大鼠延髓内含前—原脑啡肽mRNA,甲硫氨酸—脑啡肽和亮氨酸—脑啡肽神…

应用原位杂交和免疫组织化学方法，对成年大鼠延髓内含前－原脑啡肽（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ和甲硫氨酸－脑啡肽（Ｍ－ＥＮＫ）与亮氨酸－脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）免疫反应神经元进行观察。结果表明：含ＰＰＥｍＲＮＡ的神经元胞体，多数分布在孤束核、腹外侧压以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。Ｍ－ＥＮＫ与Ｌ－ＥＮＫ样免疫反应阳性结构（神经元胞体、纤维和终末）也主要密集分布在该带内。本结果对ＥＮＫ     

大鼠伏核内5-羟色胺样和甲硫氨酸-脑啡肽样免疫反应阳性结构的观察

本文借助免疫组织化学技术,在光镜和电镜水平观察了大鼠伏核内5-羟色胺(5-HT)样和甲硫氨酸-脑啡肽(Met-ENK)样免疫反应阳性结构的分布。光镜观察:5-HT样免疫反应阳性的纤维和终末可见于伏核不同平面的各亚区,但内侧区和腹侧区的明显地多于背侧区和外侧区,尾段的阳性纤维多于吻段。根据伏核内5-HT样纤维的直径、行径和膨体的数量,可将其分为粗纤维、中等粗细纤维和细纤维3种,此3种纤维的区分以内侧区和腹侧区较明显。未见5-HT样阳性胞体。Met-ENK样免疫反应阳性的胞体仅见于腹侧区和内侧区腹侧部,少量散在分布。Met-ENK样阳性纤维和终末也主要分布于内侧区和腹侧区,外侧区和背侧区较少。Met-ENK样阳性纤维均属细纤维,行径弯曲,外观呈绒毛状。Met-ENK样阳性胞体、纤维和终末在吻尾方向上的分布无明显差异。电镜观察:5-HT样阳性轴突终末与阴性树突形成对称和非对称型轴树突触;Met-ENK样阳性树突与阴性轴突终末形成对称和非对称型轴-树突触。上述突触多见于内侧区和腹侧区。     

胰岛淀粉样多肽和甲硫氨酸-脑啡肽在家兔和大鼠背根神经节细胞内共存的免疫组织化学研究

为进一步探讨背根神经节细胞间生物活性物质内的关系，用免疫组织化学ＡＢＣ法，观察到家兔和大鼠背根神经节细胞内有胰岛淀粉样多肽免疫反应。用相邻镜像邻片免疫双标记技术，证实甲硫氨酸－脑啡肽免疫反应的细胞内同时含有胰岛淀粉样多肽免疫反应物质。胰岛淀粉样多肽与甲硫氨酸－脑啡肽在哺乳类动物背根神经节细胞内的共存结果，为进一步探讨背根神经节细胞内生物活性物质间的关系提供了形态学证据，并为胰岛淀粉样多肽的胰腺外研究提供了新的资料。     

大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区5-羟色胺样、P物质样和亮氨酸-脑啡肽样免疫反应阳性亚微结构的电镜观察

本文用免疫电镜技术研究了大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区内5-HT样、SP样和L-ENK样的免疫反应阳性亚微结构。5-HT样免疫反应阳性的胞体较多,常见5-HT样阳性树突与阴性轴突终末形成多为非对称性的轴-树突触;偶见阳性轴突终末与阴性树突以及阴性轴突终末与阳性胞体分别构成轴-树和轴-体突触.SP样阳性胞体数目较少,可见少量含多形性小泡的阴性轴突终末与之形成轴-体突触;由阴性轴突终末与阳性树突所形成的轴-树突触最常见;阳性轴突终末与阴性胞体和阳性树突分别构成轴-体突触和轴-树突触。L-ENK样阳性胞体数目也较少,L-ENK样阳性树突与阴性轴突终末所形成的轴-树突触最多见,可见L-ENK样阳性胞体与阴性轴突终末构成轴-体突触;偶见阳性轴突终末与阴性树突形成轴-树突触。上述各种突触均主要含圆形小泡,有时有少量扁平小泡、椭圆形小泡和颗粒囊泡。     

