利用裸鼠角膜微囊观察人肝癌诱导肿瘤血管形成

目的 观察不同转移潜能的肝癌细胞诱导肿瘤血管的能力。方法 用裸鼠角膜制作微囊，将来自不同转移潜能肝癌细胞ＩＣＩＤ２０（高转移）和ＬＣＩＤ３５（低转移）植入微囊。在裂隙灯下观察肿瘤血管形成情况。结果 ＬＣＩＤ２０诱导的肿瘤血管在范围和条数上均高于ＬＣＩＤ３５。结论 高转移肝癌诱导肿瘤血管能力高于低转移肝癌，角膜微囊模型是研究肝癌肿瘤血管形成的影响因素和干预治疗的较理想模型。     

抗肿瘤血管形成剂抑制肝癌生长及转移的实验研究

目的　研究α干扰素 (IFN α)对肝癌生长及转移的抑制作用及其是否通过抑制一氧化氮合酶 (Ⅱ型 ,iNOS)和血管内皮生长因子 (VEGF)进而减少肝癌血管形成起作用。方法　应用裸鼠人肝癌转移模型LCI D2 0 ,于肿瘤移植后第 2天每只开始皮下注射不同剂量IFN α(3× 10 5U/d ,6×10 5U/d) ,每天 1次 ,对照组注射相同体积的生理盐水。每组治疗 35d后处死部分裸鼠 ,测量移植瘤大小 ,观察肺转移情况 ;剩余裸鼠继续用药观察IFN α对其生存时间的影响。LCI D2 0肿瘤组织移植到裸鼠角膜建立角膜微囊移植模型 ,检测IFN α对肝癌肿瘤血管形成的抑制作用。免疫组织化学方法检测治疗前后肝癌组织iNOS ,VEGF及肿瘤微血管密度变化。结果　对照组裸鼠肺转移率为10 0 % (10 /10 ) ,移植瘤大小为 8475± 2 6 36mm3,生存时间为 45± 4d ;IFN α 3× 10 5U/d治疗组分别为 5 0 % (4/8)、76 9± 2 87mm3 和 81± 6d ,与对照组比较移植瘤大小及生存时间差别有统计学意义 (P<0 0 1) ;而二者之间肺转移率无统计学差别 (P >0 0 5 ) ;IFN α 6× 10 5U/d治疗组则分别为 0 (0 /8)、13± 9mm3 和 10 5± 2 4d ,与对照组比较差别有统计学意义 (P <0 0 1)。应用裸鼠角膜微囊移植模型检测LCI D2 0肝癌组织有较强的诱导肿瘤血管形成的效应     

重组腺相关病毒介导caveolin-1基因表达抑制肝癌新生血管形成的实验研究

目的 探讨caveolin-1参与肝细胞癌血管生成及影响血管通透性的作用机制.方法 构建肝癌细胞系HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,局部注射编码重组可溶性caveolin-1蛋白的重组腺相关病毒载体rAAV-PEG-caveolin-1,观察其对肝癌细胞生长的抑制作用;通过肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)检测肿瘤新生血管的生成;Western blot检测脉管标志蛋白PECAM-1表达改变;FITC标记右旋糖苷测定肿瘤微血管通透性;放射强度测定法检测肝癌组织中eNOS活性,TUNEL法检测caveolin-1对肿瘤细胞的诱导凋亡效应.结果 rAAV-PEG-caveolin-1转染组治疗第14天后,移植瘤的瘤重较对照组和空载体转染组有不同程度的减小(P＜O.05);免疫组化分析及Western blot结果显示rAAV-PEG-caveolin-1转染组较对照组及空载体组MVD及PECAM-1表达显著减少(P＜0.05);FITC-右旋糖苷测定表明rAAV-PEG-caveolin-1可有效降低肿瘤微血管通透性;rAAV-PEG-caveolin-1转染组较对照组及空载体组eNOS活性明显下降(P＜0.05);TUNEL分析显示rAAV-PEG-caveolin-1可诱导肿瘤细胞凋亡.结论 Caveolin-1是血管生成调节的关键分子,能显著抑制肿瘤新生血管的形成,并能有效降低肿瘤微血管的通透性.

