中国北方地区严重急性呼吸综合征社区内传播的影响因素研究

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)在社区内传播的影响因素。方法以北京、太原和内蒙古在社区内造成传播的48例SARS病例为病例组,以相同性别、年龄相差不超过5岁为配比条件,按照1∶1比例,以未在社区内造成传播的SARS病例为对照组,进行配对的病例对照研究。资料分析应用SAS软件完成。结果Logistic回归分析,病例在社区居留天数和接触人数是SARS社区内传播独立的危险因素,病例戴口罩是防止SARS社区内传播的保护因素,不戴口罩的调整OR值为5.53(1.55~19.79)。结论社区内出现SARS病例时应尽早住院隔离治疗,在被收住院之前采取保护性的措施有助于防止社区内的传播。     

严重急性呼吸综合征流行病学特点及控制措施研究

本研究利用流行病学理论 ,结合现有的流行病学调查资料和工作实际 ,对严重急性呼吸综合征(SARS)的流行病学特点及控制措施进行了研究。结果表明 ,严重急性呼吸综合征 (SARS)传染源不明 ,传播途径以近距离飞沫传播为主 ,密切接触呼吸道分泌物传播 (手 ) ,可能存在粪 口途径 (在粪便中查到冠状病毒 )和实验室传播。人群普遍易感。宜采取综合性的控制措施。本研究为今后有针对性地开展SARS预防和控制提供了依据。     

统计研究设计中常见错误辨析

WHO已经直接将非典型肺炎与重型急性呼吸道综合征(SARS)联系起来，并指出．现在SARS是全球性的健康威胁因素．需要全世界的共同努力以查明病因．治疗患者并阻止其传播。SARS是新识别的疾病，其传播途径刚开始发现，因此很难解释。虽然病原体特征和强有力     

WHO对SARS病例和疑似病例献血的要求

虽然迄今为止尚未发现通过血液或血制品传播SARS的病例,但WHO要求应对可能感染SARS的血液和器官供体进行检查。联合国官员认为,目前亦未发现由血液制品或血液相关成分所导致的SARS疑似病例,而理论上存在这种危险性。研究认为,SARS主要经由飞沫(SARS患者咳嗽和打喷嚏)传播。全世界范围内已有7700多人感染     

80例SARS病例的流行病学调查

目的:了解严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome, SARS,即非典型肺炎)的流行特点、规律及传播途径.方法: 对80例SARS患者进行流行病学调查分析.结果:72例患者(90%)有明确的SARS患者接触史,接触时间最短仅20 min,潜伏期2～20天,平均为(7.6±4.3)天.80例患者中医务人员占66.3%(53/80),非医务人员为33.7%(27/80);两组中有接触史的例数分别为49例(92.5%)和23例(85.2%),两者的潜伏期相近.护士的患病人数多于医生及护工,分别为29人(54.7%)、18人(34%)和6人(11.3%);非医务人员患者中职员(8/27,29.6%)和服务人员(6/27,22.2%)的比例较高.以医院或家庭聚集性发病为特点,防护和隔离措施不到位是SARS爆发流行的主要原因.结论:密切接触是SARS的主要传播途径,潜伏期为2～20天,平均(7.6±4.3) 天.发病以医院或家庭聚集形式多见,良好的防护措施可明显降低SARS的发病率;早期的隔离能有效地控制和预防SARS的传播和流行.     

关于与SARS患者近距离接触的资讯

SARS的症状 一般而言,SARS患者开始会发烧,温度高于100.4F(>38.0℃)。其他症状可能包括:头疼、全身不舒服、身体疼痛。有些人还有轻度的呼吸道症状。经过2～7天后,SARS患者可能会出现干咳和呼吸困难。 SARS如何传播 SARS的主要传播方式是人与人的近距离接触。大多数SARS新患者都是SARS患者的照顾者或同住者,或者是直接接触了SARS患者传染性     

重庆市首例SARS的诊治

传染性非典型肺炎是一种新的病原体(SARS冠状病毒)导致的具有较强传染性的新发感染病(世界卫生组织将其称为严重急性呼吸综合征,简称SARS),我国已将其列入法定传染病,主要以近距离飞沫空气传播及密切接触传播为主.2002年11月～2003年5月间,广东部分地区发生了SARS的局部流行,2003年3月北京发现首例SARS后开始在北京暴发流行.我科在2003年4月30日收治重庆市首例输入性SARS患者,现将该病的临床特点及诊治过程报道如下.     

