蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱变化的研究

目的研究蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱的变化，为蟾酥诱导HL-60细胞凋亡的可能机制提供依据。方法采用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡；应用DNA芯片技术检测蟾酥作用前后HL-60细胞基因表达谱的变化。结果1％(v／v)的蟾酥可明显诱导HL-60细胞凋亡。细胞凋亡发生前，在检测的1152个基因中共有9个基因表达改变，其中8个基因上调，1个基因下调。结论在蟾酥诱导HL-60细胞发生凋亡过程中有多个基因参与，BCL-2下调以及IL-8上调与凋亡的发生关系密切。     

锌对HL-60细胞凋亡及p53等基因表达影响

目的研究微量元素锌在体外对HL-60细胞凋亡的作用机制。方法HL-60细胞常规培养24h，分为对照组、四吡啶甲基乙二胺N，N，N＇，N＇-tetrakis（2-pyridylmethyl）ethylenediamine（TPEN）处理组、TPEN＋ZnSO4组。以细胞形态学改变、流式细胞仪和DNA凝胶电泳分析为凋亡观察指标，并用mRNA狭缝杂交和Western-blot测定细胞凋亡相关基因的改变。结果细胞内Zn^2＋减少可诱导人髓性细胞白血病细胞系HL-60凋亡，引起bcl-2、c-myc mRNA及蛋白的表达降低，补充ZnSO4（终浓度为20μmol／L）可改善上述现象。结论细胞内Zn^2＋减少诱导HL-60细胞凋亡过程与细胞内下调bcl-2、c-mvc基因的表达有关。     

番茄红素对前列腺癌细胞PC-3增殖和细胞周期的影响

目的研究番茄红素对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的抑制作用及其可能的作用机制。方法采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对癌细胞增殖的影响,流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达的变化。结果番茄红素抑制PC-3细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使G0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少)。RT-PCR结果显示,cyclin D1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调。上述作用呈剂量效应关系。结论番茄红素可诱导PC-3细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

氧化砷对结肠癌细胞凋亡的诱导及机制的探讨

目的 探讨氧化砷(As2O3)对人结肠癌细胞的凋亡诱导作用及其分子机制。方法应用显微镜和流式细胞仪观察As2o3对SW480细胞株的形态学改变和诱发凋亡率；免疫组化技术检测bcl-2、Fas、二种基因编码蛋白的表达。结果 As2O3作用于细胞后，可看到较典型的细胞凋亡形态学改变。AO／EB荧光染色法显示，细胞凋亡率为2．1％～10．6％。As2O3诱导SW480细胞凋亡作用呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。经As2O3作用的SW480细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，Fas基因编码蛋白表达增加。结论 As2O3有诱导SW480细胞凋亡作用，其诱导细胞凋亡的分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强Fas基因编码蛋白表达。     

华蟾素联合丝裂霉素诱导人宫颈癌细胞株Hela细胞发生凋亡的实验研究

目的 探讨抗癌药物华蟾素与丝裂霉素的联合作用诱导Hela细胞发生凋亡的机制.方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞,以不同浓度的华蟾素与丝裂霉素刺激Hela细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞的增殖,凝胶电泳检测细胞DNA片段化,FITC-Annexin V检测细胞凋亡的发生,RT-PCR检测TNF-α的表达.结果 经药物作用后的细胞在倒置显微镜下观察,6 h后开始出现明显的凋亡现象;电泳结果呈200 bp大小的典型梯状带;FITC-Annexin V检测到凋亡早期细胞膜呈强绿色荧光,12 h后胞核逐渐被碘化丙啶染成红色,24 h后大部分细胞被染成红色;RT-PCR产物大小为299 bp.结论 华蟾素和丝裂霉素能使细胞生长受到明显的抑制,能诱导Hela细胞发生凋亡,能诱导DNA片段化和TNF-α的表达.     

DIM联合顺铂诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡机制的研究

目的:探讨顺铂(cis-diamminedichlorop latinum DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合应用诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡的机制。方法:采用免疫组化技术观察细胞内caspase3蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2、caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果:细胞培养及免疫化学染色可见各给药组与对照组比较均有不同程度抑SK-OV-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;westernblot结果表明各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4mg/L-1)单独应用效果相同。结论:DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。     

三氧化二砷诱导子宫内膜癌细胞凋亡的研究

目的 在体外实验中，探讨三氧化二砷（As2O3）诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法 采用TUNEL染色法，定性、定量地研究As2O3与子宫内膜癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 As2O3在体外能诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡，下调bcl-2的表达，增强bax的表达。结论 诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡是As2O3抗子官内膜癌作用的机制之一，As2O3可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡。     

