雄黄对Raji细胞凋亡的影响

目的：了解雄黄体外抗肿瘤的细胞谱。方法：采用MTT法测定细胞的活力,利用流式细胞仪测定细胞周期、Annexin V和bcl-2的表达。结果：雄黄体外对Raji细胞的生长有明显的抑制作用,对细胞周期的影响表现为G2/M期的阻滞,Annexin V阳性的凋亡细胞明显增加,并且可使bcl-2的表达下调。结论：雄黄有诱导Raji细胞凋亡的作用。     

组蛋白甲基化酶抑制剂对人淋巴瘤Raji细胞生存、凋亡及细胞周期的影响

  目的  研究组蛋白甲基化酶Zeste基因增强子同源物2（enhancer of Zeste homolog 2,EZH2）的3种抑制剂（UNC1999、DZNep及GSK343）对人B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的影响。  方法  PCR扩增EZH2基因16（Y641）和18（A677）外显子,Sanger测序检测其突变情况;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测正常成年人淋巴细胞及Raji细胞EZH2的表达;使用不同浓度的UNC1999、DZNep及GSK343处理Raji细胞,CCK-8技术检测Raji细胞的生存情况;流式细胞术检测Raji细胞的凋亡情况和细胞周期变化;Western blot检测药物处理后EZH2及H3K27 me3的表达。  结果  Sanger测序显示Raji细胞不携带EZH2基因Y641和A677突变位点。Western blot显示,相比正常成年人淋巴细胞,Raji细胞EZH2蛋白高表达。CCK-8法结果显示UNC1999、DZNep及GSK343对Raji细胞均有抑制生存的作用,DZNep抑制能力最弱。流式细胞术凋亡检测显示UNC1999、DZNep及GSK343促进Raji细胞的凋亡,UNC1999作用强于GSK343与DZNep;3种抑制剂均阻滞Raji细胞于G₁/G₀期,UNC1999组细胞周期阻滞最显著。Western blot显示UNC1999和GSK343抑制EZH2组蛋白甲基化酶的活性,降低H3K27 me3的表达。  结论  EZH2抑制剂可通过降低H3K27 me3的表达抑制Raji细胞生存,促进细胞凋亡,改变细胞周期。UNC1999作用效果优于GSK343及DZNep,且EZH2抑制剂对Raji细胞的作用不依赖于EZH2的突变。     

TRAIL对人卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响

目的 研究TRAIL对卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响。同时了解化疗药物对TRAIL受体表达的影响。方法 用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL蛋白和顺铂（DDP）联合用药对SKOV3细胞生长的影响;化疗药物处理后用RT—PCR方法检测细胞的TRAIL受体（DR4、DR5）表达的变化。结果 随着TRAIL蛋白浓度的升高,SKOV3细胞抑制率逐渐升高。TRAIL浓度达到10ng／mL及以上浓度时,TRAIL＋DDP联合组的抑制率比TRAIL组明显升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测SKOV3正常对照组、TRAIL组和TRAIL＋DDP组细胞凋亡率分别为5．9％、13．4％、39．5％,各实验组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期。RT—PCR检测发现DDP使SKOV3细胞DR5和DR4水平明显升高,分别为对照的1．95倍和1．54倍（P〈0．05）,而阿霉素、卡铂、5-FU处理后SKOV3细胞DR4、DR5表达无明显改变。结论 TRAIL蛋白单独使用对SKOV3细胞生长有抑制作用,肿瘤细胞凋亡率升高,TRAIL与DDP联合使SKOV3细胞抑制率明显升高,促凋亡作用更明显。DDP作用后SKOV3细胞DR4、DR5表达成倍增加。     

夏枯草提取物对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响

目的:观察夏枯草提取物对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响.方法:①取对数生长期Raji细胞,分6组,分别加入终浓度为80、40、20、10、5 mg/L和0 mg/L(空白对照组)的夏枯草提取物培养48 h,MTT法测定增殖抑制率,求出半数抑制浓度(IC50).②取对数生长期Raji细胞,用浓度为IC50的夏枯草提取物处理24、48、72 h,采用碘化丙啶(PI)一步插入法DNA定量荧光染色,上流式细胞仪检测细胞周期;Annexin V/FITC和PI染色,上流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法观察Bcl-2、Bax蛋白表达变化,RT-PCR检测bcl-2、bax mRNA.结果:不同浓度的夏枯草提取物对Raji细胞有明显的增殖抑制作用,并呈剂量依赖性,IC50为(18.01±0.92) mg/L.随夏枯草提取物作用时间的延长,G1期细胞减少,S期细胞增多,大部分细胞受阻于S期;细胞凋亡率升高;同时Bcl-2蛋白及mRNA表达下调, Bax蛋白及mRNA表达上调.结论:夏枯草提取物可抑制Raji细胞增殖,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax表达,诱导细胞凋亡有关.     

