细胞内游离钙与柯萨奇病毒B_3诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡(英文)

目的:探讨[Ca~(2 )]_i在柯萨奇病毒(CV)B_3诱导心肌培养细胞凋亡中的作用。方法:DNA裂点检测法(3'-末端标记)及扫描电镜检测细胞凋亡,Fluo3-AM负载心肌细胞,共聚焦显微镜观察[Ca~(2 )]_i荧光强度变化,结果:感染24 h,心肌细胞内CVB_3的浓度达峰值,感染10 h未见凋亡的心肌细胞,17,24和36 h凋亡细胞分别为5％,60％和90％,感染17 h心肌[Ca~(2 )]_i浓度达峰值,电镜结果提示凋亡的特征,结论:CVB_3可诱导培养心肌细胞的凋亡过程,细胞内Ca~(2 )参与凋亡细胞的信息转导过程,并在凋亡早期发挥重要作用。     

黄芪多糖体外抗CVB_3病毒活性

目的研究黄芪多糖(ASP)对柯萨奇B3病毒(CVB3)所致的VERO和乳鼠原代心肌细胞病变抑制作用及病毒繁殖抑制反应,并测定其对乳鼠原代心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶和血清肌酸磷酸激酶(LDH、CK-MB)活性的影响。方法在VERO细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度ASP后,感染CVB3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID50)的差别;紫外分光光度法测定心肌细胞培养上清液LDH和CK-MB活性。结果 ASP在上述实验中可降低CVB3病毒造成的细胞凋亡(P<0.01)及抑制病毒的繁殖对心肌细胞释放心肌酶也有一定的抑制作用(P<0.05)。结论 ASP对CVB3病毒感染的VERO和乳鼠心肌细胞具有保护作用。在一定浓度下可降低心肌酶的释放,其作用机制尚需做进一步实验来探讨。     

苦参系列生物碱体外抗CVB_3病毒活性

目的研究苦参系列生物碱(Sophora flavescens alkaloids)对柯萨奇B3病毒(CVB3)所致的Vero细胞和大鼠原代心肌细胞病变抑制作用、病毒繁殖抑制反应,并测定其对大鼠原代心肌细胞培养上清液中心肌酶(LDH、CK MB)活性的影响。方法在Vero细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度苦参系列生物碱后,感染CVB3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID50)的差别;紫外分光光度法测定心肌细胞培养液上清中LDH和CK MB活性。结果槐果碱、苦参碱、槐啶碱在Vero细胞和原代乳鼠心肌细胞试验中可有效抑制CVB3病毒引起的细胞病变(P<0.05,P<0.01);槐果碱对病毒的繁殖有抑制作用(对数值升高一个单位),并可降低心肌细胞释放心肌酶(P<0.05,P<0.01)。结论槐果碱、苦参碱、槐啶碱对CVB3病毒感染的Vero细胞和原代乳鼠心肌细胞具有一定保护作用。对细胞病变(CPE)的抑制作用强弱顺序为:槐果碱>苦参碱>槐定碱>氧化槐果碱、苦豆碱、槐胺碱、槐醇碱。槐果碱对CVB3病毒的繁殖有抑制作用,在一定浓度下可降低心肌酶的释放,其作用机制尚需做进一步探讨。     

L-四氢巴马汀对离体豚鼠心房的作用

THP和Ver均能对抗CaCl_2所致离体豚鼠右房正性频率作用,非竞争性拮抗CaCl_2左房正性肌力作用以及Iso右房正性频率和左房正性肌力作用。THP和Ver浓度依赖性和频率依赖性地抑制左房收缩中的阶梯现象,使正阶梯翻转为负阶梯。而对休息后加强影响较小。结果提示THP对心房的抑制作用与Ver相似,与拮抗Ca~(2+)有关,可能主要通过抑制心肌细胞外Ca~(2+)内流所致。     

甲状旁腺素对心肌细胞Ca~(2+)跨膜转运的影响

应用放射性同位素~(45)Ca示踪技术观察了牛甲状旁腺素_(1-34)活性片段(bPTH_(1-34))对培养乳鼠心肌细胞钙离子(Ca~(2+))跨膜转运的影响.并且镜检了细胞的搏动频率和采用蛋白质竞争结合法检测了胞内cAMP的含量。结果表明:bPTH_(1-34)(1×10~(-7)mol·L~(-1))显著增加静息细胞的搏动频率.明显增高细胞cAMP的含量.并且显著增加静息、高K~+去极化及NA受体兴奋状态细胞的外Ca~(2+)内流.同时抑制胞内Ca~(2+)外排。提示其强心与细胞内Ca~(2+)升高的机理之一.可能与细胞内cAMP升高有关。     

