两种荧光原位杂交试剂盒检测乳腺癌HER2基因状态的比较

目的：应用两种荧光原位杂交（FISH）试剂盒检测乳腺癌组织HER2基因状态,旨在比较两者在信号的强度和染色结果上的差异。方法：采用美国PathVysis和北京金普嘉公司生产的FISHHER2检测试剂盒检测10例免疫组化（IHC）HER2蛋白2＋以上HER2的基因状态。结果：PathVysis公司试剂盒在荧光显微镜下观察：细胞核红绿信号清晰,可以采集比较好的图片,容易进行细胞计数;北京金普嘉公司试剂盒在荧光显微镜下观察：细胞核红色信号清晰,绿色信号不明显。结论：PathVysis公司试剂盒HER2和17号染色体信号强,稳定性好,重复性强;北京金普嘉公司试剂盒,简单快速,成本低,对HER2基因不扩增或高度扩增的病例不影响结果判读;当HER2基因与17号染色体比值为临界值时（1.8-2.2）或17号染色体为多倍体的病例,应采用PathVysis公司试剂盒。     

两种荧光原位杂交试剂盒检测乳腺癌HER2基因状态的比较

目的:应用两种荧光原位杂交(FISH)试剂盒检测乳腺癌组织HER2基因状态,旨在比较两者在信号的强度和染色结果上的差异.方法: 采用美国PathVysis和北京金普嘉公司生产的FISH HER2检测试剂盒检测10例免疫组化(IHC)HER2蛋白2+以上HER2的基因状态.结果: PathVysis公司试剂盒在荧光显微镜下观察:细胞核红绿信号清晰,可以采集比较好的图片,容易进行细胞计数;北京金普嘉公司试剂盒在荧光显微镜下观察:细胞核红色信号清晰,绿色信号不明显.结论: PathVysis公司试剂盒HER2和17号染色体信号强,稳定性好,重复性强;北京金普嘉公司试剂盒,简单快速,成本低,对HER2基因不扩增或高度扩增的病例不影响结果判读;当HER2基因与17号染色体比值为临界值时(1.8-2.2)或17号染色体为多倍体的病例,应采用PathVysis公司试剂盒.     

IHC与FISH检测浸润性乳腺癌患者HER2蛋白表达和基因扩增的差异性分析

目的:探讨并比较免疫组织化学法（IHC）与荧光原位杂交法（FISH）检测浸润性乳腺癌人表皮生长因子受体-2（HER2）蛋白表达和基因扩增的差异性。方法:采用IHC法和FISH法分别检测桂西地区120例乳腺癌患者石蜡标本中HER2蛋白表达与基因扩增情况,比较IHC与FISH检测结果一致性并进行结果相关性分析。对检测不一致的病例重新检测及判读,分析差异原因。结果:120例乳腺癌患者中IHC 33例阳性（3+）中FISH检测阳性33例,阳性符合率100%;IHC 61例不确定（2+）中FISH检测阳性24例,阳性符合率39.34%;IHC 26例阴性（0/1+）中FISH检测阴性21例,阴性符合率80.77%。结果显示,除IHC（2+）外,IHC检测HER2蛋白表达与FISH检测HER2基因扩增有较好的一致性（P＜0.05）。造成两种检测方法差异的原因可能有标本固定不及时,抗体浓度偏低等。结论:IHC法检测HER2与FISH法一致性较好。临床实践中可根据实际情况,结合使用,以便指导临床治疗。     

恶性浆膜腔积液细胞块在分子病理诊断中的应用

目的 探讨恶性浆膜腔积液细胞块技术在分子病理诊断上的应用价值。方法 85例恶性浆膜腔积液分层离心获取肿瘤细胞并制作成石蜡细胞块,应用常规病理染色、免疫组化染色、荧光原位杂交（FISH）、基因测序等方法对其进行检测。结果 细胞块切片中肿瘤细胞丰富、集中,细胞结构清晰,并保持部分组织学形态特征,免疫组化染色能够辅助肿瘤确诊及明确分型,荧光原位杂交和基因测序可提供基因扩增及突变情况。30例非小细胞肺癌样本中10例EGFR基因的FISH阳性,8例EGFR基因突变。结论 恶性浆膜腔积液细胞块技术对于疾病的诊断有重要临床意义,可以帮助肿瘤确诊并查找原发灶,有效指导肿瘤分子靶向治疗。     