Abstract：

Objective To investigate the antitumor effect of the recombined adeno-associated virus encoding caveolin-1 regulated by progression-elevated gene (PEG) promotor on the angiogenesis of implanted human hepatocellular carcinoma(HCC) cell lines in a nude mouse model. Methods HepG2 cells were inoculated subcutaneously into NOD/SCID mice, and animals were treated with rAAV-PEG-caveolin-1 after tumor cell innoculation. The fluorescence ratio of Evans blue to FITC-dextran was used to assess the changes of microvasculature permeability of the tumor. Western blot and immunohistochemical analyses were employed to detect PECAM-1 expression in tumor microvascular endothelium and microvessel density(MVD), respectively; NOS activity was assessed by citrulline generation. Tumor growth was observed and tumor cell apoptosis in tumor tissues were measured by TUNEL. Results Tumor growth was significantly inhibited in mice injected with rAAV-PEG-caveolin-1. The administration of rAAV-PEG-caveolin-1 significantly blocked vascular leakage in the tumor microcirculation. The levels of PECAM-1 protein detected by Western blot were markedly reduced in rAAV-PEG-caveolin-1-treated mice, and there were fewer MVD in tumors from caveolin-1-treated mice, while NOS catalytic activity was much lower in rAAV-PEG-caveolin-1-treated mice compared to the control and empty vector-treated animals. TUNEL demonstrated significant induction of tumor cell specific apoptosis. Conclusions rAAV-PEG-caveolin-1 can reduce tumor progression through blocking microvascular formation by inhibiting eNOS.     

重组腺相关病毒介导caveolin-1基因表达抑制肝癌新生血管形成的实验研究

目的 探讨caveolin-1参与肝细胞癌血管生成及影响血管通透性的作用机制.方法 构建肝癌细胞系HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,局部注射编码重组可溶性caveolin-1蛋白的重组腺相关病毒载体rAAV-PEG-caveolin-1,观察其对肝癌细胞生长的抑制作用;通过肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)检测肿瘤新生血管的生成;Western blot检测脉管标志蛋白PECAM-1表达改变;FITC标记右旋糖苷测定肿瘤微血管通透性;放射强度测定法检测肝癌组织中eNOS活性,TUNEL法检测caveolin-1对肿瘤细胞的诱导凋亡效应.结果 rAAV-PEG-caveolin-1转染组治疗第14天后,移植瘤的瘤重较对照组和空载体转染组有不同程度的减小(P＜O.05);免疫组化分析及Western blot结果显示rAAV-PEG-caveolin-1转染组较对照组及空载体组MVD及PECAM-1表达显著减少(P＜0.05);FITC-右旋糖苷测定表明rAAV-PEG-caveolin-1可有效降低肿瘤微血管通透性;rAAV-PEG-caveolin-1转染组较对照组及空载体组eNOS活性明显下降(P＜0.05);TUNEL分析显示rAAV-PEG-caveolin-1可诱导肿瘤细胞凋亡.结论 Caveolin-1是血管生成调节的关键分子,能显著抑制肿瘤新生血管的形成,并能有效降低肿瘤微血管的通透性.     

重组腺相关病毒介导caveolin-1基因表达抑制肝癌新生血管形成的实验研究

目的 探讨caveolin-1参与肝细胞癌血管生成及影响血管通透性的作用机制.方法 构建肝癌细胞系HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,局部注射编码重组可溶性caveolin-1蛋白的重组腺相关病毒载体rAAV-PEG-caveolin-1,观察其对肝癌细胞生长的抑制作用;通过肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)检测肿瘤新生血管的生成;Western blot检测脉管标志蛋白PECAM-1表达改变;FITC标记右旋糖苷测定肿瘤微血管通透性;放射强度测定法检测肝癌组织中eNOS活性,TUNEL法检测caveolin-1对肿瘤细胞的诱导凋亡效应.结果 rAAV-PEG-caveolin-1转染组治疗第14天后,移植瘤的瘤重较对照组和空载体转染组有不同程度的减小(P＜O.05);免疫组化分析及Western blot结果显示rAAV-PEG-caveolin-1转染组较对照组及空载体组MVD及PECAM-1表达显著减少(P＜0.05);FITC-右旋糖苷测定表明rAAV-PEG-caveolin-1可有效降低肿瘤微血管通透性;rAAV-PEG-caveolin-1转染组较对照组及空载体组eNOS活性明显下降(P＜0.05);TUNEL分析显示rAAV-PEG-caveolin-1可诱导肿瘤细胞凋亡.结论 Caveolin-1是血管生成调节的关键分子,能显著抑制肿瘤新生血管的形成,并能有效降低肿瘤微血管的通透性.     

