含鼠胚胎成纤维细胞的组织工程皮肤体外构建及大鼠移植研究

目的 利用鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibrobalsts,MEFs)三维培养修复大鼠全层皮肤缺损,并初步探讨其机制.方法 培养MEFs和普通成纤维细胞(fibroblasts,FBs),复合鼠尾胶原形成三维构建,ELASA法测定其分泌功能.制作大鼠全层皮肤缺损,按移植物不同分为3组:MEFs组(实验组)、FBs组(对照组1)和空白胶原组(对照组2).观察愈合时间并计算愈合面积比率,定期取创面组织行CD31、波形蛋白免疫组化检测,并以Hoechst33342荧光标记MEFs,示踪其转归.结果 与FBs组相比,MEFs组的IL-6分泌更加旺盛,而TGF-β1分泌量少(P＜0.05).实验组创面愈合快(P＜0.05),微血管密度高(P＜0.05),创面中FBs排列有序,移植的MEFs随时间减少.结论 MEFs三维构建可加速创面愈合,减轻瘢痕形成,其机制可能与胚胎细胞对创面愈合的诱导有关.

Abstract：

Objective To investigate the application and mechanism of tissue-engineered skin with mouse embryonic fibroblasts(MEFs)for the full-thickness skin defects on mice.Methods The MEFs and fibroblasts were cultured and seeded in scaffold made of rat tail collage.ELISA method was used for detection of secretory function.The full-thickness skin defects were created on mice and covered by MEFsscaffold complex(experimental group),or FBs-scaffold complex(control group 1),or scaffold only(control group 2).The process of wound healing was evaluated by observation of the re-epithelization rate.Microvessal density(MVD)and vimentin within the wound sites were also detected with immunohistochemistry staining technique to describe the characteristics of wound healing.Hoechst 33342 staining was performed to trace MEFs'fate.Results MEFs scaffold group had higher level secretion of IL-6 and lower of TGF-β1 than FBs scaffold group(P＜0.05).Compared with wounds in control groups,the wounds in MEFs group healed markedly fast(P＜0.05)and the MVD was significantly higher(P＜0.05).The fibroblasts in the wounds of MEFs group were arranged regularly and the MEFs decreased during the healing process.Conclusions The MEFs-scaffold complex can promote wound healing with less scar formation.MEFs may have an inducing effect on the wound healing.     

羟丁基壳聚糖预防大鼠腹腔粘连的实验研究

目的 探讨羟丁基壳聚糖对大鼠术后腹腔粘连的预防作用.方法 清洁级SD大鼠90只,雌雄各半,体重250～280 g,随机分为3组(n=30).采用纱布摩擦盲肠浆膜面制作腹腔粘连动物模型后,A、B组分别于盲肠表面喷涂2 mL浓度为2%的羟丁基壳聚糖溶液及透明质酸钠凝胶,C组旷置30 s后关腹.术后观察大鼠一般情况,术后2、4剧每组各取15只大鼠,行大体观察及组织学观察,双盲法行粘连程度分级.术后4周A、C组透射电镜观察创伤处盲肠壁的超微结构.结果 术后人鼠均存活至实验完成.术后2周,A、B组腹腔粘连程度较轻,纤维结缔组织及胶原增生较少,C组腹腔粘连较重,纤维结缔组织大量增生;根据Nair五级分级标准及组织学观察分级A、B组与C组差异有统计学意义(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后4周,A组粘连程度轻,纤维结缔组织及胶原增生少,C组腹腔粘连严重,纤维结缔组织及胶原大量增生,B组介于两者之间,3组分级差异有统计学意义(P＜0.05).透射电镜观察结果显示:A组成纤维细胞不活跃,胶原纤维较纤细,排列稀疏;C组成纤维细胞活跃,胶原纤维致密、紊乱.结论 羟丁基壳聚糖可显著减少大鼠腹腔术后纤维结缔组织增生,明显抑制成纤维细胞的活性,具有长时间预防腹腔粘连的作用.     

