细胞原位PCR方法用于异性别骨髓移植植入验证

为监测异性别骨髓移植（BMT）治疗某些血液系统疾病和遗传性疾病的植入状态，利用人Y染色体特异性片段扩增引物Y3、Y4，采用非放射性核苷类似物Dig－11－dUTP直接掺入法，对2例急性粒细胞性白细胞进行原位聚合酶链反应（insituPCR）。在显微镜下观察，Y染色体阳性细胞内显示有一深蓝色信号班点，以此识别供者源细胞。1例患者BMT后＋14天供者源细胞占37％，另1例＋28天时供者源细胞达96．53％，均获得植活证据。该方法简便快速，灵敏度高，只需计数大约200个细胞，一般在检查次日即可获得结果。     

细胞原位聚合酶链反应用于异性别骨髓移植植入验证

细胞原位聚合酶链反应用于异性别骨髓移植植入验证周东风张锡元李立家崔国惠樊丽华异基因骨髓移植（ＢＭＴ）是治疗某些血液系统疾病和遗传性疾病的有效方法。移植成功的重要指标之一是受者体内查到供者源细胞。传统植活证据如红、白细胞表面抗原、同功酶谱、同种异型免疫...     

以PCR方法检测中枢神经系统微量白血病细胞的临床意义

中枢神经系统白血病(CNSL)是影响小儿白血病长期生存的重要原因之一。但是在CNSL的早期,脑脊液中的白血病细胞数量很少不易被查到或经化疗后白血病细胞形态发生改变致分辨困难,使得常规脑脊液化验不能敏感地、特异性地检测出微量白血病细胞。我们采用PCR技术在体外扩增白血病细胞IgHCDR-和TCRr基因重排序列,可以敏感地、特异性地检测到急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿脑脊液中微量白血病细胞。共检测108份脑脊液标本(来自38例ALL患儿),其中IgHCDR-阳性24份(14例ALL患者儿),其中3份脑脊液标本同时伴TCRr阳性。有4例ALL患儿先于常规检测出现阳性结果,有8例与常规检测同时出现阳性结果,另2例只有PCR阳性给以CNSL预防治疗后PCR阴转     

应用半重叠TCRγ特异性引物的PCR方法检测淋巴细胞白血病

彩更加敏感的半重叠式ＴＣＲγ特异性引物的ＰＣＲ方法，对２８例ＡＬＬ初治、ＣＲ及ＢＭＴ患儿进行检测，并用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行ＤＮＡ提取，将ＰＣＲ结果进行比较。结果表明：消化煮沸法用于微量标本的ＤＮＡ提取优于酚抽提法，２８例ＡＬＬ患儿中１６例检出ＴＣＲγ特异性条带，ＭＲＤ组１８例，阳性检出１２例，其中免疫分型标记为Ｂ细胞型的４例，占２５％，免疫标记为Ｔ细胞型者全部出现ＴＣＲγ阳性条     

荧光定量PCR方法检测婴儿尿液中人类巨细胞病毒基因的含量

目的探讨FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA含量对于临床症状性HCMV感染的诊断价值,同时,比较FQ-PCR方法与定性PCR方法的敏感性.方法应用双标探针水解的FQ-PCR方法检测89例临床怀疑有巨细胞病毒感染患儿(病例组)尿液中的HCMV-DNA拷贝数,并以82例同年龄组健康婴儿做对照,比较两组阳性标本中HCMV-DNA含量.同时,在两组中随机选取94例(其中疑诊为HCMV感染的56例,健康儿38例),用FQ-PCR方法与普通定性PCR方法共同检测进行比较.结果病例组阳性52例,称为症状性感染组,对照组阳性30例,称为无症状性感染组.症状性感染组52例,尿液HCMV-DNA拷贝数对数值(log10X)在3.81-9.93,平均为5.30;无症状性感染组30例,尿液中HCMV-DNA拷贝数对数值在2.70-4.60,平均为3.46,两组均值差异有显著性(T=8.09,P＜0.01),拷贝数大于105拷贝/mL高度预示症状性HCMV感染.FQ-PCR方法阳性率为60.64%(57/94),定性PCR方法阳性率32.98%(31/94),两方法一致率70.21%(χ2=25.30>6.63,P＜0.01),FQ-PCR方法优于定性PCR方法(χ2=23.32>6.63,P＜0.01).结论婴儿尿液中HCMV-DNA拷贝数与临床症状性HCMV感染密切相关,FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA量可以作为临床诊断HCMV症状性感染的一种快速、有效的实验室方法.     

ALA-PDT对急性淋巴细胞白血病小鼠同种异基因骨髓移植后 GVHD和GVL的影响

目的探讨5-氨基乙酰丙酸-光动力疗法(5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy,ALA-PDT)在急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠骨髓移植后对移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病作用(GVL)的影响。方法以ALL小鼠为模型,经致死剂量60Co照射后,对其进行同种异基因骨髓移植的同时,静脉输注经ALA-PDT处理的供受鼠混合淋巴细胞,同时设立骨髓细胞加脾细胞移植对照组及空白对照组。观察骨髓移植后受鼠的一般情况、30 d生存率、造血功能恢复情况以及肝脏等组织的病理学改变。结果ALA-PDT处理组小鼠30 d生存率明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.01);其造血功能恢复情况及GVHD反应均较其他各组有所改善。结论ALA-PDT能明显减轻小鼠骨髓移植后GVHD反应,并保留一定的GVL作用。