p53基因的原核表达与活性测定

目的 原核表达P53重组蛋白,检测P53蛋白对人类白血病细胞系K562增生的影响.方法 运用PCR技术鉴定了pET-p53重组质粒导人BL21菌株中p53基因的存在,并在IPTG的诱导下,大量产生外源基因产物.通过Ni-NAT亲和层析柱纯化分离P53蛋白,SDS-PAGE确定该蛋白准确性.以不同浓度的P53重组蛋白诱导K562细胞后,用MTT比色法、集落形成法、流式细胞术(FCM)测定P53蛋白对靶细胞增生的影响.结果 成功地构建了含人野生型p53基因的原核表达载体,纯化了P53重组蛋白.活性测定结果表明,随着P53重组蛋白浓度的增加,K562细胞存活率显著降低,并发现该蛋白能促进肿瘤细胞凋亡,且呈现明显的剂量依赖性,经相关分析,细胞抑制率与P53蛋白浓度呈正相关(r=0.8981),其半数抑制浓度(IC50)为6.74μg/ml.结论 P53重组蛋白具有促进K562细胞凋亡的作用.     

子宫内膜癌中细胞凋亡和p53基因的表达

目的 探讨细胞凋亡在子宫内膜癌发生发展中的作用。细胞凋亡与抑癌基因p53表达产物的关系。以及p53蛋白表达与预后相关性。方法 应用免疫组织化学方法和TUNEL技术，对子宫内膜腺癌癌变过程中各种病变组织中p53蛋白和细胞凋亡进行测定。结果 正常增生期子宫内膜有偶发凋亡，早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的细胞凋亡率分别为1.82%和3.86%，p53蛋白在正常增生期子宫内膜，早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的表达率分别为8.31%,38.9%和57.1%。p53蛋白阴性组细胞凋亡率明显高于p53蛋白阳性组。结论 细胞凋亡参与子宫内膜癌的发生发展，子宫内膜癌细胞凋亡受p53基因调控，p53蛋白可能成为评判预后的指标。     

肝癌细胞转染野生型p53基因稳定表达后肝癌细胞出现自发凋亡

肝癌细胞转染野生型ｐ５３基因稳定表达后肝癌细胞出现自发凋亡＊张晓东１王文亮１穆峰２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２第四军医大学唐都医院胸外科）关键词肝肿瘤细胞凋亡ｐ５３基因转染中图号Ｒ７３－３１目的进一步探讨ｐ５３基因与细胞凋亡（ａｐｏ...     

膀胱癌中p53诱导基因3的表达及意义

 目的探讨膀胱癌组织中p53 诱导基因3（PIG3）的表达在膀胱癌发生发展中的作用。方法应用免疫印迹（Westernblot）法,对40 例膀胱尿路上皮癌组织标本中PIG3 的表达进行检测。其中男27 例,女13 例,年龄42~87 岁,平均年龄59 岁。临床分期T118例,T213 例,T39例。复发性膀胱癌7 例。15 例非肿瘤膀胱组织作对照。结果15 例非肿瘤膀胱组织PIG3 蛋白表达积分吸光度值141.8±11.9;T1与T2垣T3期膀胱癌组织中PIG3 蛋白表达积分吸光度值分别为75.4±12.5,32.1±5.4,组间比较差异有统计学意义（ P< 0.05）。复发性膀胱癌PIG3蛋白表达积分吸光度值为42.7±6.2。结论PIG3 与膀胱癌发生发展有关,检测膀胱癌组织中PIG3 蛋白表达可以作为评估膀胱癌进展程度的一种指标。     