人胚胎成纤维细胞的培养及饲养层的制备

目的 从人胚胎躯干中分离、培养人胚胎成纤维细胞,建立人胚胎成纤维细胞饲养层用于人精原干细胞的培养.方法 利用酶消化法从孕5～9周龄人胚胎躯干中分离培养人胚胎成纤维细胞,制作饲养层,使用不同浓度丝裂霉素C处理,以细胞形态、生长曲线作为胚胎成纤维细胞和饲养层的评价指标.结果 从人胚胎中成功分离培养出人胚胎成纤维细胞,该细胞可传代15代以上,且经过传代及冷冻复苏后生物学特性无改变.12.5mg/L丝裂霉素C作用2h可达到较好处理效果.结论 成功分离和培养人胚胎来源的成纤维细胞,用于人精原干细胞饲养层的制作.     

人胚胎成纤维细胞作为组织工程皮肤种子细胞的可行性研究

目的：评估人胚胎成纤维细胞（human embryonic fibroblasts,HEF）作为组织工程皮肤种子细胞的可行性和优越性。方法：取人流产胚胎皮肤、正常儿童皮肤,相同条件下分离培养成纤维细胞,比较两组细胞镜下、超微结构以及增殖特性,异体淋巴细胞混合实验对比其抗原性。以第三代细胞复合鼠尾胶原构建三维培养,ELASA法分别测定两组三维构建培养液中IL-6,TGF-β1含量。结果：与普通成纤维细胞相比,胚胎成纤维细胞扩增后具有更好的细胞形态和功能,生长速度快,分裂指数高,几乎不刺激异体淋巴细胞增殖。在鼠尾胶原支架中成纤维细胞生长状态良好,并且具有一定的组织强度。胎儿成纤维细胞组培养液中的TGF-β1和IL-6在各个时相上分别显著低于和高于普通成纤维细胞组。结论：胚胎成纤维细胞是组织工程皮肤较理想的种子细胞。     

猪胚胎成纤维细胞αGal表达的鉴定

目的确定猪胚胎成纤维细胞是否合成α1,3半乳糖苷,为下一步进行基因工程改造的结果提供鉴定方法。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹法分别在转录和翻译水平确定猪胚胎成纤维细胞是否合成α1,3半乳糖苷。结果通过RT-PCR扩增,发现α1,3半乳糖苷转移酶基因在原代和传代培养的猪胚胎成纤维细胞内转录,Western免疫印迹证实,在原代和传代培养的猪胚胎成纤维细胞能合成含有α1,3半乳糖苷残基的糖蛋白。结论猪胚胎成纤维细胞可合成α1,3半乳糖苷;可采用PCR扩增和Western免疫印迹方法对经过基因工程改造的猪胚胎成纤维细胞是否表达α1,3半乳糖苷转移酶进行鉴定。     

成纤维细胞及其微环境在胚胎无瘢痕愈合中的研究进展

皮肤创面的有效愈合是确保皮肤屏障功能的首要前提,但伤口愈合后瘢痕的形成往往给患者带来长期的生理和心理困扰.胚胎早期皮肤伤口的无瘢痕愈合(scarless healing)为临床中瘢痕的防治提供了新的启示,但这一愈合过程涉及一系列复杂、紧密又协调的再生反应,其中成纤维细胞及细胞外微环境的适应性变化在其中扮演了至关重要的角...     

重建端粒酶活性的正常人成纤维细胞的成骨潜能研究

目的　通过重建端粒酶活性延长人成纤维细胞寿命 ,并对其成骨潜能进行研究 ,为解决组织工程骨修复种子细胞老化问题提供实验依据。方法　将人端粒酶催化亚基 (h TERT)基因用电穿孔法导入正常人原代成纤维细胞 ,用 TRAP- PCR检测细胞端粒酶活性 ,用β-半乳糖苷酶活性测定评价细胞衰老情况。在此基础上用骨形成蛋白(BMP- 2 )和肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)联合诱导已重建端粒酶活性的成纤维细胞在体外培养条件下成骨 ,用四环素活体标记和茜素红染色显示钙盐结节形成。结果　转染 h TERT的人成纤维细胞能稳定表达端粒酶活性 ,培养超过 5 0代后细胞仍保持β-半乳糖苷酶阴性。经 BMP- 2和 TNF-α诱导后 ,转染后传 80代的人成纤维细胞仍可形成四环素标记和茜素红染色均为阳性的钙盐结节。结论　重建端粒酶活性、寿命延长的人成纤维细胞仍然维持了其本身所具有的成骨潜能     

