Determination of pibutidine metabolites in human plasma by LC-MS/MS

A novel metabolite-screening procedure for pibutidine. an H2-receptor antagonist, which uses high-performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), demonstrated the presence of pibutidine and its four metabolites in plasma from volunteers who received a single dose of pibutidine hydrochloride. In order to quantitatively examine the metabolism of pibutidine, an assay based on LC-MS/MS was subsequently developed for the simultaneous determination of its metabolites in human plasma. Target analytes consisted of M-5, M-7 and M-8, which were prominently detected by the screening procedure, and M-9, which has pharmacological activity as an H2-receptor antagonist. Metabolites and their deuterated internal standards were extracted from human plasma using an Oasis HLB extraction cartridge, and chromatographed on a Monitor C18M column. No isotope effects on chromatographic retention time were observed for any deuterated compounds, which were ionized using an electrospray ionization (ESI)- interface and detected by MS/MS in the selected reaction-monitoring (SRM) mode simultaneously with the corresponding metabolites. The assay was validated over the concentration range of 0.1 to 25.6 ng ml(-1) and used to determine the plasma levels of metabolites in volunteers following oral administration of a 20-mg dose of pibutidine hydrochloride.     

LC-MS/MS法测定伊马替尼及代谢物在大鼠体内的药动学参数

目的建立LC-MS/MS法测定血浆中伊马替尼及其代谢物去甲伊马替尼的浓度。方法血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以含0.1%甲酸和2 nmol·L-1的醋酸铵混合溶液-甲醇=40:60(v/v)为流动相;采用Dikma Diamonsil C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱进行分离,流速为0.4 m L·min-1;柱温为45℃。结果伊马替尼和去甲伊马替尼的线性范围都为1~2000 ng·m L-1,最低检测限为1 ng·m L-1;伊马替尼平均方法回收率为101.3%~103.2%,去甲伊马替尼平均方法回收率为99.6%~102.4%,日内和日间变异均<15%。结论本方法简便、准确、灵敏、专属性强,可满足伊马替尼及其代谢物临床药物浓度测定的需要。     

LC-MS/MS法研究Cocktail探针药物咖啡因、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑及其代谢产物在大鼠血浆中的药代动力学

目的建立灵敏、快速、稳定的测定大鼠血浆中CYP450探针药物/代谢产物,咖啡因/副黄嘌呤、奥美拉唑/5-羟基奥美拉唑、右美沙芬/右啡烷、咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑的LC-MS/MS方法,并用于其在大鼠体内的药代动力学研究。方法 100μL血浆样品加入内标地西泮及乙酸铵溶液,乙酸乙酯进行液液萃取,离心取上清挥干复溶,LC-MS/MS检测。选用Agilent Eclipse Plus-C_(18)色谱柱(50 mm×2.1mm,3.5μm),乙腈和0.01%甲酸(1 mmol·L~(-1)甲酸铵)作为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 m L·min~(-1),进样量10μL。采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应正离子监测模式(MRM+),咖啡因m/z:195.0/138.1;副黄嘌呤m/z:181.1/124.1;奥美拉唑m/z:346.1/198.1;5-羟基奥美拉唑m/z:362.1/214.1;右美沙芬m/z:272.2/147.1;右啡烷m/z:258.1/157.1;咪达唑仑m/z:326.1/291.1;1'-羟基咪达唑仑m/z:342.1/324.1;内标地西泮m/z:285.1/154.0。结果咖啡因、副黄嘌呤、奥美拉唑、5-羟基奥美拉唑、右美沙芬、右啡烷、咪达唑仑和1'-羟基咪达唑仑的线性范围分别为1.95~2 000、0.98~250、0.48~2 000、0.98~250、0.98~2 000、0.48~125、1.95~2 000和1.95~250μg·L~(-1)。RSD<15%且无基质效应。结论该方法快速、灵敏、重现性好,可用于血浆中上述探针药物/代谢产物浓度的测定,便于深入进行代谢酶CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的代谢相关研究。     

