黏附分子CD44的表达及其糖基化与肝癌转移的相关性

目的 探讨CD44S及其变异体CD44v分子的表达和其糖基化与肝癌细胞侵袭转移的关系. 方法 用免疫组织化学法、量子点、RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光染色、甲基化特异性聚合酶链反应等技术检测转移与非转移性肝癌组织、不同转移潜能人肝癌细胞株中CD44S及其变异体CD44v的定位与表达;并应用多重凝集素印迹法检测这些细胞株中CD44v6的糖基化差异.组间均数比较应用方差分析及t检验,多组间等级资料的比较采用Wilcoxon秩和检验,各组间率的比较采用x2检验.结果 免疫组织化学结果显示,CD44S蛋白定位以细胞质为主; CD44v3、CD44v4/5蛋白定位于细胞膜与细胞质;而CD44v6主要定位于细胞膜.组织芯片结果显示,相对于CD44S及其他CD44v,CD44v6在转移组的表达水平高于非转移组(阳性率为75％与46％),差异具有统计学意义(x2=8.828,P＜0.05);量子点检测(t=2.392,P＜0.05)与血清学检测(t=2.56,P＜0.05)也证实这一结果.Western blot结果显示,CD44v6的表达与肝癌细胞转移潜能呈正相关.此外,在MHCC97L、MHCC97H肝癌细胞中CD44v6基因启动子发生不完全甲基化,而在Hep3B细胞中则发生完全甲基化.而且,相对于Hep3B细胞,MHCC97L及MHCC97H细胞中CD44v6蛋白对朝鲜槐凝集素、黑接骨木凝集素及麦胚凝激素的亲和力较高. 结论 在CD44S及其变异体CD44v中,CD44v6蛋白的高表达与肝癌转移潜能的增强呈正相关;其高表达可能与基因启动子低甲基化有关.此外,CD44v6蛋白唾液酸寡糖链的增加可能与肝癌细胞转移潜能增高有关.     

CD44在胃癌中异常表达的临床意义

胃癌的转移和扩散是依靠细胞与细胞外间质及其他细胞的一系列的相互作用,其中肿瘤细胞表面的粘附分子在这一过程中起着重要作用。细胞粘附分子CD_(44)是一种存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,能介导淋巴细胞归巢并参与细胞—细胞间粘附,在肿瘤的发生、发展和转移中起重要的作用。人类CD44基因位干第11号染色体短臂上,由20个高度保守的外显子构成,它包括10个组成型外显子和10个V区变异性拼接外显子。组成型外显子的转录片段存在于所有CD_(44)转录子中,仅含有组成型外显子的CD_(44)转录子称作标准型CD_(44s)转录子。V区外显子在转录时可以随机拼接,也可以跳跃的方式拼接,这些有变异型拼接外显子插入的CD_(44)转录子称为变异型CD_(44v)转     

PCNA、CD44 V6在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的研究增殖细胞核抗原（PCNA）及黏附分子CD44的变构体CD44V6在人肝细胞癌（简称肝癌）中的表达情况,探讨其与肝癌的相关性。方法选择76例有完整随访资料的肝癌标本、20例正常肝标本,用免疫组织化学方法检测其PCNA及CD44v6的表达。结果肝癌PCNA、CD44V6阳性表达高于正常肝（P〈0.05）;肝癌不同病理学分级间PCNA表达强度有显著差异（P〈0.05）;有肝外转移的CD44V6表达高于无肝外转移的;CD44V6高表达的患者术后生存期明显短于低表达的患者（P〈0.05）。结论 PCNA、CD44V6的过度表达与肝癌的临床病理特性相关,对肝癌临床转归的评估有一定指导意义。     

人原发性肝癌组织cDNA文库的构建及鉴定

目的构建人原发性肝癌组织cDNA文库,筛查与原发性肝癌发生特异相关的基因,为探讨原发性肝癌的发病机制及基因治疗奠定基础。方法提取人原发性肝癌组织总RNA并纯化其mRNA;逆转录合成单链cDNA,长距离聚合酶链反应(PCR)合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解并纯化后,进行SfiⅠ酶酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4 kb以上的组分,并与λTriplEx2载体连接;将连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增;检测扩增后文库的滴度和重组效率,随机挑取14个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果未扩增文库的滴度为1.37×106pfu/ml,重组效率为97.46%;扩增后文库滴度为1.28×109pfu/ml,重组效率为99.06%;插入片段平均长度为0.95 kb,长度在1.0~2.0 kb的4个,0.75~1.0 kb的4个,0.5~0.75 kb的6个。结论已成功构建一个乙型肝炎肝硬化基础上发生的人原发性肝癌组织cDNA文库。     

原发性肝癌的MRI表现

肝细胞癌（ＨＣＣ）占肝脏原发恶性肿瘤的８０％以上［１］．ＭＲＩ具有很高的组织分辨率、多参数、多方位成像等特点,成为继ＣＴ之后的又一有效而无创伤性的肝癌检查诊断方法,我们收集３０例经证实的ＨＣＣ患者的ＭＲＩ资料,采用双盲法进行前瞻性回顾分析,旨在探讨Ｍ...     