纳洛酮治疗小鼠柯萨奇病毒诱发病毒性心肌炎的实验研究

目的:研究纳洛酮治疗病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠的作用机制.方法:120只BALB/c 小鼠以柯萨奇病毒(coxsackievirus B3,CVB_3)诱导制作VMC模型,在隔离实验室饲养.分别在接种病毒后72 h各组给药至21 d,CVB_3组i.p.2500 mg/kg生理盐水(n=60);纳络酮组i.p.2 mg/kg(n=60);另取40只BALB/c,小鼠作为对照组,同法接种100μL不含病毒的Eagle液,72 h后i.p.给予2500 mg/kg生理盐水.在病毒感染第5、7、14、21、28天,各组随机取8只小鼠,处死,留取心肌组织.观察小鼠死亡率与心肌组织病理改变,并采用RT-PCR和Western blot技术检测CVB_3感染后各时间点小鼠心肌组织中K-阿片受体(K-opioid receptor,kOR)mRNA和蛋白质的表达水平.结果:CVB_3感染后第5、7、14、21天,CVB_3组KOR mRNA表达量显著高于对照组(P<0.01);kOR蛋白质的表达量在CVB_3感染后第7、14、21天明显高于对照组(P<0.05).CVB_3感染后第7、14、21天纳洛酮组小鼠死亡率和病理组织改变低于CVB_3组,kCOR mRNA和蛋白质的表达量低于CVB_3组(P<0.05).结论:CVB_3诱导性VMC小鼠心肌细胞的KOR基因和蛋白质水平明显上调,纳洛酮对VMC小鼠保护作用与抑制KOR基因和蛋白质水平有关.     

蛇床子素对豚鼠离体回肠和结肠带的作用

以豚鼠离体回肠和结肠带为标本,观察蛇床子素(Ost)的作用与Ca~(2+)的关系。结果表明:Ost和钙拮抗剂Ver产生剂量依赖性抑制乙酰胆碱(ACh)、组胺及KCl所致回肠条或结肠带的收缩;非竞争性拮抗CaCl_2累积量—效曲线,pD_2分别为4.41±0.15,7.0±0.2。Ost 100μmol/L和Ver 1μmol/L均能对抗小剂量Ca~(2+)所致结肠带收缩,但被加入较大量Ca~(2+)所取消。Ost和Ver均能抑制ACh诱导的依内钙性收缩,不影响依外钙性收缩。结果提示Ost具有钙拮抗作用,其作用方式与Ver类似。     

何谓钙拮抗剂?目前临床上常用的有哪几种?

<正> 钙拮抗剂的基本作用是阻滞心肌及平滑肌(如冠脉或外周血管平滑肌)细胞的慢Ca~(2+)通道,抑制Ca~(2+)向细胞的内流,故又称钙通道阻滞剂(或抑制剂)。电生理研究证实,心肌细胞动作电位曲线中0相的快速上升是由于Na~+内流所致,钙拮抗剂不影响或很少影响其过程;2相的平台由Ca~(2+)内流所维持,故能被钙拮抗剂所抑制。而属于慢自律细胞的窦房结和房室     

丹皮酚对体外培养乳鼠心肌细胞~(45)Ca摄取的影响

通过测定体外培养乳鼠心肌细胞~(45)Ca摄取及其搏动频率的变化,观察丹皮酚对心肌细胞Ca~(2+)内流的影响。结果50～400μg/ml的丹皮酚,能显著降低心肌细胞搏动频率,对心肌细胞快相(5min)和慢相(120min)~(45)Ca摄取均有显著抑制作用,且400μg/ml丹皮酚与10μmol/L的维拉帕米的作用相似。提示丹皮酚能抑制心肌细胞的Ca~(2+)内流,可能与阻滞慢钙通道有关。     

钙和钙调素与血管平滑肌细胞的增殖

采用MTT法,一种快速和不用放射物的新方法测定血管平滑肌细胞的增殖。本法与[~3H]TdR参入法和细胞计数法之间均有良好的线性关系。人胚和家兔主动脉平滑肌细胞的增殖依赖于FCS和Ca~(2+)。在FCS存在下,Ca~(2+)可促使细胞进入增殖周期和增加G_1晚期CaM含量;TFP可完全逆转Ca~(2+)的作用;阻断Ca~(2+)内流也能抑制细胞增殖;说明Ca~(2+)-CaM可刺激血管平滑肌细胞增殖,可能通过触发DNA合成所致。     