LC-MS/MS方法测定大鼠血浆中亮丙瑞林浓度

目的建立迅速、简单、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中亮丙瑞林的浓度。方法血浆样品采用固相萃取的方法,混合溶液(乙腈-水-甲酸=21.3:78.5:0.2,v/v/v)为流动相;采用Dikma C18柱(30 mm×4.6 mm,5μm)分离,通过电喷雾电离源(ESI),以选择性反应监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 605.5→221.1(亮丙瑞林)和m/z 584.5→221.1(内标,丙氨瑞林)。结果建立的人血浆内亮丙瑞林测定方法线性范围为0.02~100 ng·m L-1,定量下限可达0.02ng·m L-1。日内、日间精密度(RSD)均<13%。结论该方法预处理简洁,灵敏,专属性强,可方便用于大鼠血浆中亮丙瑞林的测定。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿魏酸的血药浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定大鼠血浆中阿魏酸的血药质量浓度。方法色谱柱采用Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),仪器采用API 4000三重四极杆串联质谱仪,采用多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)扫描方式检测,采用沉淀蛋白法处理样品,用于定量分析的离子对为m/z 193.1→m/z 134.1(阿魏酸)和m/z 121.2→m/z 77.0(苯甲酸,内标)。结果该方法的线性范围在5.0～2 000.0μg.L-1,定量下限为5.0μg.L-1,且血浆中内源性物质不干扰阿魏酸的测定;日内和日间精密度RSD均小于15%;阿魏酸的平均提取回收率为91.0%～100.5%,基质效应在87.8%～89.7%。结论该方法适用于阿魏酸在大鼠体内的药物动力学研究。     

液-质联用法测定大鼠血浆中ZTW-41浓度

目的： 建立快速、灵敏、准确的LC-MS/MS法测定大鼠血浆中ZTW-41的浓度，并将该方法应用于ZTW-41的药动学研究。方法： 以卡马西平为内标，血浆样品用甲醇沉淀蛋白后，通过ZORBAX Esplise XDB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×100 mm，3.5-Micron）进行分离，选择75%甲醇溶液（含5 mmol·L^-1甲酸铵和0.1%甲酸）-甲醇溶液（含5 mmol·L^-1甲酸铵和0.1%甲酸）作为流动相进行等度洗脱，流速为0.5 mL·min^-1。通过ESI，以多反应监测模式（MRM）进行正离子检测，ZTW-41和卡马西平的MRM离子对分别为m/z 540.0→168.2和m/z 237.0→194.2；大鼠尾静脉给予ZTW-41前和给药后不同时间点采集血浆，血浆样品前处理后进行LC-MS/MS检测分析。结果： 大鼠血浆中ZTW-41在10~3 000 ng·mL^-1浓度范围内具有良好的线性关系，R² ≥ 0.99；定量下限和各浓度质控样品批间、批内精密度（RSD%）在5.82%以内，准确度（RE%）在-0.81%~4.87%之间。大鼠尾静脉给予20 mg·kg^-1的ZTW-41后，C_max为（244.78±46.67）ng·mL^-1，t_1/2为（21.17±2.08）h。结论： 本研究建立的LC-MS/MS定量分析方法可快速、灵敏、准确地测定大鼠血浆中ZTW-41的浓度，并成功应用于ZTW-41的药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中阿普唑仑及其代谢物的浓度

目的 建立同时测定人血浆中阿普唑仑(抗焦虑药)及其代谢物α-羟基阿普唑仑、4-羟基阿普唑仑浓度的液相色谱一串联质谱方法.方法 用Asi-lent Zorbax SB C_(18)(2.1 mm×30 mm,3.5μm)色谱柱,流动相为25 mmol·L~(-1)甲酸-乙腈(58:42),流量为0.2 mL·min~-,柱温40℃,进样量50μL,正离子电离、多离子反应监测进行定量分析.结果 阿普唑仑和2个代谢物线性范围分别为0.5～50.0 ng·mL~-(γ=0.9960),0.05～2.00 ng·mL~(-1)(γ=0.9961,0.9922).3者的提取回收率为75.0%～87.3%(RSD<10%).结论 本方法灵敏、准确、快速,可用于临床上阿普唑仑及其代谢产物血药浓度监测和药代动力学研究.     

