鞘氨醇激酶调节细胞凋亡的研究进展

鞘磷脂衍生物神经酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sp)及1-磷酸鞘氨醇(SIP)在调控细胞增殖、存活及凋亡中发挥着重要作用。鞘氨醇激酶(SPK1)是调控细胞内Cer、Sp、SIP代谢平衡的关键酶。SPK1磷酸化Sp生成SIP，SIP通过细胞内和细胞外作用机制调节细胞生长和凋亡。SPK1参与细胞因子的信号传递。高表达SPK1抑制半胱天冬酶的裂解并上调Bcl-2基因的表达。本文综述了SPK的结构、调控及对细胞凋亡的调节作用。     

鞘氨醇代谢物——肿瘤治疗的新靶点

神经鞘脂类是细胞膜的结构成分之一。其代谢产物如神经酰胺、鞘氨醇、1-磷酸鞘氨醇亦是具有生物活性的信号分子,可作为第一和（或）第二信使调控着细胞的生命活动,如细胞的增殖、存活、迁移、新生血管形成。鞘氨醇激酶1是调节神经酰胺、1-磷酸鞘氨醇平衡的限速酶。近年研究表明,神经酰胺、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇可调控肿瘤细胞代谢的多个环节,由此提示神经鞘脂类代谢产物可作为肿瘤治疗的新靶点。     

白介素-6对马法兰诱导多发性骨髓瘤细胞KM3凋亡的影响

目的探讨白介素-6（IL-6）在马法兰诱导人多发性骨髓瘤细胞株KM。凋亡效应中的作用及其可能的分子机制。方法运用流式细胞仪技术（FACS）、DNA片段化百分率、凋亡细胞的原位检测（TUNEL法）和Western blot分析，观察II；6对马法兰诱导KM。细胞凋亡的影响及其caspase-3、caspase-8蛋白表达的变化。结果IL-6作用可使马法兰诱导的KM3细胞凋亡减少，同时caspase-3蛋白表达降低。结论1176可通过调节caspase-3、caspase-8表达保护马法兰诱导的KM3细胞凋亡。     

PS-341对多发性骨髓瘤细胞分泌BAFF与APRIL及迁移能力的影响

目的：为了研究PS-341对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226、KM-3及10例多发性骨髓瘤原代细胞分泌及迁移能力的影响。方法：在体外培养多发性骨髓瘤（MM）细胞,以PS-341进行处理,用RT-PCR方法检测BAFF与APRI及其3个受体BAFF-R、TACI、BCMAL基因的表达,用ELSIA方法检测细胞培养上清中可溶性BAFF与APRIL的浓度变化,以transwell方法检测细胞迁移能力的变化。结果：MM细胞RPMI8226及KM3表达BAFF与APRIL及3个受体BAFF-R、TACI、BCMA,但部分病人不表达BCMA;PS-341可以抑制MM细胞自分泌可溶性BAFF与APRIL;PS-341降低MM细胞迁移能力。结论：PS-341抑制多发性骨髓瘤细胞分泌BAFF与APRIL,并可以抑制多发性骨髓瘤细胞的迁移。     

马法兰作用后多发性骨髓瘤细胞APE1蛋白表达的改变及意义

目的探讨脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶（APEl）基因在多发性骨髓瘤（multiple myelorna，MM）细胞中的表达变化及其与马法兰作用的关系。方法采用免疫细胞化学、Western blot方法检测0～15μmol／L马法兰作用KM3多发性骨髓瘤细胞1～2天后APEl表达的变化，并且通过图像分析系统计算其积分光密度值。结果马法兰作用可诱导KM3细胞APE1表达增强，并与其作用时间、剂量成正比。结论马发兰作用可诱导APE1蛋白表达增强，提示其可能在MM对马发兰耐药中起一定作用。     

