RNA干扰研究进展

RNA干扰(RNAi)现象是一种在进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。它已在许多不同种属的生物体中被发现,并在生物体细胞之间进行传递,具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作用,RNAi技术不仅能大大推进人类后基因组计划的发展,还能高通量地筛选药物靶基因,促进基因治疗、新药开发等,为治疗癌症、遗传病等疾病开辟新的途径。RNAi的研究与应用具有极其重要的理论和实际意义,将对医学生物学的发展产生深远的影响。     

RNA干扰技术:白血病基因治疗的新途径

RNA干扰(RNAi)是双链RNA特异抑制靶基因表达的转录后基因沉默机制,它为白血病的 基因治疗开辟了一条新途径。本文就此技术在白血病基因治疗中的应用进行综述。     

RNA干扰技术用于基因治疗的研究现状和应用前景

随着人类基因组计划的完成,基因表达和调控等功能研究成为生物医学研究的主要内容。利用同源重组原理的基因敲除(knockout)技术使基因功能研究取得了重要进展,但其本身存在胚胎致死性的限制,而且不适用于人类的基因功能研究[1 ] 。利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)原理的基因拆卸(knockdown)技术能够克服基因敲除技术的局限性,已经成为研究基因功能的更有效方法,并且RNAi技术具有高效性和特异性,极有可能发展成为特异性治疗手段[2 ] 。现介绍RNAi技术用于白血病等肿瘤性疾病和病毒感染等基因治疗的研究现状和应用前景。1　RNAi技…     

RNA干扰研究进展

RNA干扰(RNAi)现象是一种在进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制，是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。它已在许多不同种属的生物体中被发现，并在生物体细胞之间进行传递，具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作用，RNAi技术不仅能大大推进人类后基因组计划的发展，还能高通量地筛选药物靶基因，促进基因治疗、新药开发等，为治疗癌症、遗传病等疾病开辟新的途径。RNAi的研究与应用具有极其重要的理论和实际意义，将对医学生物学的发展产生深远的影响。     

小干扰RNA:抗病毒、抗肿瘤的新途径

小干扰RNA是一种依赖Dicer酶的长度为21~23nt的双链RNA,它具有很强的基因关闭功能,能够介导RNA干扰作用,降解特定的靶mRNA,在基因功能分析领域发挥了重要的作用,近年在抗病毒、抗肿瘤方面又成为国内、外研究的一大热点,为临床病毒感染和肿瘤疾病的防治提供了新途径。     

RNA干扰技术：白血病基因治疗的新途径

RNA干扰(RNAi)是双链RNA特异抑制靶基因表达的转录后基因沉默机制，它为白血病的基因治疗开辟了一条新途径。本文就此技术在白血病基因治疗中的应用进行综述。     

RNA干扰技术的研究进展

RNA干扰(RNAi)指由ds RNA或si RNA诱发的转录后基因沉默现象,其机制是通过与靶序列特定位点互补配对,通过阻碍靶基因的翻译或者诱导m RNA降解来抑制基因表达,是一项高效率、强特异性的基因沉默技术。RNAi技术不仅在基础研究方面成为基因功能和蛋白功能研究的工具,也广泛的应用于临床研究,在肿瘤、病毒性疾病以及其他疾病的治疗方面显示了广阔的前景。     

RNA干扰的研究进展及其应用

RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)现象，它可以通过使mRNA发生降解而抑制蛋白表达。在RNAi过程中，外源的双链RNA在体内会被切割成小片段，合成新的小干扰RNA(siRNA)。近年来RNAi的作用机制假说正被逐步修正。从利用体外合成双链RNA，到通过质粒稳定表达siRNA诱发RNAi现象，这项技术正不断完善，并被广泛应用。由于RNAi技术的高效性和特异性，它已经成为基因功能研究的一种新方法，并展现出广阔的前景。     