LC-MS/MS method for the simultaneous determination of icariin and its major metabolites in rat plasma

A rapid and sensitive method using liquid chromatography-tandem mass spectroscopy (LC-MS/MS) was developed and validated for the simultaneous quantitative determination of icariin and its two major metabolites, icariside I and icariside II in rat plasma. The analytes were extracted by liquid-liquid extraction with ethyl acetate after internal standard (daidzein) spiked. The separation was performed by a ZORBAX SB-C(18) column (3.5 microm, 2.1 mm x 100 mm) and a C(18) guard column (5 microm, 4.0 mm x 2.0mm) with an isocratic mobile phase consisting of acetonitrile-water-formic acid (50:50:0.05, v/v/v) at a flow rate of 0.25 mL/min. The Agilent G6410A triple quadrupole LC-MS system was operated under the multiple reaction monitoring (MRM) mode using the electrospray ionization technique in positive mode. The nominal retention times for icariin, icariside I, icariside II and daidzein were 1.21, 1.88, 2.34 and 1.35 min, respectively. The lower limits of quantification (LLOQ) of icariin, icariside I and icariside II of the method were 1.0, 0.5 and 0.5 ng/mL, respectively. The method was linear for icariin and its metabolites with correlation coefficients >0.995 for all analytes. The intra-day and inter-day accuracy and precision of the assay were less than 12.5%. This method has been applied successfully to a pharmacokinetic study involving the intragastric administration of icariin to rats.     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度

目的：建立快速灵敏高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度,并研究其单用及联用时在其体内的药动学特征。方法：色谱柱：Diamonsil ODS C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（70∶30,V/V）;流速：0.8 mL·min^-1,进样量10 μL。采用ESI+源,选择性离子检测方式（SIM）,对离子反应m/z 559.2（阿托伐他汀钙）,m/z 406.0（非洛地平）,m/z 325.2（内标为甲基睾酮）进行检测。结果：阿托伐他汀钙和非洛地平在0.01~0.8 μg·mL^-1范围内线性关系良好,定量下限0.01 μg·mL^-1,精密度、稳定性均符合要求。与单用组相比,药物联用组阿托伐他汀钙的最大血药浓度由（677.74±100.86）μg·L^-1增加到（789.80±12.16）μg·L^-1,血浆药物-时间曲线下面积由（5 755.90±1 210.84）h·μg·L^-1增加到（6 931.74±228.11）h·μg·L^-1,半衰期由（3.77±0.89）h变为（3.60±0.36）h;联用组中非洛地平的最大血药浓度由（492.40±69.30）μg·L^-1上升到（751.50±26.12）μg·L^-1,血浆曲线下面积由（4 150.66±725.61）h·μg·L^-1增加到（6 854.87±725.61）h·μg·L^-1,半衰期由（2.64±0.20）h延长至（2.88±0.23）h。结论：该方法灵敏、准确、可靠,专属性强,适用于阿托伐他汀钙和非洛地平在大鼠体内的药动学研究。     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中多奈哌齐和美金刚的含量

