ADP-核糖 )从 NAD+转移到某些具有信号传导作用的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 ( G-蛋白 )的 α亚单位来实现的。这种 ADP-核糖基化作用常常会破坏经过修饰的 G-蛋白与其相应受体间的耦联 ,并使效应器调节作用丧失 ,从而引起不良反应。曾报告 PT催化的 ADP核糖基化作用的位点是距 C端 4个氨基酸残基处的 G-蛋白 α亚单位中一个保守的半胱氨酸残基。最近的研究表明 ,一个与 Gi3蛋白α亚单位 C端的 2 0个氨基酸序列同源的合成肽( Gαi3C2 0肽 )是 PT核糖基…     

抗百日咳毒素的单克隆抗体对毒素活性的作用

百日咳毒素(PT)是由5个亚单位(S1～S5)组成的六聚体,具有多种生物学活性,如白细胞增多促进活性(LP)、腺苷二磷酸-核糖基转移酶活性(ADPR)、血凝活性(HA)、胰岛激活活性(IA)、渗透性增加作用(PI)和中国仓鼠卵巢细胞聚集作用(CC)等。作者将SP2/0骨髓瘤细胞与经PT亚单位S234复合物免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,获得     

一种可同时诱导抗白喉毒素和百日咳毒素中和抗体应答的融合蛋白DTA-C180的构建

作者用遗传工程方法将白喉毒素(DT)A链无毒肽(DTA)基因与百日咳毒素(PT)S1亚单位的C180肽基因重组。构建分4步完成:首先将DTA基因通过质粒M13制成单链,通过定向诱变技术将其F2基因的第208     

改进的核糖基化试验检测疫苗中残余的百日咳毒素

脱毒的百日咳毒素 ( PT)是全细胞和无细胞百日咳疫苗 DTP( DTPa)的重要组分。出于安全原因 ,必须保证疫苗中 PT残余量不超过容许范围。最近报道 ,与鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 ( G蛋白 )α亚单位 C端 2 0个氨基酸序列同源的合成肽 Gαi3C2 0是 PT核糖基化反应的良好底物。Cyr等据此建立的酶促反应 -高压液相层析 ( HPLC)双重测定法可测定 PT含量。作者对该法作了改进和简化 ,并与组氨酸敏感试验 ( HIST)进行了比较。　　将 PT与荧光素己酸标记的 Gαi3C2 0肽底物 ( HCAM- 1 )共同培养 ,然后用 HPLC进行定量分析 ,但对 Cyr法中的…     

百日咳快速诊断试验的建立——检测呼吸道分泌物中的百日咳毒素

本文介绍了抗百日咳毒素单克隆抗体(ⅠB12)的产生、筛选及其在酶联斑点免疫印染法中的应用.用百日咳毒素(PT)免疫BALB/c小鼠,其脾细胞与骨髓瘤细胞(P3×63Ag8.653)融合,用ELISA法检测,发现有48孔抗PT阳性;再克隆,有15个克隆属ⅠG1亚类.经扩大培养后,在杂交瘤ⅠB12和ⅡA12的上清液中,ELISA呈阳性光密度OD值>1.0(波长405nm),与直接点在硝酸纤维素纸条上的天然毒素有很强的反应.用免疫印染法分析PT,呈现5个亚单位,ⅠB12和ⅡA12McAb仅     

霍乱毒素中和抗体的抗原特异性

霍乱毒素由两个亚单位(A和B)组成。亚单位A可激活腺苷酸环化酶,由两个多肽链(α和γ)组成。亚单位B可使霍乱毒素与组织神经节苷脂结合,由4～6个β链组成。本文对霍乱毒素及其成份进行血清学分析。     

重组百日咳菌苗能诱发免疫力而无副作用

美国Amgen公司即将研制出一种百日咳菌苗,该菌苗可不产生目前的菌苗有时引起的毒性反应,后者是由杀死的百日咳杆菌及化学处理的百日咳毒素制备的。该公司的科学家与美国国立变态反应与传染病研究所的研究人员合作,已克隆及表达了百日咳毒素的5个亚单位并且修饰了1个亚单位的1个氨基酸。这种修饰可能消除有害的、与百日咳症状有关的酶活性,同时仍能诱发免疫应答。研究人员正在将各个DNA重组亚单位(包括已修饰的亚单位)进行装配,制备     

百日咳杆菌毒素S1亚单位突变体的研究进展

百日咳杆菌毒素(PT)是目前无细胞百日咳疫苗中的主要保护性成分,其中PT的S1亚单位又是其主要的功能性亚基,具有免疫保护活性和多种毒性。在对多个S1突变体的生物学及免疫学研究后发现,其中的一个S1的双位点突变体(PTX-9K/129G)在保持有良好的免疫原性和免疫保护作用的基础上,大大降低了PT的毒性,有望成为理想的百日咳疫苗候补抗原。     

应用两种无细胞百日咳疫苗初免后的疫苗的免疫原性

无细胞百日咳疫苗 ( Pa)已批准用于初免程序 ,然而儿科医生所面临的问题是不同的 Pa交替应用是否会影响疫苗的效力。为此作者将含百日咳毒素 ( PT)、丝状血凝素( FHA)、6 9k Da蛋白和菌毛 2的 Pa 和含PT和 FHA的 Pa 按德国免疫程序在 2～ 4月龄婴儿中进行交替初免 ,以确定交替接种是否对各 Pa抗原的免疫原性产生影响。　　将 1 49名健康婴儿随机分成 3组 ,第 1组为 Pa + Pa + Pa 的 3剂程序 ;第 2组为 Pa + Pa + Pa 的 3剂程序 ;第 3组为 3剂 Pa 程序。儿童于左大腿或三角肌肌肉注射 Pa 或 Pa 。同时于右大腿或三角肌肌肉注射氢氧…     