软骨细胞与成纤维细胞共培养体外构建软骨的初步研究

目的 软骨微环境对软骨形成具有重要作用.本实验探讨软骨细胞与成纤维细胞共培养体外构建软骨的可行性.方法 分别培养猪软骨细胞与人成纤维细胞,将两种细胞按3:7(软骨细胞:成纤维细胞)比例混匀,以5.0×107/ml终浓度接种于聚羟基乙酸支架(PGA,直径9mm,高2mm)作为共培养组,相同终浓度单纯软骨细胞和单纯成纤维细胞分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照.每组各接种3例标本,每例接种细胞悬液200μl.全部标本均体外培养12周后取材,通过大体观察、组织学及免疫组化等检测对构建软骨进行评价.结果 各组细胞均与材料支架粘附良好.体外培养12周后,阳性对照组(软骨细胞组)及共培养组均形成成熟的软骨样组织,组织学及免疫组化显示有成熟的软骨陷窝样结构及Ⅱ型胶原表达.软骨细胞组在体外培养过程中能基本保持复合物初始的大小和形状,形成的软骨在组织学上也教为均匀一致.共培养组在培养过程中稍有缩小,在复合物的周边区域形成了均质的软骨样组织,但在近中心区域存在一定量的纤维性组织.阴性对照组(单纯成纤维细胞组)在体外培养过程中逐渐皱缩变形,未形成软骨样组织.结论 软骨微环境在体外软骨分化及软骨形成中具有重要作用,软骨细胞与成纤维细胞体外共培养能形成软骨样组织.     

胶原多聚物载体运载碱性成纤维细胞生长因子的研究

目的探讨以含有胶原的聚丙烯酸交酯（PGA）为载体，运载碱性成纤维细胞生长因子（bVgr），同时复合人骨髓基质干细胞（hBMSCs）进行体外构建的可行性。方法不含胶原的和含有20％胶原的PGA运载系统合成后负载bFGF，利用免疫组化的方法检测运载系统中bFGF的释放动力学，观察释放后的bFGF对增殖的影响，从而推测该运载系统可否固定bFGF；同时建立bFGF＋hBMSCs＋载体的复合体，对该构件进行体外培养，通过测定其中DNA总量和H^3胸腺嘧啶核苷的吸收情况，了解构件中细胞的增殖情况，证实其bFGF存在活性。结果不含有胶原的运载系统中，bFGF有明显的突发释放现象；而含20％胶原的运载系统中，bFGF的突发释放较弱。前种运载系统的释放液可以持续刺激细胞的增殖，而后者的释放液对细胞的增殖影响不明显。含有胶原＋bFGF的构件中细胞增殖较快，在体外培养2周后检测出较多的DNA含量。结论含有胶原的PGA运载系统可以用于固定和运载bFGF，并保持其活性。因子＋hBMSCs＋载体的模式为骨组织工程学提供了新的方法。     