γ射线照射对肺腺癌细胞迁移能力的影响及其分子机制

目的探讨辐射对肺腺癌A549细胞迁移能力的影响及其所依赖的信号通路。方法划痕实验检测2和4 Gyγ射线照射后A549细胞的迁移能力,Western印迹实验检测STAT3及磷酸化STAT3水平,ELISA法检测IL-6的分泌水平,间接免疫荧光染色观察STAT3在细胞内定位情况。结果 2或4 Gyγ射线照射均能显著增强A549细胞的迁移能力,并能激活STAT3的磷酸化,促进STAT3入核以及IL-6的分泌。JAK-2激酶特异性抑制剂AG490能阻断辐射诱导的STAT3磷酸化并进一步抑制辐射诱导的A549细胞迁移。结论本研究结果表明辐射能通过激活JAK-2/STAT3信号通路促进A549细胞的迁移,而IL-6可能参与了辐射诱导的JAK-2/STAT3信号通路的激活。     

鞘氨醇-1-磷酸受体-1促进肿瘤转移与放疗抵抗的研究进展

远处转移是癌症治疗的主要障碍之一。鞘氨醇-1-磷酸受体-1（sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1PR1）在恶性肿瘤中过度表达,通过激活下游信号通路增强细胞侵袭和迁移活性、调控上皮间质转化（EMT）以及诱导淋巴管与血管生成,最终导致肿瘤转移的发生。S1PR1与获得性放射抗性的产生也有密切关联。本文就S1PR1及其在肿瘤转移和放疗抵抗中的作用进行综述。     

60Coγ辐射诱导下IL-6对人多发性骨髓瘤细胞株凋亡效应的实验研究

目的研究白介素-6(IL-6)在60Coγ辐射诱导人多发性骨髓瘤细胞株XG-6、XG-7凋亡效应中的作用及其可能的分子生物学机理.方法运用流式细胞仪技术(FACS)、DNA片段释放法和RT-PCR,观察了IL-6对细胞株XG-6、XG-7中Bcl-xL、BaxmRNA相对表达的影响及其与辐照诱导的细胞凋亡率的相关性.结果IL-6存在时,XG-6、XG-7细胞的Bcl-xL、BaxmRNA表达在辐照后迅速上升,4h达最高峰后逐渐下降,24～48h恢复到照射前水平;不加IL-6的XG-6、XG-7细胞的Bcl-xL的表达在同样实验条件未检测到,而这2株细胞BaxmRNA的表达在照射后不同时间均低于相应的加IL-6组,但尚有明显的表达.对不加IL-6的细胞组,辐照后不同时间的凋亡率明显高于相应的加IL-6组(P＜0.05).结论IL-6可通过调节Bcl-xL、Bax的表达及改变BcL-xL/Bax二者比率,保护辐照诱导XG-6、XG-7的细胞凋亡.     

1-磷酸鞘氨醇对淋巴管内皮细胞生物学特性调节作用的研究

目的：研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）对淋巴管内皮细胞（HDLEC）的生物学特性的调节作用及其调节机制。方法：应用RT-PCR方法检测HDLEC是否表达SPK及S1P受体,应用MTT法、细胞扩散盒技术检测S1P对HDLEC增殖、迁移特性的影响,并用Western印迹方法检测S1P对HDLEC的MAPK信号通路的调节。结果：HDLEC表达SPK及S1P受体,包括S1P1,S1P2,S1P3和S1P4。外源性S1P对HDLEC没有促增殖作用,但可促进其迁移,并可通过S1P1和S1P2诱导MAPK快速磷酸化。结论：初步研究结果提示,S1P可以影响淋巴管内皮细胞的生物学特性,有可能成为调控淋巴管生成及其功能的新靶点。     

脑组织中神经酰胺、白细胞介素-1β、caspase-3在脑创伤后的改变和作用

目的 研究脑组织中白细胞介素－1β（IL－1β）、神经酰胺、caspase03在创伤性服损伤（TBI）后的改变和相互作用。方法 以大鼠自由落体脑损伤为模型，损伤前后各30min加用不同处理因素后24h，用于湿法测量服含水量，TUNEL染色检测神经细胞凋亡，ABC法检测caspase-3活性片段P20的表达，DAG激酶（diacylglcerol kinase,DAGK）法检测神经酰胺的变化。结果 TBI后双侧脑组织含水量、TUNEL染色阳性细胞、caspase-3活性片段、IL－1β有神经酰胺均较对照组显著增加。caspase－3抑制剂使TBI后TUNEL染色阳性细胞明显下降，对脑组织水和神经酰胺含量没有影响。IL－1β抗体使TBI活性片段下降，但明显弱于神经酰胺的降解剂鞘氨醇激酶（SK）的作用。而SK对TBI后脑组织中IL－1β的表达没有影响。结果 TBI后服组织中神经酰胺的大量合成在伤后的脑水肿和神经细胞凋亡中是一个主要信号途径。IL－1β是神经酰胺合成的刺激因素之一；caspase是神经酰胺的下游信号途径。     