对百日咳毒素B低聚物的免疫应答

百日咳毒素在百日咳的发病机理及免疫中均起重要作用。它由具有酶活性的A亚单位和无毒的B低聚物组成。本文证实B低聚物能诱导小鼠产生对百日咳天然毒素的免疫应答,并对百日咳毒素的实验性攻击具有防御作用。作者把百日咳毒素溶于含3M尿素、1%3-[(3-胆胺丙基)-二甲氨基]-1-丙烷磺酸盐和100μM三磷酸腺苷(ATP)的10mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中放置15分钟后混合于羧甲基琼脂糖凝胶中,室温放置15分钟后装于层析柱,用磷酸钠缓冲液洗下不与羧甲基结合的A亚单位,再以6倍体积的缓冲液洗涤,     

百日咳全菌体菌苗中百日咳毒素、丝状血凝素、69KDa外膜蛋白、凝集原2和3及脂多糖含量的测定

百日咳全菌体菌苗可诱导对多种抗原[如百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、69KDa外膜蛋白(69KDa OMP)、凝集原2和3(AGG 2和3)以及其他外膜蛋白]的抗体应答。在百日咳菌苗中,这些抗原成分的含量影响其免疫应答。 作者测定了丹麦当地4种百日咳菌株等量混合的百日咳全菌体菌苗中相应抗原成分的含量。菌苗经甲醛和硫柳汞灭活制成。每剂菌苗含16浊度单位(菌体数约为16×10~9)。从菌苗中提取各种抗原,用ELISA测定菌苗中各种抗原和脂多糖(LPS)含量。 应用2M尿素,在60℃加热30分钟,随后超声处理45秒是提取FHA、69KDa OMP、AGG2和3的最有效方法。提取PT的最佳方法是1M NaCl 4℃过夜,随后超声处理。     

表达重组百日咳毒素S1亚单位的鼠伤寒杆菌aroA突变株、伤寒杆菌Ty21a株及侵袭性大肠杆菌株口服免疫小鼠的特异性肺粘膜及全身免疫应答

百日咳毒素(PT)是百日咳致病因子,也是用于制备新一代百日咳菌苗的主要保护性组分。抗百日咳免疫的传统途径是肌肉注射,主要引起全身性体液免疫。近年人们对口服具有重组百日咳组分的弱毒活菌苗引起的粘膜免疫进行了研究。作者报告了用表达重组百日咳毒素S1亚单位的口服弱毒活菌苗株免疫小鼠所产生的全身及肺粘膜免疫应答的结     

大肠杆菌生成的重组多肽体外装配的百日咳毒素B低聚物的特性

新近面世的百日咳无细胞菌苗的主要成分是去除毒性结构的杂六聚蛋白。A是其活性部位,或称S1亚单位,是一种二磷酸腺苷(ADP)-核糖基转移酶,能干扰哺乳动物细胞内激素信号的转导,担负毒素的细胞病理效应。B是其结合部位的低聚物,含是S2,S3,S4和S5亚单位,它们的克分子比分别为1:1:     

化学交联抗原组成的无细胞百日咳疫苗的效力

在联合疫苗与多价疫苗研制过程中 ,抗原总量的增加可能是个问题 ,制备高效抗原可使疫苗的抗原含量减至最小。研究发现弱抗原性抗原经化学交联后能诱生抗体。为此作者在小鼠呼吸道感染模型中研究了化学交联抗原组成的无细胞百日咳疫苗的效力。　　作者将百日咳杆菌 Tohama株在改良的S- S液体培养基中静止培养 5天后 ,取上清液提纯百日咳杆菌丝状血凝素 ( FHA)、百日咳毒素 ( PT)、百日咳 6 9k Da外膜蛋白( PRN)。然后将上述三种抗原以 9∶ 2∶ 1的蛋白比混合 ,加入 2或 50 m M 1 -乙基 - 3- ( 3-二甲胺基丙基 )碳化二亚胺 ( EDC)和 0 …     

百日咳毒素S1亚单位在大肠杆菌中的表达及其生物学特性研究

本文采用PCR技术,以百日咳杆菌染色体DNA为模板,用质粒pCR2.1-TOPO作为载体克隆了编码百日咳毒素S1亚单位（Pertussis toxin S1 subunit)806bp的结构基因,分别在DH5α,和TOP10两株大肠杆菌中进行表达,并分别获得6株和5株表达rS1阳性的重组菌株,rS1的最高表达量分别占细胞总蛋白量的14％（DH2）和24．2％（H13）,重组菌中及粗制的rS1能被抗天然PTS1亚单位的单克隆抗体1B7识别,在小鼠主动免疫实验中,粗制的rS1免疫小鼠后,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击具有免疫保护作用,保护率可达56．3％,粗制的rS1免疫家兔所得血甭,用HP－PT及1B7－PT包被的ELISA测定效价,抗PT抗体的滴度为1：32000。该抗rB1血清在小鼠被动免疫保护实验中,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击的动免疫保护作用达到100％,证明本文获得的rS1亚单位有良好的抗原性和免疫原性,具有与天然S1相同的抗表位,有望成为百日咳基因工程单位疫苗的候选成分。