RNA干扰的研究进展及其应用

RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)现象,它可以通过使mRNA发生降解而抑制蛋白表达。在RNAi过程中,外源的双链RNA在体内会被切割成小片段,合成新的小干扰RNA(si RNA)。近年来RNAi的作用机制假说正被逐步修正。从利用体外合成双链RNA,到通过质粒稳定表达si RNA诱发RNAi现象,这项技术正不断完善,并被广泛应用。由于RNAi技术的高效性和特异性,它已经成为基因功能研究的一种新方法,并展现出广阔的前景。     

RNA干扰应用于人类疾病研究中的进展

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是一种新兴的基因阻断技术,它通过双链RNA分子的介导,特异降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默,自1998年首次报道以来已取得了重大研究进展。迄今,在果蝇、线虫、锥虫及一些哺乳动物中都相继发现存在RNAi现象,提示其具有进化保守性。近8年来,研究者对RNAi现象进行了广泛、深入的探索研究,预示RNAi有望成为今后分析人类基因功能的有力工具,并将在人类疾病的基因表达显像和治疗方面发挥重要作用。     

RNA干扰的研究进展及其应用

RNA干扰 (RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi现象在各种生物中的普遍性引起了人们浓厚的兴趣。现对近年来RNAi的研究进展、作用机制及其应用进行评述     

RNA干扰作用的机制及在治疗消化系统疾病中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为基因转录后沉默的一种方式,是生物界古老而且进化的高度保守的现象之一。此干扰机制可在转录、转录后和翻译水平上实现,Argonaute在其中扮演了一个重要的角色。1RNAi的发生机制据目前研究,RNAi主要和两类小RNA有关,小干扰RNA(small interfer     

RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究

本研究运用RNA干扰（RNAi）技术将内皮细胞MMP-2进行基因沉默，揭示MMP-2在内皮细胞增殖、迁移、侵袭、血管形成以及细胞周期等方面的作用。采用脂质体法将MMP-2小干扰RNA（siRNA）转化内皮细胞EAhy926，通过RT—PCR及流式细胞术分别在基因和蛋白水平验证转化的效率。应用MTT比色法测定经MMP-2siRNA干扰不同时间EAhy926细胞的增殖能力；虎红染色测定光密度法观察干扰48小时后内皮细胞在两种趋化因子作用下的迁移及侵袭能力的变化；Matrigel胶三维培养法观察干扰48小时后内皮细胞血管形成能力的改变；流式细胞术及半定量RT—PCR法测定内皮细胞周期和相关基因的变化。结果表明：干扰因素施加后48小时MMP-2基因表达水平降低至谷底，较正常对照下降约82％；流式细胞术分析表明，干扰因素施加后60小时MMP-2蛋白表达水平降低至谷底，较对照下降约60％。旧法检测显示干扰前后内皮细胞增殖无明显变化。内皮细胞经MMP-2siRNA干扰48小时后在两种趋化因子作用下的迁移能力均受到抑制，且对COLⅣ的抑制作用强于Fn（Fn未干扰组0．581±0．012，干扰组0．261±0．002；COLⅣ未干扰组对干扰组为0．467±0．009vs0．110±0．010，P〈0．01）。侵袭实验也有相似的结果（Fn未干扰组对干扰组为0．365±0．012vs0．101±0．002；COLⅣ未干扰组对干扰组为0．317±0．009vs0．102±0．010，P〈0.01）。内皮细胞体外的血管形成能力在经siRNA干扰48小时后下降至正常的58．9％。内皮细胞经MMP-2siRNA干扰48小时及72小时后，有丝分裂后期细胞比例（G1）分别由对照组[（65．9±2．53）％；（63．2±1.89）％]上升至[（83．9±2．53）％，（89．2±1．24）％]（P〈0．01）；DNA复制期（S）和有丝分裂前期（G2）期细胞比例分别由对照组[（32．7±1．91）％，（37．1±2．65）％]下降至[（18．1±1.49）％，（10．2±0．     