全反式维甲酸与VEGF联合应用诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向成骨分化

目的研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)与VEGF联合应用对于小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)定向成骨分化的影响。方法取NIH孕鼠(孕12~15 d)子宫内的胎鼠,去掉头、心、肝等器官后,采用胰蛋白酶消化贴壁法分离培养MEFs。利用HEK-293细胞采用反复冻融法扩增重组腺病毒红色荧光蛋白(recombinant adenovirus-red fluorescent protein,Ad-RFP)及Ad-VEGF。采用ALP染色和ALP定量检测法检测单独ATRA或VEGF以及ATRA和VEGF联合应用培养MEFs第3、5天ALP活性变化。将第3~4代MEFs分为A、B、C、D 4组,分别加入DMSO+Ad-RFP、ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF。实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测第3、7天成骨相关标志物ALP、Ⅰ型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及成血管相关标志物VEGF、血管生成素1(angiopoietin 1,ANGPT1)、内皮黏蛋白(endomucin,EMCN)mRNA表达;免疫组织化学染色检测各组第3、5、7天OPN、VEGF蛋白表达;茜素红染色检测各组成骨诱导14、21 d钙盐沉积水平。取15只4~6周龄无胸腺雌性裸鼠,随机分为3组,每组5只,分别于背侧与腹侧皮下注射经ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF处理后的MEFs。植入后5周行X线片观察、大体观察及组织学染色(Masson、HE及番红O-固绿染色),观察各组裸鼠体内异位成骨情况。结果成功分离培养MEFs;扩增后的Ad-RFP及Ad-VEGF成功转染MEFs,转染效率约为50%和20%。ALP活性检测示,单独使用ATRA或VEGF均能增强MEFs中ALP活性,且ATRA作用较VEGF强;ATRA和VEGF联合使用较单独使用显著增强了MEFs中ALP活性(P<0.05)。qRT-PCR检测示,ATRA联合Ad-VEGF使用上调了早期成骨分化相关标志物ALP、OPN、Ⅰ型胶原mRNA相对表达量(P<0.05);7 d时成血管相关标志物VEGF、EMCN及ANGPT1 mRNA相对表达量有所上升(P<0.05)。免疫组织化学染色示,ATRA联合Ad-VEGF不仅增强了OPN蛋白表达,VEGF蛋白表达在第7天也有所增强。茜素红染色示,单独应用ATRA或Ad-VEGF诱导钙盐沉积作用较弱,二者联合应用明显增强了MEFs成骨晚期钙盐沉积的效应。裸鼠体内植入实验结果显示,X线片观察发现与其余两组相比,ATRA+Ad-VEGF组存在明显骨块,且骨块体积较大,组织学染色可见大量胶原及成熟骨小梁、骨基质形成以及胶原骨组织。结论ATRA与VEGF联合应用能诱导MEFs定向成骨分化。     

软骨细胞在几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶中培养的实验研究

目的　探讨几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶体作为组织工程软骨细胞支架的可行性。方法　从一月龄兔关节表面削取软骨 ,经酶消化获得软骨细胞。按 0 .8× 10 6 / m L 细胞浓度分别接种于几丁糖凝胶 ,透明质酸钠凝胶 ,几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶。通过倒置显微镜观察细胞形态 ,描绘生长曲线 ,甲苯胺蓝染色 ,免疫组化 ,了解软骨细胞生长情况。结果　几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶能促进软骨细胞生长、增殖 ,维持软骨细胞表型表达 ,分泌 型胶原及葡萄糖胺上优于透明质酸钠及单纯几丁糖。结论　几丁糖和透明质酸钠聚合凝胶能很好维持软骨细胞正常形态、功能和增殖能力。它可能是组织工程中一种良好的软骨细胞载体材料     

磷酸钙骨水泥替代骨的制备及其细胞生物相容陛实验研究

目的：为了修复骨缺损，研制适宜的骨移植人工替代材料。方法：制备出磷酸钙骨水泥（CPC），检测其成分，并与骨髓基质干细胞共同培养，研究其细胞生物相容性及对骨髓基质干细胞成骨能力的影响。结果：所制备磷酸钙骨水泥主要成分为低结晶度的羟基磷灰石（HA），对骨髓基质干细胞的生存、增殖能力及对其成骨特性的保存无影响。结论：所制备磷酸钙骨水泥细胞生物相容性良好，是适宜的骨缺损修复材料。     

复合生物支架胶原蛋白／壳聚糖及聚乙烯醇／丝胶在大鼠膀胱扩大手术中的应用

目的评价复合生物材料胶原蛋白／壳聚糖及聚乙烯醇／丝胶在膀胱扩大手术中的效果及町行性。方法雌件大鼠21只随机分为3组,即膀胱扩大手术组（实验组：修补材料为胶原蛋白／壳聚糖＋聚乙烯醇／丝胶）;膀胱部分切除组（对照组）和非手术组（平行对照组）。所有3组实验动物在术后7d、21d、42d进行膀胱容量测定,并取材观察其形态学及组织学改变。结果接受膀胱扩大手术的大鼠,术后各时间点的膀胱容量均明显高于其他两组。大体检查见膀胱血管纹理清晰,修补部位与正常膀胱无明显分界,结石发生率为71．4％。镜下组织学检查发现：术后7d时,支架外层大量炎症细胞浸润,组织结构无法分清。术后42d时,支架内层上可见泌尿上皮呈多层排列,黏膜下层增厚明显,但平滑肌层相对稀疏且排列欠规则。结论复合生物支架胶原蛋白／壳聚糖＋聚乙烯醇／丝胶能成功应用于大鼠膀胱扩大手术,但仔在膀胱平滑肌层再生情况不佳、成石率较高的缺点,有待进一步研究改善。     