雷帕霉素体外对骨肉瘤细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的观察雷帕霉素体外对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响并初步探讨其分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞系MG-63,采用不同浓度雷帕霉素处理。MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、tr-answell检测细胞侵袭能力的变化、Western-Blot检测bcl-2和VEGF蛋白表达的情况。结果经雷帕霉素处理后,骨肉瘤细胞的增殖受到抑制、细胞发生凋亡、侵袭能力下降、bcl-2和VEGF的表达显著下调。结论雷帕霉素可能通过下调bcl-2和VEGF的表达而抑制骨肉瘤细胞增殖、诱导其发生凋亡、降低其体外侵袭能力。     

洛伐他汀对人粒系白血病细胞生长的影响

目的观察洛伐他汀(Lovastatin)对体外培养的人粒系白血病细胞株HL-60生长的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测、流式细胞仪分析等技术。结果洛伐他汀可显著抑制HL-60细胞的增殖．且呈剂量一效应关系。流式细胞仪分析结果显示：洛伐他汀不仅能影响该细胞周期进程而且可诱导该细胞凋亡。结论洛伐他汀可能通过影响细胞的生长周期和诱导细胞凋亡来抑制HL-60细胞的增殖。     

三氧化二砷诱导子宫内膜癌细胞凋亡的研究

目的在体外实验中,探讨三氧化二砷(As2O3)诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系.方法采用TUNEL染色法,定性、定量地研究As2O3与子宫内膜癌细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达.结果 As2O3在体外能诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡,下调bcl-2的表达,增强bax的表达.结论诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡是As2O3抗子宫内膜癌作用的机制之一,As2O3可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡.     

大豆异黄酮诱导胃癌细胞凋亡作用研究

目的：体外实验探讨大豆异黄酮诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法：采用MTT比色法测定大豆异黄酮对胃癌细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL染色法，定性、定量地研究大豆异黄酮与胃癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT－PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：大豆异黄酮对胃癌细胞有明显抑制作用，随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强；透射电镜可见胃癌细胞出现典型的凋亡细胞形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法可染色阳性的胃癌细胞出现细胞核碎裂，核质固缩，细胞膜突出形成质膜小泡等凋亡细胞形态学变化。免疫组织化学和RT－PCR法发现大豆异黄酮下调bcl-2的表达，上调bax的表达。结论：诱导胃癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗胃癌作用的机制之一，大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。     

姜黄素对人宫颈癌SiHa细胞株增殖、凋亡和COX-2表达的影响

目的:体外研究中药姜黄素(Cur)对子宫颈癌SiHa细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及与环氧合酶(COX-2)表达的关系。方法:以不同浓度的姜黄素(10～30μmol/L),分12～72 h四个时间点处理SiHa细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生;Western blot检测COX-2蛋白的表达;用放射免疫法检测细胞PGE2释放水平。结果:姜黄素可抑制SiHa细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);姜黄素可诱导SiHa细胞凋亡,DNA ladder呈梯状条带;姜黄素可明显抑制COX-2的表达,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性;姜黄素明显抑制SiHa细胞PGE2释放水平,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:姜黄素体外对SiHa细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用,其机制可能与抑制COX-2蛋白表达、降低PGE2释放水平有关。     

植酸对胃癌细胞恶性增殖的抑制作用研究

目的研究植酸对bax、bcl-2表达影响与抑制胃癌细胞增殖作用及其机制。方法采用MTT实验法观察植酸对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜下观察植酸对细胞基本生长状态的改变及形态的变化;单细胞凝胶电泳实验观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用;Western blotting检测凋亡相关基因bax及bcl-2的蛋白表达。结果MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量与时间的效应关系;倒置显微镜下的形态学观察表明加药组细胞的生长状态不佳;植酸作用组细胞出现了典型凋亡的彗星施尾,且存在剂量-效应关系;植酸能够下调bcl-2蛋白的表达,植酸处理组细胞中bax蛋白比对照组表达增加,且均呈现剂量-反应关系。结论植酸对SGC-7901细胞具有抑制增殖作用,bax及bcl-2参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制。     

金雀异黄酮对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响

目的观察植物雌激素金雀异黄酮(GS)对人结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测GS对HT-29细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;CellDeathELISA和流式细胞术从不同方面检测GS对HT-29细胞凋亡的影响;RT-PCR和Western-blot技术检测GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2和baxmRNA和蛋白质表达的影响。结果与对照组相比,在15~120μmol/L浓度范围内,GS能够抑制HT-29细胞增殖活力;降低S细胞分布比例,将细胞周期滞留在G2/M期;显著性诱导HT-29细胞凋亡(>30μmol/L,P<0.05),并呈现出良好的剂量-效应关系。检测GS对PCNA、bcl-2和bax表达的影响显示,GS能够抑制PCNA和bcl-2mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出促进作用。结论GS通过诱导HT-29细胞凋亡而抑制其增殖活力,这些效应与PCNA、bcl-2和bax的表达变化有关。这些资料可为结肠癌的早期预防提供膳食干预新途径,并为临床新药的开发提供新方案。     