苦参碱诱导Raji细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:观察苦参碱(Matrine,Mat)对体外人淋巴瘤Raij细胞增殖及细胞凋亡的影响,探讨 Mat 诱导 Raji 细胞凋亡的作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率;免疫细胞化学技术检测 Mat对Raji 细胞株 Bcl-2 蛋白表达的影响;RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:不同浓度的 Mat 对 Raji 细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;Mat能明显诱导Raji细胞凋亡;免疫细胞化学结果显示 Bcl-2 在实验组中的表达显著低于对照组.RT-PCR 显示 Bcl-2 mRNA 表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat 能抑制人淋巴瘤 Raji 细胞的增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调 Bcl-2 表达有关.     

TRAIL联合奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合奥沙利铂(oxaliplatin)对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法分别检测TRAIL组、奥沙利铂组及联合组的细胞抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色,流式细胞仪检测SW480细胞的凋亡率.结果 SW480细胞对TRAIL不敏感,对奥沙利铂相对敏感,TRAIL与亚毒性浓度的奥沙利铂联用对细胞的杀伤作用显著增强;亚毒性浓度的TRAIL、奥沙利铂及联合组作用SW480细胞24h的抑制率分别为8.62%,60.51%,81.28%;凋亡率分别为2.43%,11.76%,18.37%,流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现.结论 TRAIL能显著提高奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现.     

TRAIL诱导乙型肝炎病毒转染细胞株凋亡的实验研究

目的探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15的凋亡诱导效果。方法应用MTT法了解TRAIL对HepG2.2.15细胞的诱导效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术和Caspase-3酶活性分析TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡过程。结果TRAIL(0.1μg/mL)作用于HepG2.2.15细胞株12、24、36h后,细胞抑制率分别为17.91%、41.26%、59.85%;PI单染亚二倍体含量12h后为21.8%,高于对照组的8.7%;24h后DNA电泳200bp处出现特异性条带;6h后Caspase-3酶活性为对照组的4.76倍。结论TRAIL诱导后,HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15发生凋亡。     

TRAIL选择性诱导细胞凋亡的作用机理及意义

ＴＮＦ为一庞大的家族 ,到目前为止发现的ＴＮＦ家族成员主要有 :ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴα、ＬＴβ、ＣＤ30Ｌ、ＣＤ2 7Ｌ、ＣＤ40Ｌ　Ｆａｓ、ＯＸ- 40Ｌ、4-ＩＢＢＬ ,以及ＴＲＡＮＣＥ(ＴＮＦ -ＲｅｌａｔｅｄＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ -Ｉｎ ｄｕｃｅｄＣｙｔｏｋｉｎｅ)和ＴＲＡＩＬ(ＴＮＦ -ＲｅｌａｔｅｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓ -ＩｎｄｕｃｉｎｇＬｉｇ ａｎｄ)等。其中ＴＲＡＮＣＥ和ＴＲＡＩＬ是新近发现的ＴＮＦ家族成员。大多数ＴＮＦ家族成员为ＩＩ型跨膜蛋白质 ,即Ｃ末端在胞外区 ,且Ｃ末端有一同源三聚体。ＴＮＦ家族成员具有多…     

加味四君子汤诱导Raji细胞凋亡实验研究

目的研究加味四君子汤体外诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡及其作用机制。方法不同浓度的加味四君子汤作用于Raji细胞,MTT比色法分析细胞增殖情况,荧光染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测Bax、Bcl-2 m RNA的表达。结果 1加味四君子汤对Raji细胞的增殖有较强的抑制作用;2显微镜下可见明显的细胞凋亡;3流式分析显示加味四君子汤作用Raji细胞72 h后可显著诱导细胞凋亡;4 RT-PCR显示,Bcl-2 m RNA的表达随着药物浓度增加而下降,而Bax m RNA表达增加。结论加味四君子汤能有效地诱导Raji细胞凋亡,抑制细胞增殖,其机制可能与Bax基因表达增加及Bcl-2基因表达降低有关。     

4种抗肿瘤药物对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞体外抑制作用的研究

摘要目的：探讨柔红霉素、阿霉素、洛铂和顺铂对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞体外增殖的抑制作用．为淋巴瘤治疗的药物选择提供理论依据。方法：采用MTT法分别检测经柔红霉素、阿霉素、洛铂或顺铂处理后的Raji细胞的抑制率的变化,比较上述药物对淋巴瘤细胞的抑制作用的差异。结果：柔红霉素、阿霉素、洛铂和顺铂对Raji细胞体外生长均有明显的抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系;在相同药物剂量下,柔红霉素对Raji细胞的抑制率明显高于阿霉素（P〈0．05）,洛铂对Raji细胞的抑制率明显高于顺铂（P〈0．05）。结论：柔红霉素、阿霉素、洛铂与顺铂均能有效地抑制恶性淋巴瘤细胞增殖,而柔红霉素和洛铂显示出更强的抗肿瘤作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在B淋巴瘤细胞株中的敏感性及诱导细胞凋亡机制