SARS的呼吸支持治疗

对于SARS(急性呼吸综合征，即传染性非典型肺炎)，无论是流行病学还是病原学、临床病理、病理生理学我们均需进一步加以研究，目前已经知道的情况有：①世界卫生组织宣布SARS的病原体是一种新型冠状病毒，其多种亚型均有致病力；②传染源为SARS患者，传播方式主要为近距离飞沫传播和直接接触传播，很可能还有其他传播途径。     

对改装后的SARS隔离救护车空气消毒效果评价

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新近出现的呼吸道传染病，传播途径以近距离空气传播为主。在SARS流行初期，由于对疾病的认识不足，收治SARS的医院内医务人员感染率很高。到这些医院就诊的病人也受到感染，一些医院成为SARS扩散蔓延的源头，其中一种主要的传播方式，就是医院使用无隔离救护车运送SARS病人过程中，造成医护人员和司机感染。针     

传染性非典型肺炎患者泪液和血液中特异性抗体检测的对比研究

目的：通过传染性非典型肺炎(SARS)患者泪液病毒特异性抗体的检测，寻找SARS病毒是否通过泪液或眼结膜传播的理论依据，了解泪液和血液中SARS病毒特异性抗体检测结果的一致性程度。方法：用酶联免疫吸附法(ELISA)检测18例不同病程的SARS患者泪波及血清SARS病毒特异性抗体。结果：18例SARS患者泪液中的特异性IgM类和IgG类抗体均为阴性，而同组患者有13例其血液中的特异性IgM类和IgG类抗体呈阳性。结论：SARS病毒可能不通过泪液或结膜传播。     

SARS冠状病毒S蛋白S1区多肽与SARS病人血清的免疫反应

目的 测定根据计算机预测的SARS冠状病毒S蛋白S1区的抗原表位多肽与SARS病人血清的免疫反应,以寻找和确定SARS相关冠状病毒的中和抗原表位。方法 采用多肽合成仪合成SARS冠状病毒S蛋白S1区的多肽,并用ELISA方法检测合成的多肽与SARS病人血清的免疫反应。结果 合成的8个多肽与SARS病人血清免疫反应的光密度值是其与正常人血清免疫反应的光密度值的1.5～2.6倍。结论 合成的多肽与SARS病人血清的免疫反应较低,提示这些多肽是否为SARS冠状病毒的抗原表位还要进一步研究。     

Immunological reaction between the peptides from S1 domain of SARS coronavirus S-protein and the serum from SARS patients]

OBJECTIVE: To examine the immunological reactions between the peptides of SARS coronavirus (SARS-Cov) S-protein and the serum of SARS patients for identifying the SARS-Cov epitope. METHODS: The peptides from S1 domain of SARS-Cov S-protein were synthesized by peptide synthesizer, and the immunological reaction of the peptides with the serum of SARS patients were examined by means of ELISA. RESULTS: The optical density value of the immunological reaction of synthesized 8 peptides with SARS patient serum was 1.5-2.6 times higher than that with normal serum. CONCLUSION: The 8 peptides from S1 domain of S protein appear to have low immunogenicity to the serum of SARS patients, indicating that these peptides may not be the epitope of the SARS-Cov.     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的快速、高效制备的方法研究

OBJECTIVE: To develop a rapid and efficient method for preparing monoclonal antibodies (mAb) against SARS-associated coronavirus (SARS-Cov) nucleocapsid (N) protein. METHODS: BALB/c mice were injected with the recombinant N protein of SARS-Cov into the foot-pads for the immunization, and the popliteal lymph nodes were isolated 15 d later for mAb-producing hybridomas, from which the mAbs against the N protein of SARS-Cov were screened. The identification of the mAb against the N protein of SARS-Cov was performed using indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), indirect fluorescent-antibody assay (IFA), and Western immunoblotting. RESULTS: Four strains of hybridomas were obtained that produced the mAb specific to the N protein without detectable cross-reactivity with other pathogens. Of the 4 strains, 2 were identified as the immunoglobulin G1 (IgG1) isotype, 1 IgG2a, and the other IgG2b, with affinity constants (Ka) of 2 of the strains being 4.14 x 10(-9)M and 3.19 x 10(-9)M respectively. CONCLUSION: This is the first report on the preparation of mAb that is specific to the SARS-Cov, and the high-specificity and high-affinity mAb produced by the 4 strains of hybridomas provide a basis for further researches on the pathogenesis and early diagnosis of SARS.     

辣椒中常见产毒性真菌的裸磁珠-多重实时荧光定量PCR检测方法

目的将多重实时荧光定量PCR技术与裸磁珠富集技术联用,建立辣椒样品中常见3类（曲霉属、青霉属、镰刀菌属）产毒
性真菌的快速定量检测方法。方法根据真菌核糖体RNA（rDNA）基因序列选择真菌广谱引物及属特异性探针,联用裸磁珠富
集技术,建立多重实时荧光定量PCR体系,并评价所建方法的灵敏度、特异性、重复性和一致性。结果裸磁珠-多重实时荧光定
量PCR方法灵敏度高,与本研究优化后的普通实时荧光定量PCR相比提高了10倍,是原报道的100倍,直接检测辣椒样品中3
类产毒性真菌的检出限均可达103 CFU/ml,即104 CFU/g,且特异性良好（与非目标菌无交叉反应）、重复性良好（CV<1.5%）,该
方法模拟检测辣椒样品中3 类产毒性真菌的计数结果与标准培养法的计数结果相比均无统计学差异（P>0.05）,实验过程仅
需7 h（标准培养鉴定法耗时7~14 d）。结论构建的裸磁珠-多重实时荧光定量PCR方法能大大缩短产毒性真菌的检测时间,并
成功应用于模拟辣椒样品中常见3类产毒性真菌的定量检测,值得进一步研究和推广。
     

