离体培养人肿瘤细胞和正常细胞对~3H-血卟啉衍生物的摄取和存留

用液闪计数测定经组织培养的6株人肿瘤(MGC 80-3、SGC-7901、BEL-7402、Os-732、Detroit-6和 HeLa)细胞及1株正常成纤维细胞对~3H-HPD 的摄取和存留。MGC 80-3和成纤维细胞的摄取量,在测定的24h 内,随温育时间延长而增加;温育30 min 换液,再培养30 min,血卟啉衍生物含量就明显减少,MGC 80-3和成纤维细胞分别只含原摄入量的32.01%和40.75%;但在以后的24h 内,维持在类似的水平上。7株细胞温育30min 摄入~3H-HPD 量,按多少顺序依次为成纤维细胞、HeLa、BEL-7402、Detroit-6、SGC-7901、MGC 80-3 及 Os-732;但是,培养24h 后,由于各株细胞排出量不同,~3H-HPD 存留率大小顺序为 Os-732、Detroit-6、BEL-7402、HeLa、SGC-7901,MGC 80-3 及成纤维细胞。环境因素对细胞摄取~3H-HPD 起重要作用,提高 pH 值、加入血清或降低温度都使摄入减少。本文结果提示,恶性组织比正常组织血卟啉衍生物含量高,不是因为恶性细胞摄入多,而是由于存留时间长,与体内实验结果一致,可供 HPD 光敏治疗恶性肿瘤作参考。     

介绍一种胃泌素细胞(G细胞)的免疫组织化学与离体培养放射自显影研究方法

研究细胞动力学,对于基础和临床医学均有重要意义,国外已将胃肠道细胞动力学作为胃肠疾病的基础理论研究课题之一。在胃肠内分泌细胞动力学研究方面,近年来已有报道,应用体内注射放射自显影术和免疫组织化学相结合的方法来研究胃泌素细胞,但应用离体培养放射自显影术,对G细胞的观察,还甚少见。本实验是将离体培养放射自显影术与免疫组织化学法相结合,来显示标记G细胞。方法步骤如下:1.体外单次脉冲标记:(1)在基本无菌操作下,取胃幽门窦粘膜组织块,长2-3mm、宽约1mm,放入5ml链霉素灭菌瓶内,瓶中含有2mlEagle液(PH7.2-7.4),液中加有~3H-TdR 4μCi和10%小牛血清;培养液中还加入两只搅拌棒。橡皮塞封盖,用铁丝环夹加固。通过橡皮盖向瓶内注入空气3ml,以便促进~3H—TdR参入DNA中。(2)于37℃—37.5℃,经磁力搅拌器低速搅拌;孵育1小时,培养完毕,抽出空气;启盖,吸去培养液,换用Hank盐     

人参总皂甙对肾上腺素能神经未梢递质释放的影响(摘要)

采用大鼠离体输精管制备研究了人参总皂甙对肾上腺素能神经末梢递质释放的影响.离桩输精管在Kreb's液中平衡30min.取出后用2ml含5uci[~3H]-7-NE37℃的Kreb's液再温孵30min让神经末梢充分摄取[~3H]-NE.然后用Kreb's液冲洗90min,进行实验.在整个实验过程中Kreb's液均通以足量的混合气(95%o_2,5%Co_2).     

培养液中血清的含量对原代兔婴肾细胞生长的影响

组织培养技术应用广泛,但是组织培养成本高,特别是小牛血清,即价格昂贵又日趋短缺。培养原代兔婴肾细胞通常用含10%小牛血清的199培养液,培养2天左右换液,4～7天长成单层细胞。我们在实践中观察到细胞贴壁和生长速度似乎与培养液中血清含量关系密切,特进行本实验,探索节省血清的培养方法。按常规取出兔婴双侧肾脏,将肾皮质组织放入10 ml小瓶中,剪成约1mm~3大小的碎块,加入0.25%胰酶-0.02%EDTA液,于37℃消化20～30分钟。然后倾去消化液,用Hank′s液洗一次,加2～3 m1培养液,以毛细吸管将碎块吹打成乳糜状,再加培养液至10ml,静置数分钟,待未吹散的组织块沉降后,收集上部的细胞悬液。按此方法重复2次后,弃去沉降物,将几次收集的细胞悬液混合均匀,计数。培养采用含15%小牛血清的199培养液,其中含100u/ml青霉素和10ug/m1的链霉素。用该生长液把混合均匀的细胞悬液稀释     