猫延髓吻侧腹外侧区5-羟色胺、苯乙醇胺氮位甲基转移酶、P物质和亮氨酸-脑啡肽免疫反应神经元的分布

用免疫组织化学ABC技术,观察了猫延髓吻侧腹外侧区(RVL)5-羟色胺(5-HT)、苯乙醇胺氮位甲基转移酶(PNMT)、P物质(SP)、亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元的分布,并用免疫荧光组织化学法结合荧光素逆行追踪法初步研究了RVL内5-HT、SP、L-ENK免疫反应神经元向胸髓的投射。结果表明:4种物质的免疫反应神经元主要分布在旁巨细胞外侧核的尾侧部和外侧网状核的吻侧部。SP阳性细胞还见于疑核腹外侧紧邻的网状结构中。有的5-HT、SP和L-ENK阳性细胞位于紧靠软脑膜的区域。在RVL的大部分区域,4种物质的免疫反应细胞呈重叠分布。在斜方体尾侧1.0～3.5mm平面,距中线约3.3mm,距腹面约0.8mm的区域,5-HT、PNMT和L-ENK阳性神经元均聚集成团,突起相互交织,在吻尾方向上各自形成长短不一的连续细胞柱。这3条细胞柱在斜方体尾侧1.5～2.5mm平面几乎完全重合。RVL部分5-HT、SP和L-ENK神经元发出纤维投射至胸髓。本文还就上述物质在此区的功能意义进行了讨论。     

亮氨酸脑啡肽样和P物质样免疫反应物在大鼠延髓迷走神经背核簇和网状结构内的分布

用PAP法研究亮氨酸脑啡肽样(L—ENK—LI)和P物质样(SP—LI)免疫反应物在大鼠延髓迷走神经背核簇和网状结构内的分布。证明在孤束核、迷走神经背核、外侧网状核外侧部及其外侧的区域内有大量的L-ENK样终末和纤维,在背侧和腹侧网状核之间的移行区内有中等量的分布,其余区内为少量。L-ENK样胞体在孤束核、咀侧腹外侧网状核、巨细胞网状核的腹侧部和α部、外侧旁巨细胞核以及中缝大核内均有许多分布,在迷走神经背核的尾侧部、背侧和腹侧网状核之间的移行区有中等量,其余区内为少量。SP样反应物的分布与L-ENK样物类似,但其终末和纤维的数量较L-ENK者略少,阳性胞体的数量除了在中缝核及外侧旁巨细胞核内侧端中的量较L-ENK样胞体多以外,在其余区内均较少。     

大鼠延髓背角内5-羟色胺、脑啡肽、γ-氨基丁酸、甘氨酸或P-物质能终末与钙结合蛋白阳性神经元间的联系

CB(calbindin-D28k),CR(calretinin)和PV(parvalbumin)是最常见的3种钙结合蛋白(calcium-binding proteins,CaBPs)。本研究首先观察了面口部给予伤害性刺激诱发大鼠延髓背角(又称三叉神经脊束核尾侧亚核)神经元表达FOS蛋白的状况;然后通过免疫荧光组织化学技术检测这些神经元内是否含有CaBPs(CB、CR和PV);最后通过免疫荧光和免疫电镜染色技术观察5-HT、GABA、甘氨酸转运体2(glycine transporter 2,GlyT2)、脑啡肽(enkephalin,ENK)或SP与CaBPs/FOS双标神经元间的联系。在光镜下可观察到:(1) FOS阳性神经元在延髓背角各层均有分布,以Ⅱ层最为密集;(2)大多数CB、CR或PV阳性神经元位于Ⅱ层,余者分布在Ⅰ层和Ⅲ层;(3) 5-HT、GABA、GlyT2,ENK及SP阳性纤维和终末主要位于延髓背角浅层(4)部分FOS阳性神经元同时呈CB、CR或PV阳性;(5) 5-HT、GABA、GlyT2或ENK阳性终末分别与FOS/CB、FOS/CR或FOS/PV双标神经元形成密切接触;(6) SP阳性终末与5-HT、GABA、GlyT2或ENK阳性终末同时与CB、CR或PV阳性神经元形成密切接触。在电镜下观察到5-HT、GABA、GlyT2或ENK阳性终末与CB、CR或PV阳性神经元主要形成对称型(抑制性)突触联系。这些结果提示在大鼠延髓背角,5-HT、GABA、甘氨酸或ENK可能通过抑制含钙结合蛋白的伤害性感受神经元来调节面口部伤害性信息的传递。     