IHC、FISH与CISH检测乳腺癌Her-2基因状态的对比研究

目的 比较免疫组织化学法(IHC)、荧光原位杂交法(FISH)与显色原位杂交法(CISH)检测乳腺癌HER2基因状态的一致性,探讨FISH法与CISH法榆测乳腺癌HER2基因状态的临床意义.方法 对64例乳腺浸润性导管癌石蜡标本分别应用IHC法、CISH法与FISH法检测HER2蛋白、HER2基因状态及17号染色体多体的发生率.结果 HER2蛋白表达(+++)组,IHC与CISH、FISH法检测HER2基因扩增阳性的符合率均为100%;HER2蛋白表达(++)组,IHC与CISH、FISH法检测的符合率分别为95.83%与91.67%;HER2蛋白表达(+/-)组,IHC与CISH、FISH法检测的符合率亦均为100%.FISH法与CISH法的检测结果1例存在差异,FISH法与CISH法检测HER2基凶状态总的符合率为98.41%.17号染色体多体的发生率在IHC(+++、++、+/-)三组中分别为45.16%、45.83%和11.11%,其总的发生率为40.62%.结论 IHC法柃测HER2蛋白仅作为初筛方法;FISH法与CISH法检测HER2基因状态存在较高程度的符合率,CISH法可作为一种更加方便可行的方法检测HER2基凶状态;在疑有17号染色体多体干扰时,应进一步行FISH法检测.     

荧光原位杂交检测乳腺癌HER2（++）扩增状态及其与临床病理的相关性

目的 使用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）检测HER2基因扩增情况,并探讨影响HER2基因扩增的因素及其与临床病理特征的关系。方法 收集新疆医科大学附属肿瘤医院2013年l月至2015年12月间IHC检测HER2（++）的乳腺癌病例325份,均采用IHC和FISH两种方法分别检测所有患者的石蜡标本HER2表达和扩增情况,并分析HER2扩增状态与患者各临床病理特征的关系。结果 全组患者经IHC检测HER2表达均为（++）,FISH检测HER2扩增率为12.9%（42/325）,对12项临床和病理指标进行单因素分析显示：HER2扩增状态与激素状态、肿瘤直径、P53显著相关（P<0.05）,而与ki67表达、组织学分级、肿瘤个数等因素均无关（P>0.05）。结论 雌孕激素表达均阴性、肿瘤直径>2 cm、P53表达阳性是预测FISH检测IHC HER2（++）扩增的独立因素。     

非小细胞肺癌EGFR荧光原位杂交与免疫组化检测的比较

目的探讨荧光原位杂交（FISH）技术和免疫组化（IHC）法检测石蜡标本非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR基因扩增及蛋白表达水平的差异性。方法采用FISH和IHC分别检测27例NSCLC患者石蜡标本EGFR基因和蛋白表达,对2种方法的检测结果进行对比分析。结果 14例IHC法EGFR表达（3＋）的标本中有9例FISH显示阳性（64.29%）,其中5例为EGFR基因高多体性扩增（55.56%）,4例为EGFR基因扩增（44.44%）;6例IHC（2＋）的标本中仅1例为高多体性扩增（16.67%）;2例IHC（1＋）及5例IHC（-）标本均无EGFR基因扩增。结论 IHC法初筛（3＋）、（2＋）的标本与FISH检测的符合率较低,提示对IHC检测EGFR表达为（3＋）及（2＋）并选择靶向药物治疗的病例,应采用FISH法对EGFR基因表达作进一步检测。     

