去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系SHG—44生长和分化的…

目的 探讨去甲二氢愈创木酸对胶质瘤生长和分化的作用及可能机理。结论 ＮＤＧＡ对恶性胶质瘤细胞具有抑制生长和诱导分化作用，对血管生成因子表达亦有抑制作用。     

去甲二氢愈创木酸抗血管生成的鸡胚绒毛尿囊膜实验观察

本室在研究去甲二氢愈创木酸 (ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃａｃｉｄ ,ＮＤＧＡ )抗胶质瘤的过程中发现ＮＤＧＡ亦能减低移植瘤和实验性胶质瘤的微血管密度[1] ,进一步的研究还显示ＮＤＧＡ在体外能有效抑制内皮细胞增殖以及胶质瘤诱导的迁移、成型等抗血管生成作用。本研究采用鸡胚绒毛尿囊膜 (ｃｈｏｒｉｏａｌ ｌａｎｔｏｉｃｍｅｍｂｒａｎｅ ,ＣＡＭ)试验法 ,研究ＮＤＧＡ对在体血管生成的影响 ,以验证其抗血管生成效果 ,为阐明ＮＤＧＡ抗肿瘤机制以及临床应用提供依据。一、材料与方法1 测试物载体的制备 :参照姜志钢 ,…     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44生长和分化的影响

目的探讨去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤生长和分化的作用及可能机理。方法分别将ＮＤＧＡ加入培养基中和进行单细胞胞浆内显微注射ＮＤＧＡ，观察它对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞生长、形态、细胞周期和免疫组化特性的影响。结果经ＮＤＧＡ处理的瘤细胞贴壁率和生长速率受抑制，增殖活性降低，细胞周期也有明显改变；细胞异型性变小，胞浆中胶质细丝增多，且其中ＧＦＡＰ标记增加而ｖｉｍｅｎｔｉｎ标记减少；ｐ５３蛋白和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）表达也降低。单细胞胞浆内注射ＮＤＧＡ（约１．５×１０－１１ｇ／细胞）后上述作用更显著，且作用迅速而持久。结论ＮＤＧＡ对恶性胶质瘤细胞具有抑制生长和诱导分化作用；对血管生成因子表达亦有抑制作用。     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响。方法 采用微孔滤膜培养小室及室细胞联合培养法,进行人脐静脉内皮细胞系ＥＣＶ－３０４细胞与人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞的联合培养,并以免疫组化ＳＰ方法检测ＳＨＧ－４４细胞血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１～３ｄ后,ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂ     

诺帝对恶性胶质瘤细胞株U87MG生物学行为的影响及差异表达蛋白质组分析

目的观察诺帝对人恶性胶质母细胞瘤细胞株U87MG及其移植瘤生物学行为的影响,分析和鉴定诺帝诱导U87MG细胞分化时高表达的差异蛋白质。方法采用自行研制的化合物诺帝（纯度为99．87％）诱导U87MG细胞分化,再用U87MG细胞原位移植瘤模型裸鼠腹腔注射诺帝,观察肿瘤生长情况和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达改变。应用蛋白质双向电泳和PDQuest7．1软件对比分析诺帝诱导分化前后表达的差异蛋白质,采用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱进行鉴定并分析其功能。结果诺帝能显著抑制U87MG细胞体外增殖和原位移植瘤的生长（P〈0．01）并诱导其分化,U87MG细胞体外分化后高表达的差异蛋白质包括增殖相关基因A、交替拼接因子3、真核转录启动因子5A、丝切蛋白1、13半乳糖苷酶结合凝集素、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、α烯醇化酶和一种未知蛋白。结论诺帝对人胶质母细胞瘤细胞株U87MG具有诱导分化的作用,其过程涉及多种蛋白质的表达改变,其中大部分蛋白质表达下调,这些蛋白质参与细胞增殖、代谢、分化、凋亡及基因转录的调控。     

SHG－44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡ注射ＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。     

细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白质依赖激激酶4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

近年来发现去甲二氢愈创木酸 (ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃａｃｉｄ ,ＮＤＧＡ)能阻止多种肿瘤的发生和抑制其细胞的增殖[1 3 ] ,但机制不清。我们检测了ＮＤＧＡ对ＳＨＧ 4 4细胞细胞周期蛋白Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)基因的蛋白表达及细胞周期蛋白质依赖激酶 4(ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ 4 ,ＣＤＫ4 )活性的影响 ,旨在探讨ＮＤＧＡ抑制ＳＨＧ 4 4细胞增殖的分子机制。一、材料和方法1.细胞培养 :人脑恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ 4 4 (第 110代 )引自苏州医学院附属第二医院脑肿瘤研究室。按我室常规进行培养。2 …     