大鼠下丘脑内前阿黑皮素原mRNA的老年变化

研究大鼠下丘脑内前阿黑皮素原（POMC）mRNA表达的老年变化，本实验采用SPraque－Dawley大鼠3月龄（青年组）和28～30月龄（老年组）各8只，利用地高辛标记POMC反义RNA探针进行原位杂交组织化学并行图象定量分析。结果：在青年组大鼠肉，OPMCmRNA阳性胞体主要分布于弓状核及其邻近区域；老年大鼠POMCmRNA胞体主要分布于弓状核的内侧，着色浅谈．与年轻大鼠相比，老年大鼠下丘脑内POMCmRNA神经元数量显著减少，（P＜0．01），胞体灰度值明显升高（P＜0．05），而胞体截面积略有增大，但差异无显著性（P＞0．05）。结果表明，大鼠下丘脑内POMCInRNA神经元有明显的老年变化，提示老年大鼠下丘脑POMC神经元胞体发生了衰老形态学改变，功能活动低下，细胞丢失，POMC的表达显著增加，生物合成功能紊乱。     

大鼠下丘脑催产素及加压素样神经元与脑啡肽样传入纤维末梢的关系

用免疫组织化学ABC双标记法,显示大鼠下丘脑各大细胞神经分泌核团中催产素样免疫反应(OT-li)、加压素样免疫反应(VP-li)神经元、亮-脑啡肽样免疫反应(L-ENK-li)和甲-脑啡肽样免疫反应(M-ENK-li)纤维末梢,并对不同神经分泌核团内脑啡肽样传入纤维末梢与OT-li及VP-li神经元的关系加以分析。结果发现,L-ENK-li及M-ENK-li纤维末梢在下丘脑各神经分泌核团中,与OT-li及VP-li神经元均有一定程度的接触关系。L-ENK-li与M-ENK-li纤维末梢在第三脑室周、前连合核、背内侧和背外侧副核、穹窿前和后核的OT-li及VP-li神经元周围最密集,在视上核、室旁核次之,在血管周细胞群内的OT-li及VP-li神经元周围密度较低。这些神经分泌性核团内L-ENK-li纤维末梢,均较M-ENK-li纤维末梢密集。表明脑啡肽能传入纤维末梢,与视上核、室旁核及各神经分泌副核(除血管周细胞群外)中的OT-li及VP-li神经元,均有不同程度的接触关系。因此,脑啡肽能传入纤维末梢可能在大细胞神经分泌系统OT-li及VP-li神经元分泌活动的调节中,起较广泛的重要作用。     

亮氨酸-脑啡肽样成分在人胎儿和新生儿脊髓的分布及在发育过程中的变化——免疫组织化学研究

用PAP和ABC法,观察了亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)样免疫反应成分在52例胎龄为8-39周的人胎儿和2例新生儿脊髓的分布状况,并通过显微分光光度计对分布密度进行了量的变化的分析。L-ENK样阳性细胞在后角浅层始现于第16周胎儿,以后细胞数量随胎龄增长而逐渐增多,至第6个月达到高峰,此后却随胎龄增长而渐减,至降生前后已降至很少,即在胚胎发育过程中显示着“少—多—少”的变化规律。Ⅳ-Ⅶ层L-ENK样细胞出现略早(第14周),但数量很少且变化甚微,至第7个月以后,仅偶见散在的L-ENK样阳性细胞。L-ENK样阳性纤维和终末在后角浅层也始见于第16周胎儿,随胎龄增长而持续增多,至降生前后达到密和极密的程度。Ⅵ层内侧部(骶髓为后连合核)、Ⅶ层、网状核及其桕邻的侧索白质,L-ENK样纤维和终末从第14周开始出现,直至降生前后一直保持中等至密布的分布状态。     

内脏伤害性刺激诱导的大鼠延髓内Fos表达

用抗Ｆｏｓ蛋白和酷氨酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学方法，对大鼠两种内脏伤害性刺激诱导的大鼠延髓Ｆｏｓ表达情况及其与儿茶酚胺能神经元的关系进行了观察。提示延髓内脏带半数以上的儿茶酚胺神经元参与对内脏伤害性刺激的反应。     