乳腺癌17号染色体多体对HER2检测的影响及其临床病理学意义

目的:探讨乳腺癌17号染色体多体对人类表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor 2,HER2)检测结果的影响及其临床病理学意义.方法:采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)双色法检测71例原发性浸润性乳腺癌中HER2基因和17号染色体拷贝数目情况.采用HER2绝对拷贝数标准和HER2/chromosome 17 比值标准,判定HER2的FISH检测结果;基于FISH检测结果,结合免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)检测的HER2蛋白表达情况及相关临床病理参数进行分组对比分析.结果: 无论按照HER2绝对拷贝数标准(14/71,19.7%)或HER2/chromosome17 比值标准(2/71, 2.8%),所有FISH检测结果示HER2基因扩展可疑的病例都为17号染色体多体;与HER2基因扩增阴性者相比,单纯17号染色体多体组在肿瘤分级、淋巴结转移以及激素受体表达上差异无统计学意义(P均>0.05);而与HER2基因扩增阳性组相比,单纯17号染色体多体组表现出更低的肿瘤分级(50.0% vs 81.5%, P=0.025)、更高的淋巴结阴性率(55.6% vs 25.9%, P=0.045)以及更高的雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性率(83.3% vs 41.7%, P=0.005)和孕激素受体(progestogen receptor,PR)阳性率(87.5% vs 44.4%, P=0.003).结论:相比于HER2基因扩增组,单纯17号染色体多体组更倾向于HER2基因扩增阴性;17号染色体多体会影响HER2检测结果,是FISH检测中导致可疑结果产生的主要原因.     

荧光原位杂交对非整倍体毒剂的检测

荧光原位杂交（FISH）技术是近年来开展起来的分子生物学新技术。它是使用生物素或地高辛标记的各类DNA和RNA探针与细胞或组织在玻片上进行原位杂交。然后通过荧光抗体（第2抗体）显色，使被观察的特定DNA片段（或序列）在荧光显微镜下在细胞核或染色体的原有部位显示荧光。这对了解DNA序列（基因）在染色体细胞核内的位置及相互关系，提供了一个强有力的手段。     

色素原位杂交在检测乳腺癌患者组织中HER2基因的应用

[目的]探讨色素原位杂交（CISH）在检测乳腺癌患者组织中HER2基因状态的临床应用，比较CISH与免疫组化（IHC）检测组织HER2状态的差异性。[方法]采用SPOT—Light HER2 CISH^TM试剂盒，以CISH方法对40例IHC EnVision法染色分别为（＋＋＋）、（＋＋）、（＋）和阴性（-）的乳腺癌石蜡切片标本进行HER2基因状态的检测。[结果]HER2表达IHC（＋＋＋）的8例标本中，7例为HER2基因扩增CISH检测，1例无扩增；（＋＋）的13例标本中，5例为HER2基因扩增．8例无扩增；（＋）的10例标本中，2例为HER2基因扩增，7例无扩增；（-）的9例标本均无扩增。两种方法对乳腺癌组织HER-2／neu状态的检测有一定的差异性（kappa=0．458，P=0．003）。[结论]IHC是HER表达初步筛查的首选方法，由于蛋白表达和基因扩增检测结果存在一定的差异性，建议IHCC（＋＋＋～＋）患者进一步作CISH检测确诊。     

EGFR、HER2 在食管鳞癌中的状态及临床意义研究

目的：探讨食管鳞癌中EGFR信号传导通路相关分子EGFR、HER2的表达情况及二者之间的相互关系,对比研究免疫组织化学方法（IHC）检测食管鳞癌HER2蛋白表达和荧光原位杂交技术（FISH）检测HER2基因状态的一致性。方法：随机选取食管鳞癌根治术后的切除标本76例和21例癌旁正常鳞状上皮组织,应用IHC法检测EGFR的表达。IHC法及FISH法分别检测HER2蛋白表达和HER2基因状态,并进行对比分析。结果：EGFR在食管鳞癌的表达明显高于癌旁正常鳞状上皮（63．2％VS33．3％,P〈0．05）;HER2在食管鳞癌低表达（3．9％）,正常鳞状上皮不表达。EGFR、HER2表达均与脉管累犯、淋巴结转移正相关,此外,HER2表达还与肿瘤浸润深度正相关。HER2与EGFR表达未发现相关性;HER2蛋白为阳性的患者中,HER2基因扩增符合率为66．7％（2／3）。HER2蛋白为阴性的患者中,HER2基因非扩增符合率为100％（73／73）。两种方法检测结果比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：EGFR在食管鳞癌中高表达可能与食管鳞癌的发生发展有关,并有可能成为靶向治疗的靶点,而HER2在食管鳞癌中由于表达很低,有可能不是该肿瘤分子治疗的靶点。IHC检测HER2蛋白与FISH检测HER2基因结果一致性较高。     