p53在异丙肾上腺素所致心肌纤维化大鼠心肌组织中的表达及意义

目的：探讨p53在异丙肾上腺素（Iso）所致心肌纤维化大鼠心肌组织中的表达及意义,阐明其在心肌纤维化中的作用。方法：25只大鼠随机分为5组,正常对照组及注射Iso后12 h、24 h、1周和3周组。除正常对照组外,其他各组皮下多点注射Iso（15 mg·kg^-1）复制大鼠心肌损伤模型。采用免疫组织化学染色及RT-PCR分别检测心肌p53蛋白及基因表达。结果：免疫组织化学染色显示,注射Iso后12和24 h心肌P53蛋白表达水平明显高于正常对照组（P<0.05）,注射1和3周后p53蛋白表达增加更明显（P<0.01）。RT-PCR结果显示,与正常对照组比较,注射Iso后12 h心肌组织中p53 mRNA表达明显增高（P<0.05）,注射Iso后24 h p53 mRNA表达水平达到最高（P<0.01）,而注射Iso后1周心肌p53 mRNA表达较注射后24 h有所下降,但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论：P53蛋白在大鼠损伤心肌中呈持续高表达,p53基因表达上调,提示p53在心肌纤维化形成过程中起一定作用。     

大鼠胃癌相关基因p53和p21表达的研究

目的 研究中重度异型增生与胃癌发生的关系。方法 用免疫组化ＡＢＣ法对相关癌基因ｐ５３和ｐ２１在鼠胃癌发生过程中的表达进行研究。结果 中、重度异型增生及胃癌中ｐ５３表达明显高于正常对照组及轻度异型增生，Ｐ２１也趋于同样的结果。结论 证实中重度异增生与胃癌关系，它可作为胃癌的危险信号，为临床判断胃粘膜上皮异型产生的癌变趋向提供同依据。     

p53基因与糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡相关性研究

目的：研究糖尿病肾病（Diabetes nephropathy,DN）大鼠p53基因与肾组织细胞凋亡的关系。方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组。采用RT-PCR检测肾组织p53基因mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：DN模型组大鼠肾脏p53基因表达明显上调,且肾组织凋亡细胞明显增加。结论：DN模型组大鼠肾组织细胞凋亡增加,与p53基因mRNA呈正相关。     

抑癌基因p16和p53在磅胱癌中的表达及意义

目的;研究膀胱癌中抑癌基因P16和P53的表达与其与临床病理特征及预后的关系。方法：应用免疫组织化学ABC法和微波炉抗原修复法对69例膀胱移行细胞癌标本中抑癌基因P16和突变型P53蛋白产物进行检测。结果：69例膀胱癌标本中37例P16检测阳性（53．62％）,30例P53检测阳性（43．48％）,P16了性率在I,II和III级肿瘤中分别为69．57％,56．25％和21．43％,在Tis-T1期和T2－T4期肿瘤中分别为70．59％和37．14％。P53阳性率在I,II和III级肿瘤中分别为26．09％,46．88％和64．29％,在Tis-T1期和T2－T4期肿瘤中分别为29．41％和57．14％,随着膀胱癌病理分级,临床分期的上升,P16表达阳性率逐渐下降,P53阳性率逐渐上升,P16阴性或P53阳性患者的肿瘤复发率和病死率分别高于P16阳性或P‘53阴性患者,结论：P16和P53的表达状况与膀胱癌生物学行为密切相关,P16和P53的免疫组化检测人有评估膀胱癌预后的价值,可作为膀胱癌的生物学瘤标。     

bcl-2与p53基因在口腔白斑及口腔鳞癌中表达的意义

目的:研究p53和bcl-2的基因产物在正常口腔粘膜(NOM)、口腔粘膜白斑(OLK)及口腔鳞癌(OSCC)中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学S-P法,对NOM(10例)、OLK(17例)、OSCC(32例)中p53和bcl-2的表达情况进行测定.结果:p53在正常NOM中无表达,在OLK中有中度表达(阳性率29.4%),在OSCC中有较强的表达(阳性率56.25%);bcl-2在NOM中无表达,在OLK中有较强的表达(阳性率23.53%),而在OSCC中的表达(阳性率21.88%)与OLK中的表达比较差异无显著性.结论:① p53的突变和bcl-2的过度表达,通过抑制细胞凋亡促进了OLK和OSCC的形成;②在OLK的形成过程中,突变型p53和bcl-2的基因产物表达呈正相关,而在OSCC的形成过程中,二者的基因产物无明显相关性;③ bcl-2在OLK和OSCC的形成过程中,并非单纯通过抑制细胞凋亡这一机制而起作用;④突变型p53的表达可作为OLK及OSCC的基因标志物.     