实时荧光定量PCR检测贝氏柯克斯体方法的建立

目的建立检测贝氏柯克斯体的Real-Time PCR方法。方法根据贝氏柯克斯体特有的htpAB基因相关重复序列（IS1111a）进行PCR扩增片断485bp,以克隆的IS1111a基因片断作标准DNA模板,建立Real-Time PCR检测方法。结果建立的Real-Time PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0.999）;重复性测试Ct变异系数CV≤6.1%;其灵敏性约为普通PCR的10倍;以其它相关立克次体和病原菌DNA为模板应用于该方法,结果均为阴性。结论所建立的Real-Time PCR方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性,可代替普通PCR用于贝氏柯克斯体的感染早期的快速定性、定量检测。     

一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA

目的 构建RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因mRNA表达的方法,准确定量检测白血病患者微小残留病,指导临床判断预后和早期预测复发.方法 从K562细胞提取的RNA用特异性引物扩增WT1基因,pMD18-T载体克隆法构建荧光定量PCR标准模板,建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测wTl基因方法,并对该方法的灵敏度、重复性和稳定性进行检测.结果 构建的RT-PCR一步法实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平:以拷贝数为1.0x106～1.0×102 cps/ml的标准品,分别进行RT-PCR一步法实时荧光定量PCR扩增后,标准品的Ct值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,r值达0.998:管间和批间的变异系数均小于8%.结论 所建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法的灵敏度、重复性和特异性好;RT和PCR反应过程一步完成,更简便快捷,减少加样和污染机会,更适合临床检测.     

鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立检测鸭疱疹病毒1型(鸭瘟病毒)的实时荧光定量PCR方法,为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列,设计引物和探针,采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR,用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照,构建标准曲线,对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价,同时与传统PCR方法进行比较研究。结果标准曲线表明在2.3×105~2.3×10拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为1.22~6.69以及2.09~8.84,说明有较好的重复性;对非鸭瘟病毒DNA无扩增,说明有很好的特异性;在对病毒DNA的检测方面,比传统PCR的敏感性高出104倍。结论成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。     

实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用

目的建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法。结果检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10fg和20CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%。20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符。70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出。结论建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌。     

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157：H7的rfbE保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，用FAM荧光剂标记探针的5’端，建立改良分子信标实时PCR检测O157：H7的反应体系，应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌。只有大肠杆菌O157：H7有荧光信号，其余10种全无荧光信号，且与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为64fg，菌液灵敏度为59cfu／ml或2cfu／PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157：H7均出现特异的荧光信号，无干扰。对89份食品样品进行检测，5份O157：H7实时PCR阳性，其余样品为阴性，检测仅需2h。5份阳性样本，经传统方法培养，有3份检出大肠杆菌O157：H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

呼吸道合胞病毒实时荧光定量PCR检测

OBJECTIVE: To Establish a rapid and objective quantitative fluorogenic real-time PCR assay for early detection of human respiratory syncytial virus (hRSV). METHODS: Two pairs of primers and one TaqMan Fluorogenic probe that are specific for the recognition of the most conservative N gene of hRSV for virus detection with LighCycler PCR in 93 nasopharyngeal secretion specimens collected from infants and young children. The assay was compared with virus isolation, routine PCR, nested PCR, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: This TaqMan assay had a sensitivity of 1 x 10(2) cDNA copies/microl with a dynamic range between 1 x 10(2) and 1 x 10(7) cDNA copies/microl, which was the same as that of nested PCR, but 10 times more sensitive than routine PCR. The specificity of the assay was evaluated by comparing hRSV with polivirus type 1, coxsackie virus type 2, influenza A, influenza B and adenovirus type 7. A PCR product of the expected size (195 bp) was produced and fluorescence signal detected for hRSV, but not for any of the other viruses. The results in LightCycler and Rotor-Gene instrument were consistent. Forty-four specimens (43.9%) were hRSV-positive with this assay and 4 (4/93,4.3%) were hRSV-positive with ELISA, showing rather low correlation between the two methods. No visible relation was found between the concentration of hRSV RNA and severity of the disease. CONCLUSION: This assay is rapid, sensitive, specific and quantitative, and has the potential of wide application for early diagnosis of hRSV infection and evaluation of the therapeutic effect.