目的建立一种简单、快速的LC-MS/MS法,同时测定大鼠血浆中多奈哌齐和美金刚的含量,研究多奈哌齐和美金刚在大鼠体内药动学的相互影响。方法大鼠血浆样品用正己烷-乙醚(体积比为1∶1)提取,Agilent-TC-C_(18)柱分离;流动相为甲醇-水(含体积分数为0.05%的甲酸溶液)(体积比为90∶10),流速为0.7m L·min~(-1),分流比为1∶1;质谱:采用电喷雾电离源,正离子方式检测,多反应监测扫描。结果多奈哌齐与美金刚线性范围分别为0.5~50.0μg·L~(-1)和2.0~200μg·L~(-1);定量下限分别为0.5μg·L~(-1)和2.0μg·L~(-1);准确度(RE)均小于15%,日内日间精密度(RSD)均不大于13.3%。结论该法简单、灵敏、选择性强,适用于同时测定大鼠血浆中多奈哌齐和美金刚的含量,并成功应用于多奈哌齐和美金刚在大鼠体内药动学相互影响的研究。     

LC-MS/MS快速测定大鼠血浆中HHY-002浓度

目的：建立用于测定治疗慢性心律失常药物HHY-002的大鼠血浆测定法。方法：流动相为乙腈-0．1％甲酸（65：35）,流速0．200mL／min,色谱柱Phenomenex LunaC18柱（150mm×2．00mm,5μm,5micron）,进样量为10μL,柱温35℃,以地西泮为内标。结果：HHY-002在1．98～1013．50ng／mL的范围内呈良好的线性关系（r=0．998）,最低定量限达1．98ng／mL,绝对回收率高于80％,日内和日间误差小于10％,方法回收率大于（81．4±4．5）％,符合生物样品分析要求。结论：建立的LC—MS／MS方法专属性强,灵敏度高,可用于HHY-002的体内定量分析。     

尼美舒利分散片在健康人体内的药代动力学及生物等效性的LC-MS/MS研究

目的:建立人血浆中尼美舒利浓度的LC-MS/MS测定法,并用于尼美舒利分散片的药代动力学和生物等效性研究。方法:采用自身双交叉试验设计,20名男性受试者随机分成2组,分别单剂量口服100 mg受试制剂或参比制剂,0～24 h间隔采集血样。以LC-MS/MS内标法测定尼美舒利血药浓度,使用Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(82∶18,v/v);多反应监测[M+H]+离子通道分别为m/z 309.1→m/z 153.9(尼美舒利)和m/z 237.1→m/z 194.0(内标卡马西平),DAS 2.1计算药动学参数。结果:建立的LC-MS/MS法在0.075～12μg·mL-1范围内色谱响应与浓度相关性良好,最低定量限为0.075μg·mL-1,批内及批间精密度RSD均小于15%。受试制剂与参比制剂的Tmax分别为(3.0±0.7)h和(3.5±1.0)h,Cmax分别为(4.863±1.194)μg·mL-1和(4.657±1.038)μg·mL-1,t1/2分别为(3.2±1.0)h和(3.3±1.1)h,AUC0-24 h分别为(32.35±12.50)h·μg·mL-1和(32.32±11.69)h·μg·mL-1,相对生物利用度F为(105.2%±35.0)%。结论:建立的LC-MS/MS法准确、灵敏,结果可靠,测得尼美舒利受试制剂和参比制剂生物等效。     

LC-MS-MS法同时测定人血浆中阿戈美拉汀及其2种代谢产物的浓度

目的建立同时测定人血浆中阿戈美拉汀及其代谢产物7-去甲阿戈美拉汀和3-羟基-阿戈美拉汀浓度的方法。方法采用LC-MS/MS法(液相色谱串联质谱)进行检测,以非那西汀为内标、Phenomenex ODS-3为色谱柱,A(0.2%甲酸铵+100%水)-B(甲醇)=30∶70为流动相进行色谱分离。采用ESI(电喷雾电离源)和MRM(多反应监测)的方式进行正电荷检测,用作定量分析的阿戈美拉汀、7-去甲-阿戈美拉汀、3-羟基-阿戈美拉汀和非那西汀的离子反应对m/z分别为244.1→185.1、230.1→171.1、260.1→201.1、180.1→110.1。结果阿戈美拉汀、7-去甲-阿戈美拉汀、3-羟基-阿戈美拉汀分别在0.045 7~100 ng/m L、0.137 2~300 ng/m L、0.457 2~1000 ng/m L范围内线性关系良好;最低检测限分别为0.045 7、0.137 2、0.457 2 ng/m L;所有待测样本的日内及日间精密度和准确度均符合相关生物样品分析的要求,且RSD<10%。在稳定性试验中,血浆样品在室温放置4 h、在4℃放置24 h、经历3次冷冻-解冻循环及在-80℃中放置3个月等条件下均可保持稳定。结论该方法具有操作简便、检测快速及灵敏性好等特点,能够用于临床相关药动学研究。     