荧光原位杂交技术在泌尿生殖肿瘤中的应用

随着分子细胞遗传学的快速发展,荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术已广泛应用于临床和科学研究。FISH技术综合了荧光信号的高度灵敏性、无放射性、直观性及原位杂交的准确性,通过检测样本中基因或染色体的异常改变而应用于遗传性疾病、肿瘤的研究及临床诊断和治疗监测。本文就荧光原位杂交技术在常见的泌尿生殖肿瘤中的应用进行综述。     

乳腺癌HER2基因扩增的临床病理意义

目的 检测乳腺癌组织中HER2基因扩增状态,评价其临床病理意义。方法 应用FISH、IHC方法分析55例乳腺癌HER2基因扩增/蛋白表达状态与临床病理特征的关系,比对IHC法与FISH检测的一致性程度。结果 55例乳腺癌FISH检测有32例（58.2%）HER2基因扩增。IHC法HER2（+++）22例中21例（95.5%）HER2基因扩增;HER2（++）12例中10例（83.3%）HER2基因扩增;HER2（+/－）21例中1例（4.7%）HER2基因扩增。39例浸润性导管癌中30例（76.9%）有HER2基因扩增,12例浸润性小叶癌中仅1例（8.3%）HER2基因扩增。HER2基因扩增在浸润性导管癌的组织学分级间差异有统计学意义（P<0.001）,组织学Ⅲ级的浸润性导管癌较Ⅰ、Ⅱ级有较高的HER2基因扩增率。HER2基因扩增与ER、PR阴性状态及腋淋巴结转移有显著相关性（P<0.01）,与患者是否绝经无相关性（P>0.05）。结论 浸润性小叶癌,ER、PR阳性以及组织学Ⅰ级的浸润性导管癌常少有HER2基因扩增;对于组织学Ⅲ的浸润性导管癌,同时ER、PR阴性者尽管IHC检测结果为阴性,仍需做FISH检测以明确是否有HER2基因扩增。     

172例乳腺浸润性癌 HER -2免疫组化与 FISH 技术检验对比研究

目的：比较免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）技术在检测乳腺浸润性癌患者中 HER -2蛋白表达和基因扩增的一致性。方法：分别用 IHC 和 FISH 技术对172例乳腺浸润性癌 HER -2进行蛋白表达和基因扩增检测,比较两者检测的结果和相关性。结果：172例浸润性乳腺癌标本行 IHC 检测结果30例为（1＋）,88例为（2＋）,42例为（3＋）,12例为（-）。172例乳腺癌标本进行 FISH 检测结果71例为阳性,101例为阴性。其中 FISH 结果阳性标本中 IHC 检测有2例（1＋）,30例（2＋）,39例（3＋）。IHC 检测 HER -2为（3＋）的病例 FISH 检测中阳性符合率92.9%（39/42）,且检测 HER -2（-）的病例 FISH 检测均为阴性, IHC 检测 HER -2（2＋）的88例患者中有58例经 FISH 检测证实 HER -2呈阴性,30例呈阳性。FISH 检测共发现47例17号染色体多体,其发生率为27.3%。用 IHC 检测 HER -2发现有25例标本存在肿瘤之间的不同表达,而在这25例标本的 FISH 检测结果中有11例存在 HER -2基因瘤内遗传异质性。结论：HER -2蛋白表达和基因扩增 IHC 和 FISH 检测在免疫组化强阳性的标本中具有较好的一致性,且免疫组化染色强度与HER -2基因扩增呈正相关。理解和判断 HER -2基因遗传异质性对肿瘤药物应用及 HER -2基因检测方法具有指导意义。     