重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体的构建及其应用

目的　构建表达人内皮细胞抑制素 (Endostatin)的重组腺病毒载体 ,并进行活性检测。方法　将含有IL3分泌肽的人Endostatin全长cDNA插入穿梭质粒pAdCMV产生重组质粒pAd IL3 Endo ,通过脂质体介导与 pBHG1 0共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生重组腺病毒Ad IL3 Endo。体外转染人结肠癌SW62 0细胞并观察其上清对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)生长的影响。结果　扩增到的Ad IL3 Endo的滴度为 4 .3× 1 0 1 2 空斑形成单位 (pfu) /L ,多聚酶链反应 (PCR)显示在转染的细胞中有人EndostatincDNA的存在 ,Westernblot显示转染细胞上清中有人Endostatin蛋白表达 ,台盼蓝染色显示其上清作用 72h后HUVEC的生长被抑制了 67% (P <0 .0 5)。结论　所制备的重组人Endostatin腺病毒载体能有效表达具有生物学活性的人Endostatin ,为进一步的研究奠定了基础     

Endostatin抑制高转移性人肝癌皮下移植瘤的生长

目的　探讨Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 对高转移潜能肝癌ＬＣＩＤ２０ 生长的抑制作用。方法　ＬＣＩＤ２０ 组织植入裸鼠皮下,分别采用不同剂量的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ、顺铂以及二者联合治疗。每５ 天测量肿瘤的长短径。结果　２ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １ 的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 对肿瘤生长无作用,４ ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－ １ 的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ 和１ ｍｇ·ｋｇ－ １·ｄ－ １的顺铂对肿瘤生长有抑制作用,而联合用药组对肿瘤生长的抑制更强。结论　足量血管形成抑制剂可抑制肝癌生长;与细胞毒性药物联合应用可提高疗效。     

Alphastatin体外抑制血管内皮细胞血管生成的实验研究

血管新生（angiogenesis）是肿瘤生长和转移过程中一个非常重要的阶段.研究表明,当肿瘤大小超过1～2 mm^3时,其继续生长和转移则依赖于新血管的形成.抗肿瘤血管生成制剂可以阻断瘤体血供,有效地抑制肿瘤生长、转移和复发.目前,多种血管生成抑制剂相继被发现,研究证实具有良好的效果.2004年Staton等首次研究发现人纤维蛋白原α链末端的24个氨基酸片段具有抑制体外血管生成和鼠源性肿瘤血管生成的作用,他们将其命名为alphastatin.本研究中,我们在体外模拟血管生成,探讨了alphastatin对人血管内皮细胞的作用,为进一步抗人源性肿瘤实验提供了依据.     

重组腺病毒携带人血管抑素基因抑制胰腺癌血管生成的研究

目的研究重组腺病毒介导的人血管抑素基因(Ad-hAG)对胰腺癌血管生成的抑制作用。方法通过病毒重组技术将人血管抑素K5基因克隆人增殖缺陷型腺病毒基因组中,获得腺病毒滴度达5.5×10~(10)pfu/ml。转染人胰腺癌细胞,Western印迹和ELISA法检测人血管抑素基因的蛋白表达情况,并通过建立荷人胰腺癌的裸鼠动物模型(每组15例),微血管密度计数分析血管抑素对胰腺癌血管形成的影响。结果成功构建了携带血管抑素K5基因的腺病毒Ad-hAG;检测到重组腺病毒载体介导的血管抑素基因在胰腺癌细胞内高表达,微血管密度计数(MVD)治疗组为8.75±2.12,对照组MVD分别为20.52±1.25、18.52±1.36(t=6.165,P<0.05)。结论重组腺病毒介导的血管抑素基因在体内、外均获得高效表达,可明显抑制裸鼠胰腺癌血管形成和肿瘤生长。     