大豆异黄酮诱导食管癌细胞凋亡作用研究

目的 在体外实验中，探讨大豆异黄酮诱导食管癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bel-2和bax之间的关系。方法 采用MTT比色法测定大豆异黄酮对食管癌细胞的生长抑制率；以透射电镜和。TUNEL染色法，定性、定量地研究大豆异黄酮与食管癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 大豆异黄酮对食管癌细胞有明显抑制作用，随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强；透射电镜可见食管癌细胞出现典型的凋亡细胞形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法可见，经大豆异黄酮处理24、48、72、96h后，食管癌EC-9706细胞凋亡数明显随时间延长而增加。免疫组织化学法发现经大豆异黄酮处理24、48、72、96h后，食管癌EC-9706细胞的bcl-2蛋白阳性率减少，bax蛋白阳性率增加。经大豆异黄酮处理24、48、72、96h后，经RT—PCR检测发现食管癌EC-9706细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性，并显示bcl—2mRNA条带密度随时间的延长而递减，bax mRNA条带密度随时问的延长而增强。结论 诱导食管癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗食管癌作用的机制之一，大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌细胞发生凋亡。     

曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用

目的:探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用及其相关机制。方法:TSA与ATRA联合或者单独作用于SiHa细胞,采用CellTiter 96Aqueous法检测细胞增殖情况,7AAD荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V/7AAD法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot法检测P53、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:细胞增殖实验结果显示TSA联合ATRA对SiHa细胞有显著的增殖抑制作用;7AAD荧光染色结果显示联合用药组细胞凋亡明显增加,出现核碎裂等典型凋亡改变;流式细胞术检测结果显示联合用药组凋亡率显著增高;Western Blot结果显示:与对照组比较,联合用药组中P53和活化性Caspase-3蛋白的表达水平显著升高,而BCL-2蛋白表达水平显著下降。结论:TSA联合ATRA在体外对SiHa细胞具有明显的协同抑制增殖和诱导凋亡作用,推测其机制可能与P53和活化性Caspase-3蛋白表达水平上调、BCL-2蛋白表达水平下调有关。     

NS-398对肝癌细胞系HepG2环氧合酶-2表达的影响

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS-398)对肝癌细胞株HepG2细胞体外抗肿瘤作用,探讨其抗癌作用的分子机理.方法 分别用100、200、300、400μmol/L NS-398处理HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞增殖抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的改变及凋亡百分比的变化,用Westen blotting检测COX-2蛋白的表达,用放射免疫测定法检测NS-398对HepG2细胞前列腺素E2(PGE2)释放水平.结果 NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明,随着浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,24 h时半数有效剂量(IC50)为300μmo/L.NS-398明显抑制COX-2的活性和表达.随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,100、200、300、400μmol/L NS-398组灰度值分别为1515.1±127.2、1023.5±108.4、691±94.3和493.6±86.6,与对照组1822±157.4相比差异有统计学意义(t值分别为3.736、1.623、1.810、2.587,P<0.01).NS-398可明显抑制HepG细胞PGE2释放水平,其吸光度值(A值)分别为0.70±0.02、0.48±0.02、0.29±0.01和0.18±0.01,与对照组比较0.03±0.01差异有统计学意义.结论 NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用并诱导其凋亡,可能与细胞G1期阻滞以及通过抑制COX-2活性,抑制COX-2下游产物PGE2表达有关.     

松口蘑菌丝体蛋白对HeLa细胞凋亡的影响

目的 :　研究松口蘑发酵菌丝体水提液中菌丝体蛋白质 (TMP- B)的体外抗癌作用。方法 :　体外培养 He La细胞 ,培养时添加不同浓度的 TMP- B,绘制细胞生长曲线。利用扫描电镜、流式细胞术及 DNA凝胶电泳等进行体外抗人子宫颈癌 He La细胞增殖和诱导细胞凋亡机制的研究。结果 :　 TMP- B在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。扫描电镜观察到 TMP- B处理细胞产生明显的凋亡小体 ;TMP- B对细胞周期的影响是通过抑制细胞从 S到 G2 /M期的转化来抑制He La细胞增殖 ,诱导细胞发生凋亡的 ;流式细胞仪分析图上出现凋亡峰 ;DNA电泳出现以 2 0 0 bp左右为单位的 DNA碎片。结论 :　采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质 ,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

Rab25基因siRNA对人卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,观察Rab25基因siRNA对卵巢癌细胞增殖及诱导凋亡的效果。方法:构建针对Rab25基因的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258荧光染色和透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果:成功构建Rab25的siRNA,稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达,细胞生长速度减慢、增殖能力下降;荧光显微镜和电镜观察到细胞胞质浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。结论:Rab25基因的siRNA能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,为卵巢癌基因治疗开辟新途径。