应用荧光原位杂交法检测乳腺癌石腊样本中HER-2 基因的扩增

 目的 探讨荧光原位杂交法（Fluorescence in situ hybridization，FISH）检测乳腺癌HER-2基因扩增在临床病理诊断及分子靶向治疗中应用的可能性。方法 用FISH技术和免疫组化（Immunohisto—chemistry，IHC）技术检测50例乳腺导管癌石蜡包埋标本并比较两种方法的结果以及与临床病理的关系。结果 16／50例HER-2蛋白表达阳性，其中强阳性5例，中度阳性9例，弱阳性2例；11／50（22％）例乳腺癌标本FISH技术检测HER-2基因扩增阳性，其中5／5为免疫组化HER-2蛋白强阳性病例；6／9为中度阳性病例，其中1例为17号染色体多倍体与HER-2基因扩增。HER-2基因扩增与蛋白表达与乳腺癌转移有关（P〈0．05）。结论 FISH技术可稳定地检测用IHC确定的HER-2蛋白阳性乳腺癌中HER-2基因的扩增状况，并用于临床赫赛汀分子靶向治疗病例的筛选。     

浸润性尿路膀胱上皮癌中人类表皮生长因子受体-2表达与扩增的研究*

  目的   探讨不同分期（T2~T4）的尿路膀胱上皮癌（urothelial bladder carcinoma，UBC）中人类表皮生长因子受体-2（HER2）蛋白表达和基因扩增状态。   方法   将49例不同分期的膀胱癌患者的肿瘤组织进行HER2免疫组织化学染色，以及HER2基因的双色荧光原位杂交（FISH）检测。   结果   膀胱癌患者男性居多。而且分期越高，HER2染色阳性率越高。但所有患者均未出现基因扩增，有12例患者出现17号染色体多倍体。分期越高，多倍体发生越多。   结论   膀胱癌患者HER2蛋白增高不是由于基因扩增所致，其它的转录和后转录机制参与并调节了蛋白的表达。       

荧光原位杂交技术在泌尿生殖肿瘤中的应用

随着分子细胞遗传学的快速发展,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术已广泛应用于临床和科学研究.FISH技术综合了荧光信号的高度灵敏性、无放射性、直观性及原位杂交的准确性,通过检测样本中基因或染色体的异常改变而应用于遗传性疾病、肿瘤的研究及临床诊断和治疗监测.本文就荧光原位杂交技术在常见的泌尿生殖肿瘤中的应用进行综述.     

伴有复杂核型的急性早幼粒细胞白血病的临床及实验研究

目的：探讨伴有复杂核型的急性早幼粒细胞白血病的临床和实验室特征。方法：应用常规细胞遗传学,间期荧光原位杂交技术（FTSH）,多重荧光原位杂交技术,检测2例急性早幼粒细胞白血病。结果：常规细胞遗传学检测发现2例具有复杂核型,间期FISH证实2例均含有PML／RARA融合基因,多重FISH明确复杂核型性质。2例预后均较差。结论：联合常规细胞遗传学,间期FISH,多重FISH可以准确明确复杂核型的性质。具有复杂核型的急性早幼粒细胞白血病患者预后较差。     

荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2基因扩增实验方法的比较

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测乳腺癌HER-2基因的最佳实验方法.方法:应用FISH技术检测55例乳腺癌组织标本的HER-2基因,分别采用水浴法和直接消化法,甲酰胺法和共变性法,检测HER-2基因表达成功率,对比实验方法的最佳结果.结果:两种消化法中,水浴法和直接法杂交成功率分别为86.21%(25/29)和88.46%(23/26),差异无统计学意义(P>0.05),杂信号比分别为17.24%(5/29)和46.15%(12/26),差异有统计学意义(P<0.05).两种变性法中甲酰胺法和共变性法杂交成功率分别为73.08%(19/26)和93.10%(27/29),差异有统计学意义(P<0.05).结论:FISH检测乳腺癌HER-2基因,以水浴法和共变性法杂交成功率最高.     

基于随机游走的FISH细胞检出及HER2状态判别

目的针对肿瘤FISH图像细胞边缘模糊和粘连等问题,提出一种基于自动随机游走的细胞检出及HER2基因状态判别方法。方法首先,在RGB颜色空间中的分割细胞、信号点等区域;然后,改进极限腐蚀算法,自动获取细胞种子区域,并提取有效种子点进行自动随机游走分割,较好地实现了FISH细胞的检出;最后。依据细胞内红绿信号点数比值对HER2基因状态作出判别。结论实验结果表明,本文方法细胞检出效果理想,能较好地实现粘连、重叠细胞的分离,FISH-HER2基因状态判别敏感度、特异性、准确率均达到90％以上。