子宫内膜癌中细胞凋亡和p53基因的表达

目的 探讨细胞凋亡在子宫内膜癌发生发展中的作用，细胞凋亡与抑癌基因p53表达产物的关系，以及p53蛋白表达与预后相关性。方法 应用免疫组织化学方法和TUNEL技术，对子宫内膜腺癌癌变过程中各种病变组织中p53蛋白和细胞凋亡进行测定。结果 正常增生期子宫内膜有偶发凋亡，早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的细胞凋亡率分别为1．82％和3．86%。p53蛋白在正常增生期子宫内膜、早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的表达率分别为8．31％、38．9％和57．1％。p53蛋白阴性组细胞凋亡率明显高于r63蛋白阳性组。结论 细胞凋亡参与子宫内膜癌的发生发展，子宫内膜癌细胞凋亡受p53基因调控，p53蛋白可能成为评判预后的指标。     

大鼠单侧睾丸扭转/复位后对双侧睾丸生殖细胞凋亡及MDA水平的影响

目的探讨大鼠单侧睾丸不同时间扭转、复位对双侧睾丸生殖细胞的影响以及可能机制。方法选用健康雄性SD大鼠35只,随机分成假手术组、单纯扭转组及扭转复位组。单纯扭转组采用Turner方法建立左侧睾丸扭转模型(左侧睾丸逆时针扭转720°),分别在扭转持续2、61、2h后即处死;扭转复位组在左侧睾丸扭转后26、1、2h再复位,复位后24h处死。留取双侧睾丸标本进行HE染色观察、生殖细胞凋亡检测及丙二醛(MDA)含量测定。结果睾丸扭转2h,单纯扭转及扭转复位后与假手术组比较扭转侧生殖细胞凋亡增加(P<0.05),而对侧生殖细胞凋亡增加差异无统计学意义(P>0.05);双侧MDA含量均增加(P<0.05)。随着扭转时间的延长,单纯扭转及扭转复位后细胞凋亡和MDA含量均明显增加(P<0.05)。结论随着扭转时间的延长,扭转复位后睾丸的损伤加重,其中缺血-再灌注的氧自由基损伤是造成睾丸损伤的可能机制之一。     

P53、Caspase-3和PCNA蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的 研究P53、Caspase-3和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在肝细胞癌中的表达和意义.方法 采用免疫组织化学S-P法检测P53、Caspase-3和PCNA蛋白在69例肝细胞癌(HCC)及癌旁组织中的表达.结果 (1)P53和PCNA蛋白在肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为56.52%、20.29%,在癌旁组织中的阳性表达率均为1.45%,肝细胞癌组织中P53和PCNA蛋白的阳性表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);(2)Caspase-3蛋白在肝细胞癌及癌旁组织中均有表达,差异有统计学意义(P<0.05);(3)P53蛋白的表达与肝细胞癌的分化程度呈负相关(r-s=-0.239, P<0.05),肝细胞癌的分化程度越低,P53蛋白的阳性表达率及表达强度越高.结论 P53和PCNA蛋白的过度表达及Caspase-3蛋白的低表达可能在肝细胞癌的发生和发展中起重要作用.     

骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注凋亡蛋白Caspase-3的影响

目的 研究静脉移植骨髓间充质干细胞 (MSCs) 对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能及凋亡相关蛋白caspase-3的影响.方法体外培养及扩增 MSCs 后,用绿色荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 (CFSE) 标记,通过静脉途径移植给大脑中动脉缺血 2 h 再灌注的SD 大鼠,按不同时间点取材,荧光显微镜观察BMSCs在脑内的分布,免疫组织化学染色及RT-PCR检测大鼠脑内caspase-3蛋白表达情况.结果移植组在移植后第6天神经功能明显好于对照组 (P<0.05).移植组移植后3、 12、24、48、72 h caspase 3 免疫组化阳性目标面密度分别为 (1.34±0.31)%、(3.98±0.67)%、(5.58±0.92)%、(4.65±0.69)%、(3.51±0.63)%,对照组分别为 (2.09±0.19)%、(5.23±0.30)%、(6.89±0.57)%、(5.93±0.56)%、(4.39±0.57)%,移植组和对照组比较均 (P< 0.05).6 h 及 7 d 移植组 caspase 3 阳性目标面密度分别为 (2.81±0.35)%、(1.64±0.29)%,与对照组 (3.92±0.44)%,(2.29±0.21)% 比较差异显著 (P< 0.01).移植组相应时间点caspase-3的表达明显低于对照组 (P<0.05, P<0.01);移植组大鼠缺血侧皮层的caspase-3 mRNA相对量明显低于对照组 (P<0.01).结论经静脉注射骨髓间充质干细胞可明显改善神经功能.其可能通过下调caspase-3表达方式对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

P53、Caspase-3和凋亡调节蛋白FasL在乳腺癌的表达及其意义

目的:通过在人乳腺癌组织和癌旁(相对正常)乳腺组织中观察p53、Caspase-3和FasL凋亡调节蛋白的表达,探讨p53、Caspase-3及FasL在乳腺癌疾病发生、发展过程中的作用及关系,为提高生物治疗乳腺癌疾病提供一定的实验依据。方法:运用免疫组织化学方法检测21例收集于手术切除患者的乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织中的p53、Caspase-3及FasL。结果:P53蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为61.9%明显高于癌旁组织(相对正常)乳腺组织的0%;而Caspase-3蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.0%明显低于癌旁乳腺组织的80.9%;FasL蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为57.1%明显高于癌旁乳腺组织的19.0%。结论:在乳腺癌发生、发展过程中p53、Caspase-3和FasL蛋白发挥着既独立又协同的作用。     

地塞米松对大鼠睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡和相关因素的影响

目的　探讨地塞米松对睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡和相关因素的影响。方法　 16只成年健康SD雄性大鼠随机分为睾丸扭转复位加地塞米松 (实验 )组和睾丸扭转复位加生理盐水 (对照 )组 ,每组 8只。建立单侧睾丸扭转复位模型。术后 2 4h取手术侧睾丸 ,原位缺口末端标记法 (TUNEL)检测生殖细胞凋亡 ,化学比色法测定睾丸组织的超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)、髓过氧化物酶 (MPO)活性和丙二醛 (MDA)含量。结果　与对照组相比 ,实验组生殖细胞凋亡明显减少 (P <0 .0 1) ,MDA含量和MPO活性显著降低 (P <0 .0 1) ,SOD和CAT的活性显著升高 (P<0 .0 1)。结论　地塞米松可减少睾丸扭转复位后的生殖细胞凋亡 ,对睾丸有保护作用。     

瑞芬太尼对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮质bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的 研究瑞芬太尼对大鼠脑缺血再灌注损伤后bcl-2和Caspase-3表达的影响,探讨瑞芬太尼对脑缺血再灌注损伤的作用.方法 以线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞的脑缺血再灌注模型,采用免疫组化、Real-time PCR法和神经行为检测相结合的.方法,观察缺血再灌注侧大脑皮质内bcl-2和Caspase-3的表达及神经功能的变化.结果 与缺血再灌注组比较,瑞芬太尼组的bcl-2 mRNA实时表达明显增高(P＜0.05),Caspase-3 mRNA实时表达明显降低(P＜0.05),神经异常行为明显减轻.结论瑞芬太尼可上调大鼠脑缺血再灌注损伤后bcl-2的表达,下调Caspase-3表达,明显改善神经症状,对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用.     