原发性肝癌MRI特征

目的探讨原发性肝癌的ＭＲＩ特征，以提高诊断准确性．方法原发性肝癌２９例，全部为男性，年龄３３岁～８０岁，平均５６岁．ＧｄＤＴＰＡ增强扫描１０例共１１个肿块．扫描序列为自旋回波（ＳＥ）、ＦＬＡＳＨ，扫描层厚８ｍｍ～１０ｍｍ．结果肿瘤不规则６９２％（３６／５２），边缘模糊３８５％（２０／５２），长ＴＥ肿瘤的信号强度增高不明显．假包膜征１９例，Ｔ１ＷＩ表现为低信号单环，Ｔ２ＷＩ为低信号或高信号单环，典型表现为外高内低双环．１５例镶嵌征Ｔ１ＷＩ和Ｔ２ＷＩ表现为肿瘤内线样或不规则低信号区．１３例斑征Ｔ２ＷＩ表现为肿瘤内高信号斑块．动态增强扫描肿瘤中心不规则强化３６４％，肿瘤边缘结节样强化４５５％．门静脉或下腔静脉瘤栓是原发性肝癌的辅助征象．结论原发性肝癌ＭＲＩ具有特征性．     

中国肝癌临床研究进展

我国２７个省１９９０／１９９２抽样调查表明，肝癌在癌症死亡率中已上升为第二位，达２０３７／１０万，其中男性２９０１／１０万，女性１１２１／１０万［１］．我国肝癌的主要病因因素有：病毒性肝炎感染－我国肝癌患者中约９０％有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染...     

CD44 V6和VEGF在肝癌组织中的表达及其预后价值的研究

目的探讨CD44 V6和VEGF在肝细胞癌(HCC)中的表达及其在临床预后中的价值。方法对随访的40例原发性肝癌临床病理学资料进行回顾性分析分类,并按照1年内有无复发和转移分组,然后进行常规HE染色及CD44 V6、VEGF的免疫组化染色(S_P法)。结果结果CD44 V6和VEGF主要定位于癌细胞的胞膜,部分胞质同时出现阳性表达;在40例肝癌组织中,CD44 V6和VEGF的阳性表达率分别为75%(30/40)和77.5%(31/40);CD44 V6、VEGF在复发和转移组的表达均高达88.9%(16/18,16/18),明显高于未复发和转移组,和肿瘤侵袭转移的发生有相关性(P<0.05),癌组织中的表达均明显高于癌旁组织,而在肿瘤大小及组织学分级间未见明显差异。结论资料提示肝癌组织中CD44 V6和VEGF过表达分析,有助于肝癌侵袭、转移预测和肝癌预后判断。     

肝细胞性肝癌AFP-mRNA检测外周血癌细胞的价值

目的通过对原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）外周血中癌细胞的检测，为临床建立诊断肝癌转移的常规方法．．方法以甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍＲＮＡ为ＨＣＣ的标记物，应用ｎｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ对３０例ＨＣＣ外周静脉全血标本及不同细胞株进行检测及分析．结果ＨＣＣ患者３０例外周血癌细胞阳性检出率为５６７％，并与肝内静脉癌栓形成（１１／１３，８４６％ｖｓ６／１７，３５３％）、肝内转移（１６／２３，６９６％ｖｓ１／７，１４３％）和细胞分化密切相关（Ｐ＜００５）；最低检出浓度为全血肝癌细胞２×１０４／Ｌ．对照组中结肠癌、鼻咽癌等肝转移癌以及胆囊结石患者的外周血中均未发现ＡＦＰｍＲＮＡ．结论ＮｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ对ＨＣＣ的检测具有较强的特异性和较高的灵敏度，对于ＨＣＣ诊断、判断转移可能具有较为重要的临床应用价值     

不同转移潜能肝癌细胞株中CD标志物的表达差异及意义

目的探讨不同转移潜能的肝癌细胞株中几种CD标记物的表达差异及其意义,为进一步利用CD分子标志物分离多潜能肝癌干细胞奠定基础。方法常规培养三种不同转移潜能的肝癌细胞株HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1,胰酶消化获得单细胞悬液后,经流式抗体染色,通过流式细胞仪分析三种肝癌细胞株中CD133、CD90、CD44、CD34、CD24的表达差异及意义。结果 CD133+细胞在HepG2细胞株仅占0.1%,而在MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中表达也较低;CD90+、CD44+、CD90+CD44+表达水平随细胞转移潜能的增加呈递增趋势(P<0.05)。CD44+CD24+在HepG2、MHCC-97H、SK-HEP-1细胞中的阳性表达率分别为0.05%、10.3%和0.3%(P<0.05);三者中均无CD34+和CD133+CD90+细胞表达。结论 CD90和CD44与肝癌细胞的转移潜能有一定的相关性,可能成为潜在的肝癌肿瘤干细胞标记物。     

CD44 and VEGF expression in extrahepatic metastasis of human hepatocellular carcinoma