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在B淋巴瘤细胞株中的敏感性及TRAIL通过线粒体信号通路诱导人B淋巴瘤细胞株Ramos凋亡的机制.方法 采用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,流式细胞术分析细胞线粒体膜电位、细胞表面受体DR4/DR5表达及细胞凋亡率变化,并用Western Blot测定Ramos细胞经TRAIL作用24 h后相关凋亡蛋白的表达水平.结果 供试的4株B淋巴瘤细胞中,Ramos细胞为TRAIL敏感株,Ramos细胞表面受体DR4/DR5表达水平明显高于TRAIL耐药株;TRAIL抑制Ramos细胞增殖通过诱导细胞凋亡介导;细胞调亡伴随线粒体膜电位明显变化;Western Blot免疫印迹结果显示,药物作用后,细胞内相关凋亡信号分子包括Caspase-9,Caspase-3,PARP蛋白等均明显活化.结论 4株B淋巴瘤细胞株对TRAIL敏感性不同,并与DR4/DR5表达相关;TRAIL抑制Ramos细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起线粒体膜电位明显下降,活化Caspase-9及下游凋亡蛋白;线粒体调亡途径是介导TRAIL诱导Ramos细胞凋亡的途径之一.     

TNFα及PDTC诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新途径。方法　以含 2 0 %小牛血清的RPMI - 16 4 0为培养基 ,在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 (PC - 3) ,倍增至所需的细胞数后 ,行SCID鼠右腋皮下接种 ,建立雄激素非依赖性前列腺癌动物模型。待瘤体长至约 1.0cm3 大小时 ,随机分成 4组 :A组 (对照组 ) ,皮下注射生理盐水每只 0 .2ml;B组瘤体内注射TNFα(2 0 0 μg/kg体重 ) ;C组腹腔注射PDTC(2 0 0mg/kg体重 ) ;D组同时注射TNFα及PDTC(剂量同B、C组 )。隔日 1次 ,2 8d后取出瘤体 ,进行瘤体大小及细胞凋亡的检测。结果　各用药组瘤体大小及凋亡率与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B组抑瘤率为 70 .9% ,C组为4 5 .9% ,D组为 89.5 %。用药前后的瘤重相比 ,D组有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B、C组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在治疗过程中 ,对照组死亡 1只 ,用药组无死亡。结论　TNFα、PDTC对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长均有抑制作用 ,TNFα联合PDTC可显著缩小瘤体大小 ,其作用机制可能为 :TNFα诱导PC - 3细胞的凋亡 ,PDTC对TNFα的诱导起增强作用。     

醋酸棉酚对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察醋酸棉酚对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察醋酸棉酚对Raji细胞生长存活的影响,瑞氏染色法观察药物处理后细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳和Annexin V-FITC标记流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期、检测细胞凋亡率及Bcl-2蛋白表达水平变化,比色法测定Raji细胞Caspase-3样蛋白酶活性.结果 5 μmol/L以上浓度醋酸棉酚能抑制Raji细胞生长增殖并诱导其凋亡,效应与药物浓度及给药时间呈正相关.醋酸棉酚作用后,Raji细胞被阻滞于G_0/G_1期.比色法显示Caspase-3样蛋白酶活化.流式细胞仪检测到Bcl-2蛋白表达下调,且与Caspase-3活化在时间上存在同步趋势.结论 醋酸棉酚能抑制aaji细胞增殖并诱导凋亡,其原因可能与调节细胞周期及下调Bcl-2蛋白表达有关.     

藤黄酸诱导Burkitt淋巴瘤细胞株凋亡及增殖抑制的分子学机制

[目的]研究藤黄酸对Burkitt淋巴瘤细胞株Namalva细胞增殖与凋亡的影响及其分子学机制,探讨藤黄酸治疗Burkitt淋巴瘤的潜在应用价值.[方法]用不同剂量藤黄酸处理细胞,采用MTS法对淋巴瘤细胞进行细胞活力及增殖抑制测定;0.25、0.5、0.75μmol/L藤黄酸分别处理细胞24 h,0.75μmol/L藤黄酸分别处理细胞6、12、24h后收集细胞,采用Annexin V-FTIC/PI流式细胞术检测藤黄酸剂量依赖性细胞凋亡情况;利用Western blot方法检测凋亡相关蛋白和细胞增殖信号通路相关蛋白剂量与时间依赖的变化情况.[结果]藤黄酸明显抑制Namalva细胞的增殖,诱导Namalva细胞发生凋亡.随藤黄酸浓度升高与作用时间延长,细胞中PARP,caspase 8出现切割,Bax表达上调,Pro-caspase 3,Pro-caspase 9,Bcl-2表达下调.增殖通路蛋白STAT5、p-STAT5、ERK、p-ERK的表达受到明显抑制.[结论]藤黄酸通过影响Burkitt淋巴瘤细胞株Namalva细胞凋亡相关蛋白的表达,促进细胞凋亡;通过抑制JAKs/STATs、MEK/ERK信号转导通路的活化,抑制Burkitt淋巴瘤细胞的增殖.     

奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞生长抑制与凋亡的影响

目的 观察奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞的生长抑制和凋亡作用.方法 将浓度为0、6.25、12.5、25、50、100 μg·mL-1的奥沙利铂与人Burkitt-Raji细胞分别作用24、36、48 h,用CCK-8法检测奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,用免疫组化的方法检测奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞ki-67蛋白、bax蛋白的影响.结果 奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞有生长抑制、促凋亡作用,其对人Burkitt-Raji细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大,流式细胞仪分析显示奥沙利铂将人Burkitt-Raji细胞阻滞于G2/M期.奥沙利铂浓度为100 μg·mL-1作用48 h,Raji细胞生长抑制率为(94.73±1.40)%,Raji细胞的早期凋亡率为(8.25±1.79)%、晚期凋亡和继发坏死率为(14.61±2.18)%.结论 奥沙利铂能够抑制人Burkitt-Raji细胞的增殖,可诱导人Burkitt-Raji细胞发生一定的凋亡.     

Adenovirus Mediated BIMS Transfer Induces Growth Supression and Apoptosis in Raji Lymphoma Cells

Objective To transfer pro-apoptotic BIM directly into tumor cells bypass the complicated biologica processes of BIM activation so as to reverse the chemoresistance of cancer cells. Methods BIMS was specifically amplified from HL-60 cells by RT-PCR, confirmed to be correct by sequencing and cloned into shuttle vector pAdTrack-CMV carrying a green fluorescence protein gene to generate a recombinant plasmid pAdTrack-CMV-BIMS. This plasmid and adenovirus backbone plasmid pAdEasy-1 were linearized and electroporated into E.coli BJ5183 host bacteria to mediate homologous recombination. The positive clone was identified by restrict endonuclease digestion. The recombinant pAdEasy-CMV-BIMS was transferred into HEK293 cells for packaging and amplification. The successful construction of recombinant human BIMS adenovirus （Ad-BIMS） was demonstrated by Western blot. To test whether Ad-BIMS has the capability of inducing apoptosis of tumor cells, Ad-BIMS was used to infect GC resistant Burkitt lymphoma Raji cells. Results After infected for 2-5 days, BIMS expression in Raji cells was detected by RT-PCR and Western blot. The significant growth retardation and apoptosis of Raji cells were also observed by MTI- and flow cytometry. Conclusion These results indicated that BIMS might be a potential candidate of gene therapy for chemoresistant tumor cells.     

PDTC对缺血再灌注复合内毒素血症所致急性肝损伤的保护作用

目的:探讨PDTC对肝脏缺血再灌注复合内毒素血症(HIRE)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制. 方法:Wister大鼠40只随机分为:HIRE组, PDTC保护(HIRE PDTC)组. HIRE组阻断肝左叶及肝中叶的入肝血流60 min后再灌注,再灌注时自阴茎背iv大肠杆菌内毒素(LPS) 2.5 mg/kg,PDTC组先经阴茎背iv PDTC 120 mg/kg后立即按HIRE组致伤. 分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后 1, 3, 6, 12 h NF-κB活性及TNF-α表达,并用赖氏法检测血浆中ALT含量. 结果:损伤后NF-κB结合活性明显升高,并于再灌注后3 h达到高峰,TNF-α表达增加,同时血浆中ALT含量亦明显升高,PDTC保护组NF-κB活性减弱,TNF-α表达减弱,ALT水平降低. 结论:PDTC能通过抑制NF-κB的激活,减少致炎因子的基因表达与合成释放,减轻炎细胞浸润,从而对HIRE所致ALI起到保护作用.     

抗癌药莪棱舌草Ⅰ号诱导人肝癌细胞凋亡的研究

用流式细胞光度术检测细胞凋亡 ,运用细胞化学方法检测凋亡相关基因蛋白的表达 ,以及用Westernblot ting分析研究抗癌药莪棱舌草Ⅰ号对人肝癌细胞 (772 1细胞 )凋亡的诱导作用。结果表明药物能够诱导 772 1细胞发生凋亡 ,凋亡率可达 4 0 % ;药物作用可以使细胞中凋亡抑制基因bc1 2表达减少 ,凋亡促进基因Bax表达增加。提示诱导肿瘤细胞凋亡可能是莪棱舌草Ⅰ号抑制肝癌细胞的机制之一