Survivin与Caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达及化疗对其的影响

目的：研究Survivin和Caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达和相互关系,以及化疗对其表达的影响。方法：运用免疫组织化学（S-P法）方法,检测Survivin和Caspase-3在99例卵巢组织中的表达。结果：Survivin在未化疗的上皮性卵巢癌中的表达率显著高于正常卵巢、良性囊腺瘤、交界性囊腺瘤（P均〈0．05）;而Caspase-3则相反（P均〈0．05）;Survivin与病理分级和临床分期均有关（P均〈0．05）;Caspase-3与临床分期有关（P〈0．05）;Survivin和Caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达无相关性。结论：Survivin的表达与Caspase-3的缺表达可能参与了卵巢癌的发生发展过程,与卵巢癌的预后和耐药机制有关;Survivin有望成为卵巢癌早期诊断的筛查性标记物;针对Survivin和Caspase-3的靶向治疗有可能提高化疗效果和减少耐药。     

Caspase-3与Caspase-6蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨Caspase-3、Caspase-6蛋白在肾透明细胞癌（RCCC）的表达及与预后的关系。方法采用免疫组化（SP法）对75例RCCC及其癌旁组织、15例正常肾组织标本中的Caspase-3、Caspase-6蛋白的表达进行研究，分析与RCCC临床病理特征及其术后生存率的关系。结果Caspase-3蛋白在RCCC中阳性表达率低于癌旁对照组，差异有显著性（P〈0．01）；在病理分级中的阳性表达率G3低于G1；在临床分期中的阳性表达率Ⅲ～Ⅳ期低于Ⅰ期；在淋巴结转移阳性组中阳性表达率低于阴性组，差异均有显著性（P〈0．05）。Caspase-6蛋白在RCCC中阳性表达率低于癌旁对照组，差异有显著性（P〈0．05）；在不同病理分级和临床分期中阳性表达率差异均无显著性（P〉0．05）；在淋巴结转移阳性、阴性组中的阳性表达率差异无显著性（P〉0．05）。在RCCC中，统计学显示Caspase-3与Caspase-6蛋白表达无相关性（C=0．0921，P〉0．05）。在35例随访患者中，Caspase-3、Caspase-6蛋白表达阳性、阴性的术后3年死亡率差异均无显著性（P〉0．05）。结论Caspase-3蛋白在RCCC中的阳性表达率低于癌旁和正常肾组织，与临床分期、病理分级呈负相关，其低表达与淋巴转移有关。Caspase-6蛋白在RCCC中的阳性表达率低于癌旁和正常肾组织，但与临床分期、病理分级及淋巴转移无关。在RCCC中，Caspase-3蛋白的表达与Caspase-6蛋白的表达无相关性。     

Caspase-3蛋白在喉癌中的表达及其临床意义

目的研究喉癌中Caspase-3的表达与相关病理生物学行为及其对临床预后的影响。方法应用免疫组化法检测68例原发喉癌组织中Caspase-3基因蛋白的表达情况。结果68例喉癌中Caspase-3呈阳性反应34例,占50.0%。其中,48例声门上型喉癌中呈现Caspase-3阳性反应占45.83%(22/48),20例声门型喉癌占60.0%(12/20);Caspase-3的阳性表达与喉癌颈淋巴结转移呈负相关。结论Caspase-3在喉癌中低表达,其原位检测对喉癌淋巴结转移和预后估计具有参考价值。     

神经细胞凋亡和Caspase-3表达与脑损伤时间的关系

目的观察脑挫伤后神经细胞凋亡和调节因子Caspase-3表达的时序变化,探索损伤时间推断的新方法。方法采用TUNEL和免疫组化染色方法,结合图像分析技术对不同损伤时间组的脑挫伤组织进行染色观察和分析。结果①TUNEL和Caspase-3免疫组化染色的阳性细胞分布在挫伤灶中央及其周围的半影区,与远隔部位和对照组脑组织呈阴性染色形成明显对比;半影区比中央区更显著,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。②脑挫伤后随着损伤时间的延长,半影区TUNEL染色和Caspase-3表达逐渐增强,呈平行关系;48h内两种染色方法的平均积分光密度（IOD）增加与损伤时间呈线性关系（r分别为0．93和0．69）。结论观察脑挫伤后神经细胞凋亡和Caspase-3的表达随损伤时间逐渐增强的变化规律,可以作为损伤时间推断的新方法。