SHG—44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察云甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡＩＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。     

血管内皮生长因子诱导的胶质瘤源性微血管内皮细胞体外三维成型特性

目的比较人脑胶质瘤源性微血管内皮细胞（GDMEC）和内皮细胞样细胞ECV304三维培养血管生成特性,探讨GDMEC在血管生成研究中的意义。方法采用免疫磁珠分选系统获得纯化的人脑GDMEC,以胶原为介质建立内皮细胞三维培养模型,比较观察GDMEC与ECV304细胞三维培养小管样结构（TLS）形成及不同浓度血管内皮生长因子（VEGF）对两种细胞TLS形成的诱导作用。结果所获GDMEC细胞纯度达98％,可连续传代培养。GDMEC的TLS形成数显著多于同数量、同时相点ECV304细胞的TLS形成数量。VEGF在体外对GDMEC有显著的促进TLS形成作用,且呈量-效和时-效关系;VEGF对ECV304细胞形成小管样结构的诱导作用弱。结论GDMEC在体外保持了内皮细胞特征和活跃的血管生成特性,对VEGF的反应性较ECV304好,因而GDMEC更适合体外血管生成研究。     

二甲双胍对脂多糖诱发的血管内皮细胞炎性损伤的影响

目的探讨二甲双胍(Metformin, Met)对脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱发的人主动脉内皮细胞HAEC炎性损伤的影响及作用。方法体外培养人主动脉内皮细胞株HAEC,随机分为4组:正常对照组,LPS组(1μg/mL LPS),2.5mmol/L Met预处理+LPS组,5 mmol/L Met预处理+LPS组。MTT法检测细胞生存活性;Western Blot检测细胞内cleaved-caspase-3的表达;ELISA法检测细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。实时PCR检测IL-1βmRNA、IL-6mRNA、TNF-αmRNA表达。结果与正常对照组相比,LPS组细胞生存率明显降低,细胞内的cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高。2.5mmol/L Met、5mmol/L Met预处理12h后,能显著减轻LPS诱发HAEC细胞炎性损伤,并存在剂量依赖性。而且细胞内的IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA表达明显低于LPS组。结论二甲双胍拮抗LPS诱发的HAEC细胞炎性损伤,与降低细胞内IL-1βmkHA、IL-6mkHA、TNF-αmRNA的表达,从而抑制炎症因子的释放相关。     

穿心莲黄酮对内皮细胞分泌功能作用的研究

本实验通过内皮细胞培养，研究；穿心莲黄酮对内皮细胞分泌功能的作用，结果表明：１．终浓度为６６０μｇ／ｍｌ的黄酮可ＡＣＥ，ＥＴ的生成，生成量与黄酮剂量有一定相关关系；黄酮可增加ｔＰＡ的生成，对ＰＡＩ，ＰＧＩ２则无明显作用。２．低浓度的黄酮对ＰＧＩ２，ＡＣＥ，ＥＴ，ｔＰＡ，ＰＡＩ均无明显作用。提示穿心黄酮具有一定的舒张血管，促进纤溶等作用，其机制为保护内皮细胞并影响ＡＣＥ，ＥＴ，ｔＰＡ的生成有关。     

P物质对人脐静脉张力及内皮细胞Ca2+的调控及其机制

目的：观察P物质（SP）对人脐静脉张力的调节及其对体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）膜上Ca^2 通道及胞浆内游离Ca^2 浓度[(Ca^2 )i]的调控作用。方法：应用常规生理记录仪，记录SP对人脐静脉张力的影响，用共聚焦激光扫描显微术和膜片钳单通道记录技术对体外培养HUVEC胞浆内（Ca^2 )i、膜上Ca^2 通道开放情况进行观察。结果：SP具有内皮依赖性舒张人脐静脉的作用，促使体外培养HUVEC胞膜上Ca^2 通道开放和胞浆内（Ca^2 ）i明显升高。结论：SP对人脐静脉张力的舒张作用可能通过HUVEC胞浆内储存的（Ca^2 ）i释放和膜上Ca^2 通道开放，达到其调节效应。     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞PDGF-B mRNA表达的影响

目的：探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞（VSMCs）对内皮细胞（ECs)PDGF-BmRNA表达的影响，为预防血管移植物发生再狭窄提供实验资料。方法：用原位杂交和图像分析等技术，以静态条件下单独培养的ECs和联合培养的ECs为两对照组，观察切应力作用下单独培养的ECs和与VSMCs联合培养ECs的PDGF－BmRNA表达变化。结果：静态条件下联合培养ECs和PDGF－BmRNA表达水平比单独培养的ECs下降；切应力作用下，联合培养ECs的PDGF－BmRNA的表达在切应力作用1h左右有瞬时上升，6h后 下降至低于联合培养条件下的静态水平，且瞬时上升的时间点比单独培养的ECs提前。结论：切应力作用下，与VSMCs联合培养ECs的PDGF－BmRNA表达水平下降，这可能有利于抑制VSMCs的增生。     