Astragaloside IV exerts antiviral effects against coxsackievirus B3 by upregulating interferon-gamma

Coxsackievirus B3 (CVB3) is a major pathogen for viral myocarditis and dilated cardiomyopathy in children and young adults. The aim of this study was to determine the antiviral effects of astragaloside IV against CVB3, and the underlying mechanism. First, we evaluated antiviral effects of astragaloside IV in vitro by measuring the virus titers of CVB3 in primarily cultured myocardial cells infected with CVB3, and in vivo by assessing the morbidity, mortality, heart-to-body weight ratio (HW/BW), and virus titers in BALB/c mice infected with CVB3. Then, we performed serum pharmacological experiments by testing the effect of sera from SD rats treated with astragaloside IV on proliferation of CVB3 in primarily cultured myocardial cells. Finally, we determined the effect of astragaloside IV on IFN-gamma mRNA expression in the hearts of infected BALB/c mice. We observed that astragaloside IV decreased virus titers of CVB3 in primarily cultured myocardial cells. Morbidity, mortality, HW/BW, and virus titers all decreased, and necrosis and mononuclear cell infiltration were alleviated in CVB3-infected mice treated with astragaloside IV, compared with those infected mice without the treatment. In addition, proliferation of CVB3 was inhibited by the sera of rats treated with astragaloside IV. Moreover, we observed that IFN-gamma mRNA expression was increased in mice treated with astragaloside IV. Therefore, we conclude that astragaloside IV exerts antiviral effects against CVB3 by upregulating expression of IFN-gamma mRNA.     

高山红景天酪醇对病毒感染细胞的保护作用

本文采用细胞培养技术、中性红染料摄入、细胞病变效应和扫描电镜等几种不同实验方法观察了高山红景天酪醇对柯萨奇B_s病毒感染细胞的保护作用。实验结果表明,在无毒剂量范围内.高山红景天酪醇对病毒感染细胞具有保护作用.以病毒和红景天酪醇同时加入组作用更为明显。本研究结果为探讨中药抗病毒作用机理和病毒性疾病的防治提供实验依据。     

安心康滴丸体外抗柯萨奇病毒的实验

目的 评价安心康滴丸的体外抗柯萨奇病毒（CVB3）活性。方法 在大鼠心肌细胞上进行抗病毒实验，观察安心康滴丸对细胞病变的影响、对病毒繁殖抑制作用和对肌钙蛋白含量的影响。结果 安心康滴丸能有效的修复病变细胞，抑制病毒繁殖和降低肌钙蛋白含量。结论 安心康滴丸在体外具有显著的抗柯萨奇病毒作用。     

小檗碱对培养大鼠心肌细胞胞内游离Ca2+的作用

利用Fura-2技术和AR-CM-MIC阳离子测定系统,直接观察了小檗碱对培养大鼠心肌细胞胞内[Ca²⁺]i的影响。结果显示:小檗碱可明显升高心肌细胞静息[Ca²⁺]i且具饱合性,维拉帕米和CoCl₂对其有一定的抑制作用;小檗碱与高K⁺,高Ca²⁺,去甲肾上腺素,哇巴因合用比单用上述激动剂更能明显增高[Ca²⁺]i;维拉帕米对其有抑制作用;在胞外无外Ca²⁺和无外Ca²⁺,外K⁺,外Na⁺时,小檗碱30～200μmol·L^-1仍能升高静息[Ca²⁺]i,维拉帕米只对前者有一定抑制作用。结果提示:小檗碱可能通过促胞外Ca²⁺内流和胞内Ca²⁺释放等途径有限度地增高心肌细胞内游离Ca²⁺浓度,显示强心作用。     

大黄素配伍中药活性成分体外抗柯萨奇B_3病毒试验

目的:研究大黄素与不同中药活性成分配伍后体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,并探讨其抗病毒机制。方法:用不同组成、不同浓度的中药材提取液处理CVB3感染的Hep-2细胞,72h后用MTT法测定细胞活性。结果:在Hep-2细胞系中,所有经配伍后的中药组合都能抑制CVB3致细胞病变作用,提高细胞存活率,降低细胞毒性。对病毒直接作用效力最高的药物组合为大黄素:姜黄素:苦参碱=2:1:2;抗病毒合成效力最高的药物组合为大黄素:姜黄素:苦参碱=2:0:1。结论:大黄素与中药活性成分配伍,其细胞毒性降低,抗CVB3效力增强。     