血管生成抑制剂SU6668对SCID鼠胃癌生长和转移抑制的作用

目的研究血管生成抑制剂SU6668对胃癌生长和转移的抑制作用。方法完整组织块SCID鼠胃壁原位种植,建立类似于临床的胃癌转移模型。将裸鼠48只随机分为4组,每组12只。移植后第7天开始,分别自腹腔注射生理盐水(对照组)、氟尿嘧啶(5-FU组)、SU6668制剂(SU6668组)、5-FU和SU6668制剂联合应用(5-FU加SU6668组),每日1次。共6周。种植后第8周末处死动物。原位肿瘤切除称重,计算抑瘤率、测定肿瘤微血管密度(MVD)和细胞凋亡指数(AI),并检查转移情况,计算转移抑制率。结果对照组、5-FU组、SU6668组和5-FU加SU6668组的抑瘤率分别为0、47．5%、64．1%和69．2%；MVD分别为13．4±5．4、11．6±5．1、6．6±3．1和4．8±2．9；AI分别为3．67±2．93、6．52±4．19、9．25±5．11和14．83±7．95；肝转移抑制率分别为0、25%、62．5%和74．9%；腹膜转移抑制率分别为0、19．9%、69．9%和90%。SU6668组和5-FU加SU6668组胃癌生长和转移受到明显抑制,以5-FU加SU6668联用组效果最明显。结论SU6668对胃癌生长和转移有明显抑制作用,与5-FU联用可起协同抑制作用。     

雷帕霉素在人肝癌裸鼠肝移植瘤血管形成和肿瘤进展中的作用

目的 探讨雷帕霉素(RPM)在人肝癌裸鼠肝移植瘤血管形成和肿瘤发展中的作用.方法 建立人肝癌裸鼠肝移植瘤模型,使用RPM、环孢素A(CsA)进行干预治疗,采用实时定量PCR法检测移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的表达,免疫组织化学方法和图像分析技术检测移植瘤VEGF蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和微血管密度(MVD),ELISA法检测外周血VEGF蛋白水平的变化.结果 (1)RPM、CsA和对照组移植瘤重量分别为(372±35)mg、(769±39)mg、(751±42)mg;RPM组移植瘤重量较对照组显著减少(P<0.01);CsA组和对照组比较无明显变化(P>0.05).(2)RPM组移植瘤VEGF mRNA、蛋白和PCNA的表达及外周血中VEGF蛋白水平较对照组显著下调(P<0.05),CsA组和对照组比较无明显差异(P>0.05).(3)RPM组移植瘤MVD较对照组显著减少(P<0.01);CsA组和对照组相比无明显变化(P>0.05).结论 RPM通过阻止肿瘤增殖,下调VEGF的表达,抑制肝癌血管形成和肿瘤进展.     

Caveolin-1促肝细胞癌血管生成的鼠在体实验研究

目的：通过在体动物实验,探讨Caveolin-1与肝细胞癌侵袭转移和肿瘤血管生成的关系。方法：分别用pGC—FU-caveolin-1过表达质粒慢病毒（过表达组）和空载体慢病毒（对照组）感染人肝细胞癌株SMMC7721,建立肝细胞癌裸鼠模型,在体观察成瘤、转移瘤的大小和数量,应用免疫组织化学技术检测成瘤组织标本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达、肿瘤微血管密度（MVD）。结果：过表达组成瘤最大体积和转移瘤数量均大于对照组,[（1018．3±231．6）mm3VS（611．7±149．5）mm3,P〈0．01;（5．8±1．3）VS（1．3±1．6）,P〈0．01];过表达组VEGF和MVD水平均超过对照组,[（5．2±2．5）VS（2．74±8）,P〈0．01;（31．9±21．3）VS（18．2±15．6）,P〈0．01]。结论：Caveolin-1过表达能促进肝细胞癌的侵袭转移和肿瘤血管生成。     