BACKGROUND/AIMS: We investigated the correlation between vascular endothelial growth factor (VEGF) and CD44 expression in hepatocellular carcinoma (HCC) and the frequency of extrahepatic metastasis, in order to evaluate the influence of vascular growth and adhesion molecules in facilitation of distant metastasis. METHODOLOGY: We obtained materials from primary lesions of HCC with no extrahepatic metastasis (control group) and primary lesions and metastatic lesions with extrahepatic metastasis (metastasis group). Immunohistochemical staining was performed using anti-human CD44v3 monoclonal antibodies and anti-human VEGF ab-3 monoclonal antibodies. Although pathological parameters such as tumor size, differentiation, capsule formation, and vascular invasion were analyzed, there was no marked difference among the groups. RESULTS: Percentages of nodules with VEGF-positive tumor and sinusoidal cells were low in primary lesions of the control and metastasis groups, while high in metastatic lesions in the metastasis group. On the other hand, percentages of nodules with CD44-positive tumor and sinusoidal cells were low in primary lesions of the control group, while high in primary lesions and metastatic lesions of the metastasis group. CONCLUSIONS: The present study demonstrated that CD44 expression in primary lesions is related to a higher frequency of extrahepatic metastasis, suggesting that this is a clinicopathologically useful parameter in predicting the occurrence of distant metastasis.     

ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中的表达及意义

目的: 探讨干细胞标志物ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中表达的意义.方法: 应用免疫组化SP方法检测ABCG2在30例肝细胞性肝癌组织和8例癌旁肝硬化组织中的表达、分布, 并采用细胞免疫荧光技术检测ABCG2在两种肝癌细胞株HepG2、PLC/PRF/5中的表达, 采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例.结果: 免疫组化中, ABCG2阳性染色定位于癌细胞胞膜, 部分病例胞质也有分布. 免疫组化显示ABCG2在肝细胞性肝癌组织和癌旁肝硬化组织中的表达阳性率分别为63.33%(19/30)和25%(2/8). ABCG2蛋白在HepG2、PLC/PRF/5这两个肝癌细胞株中均有表达, HepG2中, ABCG2阳性染色定位于细胞胞质中, 而在PLC/PRF/5中, ABCG2阳性染色定位于细胞胞质和细胞膜上. PLC/PRF/5细胞株中, 通过流式细胞仪能检测出表达ABCG2的细胞( P<0.05), 而在HepG2细胞株中, 通过流式细胞仪不能检测出表达ABCG2的细胞.结论: ABCG2在肝细胞性肝癌的发生发展过程中可能起着非常重要的作用, 有可能成为临床治疗肝细胞性肝癌的分子靶标.     

不同分化肝癌细胞株中上皮细胞黏附分子、CD90及CD24的表达分析

目的 验证不同分化肝癌细胞株MHCC97L、MHCC97H和HCCLM3的恶性表型,并探索其中肿瘤干细胞表面标志分子CD90、上皮细胞黏附分子(EpCAM)及CD24的表达情况.方法 Transwell侵袭小室检测三种不同分化细胞株MHCC97L、MHCC97H和HCCLM3的侵袭能力,细胞计数试剂盒8检测三种不同分化细胞株对奥沙利铂的敏感性,流式细胞仪检测肿瘤干细胞表面标志分子CD90、EpCAM、CD24在三种细胞株中的表达情况.多个样本均数比较采用方差分析. 结果 MHCC97L、MHCC97H和HCCLM3三种细胞穿膜细胞数存在明显差异,HCCLM3(30.57±8.95)个＞MHCC97H (21.33±4.17)个＞HCC97L (9.33±3.85)个,F=38.484,P＜ 0.01.对奥沙利铂的半数抑制浓度IC50 HCCLM3为(36.57±6.95)μmol/L,MHCC97H (26.35±3.88) μmol/L,MHCC97L (17.68±3.25) μmol/L,F=40.181,P＜0.01. CD90在MHCC97L、MHCC97H和HCCLM3细胞中的表达比例分别为0.92％±0.21％、1.98％±0.23％和2.55％±0.34％,差异有统计学意义(F=60.481,P＜0.01);EpCAM在三种细胞中的表达比例分别为2.11％±0.32％、3.23％±0.18％和4.38％±0.49％,表达差异也有统计学意义(F=84.800,P＜0.01);CD24在三种细胞中的表达比例分别为0.68％±0.37％、1.22％±0.26％和1.36％±0.24％,表达差异有统计学意义(F=15.677,P＜0.01).结论 分化越低的肝癌细胞株侵袭能力越强,对化疗敏感性越差,其中的肝癌干细胞比例则越高.     

Expression of CD44,CD24 and ESA in pancreatic adenocarcinoma cell lines varies with local microenvironment

BACKGROUND:Emerging evidence suggests that pancreatic adenocarcinoma is hierarchically organized and sustained by pancreatic cancer stem cells.Furthermore,elimination of these cells is possible and therapeutically relevant.This study aimed to investigate the expression patterns of pancreatic cancer stem cell surface markers CD44,CD24 and ESA in pancreatic adenocarcinoma cell lines and explore the influence of their local microenvironment.METHODS:Flow cytometry was used to analyze the expression patterns of ...