重组腺病毒Ad5-KAI1对骨髓瘤细胞的功能调节作用

目的研究抗癌一号KAI1（又称CD82）基因对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及机制。方法将携带KAI1基因克隆至重组腺病毒,制备Ad5-KAI1重组腺病毒,并感染骨髓瘤细胞SKO-007。Ad5-GFP作为阴性对照,未感染细胞为空白对照,利用CCK-8和AnnexinⅤ-PI等方法分别检测不同时间点（24 h,48 h）的细胞活率和凋亡水平。另外,利用W estern印迹方法检测不同组别细胞表达ERK及其磷酸化水平。结果 Ad5-KAI1组细胞活率抑制水平和凋亡水平明显高于对照组,且剪切型胱天蛋白酶（caspase）3、ERK磷酸化水平在实验组高表达,而抑制ERK磷酸化则导致凋亡进一步增加。结论 KAI1显著抑制骨髓瘤细胞增殖,并诱导其caspase依赖的凋亡;KAI1在促进凋亡的同时,其应激性诱导了ERK磷酸化,后者又对细胞具有保护作用。     

p38 MAPK对嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞共培养时细胞因子释放的调控作用

目的 了解嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞相互作用诱导细胞因子释放的p38 MAPK信号转导通路.方法 用CD16磁珠抗体分离外周血中嗜酸性粒细胞,以嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞(BEAS-2B)接触共培养为实验模型,观察SB 203580对细胞培养上清液中细胞因子浓度的影响.细胞因子浓度采用ELISA和流式细胞微珠方法测定.结果 SB 203580能够有效抑制BEAS-2B细胞释放IL-6、IL-8(P＜0.05)和嗜酸性粒细胞释放IL-8(P＜0.01).SB 203580对嗜酸性粒细胞与BEAS-2B细胞接触共培养诱导的IL-6、IL-8和IP-10释放具有显著抑制作用(P＜0.001).结论 嗜酸性粒细胞、BEAS-2B细胞单独或相互作用时均通过p38 MAPK信号转导通路释放细胞因子.     

鼻咽癌放射抗拒相关的信号通路

目的 研究具有不同放射抗拒性的人鼻咽癌细胞株CNE-2R与CNE-2的基因表达谱差异,筛选与鼻咽癌放射抗拒相关的基因信号通路.方法 验证已构建的鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的放射抗拒性,选用Human-6v3.0全基因组表达谱微珠芯片,筛选这2种细胞的差异表达基因.对差异基因进行生物信息学分析,寻找与鼻咽癌放射抗拒...     

肝刺激物促肝细胞增殖信号转导途径的初步研究

目的：探讨新生牛肝肝刺激物(hepatic stimulator substance，HSS)促进SMMC7721肝癌细胞增殖的信号转导途径。方法：对新生牛肝进行多步分离，采用^3H-Td RDNA掺入法检测分离物的促增殖活性，从而获得具增殖刺激活性的HSS；Western印迹方法检测其对肝癌细胞MAPK Thr202／Tyr204的磷酸化作用并检测其对SPK的激活作用。结果：经多步分离纯化，获得了活性较高的HSS粗提物，Western印迹法结果显示HSS粗提物能明显提高MAPK的磷酸化水平，并能激活细胞内的SPK活性。结论：HSS对细胞的增殖刺激可能是通过SPK和MAPK途径发挥作用。     

rhIL-11对正常IEC-6细胞的增殖及细胞周期的影响

目的通过研究重组人白介素11(rhIL-11)对正常IEC-6细胞增殖、细胞周期及其IL-11受体表达的影响,探讨IL-11对小肠上皮细胞的调控作用以及相关机制。方法利用MTT法检测rhIL-11对正常IEC-6细胞增殖的影响,通过流式细胞仪检测细胞周期的变化,并采用Westem blot方法检测IEG-6细胞表面IL-11受体α链的表达情况。结果rhIL-11可引起正常IEC-6细胞发生增殖抑制和明显的G／G1期阻滞,并诱导细胞表面IL-11受体α链表达增加。结论rhIL-11可能通过与IEG-6细胞表面特异性受体结合,从而启动胞浆内信号转导通路,引起细胞效应。     