三七总皂甙对红系祖细胞增殖调控机理的研究

采用造血祖细胞体外培养和造血生长因子检测等实验血液学技术，研究三七总皂甙对小鼠红系祖细胞调控的生物学机理。结果表明：三七总皂甙对正常或骨髓抑制一贫血模型小鼠的红系祖细胞增殖有明显促进作用。三七总皂甙亦可提高阿糖胞苷所致祖细胞的“自杀”率；经三七总皂甙诱导制备的脾细胞，Ｌ细胞培养上清液和红系祖细胞的直殖具有较高刺激活性。     

锂增强小鼠LAK细胞活性及其体内抗瘤作用的研究

本文观察了锂体外对小鼠ＬＡＫ细胞的作用及其体内抗瘤作用，以期找到一种能增强ＬＡＫ细胞活性，降低ＩＬ－２毒副作用的免疫调变剂。在ＩＬ－２诱导ＬＡＫ的同时加入ＬｉＣｌ，则能增强ＬＡＫ细胞的活性。以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接种Ｂ１６黑色素瘤细胞为荷瘤小鼠模型，比较了ＩＬ－２／ＬＡＫ，单独锂及ＩＬ－２／ＬＡＫ合并锂三组的抗瘤作用，结果表明，单独锂及ＩＬ－２／ＬＡＫ组与对照组相比均有抗瘤作用，但ＩＬ－２／ＬＡＫ和锂一起作用，其抗瘤作用最强，表现为能抑制肿瘤的生长及延长荷瘤小鼠的存活时间。因此，锂可望作为一种新型的免疫调节剂用于免疫性疾病及肿瘤的治疗。     

硒对LAK细胞活性的影响及其机理研究

研究了硒在体外对LAK细胞活性的影响及作用机理,结果证明在LAK细胞的诱导阶段加入10~5～10mol/L亚硒酸纳能增强LAK细胞的杀伤和增殖活性。采用流式细胞仪测Tac(IL—2Rα)表达,Slot-Blot检测硒对LAK细胞的IL—2RαmRNA水平的影响,结果表明硒能增强LAK细胞的Tac抗原表达和IL-2RαmRNA的水平,提示硒可能通过促进Tac的表达增强了LAK细胞对IL—2的敏感性,从而提高了LAK细胞的增殖及杀伤活性。因此硒可望作为一种新型的免疫调节剂用于抗肿瘤治疗。     

大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素及其受体cDNA的克隆和序列测定

目的 研究促甲状腺激素释放激素（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＴＲＨ）及其受体（ＴＲＨ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＲＨ－Ｒ）在大鼠丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用。方法 以大鼠丸组织总ＲＮＡ为模板,依据大鼠下丘脑中的前ＴＲＨ和垂体中的ＴＲＨ－Ｒ ｃＤＮＡ设计引物,进行反转录聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉ     

A20基因在血管内皮细胞的表达研究

目的：探讨外源性A20基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性。方法：将N－末端标记E－tag的HA20 cDNA重组于pCAGGS真核表达载体，构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体，构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体。DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA20和pMAMneo基因转染，经G418筛选阳性克隆，再用免疫荧光及分子原位杂交检测A20基因的表达。结果：成功构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体，A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到有效表达。结论：在DOTAP脂质体介导下，A20基因能够导入内皮细胞并在其内获得表达。     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞F-肌动蛋白构筑的影响

目的　探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞抗应力和粘附能力的影响 ,为改进血管内皮细胞种植的组织工程学技术提供生物力学基础。　方法　应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术 ,以静态条件下单独培养的内皮细胞、联合培养的内皮细胞以及切应力作用下单独培养的内皮细胞为对照组 ,研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞骨架F 肌动蛋白构筑的变化。　结果　静态条件下单独培养的内皮细胞的F 肌动蛋白排列松散 ,不规则 ,微丝较细 ;联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白微丝明显增多增粗。切应力作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白发生重排 ,并形成大量沿切应力方向排列的应力纤维 ,且发生重排的时间明显早于单独培养的内皮细胞。　结论　在切应力作用和血管平滑肌细胞的影响下 ,内皮细胞F 肌动蛋白构筑的变化有利于增强内皮细胞的抗应力和粘附能力