RNA干扰在肿瘤治疗研究中的应用进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是一种生物进化过程中出现的高度保守现象。1998年Fire证实Guo等发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象是由于体外转录制备的RNA中污染了微量内源或外源双链RNA（double-stranded RNA,     

应用RNA干扰技术沉默vegfr-2基因的实验研究

为了探讨恶性肿瘤基因治疗的新靶点,本研究以vegfr-2的mRNA为靶点,设计、构建vegfr-2 shRNA的真核表达载体,用脂质体法将重组质粒转染人非小细胞肺癌A549细胞,用RT-PCR法及Western blot分别检测重组质粒对该基因mRNA和蛋白表达的抑制效果,应用CCK-8法检测细胞增殖、抑制情况,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学变化。结果表明:与空白对照、空质粒对照及scramble对照相比,干扰组shRNA能有效地降解vegfr-2mRNA,尤其转染pGenesil-1-vegfr-2-shRNA-1质粒组内源性vegfr-2 mRNA及蛋白减少更显著;在不同时间点转染干扰质粒组的A值均降低,转染后72小时抑制率最高,干扰组与空质粒组和空白对照组相比,对细胞生长抑制作用的差异有统计学意义(p0.01);Hoechst荧光染色显示,转染48小时后在荧光显微镜下干扰组细胞呈典型的细胞凋亡形态。结论:vegfr-2 shRNA真核表达载体可序列特异性下调A549细胞的基因转录和表达,有效抑制细胞增殖和诱导凋亡,提示VEGF/VEGFR-2信号通路可作为恶性肿瘤基因治疗和功能研究的理想靶点。     

Dose Optimization for Long-term rAAV-mediated RNA Interference in the Nigrostriatal Projection Neurons

Short-hairpin RNA (shRNA)–mediated gene knockdown is a powerful tool for targeted gene silencing and an emerging novel therapeutic strategy. Recent publications, however, reported unexpected toxicity after utilizing viral-mediated shRNA knockdown in vivo. Thus, it is currently unclear whether shRNA-mediated knockdown strategy can be used as a safe and efficient tool for gene silencing. In this study, we have generated rAAV vectors expressing shRNAs targeting the rat tyrosine hydroxylase (TH) mRNA (shTH) for testing the efficacy of in vivo TH knockdown in the nigral dopaminergic neurons. At high titers, not only the shTH vectors but also the scrambled and green fluorescence protein (GFP)–only controls caused cell death. In a dose–response study, we identified a dose window leading to >60% decrease in TH⁺ neurons without any change in vesicular monoamine transporter-2 (VMAT2) expression. Moreover, using the safe and efficient dose, we showed that dopamine (DA) synthesis rate was significantly reduced and this lead to emergence of motor deficits in the shTH-expressing rats. Interestingly, these animals showed very robust and long-lasting recovery after a single systemic L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) administration beyond what can be achieved in 6-hydroxydopamine (6-OHDA)–lesioned rats. Our results have implications for both mechanistic and therapeutic studies utilizing long-term shRNA-mediated gene silencing in the nigrostriatal projection system.     

RNAi技术研究进展及其基因治疗应用前景

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi现象在各种生物中的普遍性引起了人们浓厚的兴趣。RNAi可能将成为基因治疗的新途径。     

针对人c-Met基因的RNA干扰对晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人晶状体上皮细胞增殖的影响.方法 构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人晶状体上皮细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测细胞中c-Met mRNA的表达变化,应用MTT法检测HGF诱导后人晶状体上皮细胞增殖.结果 与对照组相比,转染后的人晶状体上皮细胞中c-Met mRNA表达水平明显下降(P《0.01);与单纯HGF诱导组相比,转染后HGF诱导的人晶状体上皮细胞生长明显减慢,增殖能力明显下降(P《0.01).结论 针对人c-Met基因的RNA干扰可以有效阻断人晶状体上皮细胞中c-Met mRNA的表达,并能抑制HGF诱导的人晶状体上皮细胞的增殖.