真皮多能干细胞与聚(对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸)三元共聚酯的生物相容性

目的 观察小鼠真皮多能干细胞(SKP)与聚(对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸)(PBTEOLA)三元共聚酯的生物相容性.方法 分离培养小鼠乳鼠SKP.用DAPI标记SKP细胞核后,荧光显微镜下动态观察SKP接种在共聚酯支架上的生长情况;SKP与共聚酯体外立体培养至第4天和第7天时,通过扫描电镜及苏木素-伊红(HE)染色观察细胞生长及基质分泌情况;噻唑蓝(MTY)比色法检测共聚酯对SKP的增殖影响.结果 SKP细胞接种于共聚酯上24 h后即贴壁生长,第5～7天时为生长高峰.SKP牢固地黏附于共聚酯材料表面和孔隙内,细胞间有伪足相连,且有基质形成.检验时间因素和材料因素交互作用时,差异无统计学意义(P＞0.05).共聚酯对细胞生长无明显影响.结论 PBTEOLA三元共聚酯对SKP细胞具有良好的生物相容性,可选择作为组织工程的支架材料.     

泌尿系统组织工程支架材料胶原蛋白-壳聚糖及聚乙烯醇-丝胶的生物相容性评价

目的评价复合材料胶原蛋白-壳聚糖、聚乙烯醇-丝胶作为泌尿系统组织工程支架的生物相容性和生物安全性。方法采用溶血实验评价胶原蛋白-壳聚糖、聚乙烯醇-丝胶两种复合材料对红细胞功能和代谢的影响;采用皮肤致敏实验评价两种材料是否满足体内植入的要求;采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法评价胶原蛋白-壳聚糖、聚乙烯醇-丝胶两种复合材料对泌尿上皮细胞和膀胱平滑肌细胞的生长和增殖的影响。结果胶原蛋白-壳聚糖和聚乙烯醇-丝胶的溶血率分别为1.86%和2.08%(均<5%),两种材料不引起溶血反应。与阴性对照组相比,两种材料皮肤致敏实验的结果均为阴性,没有致敏作用。细胞毒性实验(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)显示两种材料细胞毒性均为0级。结论复合生物材料胶原蛋白-壳聚糖、聚乙烯醇丝胶具有良好的生物相容性,有望作为组织工程支架材料,应用于泌尿系统的修复重建。     

Photocrosslinkable Chitosan Hydrogel Can Prevent Bone Formation in Both Rat Skull and Fibula Bone Defects

UV light irradiation to a photocrosslinkable chitosan (Az-CH-LA) resulted in an insoluble and flexible hydrogel within 30 s. The purpose of this study was to evaluate the ability of the photocrosslinkable chitosan to inhibit bone formation in the bone defects. A 5-mm-diameter defect was made in the rat calvarium, and then photocrosslinkable chitosan was implanted and irradiated with UV for 30 s. Furthermore, a 2-mm defect was made in the fibula of a rat hind leg, and then photocrosslinkable chitosan was implanted and irradiated with UV. Bone formations in the rat skull and fibula defects with photocrosslinkable chitosan hydrogel were significantly prevented for 8 weeks. Thus, the chitosan hydrogel has an inhibitory effect on bone formation.     

壳聚糖复合胶原蛋白周围神经支架材料的制备研究

目的:以壳聚糖复合Ⅰ型胶原蛋白利用自制的组织工程周围神经模具通过冷冻干燥技术制备一种神经组织工程支架材料。方法:从SD大鼠鼠尾中提取高纯度的Ⅰ型胶原蛋白,将其与壳聚糖分别溶于0.2M醋酸溶液中,利用自制的组织工程周围神经模具制备成管状支架,冷冻干燥,以紫外线照射的方法使其交联。经扫描电镜观察、比较其与周围神经的异同、测量微孔直径、计算孔隙率。测试0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)中30天体外降解率。并埋入SD大鼠皮下看其与周围组织反应。结果:制备出的支架材料具有半透性外壳及高孔隙率的内部海绵状结构,其微孔直径为15～55μm,孔隙率为95%,体外降解率为19%,与周围组织无毒性反应。结论:以壳聚糖复合Ⅰ型胶原蛋白结合冷冻干燥技术,制备出具有半透性外壳及高孔隙率内部海绵状结构的神经组织工程支架材料,生物相容性良好,具应用潜力。     