伽玛刀不同剂量照射正常大鼠一侧尾壳核后延髓内Fos蛋白的表达及变化

目的 观察γ－刀不同剂量照射正常大鼠一侧尾壳核后３个月,远离靶区的延髓中尾段内Ｆｏｓ的表达和变化及与剂量的关系。方法 分别用１０Ｇｙ至１００Ｇy１０个级别剂量照 射大 侧尾壳核,３个月后,用ＡＢＣ法对延髓中尾段切片进行抗Ｆｏｓ蛋白的免疫组织化学反应。结果 在延髓内脏带、三叉神经尾侧亚核、三叉神间质核、延髓背侧网状核和下橄榄核等处出现多少不等的Ｆｏｓ阳性细胞：胞核阳性、胞浆阴性;胞浆阳性、胞服性;胞核     

大鼠背海马内生长抑素mRNA神经元的老年变化

采用原位杂交组织化学及图像定量分析法，研究了大鼠背海马中生长抑素（ＳＳ）ｍＲＮＡ神经细胞的老年变化。年轻大鼠内，ＳＳｍＲＮＡ胞体主要分布于ＣＡ１和ＣＡ２区的锥体层和多形层、ＣＡ３区的辐状层和多形层，以及齿状回的多形层。老年大鼠内，ＳＳｍＲＮＡ胞体则主要集中于背海马的多形层。和年轻大鼠相比，老年大鼠背海马内ＳＳｍＲＡＮ胞体数量显著减少，胞体灰度值明显升高，而胞体截面积无明显年龄变化。结果表明，大鼠背     

大鼠延髓内神经激肽B受体神经元对腹膜伤害性刺激的Fos表达——免疫组织化学双重染色研究

为探讨神经激肽Ｂ受体（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎｂｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＮＫＲ）神经元在大鼠延髓的定位及其在腹膜伤害性传入信息整合中的作用。应用免疫组织化学双重染色方法，显示ＮＫＲ神经元的分布并观察它们对腹膜化学伤害性刺激的Ｆｏｓ表达。结果表明：ＮＫＲ样免疫反应（ＮＫＲ－ＬＩ）神经元主要分布在孤束核（Ｓｏｌ）、延髓腹外侧区（ＶＬＭ）、三叉神经脊束核尾侧亚核（Ｓｐ５Ｃ）浅层和三叉旁核（Ｐａ５）。腹膜伤害性刺激激诱导的Ｆｏｓ表达神经元多数分布在Ｓｏｌ、ＶＬＭ、Ｐａ５和最后区。Ｓｏｌ、ＶＬＭ和Ｐａ５中约３０．１％的ＮＫＲ－ＬＩ神经元同时呈Ｆｏｓ样免疫反应。本研究提示：延髓内上述核团ＮＫＲ－ＬＩ神经元与腹膜伤害性初级传入信息的整合有关，可能参与内脏伤害性刺激的抗伤害性感受（ａｎｔｉ－ｎｏｃｅｃｉｐｔｉｏｎ）过程。     

肾母细胞瘤过度表达基因mRNA在大鼠中枢神经系统的原位杂交定位

为了了解肾母细胞瘤过度表达基因（ＮＯＶ）ｍＲＮＡ在中枢神经系统的定位，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针原位杂交组织化学方法，研究了ＮＯＶ原癌基因ｍＲＮＡ在成年大鼠中枢神经系统的分布。结果显示，在颞叶、听区、梨状前皮质、纹状皮质、海马复合体、杏仁基内侧核、杏仁皮质核、杏仁内侧核、杏仁外侧核、丘脑腹后内侧核、丘脑腹后外侧核、丘脑外侧背核、下丘脑腹内侧核、下丘脑背侧核、下丘脑背内侧核、下丘脑弓状核、脑桥面神经核、脑桥网状结构、前庭神经外侧核、前庭神经上核、脊髓前角均有较多ＮＯＶｍＲＮＡ阳性神经元分布，提示ＮＯＶ原癌基因在大鼠中枢神经系统内可能起重要作用     