Simultaneous determination of pioglitazone and its two active metabolites in human plasma by LC-MS/MS

A liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed and validated for the simultaneous determination of pioglitazone (PIO) and its two metabolites: M-III (keto-derivative) and M-IV (hydroxy-derivative) in human plasma. Human plasma samples of 0.2 ml were extracted by a single step liquid-liquid extraction procedure and analyzed using a high performance liquid chromatography (HPLC) electrospray tandem mass spectrometer system. The compounds were eluted isocratically on a C-18 column, ionized using a positive ion atmospheric pressure electrospray ionization source and analyzed using multiple reaction monitoring mode. The ion transitions monitored were m/z 357-->134 for PIO, m/z 371-->148 for M-III, m/z 373-->150 for M-IV and m/z 413-->178 for the internal standard. The chromatographic run time was 2.5 min per injection, with retention times of 1.45, 1.02 and 0.95 min for PIO, M-III and M-IV, respectively. The calibration curves of pioglitazone, M-III and M-IV were well fit over the range of 0.5-2000 ng/ml (r(2)>0.998759) by using a weighted (1/x(2)) quadratic regression. The inter-day precisions of the quality control samples (QCs) were 相似文献   

LC-MS/MS法测定大鼠血浆内尼可地尔浓度及其药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定尼可地尔在大鼠血浆中的浓度,并初步研究其在大鼠体内的药动学行为。方法:血浆样品以甲醇沉淀,采用Kromasil 100-5-C18(2.1 mm×150 mm,5.0μm)色谱柱进行色谱分离。以甲醇-含甲酸铵和甲酸的水溶液为流动相,流速0.3 mL·min-1,进样量4μL,LC-MS/MS分析,分别以m/z 212.1→136.0和m/z 271.2→172.2为尼可地尔和内标(甲苯磺丁脲)的质谱检测条件。大鼠灌服10 mg·kg-1尼可地尔后,不同时间点取样测定其血浆中尼可地尔的浓度。由DAS 2.0计算药动学参数。结果:尼可地尔质量浓度在5.0~2 000.0 ng·mL-1内线性关系良好(r=0.997 9,权重1/X2);定量下限为5.0 ng·mL-1;尼可地尔和内标的提取回收率均高于95%,日内、日间的RSD均小于15%;尼可地尔血浆样品在室温放置4 h,-70℃冰箱放置15 d以及预处理后室温放置24 h的变化率均小于15%。大鼠口服灌胃尼可地尔(10 mg·kg-1)后,尼可地尔在大鼠体内吸收较快,达峰时间约为0.3 h,达峰浓度约为15.0μg·m L-1。结论:建立的LC-MS/MS方法适合于尼可地尔的药动学研究。     