Effect of Photocrosslinkable Chitosan Hydrogel and Its Sponges to Stop Bleeding in a Rat Liver Injury Model

This study examined the hemostatic efficacy of photocrosslinkable chitosan hydrogel‐mixed photocrosslinked chitosan sponges (PCM‐S) after hepatic injury in rats. The left lobe of the liver was penetrated with a dermal punch to produce a penetrating wound in heparinized and nonheparinized rats. Treated rats either had PCM‐S applied into the wound and then were immediately ultraviolet irradiated, or they had TachoComb (TC) inserted into the wound. Blood loss, hemostasis, and survival were quantified after the hepatic injury. Measurements on serum alanine aminotransferase in nonheparinized rats and hemoglobin concentrations and histologic examinations in heparinized rats were performed to assess hepatic function. Although the hemostatic effect in the PCM‐S‐treated nonheparinized rats was identical to that of the TC‐treated group, PCM‐S‐treatment has higher hemostatic effect in heparinized rats. No adverse events related to the use of PCM‐S were detected in blood and histologic examinations.     

关节软骨源性微载体生物相容性及异位成软骨特性观察

目的 观察改良后软骨源性微载体的微观结构及主要成分,其对软骨细胞增殖的影响及体内异位成软骨特性.方法 将新鲜猪软骨片粉碎后,梯度筛滤后得到直径大200～400 μm的软骨源性微载体,经1%十二烷基硫酸钠（SDS）脱细胞处理后,Hoechst 33258荧光染色观察其DNA残留,采用扫描电镜对其微结构进行观察,通过甲苯胺蓝、番红花O组织学染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色观察微载体的主要成分;体外复合软骨细胞后,通过MTT观察软骨源性微载体对软骨细胞增殖的影响;将复合有软骨细胞的软骨源性微载体包埋于裸鼠皮下观察其异位成软骨能力.结果 改良后的微载体形态近似椭圆形,直径200～400 μm,微丝覆盖其表面,微丝长度40～90 nm;脱细胞处理后Hoechst 33258荧光染色阴性;甲苯胺蓝和番红花O组织学染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性;在MTT检测细胞增殖中,第1天以后软骨源性微载体组及条件培养基组的OD值均高于完全培养基组（P〈0.05）;复合有软骨细胞的软骨源性微载体具有异位成软骨能力.结论 本实验成功制备的软骨源性微载体,可作为天然微载体高效扩增软骨细胞,可为组织工程提供优质种子细胞;其具有异位成软骨能力,有望成为软骨组织工程的新型支架.     

关节软骨源性微载体生物相容性及异位成软骨特性观察

目的 观察改良后软骨源性微载体的微观结构及主要成分,其对软骨细胞增殖的影响及体内异位成软骨特性.方法 将新鲜猪软骨片粉碎后,梯度筛滤后得到直径大200～400 μm的软骨源性微载体,经1%十二烷基硫酸钠（SDS）脱细胞处理后,Hoechst 33258荧光染色观察其DNA残留,采用扫描电镜对其微结构进行观察,通过甲苯胺蓝、番红花O组织学染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色观察微载体的主要成分;体外复合软骨细胞后,通过MTT观察软骨源性微载体对软骨细胞增殖的影响;将复合有软骨细胞的软骨源性微载体包埋于裸鼠皮下观察其异位成软骨能力.结果 改良后的微载体形态近似椭圆形,直径200～400 μm,微丝覆盖其表面,微丝长度40～90 nm;脱细胞处理后Hoechst 33258荧光染色阴性;甲苯胺蓝和番红花O组织学染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性;在MTT检测细胞增殖中,第1天以后软骨源性微载体组及条件培养基组的OD值均高于完全培养基组（P〈0.05）;复合有软骨细胞的软骨源性微载体具有异位成软骨能力.结论 本实验成功制备的软骨源性微载体,可作为天然微载体高效扩增软骨细胞,可为组织工程提供优质种子细胞;其具有异位成软骨能力,有望成为软骨组织工程的新型支架.