Investigation of the mechanisms underpinning IL-6 cytokine release in bystander responses: The roles of radiation dose, radiation quality and specific ROS/RNS scavengers

Abstract Purpose: To investigate the mechanisms regulating the pathways of the bystander transmission in vitro, focusing on the radiation-perturbed signalling (via Interleukine 6, IL-6) of the irradiated cells after exposure to low doses of different radiation types. Materials and methods: An integrated 'systems radiation biology' approach was adopted. Experimentally the level of the secreted cytokine from human fibroblasts was detected with ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) method and subsequently the data were analyzed and coupled with a phenomenological model based on differential equations to evaluate the single-cell release mechanisms. Results: The data confirmed the important effect of radiation on the IL-6 pathway, clearly showing a crucial role of the ROS (Reactive Oxygen Species) in transducing the effect of initial radiation exposure and the subsequent long-term release of IL-6. Furthermore, a systematic investigation of radiation dose/radiation quality dependence seems to indicate an increasing efficiency of high LET (Linear Energy Transfer) irradiation in the release of the cytokine. Basic hypotheses were tested, on the correlation between direct radiobiological damage and signal release and on the radiation target for this endpoint (secretion of IL-6) Conclusions: The results demonstrate the role of reactive oxygen and nitrogen species in the signaling pathways of IL-6. Furthermore the systems radiation biology approach here adopted, allowed us to test and verify hypotheses on the behavior of the single cell in the release of cytokine, after the exposure to different doses and different qualities of ionizing radiation.     

血管生成过程中促血管生成因子及其在内皮细胞中信号转导途径的研究进展

新血管生成在个体发育、创伤愈合及肿瘤生长等过程中具有十分重要的意义。多种促血管生成因子作用于血管内皮细胞,通过不同的信号转导途径调节细胞的迁移、增殖、凋亡、分化、分泌及管腔状结构的形成。本文回顾了多肽类生长因子、脂类介质,如鞘氨醇－1－磷酸酯（sphingosinel-phosphate,SPP)、溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA)以及一氧化氮分子等在血管内皮细胞中的信号转导途径及其在血管生成过程中的主要作用,并简述了电离辐射对血管生成影响的研究进展。     

诱导型一氧化氮合酶和白介素1受体拮抗剂在骨关节炎滑膜和软骨中的表达及意义

炎症前细胞因子白介素 1(IL - 1)通过刺激软骨细胞合成诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) ,产生一氧化氮(NO) ,增加基质降解 ,参与关节炎的炎症活动 ,而局部产生的白介素 1受体拮抗剂蛋白 (IL - 1Ra)可阻止软骨破坏。本实验旨在观察iNOS和IL - 1Ra在骨关节炎 (OA)关节滑膜和软骨中的表达及分布。我们收集了 6例OA患者的关节滑膜和软骨标本。通过免疫组化方法对iNOS、CD6 8和IL - 1Ra进行了原位检测。在 6例OA滑膜标本连续切片中 ,滑膜的衬里层细胞、炎症浸润细胞以及血管内皮细胞中均强烈表达iNOS蛋白。IL - 1Ra阳性细胞主要局限于滑膜的衬里层细胞及血管内皮细胞 ,表达强度低于iNOS表达。CD6 8阳性细胞 (检测巨噬细胞的抗体 )仅在滑膜衬里层的表层 (A型滑膜细胞 )及炎症浸润细胞中零星表达。在 6例骨关节炎软骨连续切片标本中 ,iNOS和IL - 1Ra在软骨全层及软骨下骨髓腔内均有强烈表达。结果提示 ,骨关节炎时 ,iNOS主要产生于滑膜衬里层细胞、软骨细胞以及血管内皮细胞 ,而IL - 1Ra主要产生于滑膜衬里层的巨噬样滑膜细胞和软骨细胞 ;iNOS和IL - 1Ra之间的拮抗作用可能在骨关节炎的病理机制中发挥很重要的作用。