大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应

目的探讨大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应,及反应性星形胶质细胞和反应性神经元之间的关系.方法成年雄性SD大鼠,实验组（n=17）给予三硝基苯磺酸（TNBS）灌肠诱导结肠炎;对照组（n=16）给予生理盐水灌肠.免疫组织化学法显示大鼠腰骶髓和延髓内胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性星形胶质细胞和Fos阳性神经元.结果TNBS灌肠后,GFAP阳性星形胶质细胞主要分布在脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）、中间外侧核（Ⅴ层）、后连合核（Ⅹ层）和腹角外侧核（Ⅸ层）.Fos阳性神经元集中分布在背角深层（Ⅲ～Ⅳ,Ⅴ～Ⅵ层）.在延髓,两者均主要分布在由孤束核、中间网状带和腹外侧区组成的延髓内脏带（MVZ）.TNBS灌肠后3、7、14 d,脊髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组（P＜0.05）.TNBS灌肠后3 d,延髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组（P＜0.05）.TNBS灌肠后28 d,脊髓和延髓中GFAP阳性细胞密度下降,与对照组无显著性差异（P＞0.05）.结论结肠炎性刺激引起脊髓和延髓中星形胶质细胞激活.随着结肠炎的恢复,星形胶质细胞的反应性下降.在延髓内脏带,反应性星形胶质细胞与反应性神经元关系密切.     

Noggin在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达

目的 研究Noggin基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达。方法 地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术。结果 ISHH结果显示，在胚胎期(E16)大鼠，noggin mRNA阳性细胞主要位于大脑皮质、海马、丘脑与下丘脑的部分核团。新生期(P1-P2)大鼠，noggin在大脑皮质与海马的表达均降低，而在丘脑与延脑的表达增强；生后1周(P1W)noggin在脑内的表达明显降低，生后2周noggin在脑内的表达开始升高，在大脑皮质与海马升高尤为明显。生后1个月，noggin表达继续升高，在额叶皮质、顶叶皮质、扣带皮质、梨状皮质及海马的齿状回可检测到强阳性信号；而在丘脑的侧核、网状核、腹内侧核与腹外侧核可见中等强度的阳性信号。此外，在下丘脑的室旁核和视上核亦可见密集深染的阳性神经元。生后3个月，noggin阳性细胞在脑内的表达开始降低；生后18个月，noggin表达降至最低，仅见散在的阳性神经元。此外，在不同发育期大鼠的脊髓亦未观察到noggin mRNA阳性细胞。结论 提示noggin基因参与大鼠生后CNS的发育。     

大鼠胃窦部胃泌素和生长抑素mRNA及其相关蛋白表达的研究

为探讨大鼠胃窦部胃泌素ｍＲＮＡ和生长抑素ｍＲＮＡ在Ｇ、Ｄ细胞的转录及其相关蛋白的表达，用免疫细胞化学和原位杂交技术，检测了大鼠胃窦部Ｇ细胞内的胃泌素和Ｄ细胞内的生长抑素以及它们相应的ｍＲＮＡ。结果显示，大鼠胃窦部的Ｇ、Ｄ细胞位于幽门腺基部，细胞分布不均，单个或多个在一起；胃泌素和生长抑素均匀地分布于胞质内，核内阴性；Ｇ／Ｄ细胞比值在１．３±０．３２～１．５５±０．７５之间，即Ｇ细胞多于Ｄ细胞。ｍＲＮＡ信号染色强度细胞间有差异，呈极性分布，多位于核周或核上胞质内。ｍＲＮＡ阳性细胞数在单位面积内少于Ｇ、Ｄ免疫组织化学显示阳性细胞数，原因可能是由于多聚甲醛的固定对ｍＲＮＡ的降解，降低了ｍＲＮＡ的活性，从而导致某些Ｇ、Ｄ细胞内ｍＲＮＡ不能被检出。该法具有安全、省时、定位准确等优点，适合一般实验室和临床诊断需要     

骨形成蛋白4在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达

目的 研究骨形成蛋白4(BMP4)基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达。方法 地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术。结果 在E16大鼠，BMP4主要在小脑与嗅球呈强阳性表达。在P1—2大鼠，BMP4 mRNA在延脑的舌下神经核呈强阳性信号，在三叉神经脊束核、脊髓小脑束可见部分BMP4 mRNA阳性细胞。在P1周大鼠，额叶皮层、枕叶皮层与海马的前下托可见较强的阳性信号。生后1个月，海马与皮层BMP4的表达达到生后的峰值。此时BMP4在颞叶皮层与杏仁周皮质呈强阳性表达。生后3个月，BMP4在大鼠CNS有广泛表达，其中在海马、颞叶皮层、杏仁周皮质、丘脑侧核与下丘脑的室旁核均可见强阳性信号，而生后18个月大鼠的皮质、海马、丘脑、下丘脑仍可见一定数目的阳性神经元。结论 提示BMP4对新生期和成年期大鼠CNS的发育起重要作用。