自然状态下绒毛细胞的增殖动力学

绒毛(CV)标本直接制备染色体通常有很少的分裂相,但过夜培养后可得到较好结果,说明绒毛经活检损伤和送到实验室后需要时间恢复。用特殊抗体染色技术了解胸苷类似物的掺入,测定BrdU摄入量,从而监测绒毛的增殖动力学。绒毛标本取自流产物,在含5%FCS的Chang氏培养液中培养。BrdU的用法有两种:(1)活检后直接用BrdU(0.03mM)连续处理,或在24小时后,收获前处理2～5小时;(2)活检后将等份标本按0、3、6和24小时加入BrdU(0.03mM)处理1小时,通过换液和过量胸苷(0.3mM)终止BrdU的作用。6和8小时后收获细胞,以保证至少已通过部分S期。免疫细胞     

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞合成胶原的影响

本实验采用胶原酶消化法分离、培养兔主动脉内皮细胞(EC)及平滑肌细胞(SMC),以[~3H]-脯氨酸掺入SMC合成的[~3H]-羟脯氨酸中的量作为测定胶原的指标,观察了兔主动脉内皮细胞条件培养液(EC-CM)对动脉SMC合成胶原的影响,结果发现融合的EC-CM能促进SMC的胶原合成,但SMC数无明显变化;1:2稀释的EC-CM促进SMC合成胶原的作用最大。可见EC通过促进SMC的胶原合成而参与了动脉粥样硬化过程。     

人肉瘤细胞对表皮生长因子的不敏感性

实验证明:培养液中加入最终浓度为每毫升6.5-26×10~(-2)微克的表皮生长因子(Epidermal growth factor),在体外与人纤维母细胞(JHU-2)共同温育5小时,可见其对~3H-脱氧胸苷的参入,有极为明显的促进作用。含有每毫升6.5×10~(-2)微克的表皮生长因子即具促进作用。含有每毫升26×10~(-2)微克表皮生长因子的实验组,其~3H-脱氧胸苷的参入活性(CPM=39254),几为     

淋巴因子诱导的细胞毒细胞活性检测的研究

本文通过正交设计试验,建立了一种改良的诱生及检测LICC细胞毒活性的培养体系。先将脾脏淋巴细胞(5×10~6/ml)在含有IL-2(0.5U/ml)、CCDF(50％V/V)RPMI1640培养液中预培养72小时,然后加入肿瘤细胞(5×10~4/ml),用~3H-TdR后标法检测LICC细胞毒活性,杀伤时间为72小时。     

应用MTT法测定IFN的生物活性效价

<正> 本文介绍一种MTT[3-(4,5二甲基噻唑-2-yl)-2,5-2苯基-四唑溴盐]染色法在测定IFN效价中的应用,结果表明,本法所需指示细胞数少,结果客观重复性好,操作方法简便。 在96孔或40孔细胞培养板上,将对照IFN和待测IFN进行倍比稀释,设细胞和病毒对照。每孔加入100μl 1.5～2×10~5/ml Hep-2细胞悬液,培养5～6小时后,每孔加入100μl 100个TCID_(50)VSV病毒攻击(细胞对照孔不加)。在终止培养前3～4小时,加入5mg/ml MTT 15μl/孔,混匀继续培养,3～4小时后,加入适量生理盐水,用滴管轻轻吹吸,弃去悬浮的病变细胞和死细胞,然后每孔加入200μl     

胸腺淋巴细胞被自身瘤细胞致敏后的淋转反应

<正> T淋巴细胞的功能首先是对相应靶子的正确识别。在其细胞表面呈现特异性受体,能识别并结合特定的细胞表面抗原。胸腺是T淋巴细胞发育的主要场所,它所产生的T淋巴细胞与自身肿瘤细胞接触而致敏,增强其增殖反应,反过来可以杀伤肿瘤细胞,癌症病人的外周血淋巴细胞在离体与肿瘤细胞混合培养后被致敏,经~3H—TdR掺入后,可测出淋巴细胞增殖反应提高,从而能杀伤肿瘤细胞,这对利用离体培养的免疫T淋巴细胞的免疫疗法治疗癌症病人有一定价值。本文用~3H-TdR掺入法测定小鼠胸     

CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

目的 :研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞 (Cytokine inducedkillcells ,CIK)对MGC 80 3胃癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法 :应用MTT法检测CIK细胞对MGC 80 3胃癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性 ;通过HE染色、扫描电镜和透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变 ;通过免疫细胞化学法测定p5 3、p16、C myc的阳性表达率。结果 :MTT比色法表明随着CIK细胞与胃癌细胞效靶比增加及作用时间延长 ,抑制率明显增强 (P <0 0 1)。CIK细胞作用于胃癌细胞 2 4小时后 ,形态学观察胃癌细胞发生凋亡或坏死。CIK实验组p5 3、p16、C myc蛋白随作用时间延长表达均下降 ,与对照组相比均有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外胃癌细胞的免疫活性细胞。其杀伤MGC 80 3胃癌细胞的作用机制之一可能是通过下调p5 3、C myc的蛋白表达。     

免疫小鼠脾脏RNA引起的免疫记忆参与细胞

本工作用体外抗体产生系统,研究了由免疫核糖核酸(iRNA)引起的、参与免疫记忆的T细胞与B细胞.实验动物采用8-12周龄的BALB/C小鼠及由BALB/C小鼠培育的裸鼠.抗原用10%绵羊红细胞(SRBC)或马红细胞(HRBC).取0.1ml抗原给小鼠作腹腔内注射,四周后再加强注射.免疫后五天将小鼠解剖,用改进Kidson法自小鼠脾脏提取iRNA.取500μgiRNA给小鼠作腹腔注射,四周后再加强注射.脾细胞的制备及试管内抗体形成的测定:在双玻皿内将小鼠脾脏切开,加入培养液制备成无菌的单个细胞悬液.在1ml RPMl1640培养液内计数脾细胞1×10~7,并加入青霉素G50U/ml、硫酸链霉素50μg/ml、硫烷醇(5×10~(-5)M),再补足20%胎     

细菌对苯噻唑力复霉素的耐药性与细菌膜屏障关系的研究(摘要)

苯噻唑力复霉素为力复霉素的一种新的衍生物。本文报告苯噻唑力复霉素的耐药性与细菌膜屏障的关系。材料和方法苯噻唑力复霉素由四川抗菌素研究所提供[~3H]-苯噻唑力复霉素由北京原子能研究所标记。金色葡萄球菌209P和大肠杆菌2281用普通营养肉汤培养。[~3H]-尿苷和[~3H]-苯噻唑力复霉素掺入细菌的量用玻纤滤纸液体闪烁计数法测定。     

小胶质细胞源性因子对培养星形胶质细胞的活化作用研究

目的和方法：本实验采用胶质细胞分离纯化培养、胶质原纤维酸性蛋白（glial fibric acidic protein,GFAP）表达的免疫荧光流式细胞仪检测及[³H]-TdR掺入等方法,观察离体条件下小胶质细胞条件培养液对星形胶质细胞增殖与GFAP表达的影响。结果：小胶质细胞条件培养液能明显促进培养星形胶质细胞的增殖和GFAP的表达。结论：小胶质细胞源性因子能刺激星形胶质细胞的活化,由此推测在体条件下小胶质细胞源性因子可能是引起反应性胶质化的因素之一。     

气功外气对小鼠淋巴细胞和肿瘤细胞作用的体外试验

一、气功外气对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用按本室常规制备小鼠脾细胞悬液(2×10~6/ml),ConA最终浓度为3μg/ml或不加ConA,淋巴细胞转化试验用~3H-TdR掺入法测定,细胞悬液分装于设有对照组与试验组的平皿内各6ml,试验组接受气功外气15分钟,对照组不接受外气,发功完毕两组细胞充分摇匀后,分别吸取0.2ml加入96孔培养板内,每组设6个复孔,37℃,5%CO_2培养72小时。结果发现,气功外气对无     

瓜蒌注射液对兔血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察瓜蒌注射液对血管平滑肌细胞(SMC)增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:用免疫组织化学LSAB法检测培养的兔主动脉SMC中PCNA的表达,液闪法测定SMC氚-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入量,同时测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)、前列环素(PGI₂)及环磷酸腺苷(cAMP)的含量。结果:瓜蒌注射液能增加SOD活性,降低LPO和升高PGI₂、cAMP水平,抑制SMC的[³H]-TdR掺入量和PCNA的表达(P均＜0.05,0.01)。结论:瓜蒌有抑制SMC增殖的作用。     