参麦注射液对感染柯萨奇B3病毒心肌细胞的影响

目的在细胞水平探讨参麦注射液（SMI）对实验性病毒性心肌炎的治疗作用。方法采用原代培养的SD大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒（CVB3）造成实验性病毒性心肌炎细胞模型;设立正常对照组、模型组、SMI高剂量（10g／L）组、SMI中剂量（5g／L）组及SMI低剂量（2．5g／L）组,观察心肌细胞感染CVB,后第3天和第5天的搏动频率、细胞病变、细胞超微结构、上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性和CVB,滴度。结果感染CVB,后心肌细胞的搏动频率明显减慢;第5天模型组有半数细胞搏动停止,细胞病变明显,线粒体肿胀且形态不完整,内质网扩张,部分肌原纤维损坏,上清液中LDH的活性显著升高;SMI各剂量组心肌细胞均维持搏动,且高剂量组细胞病变程度、LDH活性和CVB,滴度均明显低于模型组,除部分肌原纤维损坏外,线粒体形态完整,内质网未见扩张。结论SMI对感染CVB,的培养心肌细胞搏动功能具有保护作用,并能降低心肌细胞上清液中CVB3滴度和减轻CVB,对心肌细胞的损伤。     

肉桂油抗柯萨奇病毒B3的血清药理学研究

目的 利用血清药理学方法 探讨肉桂油抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用机制. 方法 制备SD大鼠乳鼠心肌炎细胞模型,72 h后,加入肉桂油静脉给药所得的大鼠含药血清至感染细胞模型,同时设立模型组与空白对照组,测定血清中不同时间点桂皮醛与肉桂酸的含量,并采用实时定量聚合酶链反应(PCR)法测定各组CVB3mRNA的相对含量,噻唑蓝(MTT)比色法测定各组心肌细胞存活率. 采用SPSS统计学软件对其进行单因素相关性分析. 结果肉桂油含药血清对心肌细胞存活率和CVB3mRNA的相对含量的影响与肉桂酸的浓度相关(P<0.05或P<0.01),而与桂皮醛的浓度无显著相关. 结论 肉桂油对病毒性心肌炎具有抗病毒活性,肉桂酸是肉桂油抗病毒的活性成分.     

四氢小檗碱对离体兔主动脉环的作用和离体豚鼠结肠带平滑肌~(45)Ca内流的影响

THB和Ver相似,对KCl和NE所致兔主动脉环收缩,呈非竞争性拮抗,THB的作用弱于Ver。THB对KCl所致的兔主动脉环收缩的松弛作用,能被20 mmol/L CaCl_2所对抗。 THB,THP和Ver明显抑制80 mmol/L KCl所致的豚鼠结肠带平滑肌细胞的~(43)Ca内流。THB的作用与THP相当,但均弱于Ver。     

槐果碱对感染CVB3搏动心肌细胞的保护作用

目的：应用柯萨奇病毒B3(CVB3)感染SD大鼠乳鼠心肌细胞造成病毒性心肌炎模型,观察槐果碱对该模型的作用。方法：(1)将乳鼠心肌细胞分成4组：感染组,感染CVB3；治疗组,感染病毒后加入100mg·L~(-1)的槐果碱；同时设立药物对照组和细胞对照组。在处理的d 2,3,5观察各组细胞病变效应(CPE)、细胞搏动频率并测定细胞上清液中乳酸脱氢酶浓度。(2)将心肌细胞感染CVB3后加入不同浓度的槐果碱(12．5～400mg·L~(-1)),设立病毒、细胞及药物对照。在处理后d 2,3,5观察CPE并测定细胞上清中的乳酸脱氢酶(LDH)浓度。结果：(1)100mg·L~(-1)的槐果碱对感染CVB3的乳鼠心肌细胞有保护作用,治疗组的CPE较感染组减轻,上清液中的LDH浓度降低。(2)槐果碱在12．5～300mg·L~(-1)之间均对感染CVB3的乳鼠心肌细胞有保护作用,它可以减轻病毒导致的CPE,并减少LDH释放。在400mg·L~(-1)反而会加重CPE,增加LDH释放。结论：一定浓度的槐果碱在体外对感染CVB3的心肌细胞有保护作用。