液相色谱-质谱联用法同时测定大鼠血浆中柔红霉素和汉防己甲素的浓度

目的:建立一种灵敏快速的LC-MS/MS方法,能够同时测定大鼠血浆中的柔红霉素(DNR)和汉防己甲素(Tet)含量。方法:色谱柱使用的是BDS HYPERSIL-C₈柱(2.1 mm×100 mm,3 μm);采用乙腈-5 mmoL·L^-1醋酸铵(46:54 V/V)作为流动相, 其中含千分之四的甲酸;流速设为0.2 ml·min^-1。采用醋酸乙酯对血浆样品进行液液萃取,选择阿霉素(DOX)为内标,进行HPLC-MS/MS分析,正离子扫描, MRM模式检测。DNR、Tet和IS的定量检测离子对分别为m/z 528.4→321.3,m/z 623.1→381.8,m/z 544.4→397.6。结果:大鼠血浆中检测DNR及Tet的线性范围分别为2~500 ng·ml^-1,0.5~400 ng·ml^-1,DNR与Tet高、中、低浓度提取回收率均>86%,日内精密度RSD<7.3%,日间精密度RSD<4.9%,准确度RE在-0.4%~4.5%范围内。结论:本方法可灵敏、快速地测定大鼠血浆中DNR及Tet 浓度。     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中舒巴坦的浓度及其药动学研究

目的：建立测定大鼠血浆中舒巴坦血药浓度的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法,探讨美罗培南、亚胺培南对舒巴坦在大鼠体内的药动学影响。方法：将18只SD大鼠随机分为舒巴坦组、美罗培南+舒巴坦组和亚胺培南+舒巴坦组,分别静脉注射给药,按规定时间点采血,血浆样品经乙酸乙酯萃取,LC-MS/MS法测定血药浓度;采用负离子模式,多重反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）,定量离子对为m/z 232.3→m/z 139.9（舒巴坦）和m/z 423.4→m/z 207.1（头孢呋辛,内标）。经DAS 2.0.1计算药动学参数,并进行统计学比较。结果：舒巴坦在0.250~200 μg·mL^-1范围内线性关系良好,方法学符合要求。药动学试验结果表明,合用美罗培南或亚胺培南后,舒巴坦在大鼠体内的主要药动学参数t_max、C_max、AUC、MRT、t_1/2z、CL_z和V_z与单用舒巴坦相比,无显著性差异。结论：和已报道的方法比较,本研究所建方法具有快速、高效,生物样品用量小的特点,适用于舒巴坦在大鼠体内药动学的研究;美罗培南、亚胺培南对舒巴坦在大鼠体内的药动学过程无明显影响,提示评价此类药物相互作用还需同时考虑药效学等方法。     

液相色谱-质谱联用法测定大鼠血浆中木通皂苷D的浓度

目的建立液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）测定大鼠血浆中木通皂苷D的浓度。方法选用XDB-C18色谱柱,以5 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）-甲醇溶液为流动相,采用梯度洗脱进行分离。样本经甲醇沉淀后进样,选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测扫描方式进行检测。结果木通皂苷D线性范围为10～1000 ng/ml,最低定量限为10ng/ml。准确度与精密度结果显示方法日间、日内变异均小于15%,相对误差为-2.8%～4.6%,低、中、高3个浓度提取回收率为95.3%～108.1%。结论本研究所建立的方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,可用于大鼠血浆中木通皂苷D浓度的测定和药代动力学研究。     

LC-MS鉴定大鼠血浆山柰酚代谢产物

目的:采用液相色谱-质谱联用技术鉴定大鼠给药山柰酚单体后血浆中代谢产物。方法:取给药后大鼠的血浆样品经酶水解、酸水解后,进行色谱分离,采用液相色谱-质谱联用仪检测,大气压电喷雾离子源(EPI)负离子条件下进行扫描,鉴定大鼠给药山柰酚(30 mg.kg-1)单体后血浆中代谢产物的结构。结果:通过与山柰酚对照品谱图比较,结合质谱仪扫描结果分析,在大鼠给药山柰酚单体后血浆中鉴定出山柰酚(m/z286.0)代谢产物结构。结论:采用酶水解、酸水解的方法可快速、有效地鉴定出大鼠血浆中山柰酚代谢产物,为进行含山柰酚中药及其复方的药物代谢动力学研究奠定科学基础。