抗AML特异性T细胞的诱导、扩增及功能研究

目的:体外培养抗急性髓性白血病(AML)细胞的特异性T细胞,并研究其生物学特性和功能.方法:取12例AML患者的外周血或骨髓,分离单个核细胞(MNCs)后接种于96孔板,加入组合细胞因子,诱导AML细胞来源的树突细胞(DC)生成,培养过程中用倒置显微镜进行形态学观察,并在7天后用流式细胞术检测免疫学表型.培养第7天时将组合细胞因子培养液换为高IL-2因子培养液,促进抗AML细胞的特异性T细胞生长,培养4～5周后测定T细胞表型,并采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法进行T细胞杀伤活性测定.结果:AML细胞经组合细胞因子诱导后,大部分细胞呈现树突状细胞的典型形态,而且CD80、CD86和HLA-DR较培养前明显上调(P＜0.01);高IL-2因子培养液培养4～5周后,82.5%的培养孔内CD3+T细胞占孔内细胞总数99%以上;LDH释放法进行T细胞杀伤试验表明培养出的T细胞对自体AML有较强的杀伤作用,而对异体AML细胞杀伤力弱.结论:在体外可以成功诱导出抗AML细胞的特异性T细胞,且培养出的T细胞对自体AML细胞有特异性杀伤作用.     

缺乏脂蛋白血清促进体外培养细胞的胆固醇外流

逆向胆固醇转运机理的研究对防治动脉粥样硬化具有理论和实践意义,Stein等利用~3H-胆固醇示踪的方法对细胞胆固醇外流进行过较多研究。我们为了同时观察细胞LDL受体表达及胆固醇外流,曾利用薄层层析的方法测量细胞的胆固醇外流。以上两种方法均含有繁琐的用有机溶剂从培养液和细胞中萃取脂质的步骤。为探索一个简便的方法来评价细胞内胆固醇外流的相对值,我们参照Stein等的~3H-胆固醇示踪的方法,采用容水量大的甲苯-Triton闪烁液直接与收集的培养液或细胞Triton萃取液混合后计数,观察了兔缺乏脂蛋白血清对体外培养的兔皮肤成纤维细胞胆固醇外流的影响。 实验前细胞用每毫升含~3H-胆固醇0.5微居里的培养液培养。实验时吸去标记培养液,细胞先后经PBS冲洗两次,含1％牛血清白蛋白的EMEM和不含血清的EMEM各孵育15分钟后,对照组和实验组的细胞分别换不含血清的EMEM和含10％兔缺乏脂蛋白血清的EMEM     

富含溶酶体的细胞具有LAK细胞的溶解活性

人们已经确定了人和鼠LAK细胞的溶细胞特异性及动力学性质,但对其群体中的效应细胞所知甚少。已有人报道了NK细胞和T细胞杀伤作用中富含溶酶体细胞的重要作用。本文首次确定了溶酶体在LAK细胞溶解活性中的作用并利用这个特性测定了LAK细胞的溶解活性。作者用10~(-7)M quinacrine(奎纳克林)在37℃、完全培养基(CM)中对LAK细胞(10~6/ml)染色20分钟,用CM洗涤3次后,用荧光激活的细胞分离仪(FACS)     

人腮腺细胞分离培养的初步观察

目的从人体腮腺组织分离培养获得具有体外增殖能力的涎腺细胞。方法取成人腮腺良性肿物切除的腮腺组织,将组织块在无菌条件下剪出小腺叶,剪成1 mm2大小碎块。用质量浓度10％的Ⅰ型胶原酶10 ml消化20 min,用质量浓度0．25％胰蛋白酶10 ml消化15 min。收集2次消化细胞悬液,离心获得细胞沉淀。以15 ml含用质量浓度10％胎牛血清、2 mmol／L L-谷胺酰胺、100μg／ml链霉素、100 U／ml青霉素、5μg／ml人胰岛素、5μg／ml氢化考的松、2μg／ml异丙肾上腺素的DMEM和F12培养基各占50％的培养液重悬细胞沉淀,计数细胞总量为2．5×105。在预先铺被鼠尾胶原的6孔板的3个孔中,每孔播种细胞悬液5 ml。培养板置37℃、体积分数5％CO2,饱和湿度条件培养箱中培养。