促血管生成素基因转染对人肝癌细胞成瘤性和血管生成的影响

目的 观察促血管生成素—2(Angiopoietin-2)基因转染人肝癌细胞系SMMC7721后对其体外成瘤性和血管生成的影响，进一步研究促血管生成素—2在肝癌血管生成和转移中的作用。方法 选择本身不表达Angiopoietin-2的肝癌细胞系SMMC7721，通过脂质体介导的基因转染方法将Angiopoietin-2基因导入SMMC7721肝癌细胞系，并用G418筛选稳定表达的细胞克隆，用RT—PCR和免疫荧关法检测是否成功构建了携带Angiopoietin-2基因并稳定表达的SMMC7721肝癌细胞系。将30只裸鼠随机分成两组，分别用未转染和转染了Angiopoietin-2基因的SMMC7721肝癌细胞注射于裸鼠皮下产生肿瘤结节，观察肿瘤生长的速度并对肿瘤组织中的微血管进行检测。结果 用RT—PCR方法从RNA水平以及用免疫荧光法从蛋白水平均可以证实新构建的肝癌细胞系携带了Angiopoietin-2基因并能稳定表达其蛋白产物。表达Angiopoietin-2基因后肿瘤生长速度明显加快，肿瘤组织中血管生成的数量较未转染前明显增多。结论 促血管生成素—2的表达增强了人肝癌细胞系SMMC7721的体外成瘤性并促进了肿瘤组织中的血管生成。促血管生成素可能参与了肝癌的新生血管形成的过程。     

凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的 研究部分凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌（肝癌）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测90例肝癌标本中p53、Survivin、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并分析其与肝癌术后复发的关系。结果 p53、Survivin、MMP-2、MMP-9及VEGF的阳性率分别为33．3％、51．1％、60．0％、37．8％及76．7％。经相关性分析,VEGF与MMP-2、VEGF与MMP-9的表达呈正相关;MMP-2、MMP-9及VEGF与术后复发呈正相关（P〈0．05）。MMP-2阴性组的1、2、3年无瘤生存率分别显著高于MMP-2阳性组中的相应指标（P〈0．05）,MMP-9和VEGF中亦发现类似结果。多因素分析发现术前播散结节、镜下微转移灶、血清甲胎蛋白水平以及VEGF和MMP-9的表达水平是肝癌术后复发的独立危险因素。结论 p53和Survivin与肝癌术后复发无关;MMPs和VEGF与肝癌术后复发相关,可用于评价术后复发风险。     

环氧合酶-2和血管内皮生长因子共表达与肝细胞癌血管形成的关系

目的　探讨环氧合酶 (COX) 2与肝细胞癌血管形成的关系。方法　利用免疫组织化学、Westernblot方法检测 48例肝癌组织中COX 2和血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白及逆转录 聚合酶链反应法 (RT PCR)检测COX 2和VEGFmRNA的共表达 ,对共表达COX 2和VEGF蛋白和mRNA的肝癌组织进行微血管记数。结果　免疫组织化学检测中 ,48例肝癌组织 3 6例共表达COX 2和VEGF蛋白。类似结果见于蛋白电泳分析。RT PCR显示 ,48例肝癌组织 3 6例共表达COX 2mRNA和VEGFmRNA。两者之间的表达明显相关 (γ =0 .845 )。共表达COX 2和VEGF蛋白和mRNA的肝癌组织中 ,平均微血管数 (5 6.8± 17.5 )个 ,明显高于阴性表达组。结论　COX 2可能与肝细胞癌的血管形成有关 ,且其作用之一可能是通过上调VEGF通道来发挥的     

聚酯型儿茶素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨聚酯型儿茶素（ＴＳ）的抗癌作用机制。方法 应用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法,透视电镜,琼脂糖凝胶电泳,流式细胞术等方法研究ＴＳ诱导体外培养的人肝癌细胞凋亡。结果 ５０－８００ｍｇ／Ｌ ＴＳ对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长有明显的抑制作用,且量效关系明显。４００ｍｇ／Ｌ ＴＳ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞２４ｈ后,透射电镜观察到凋亡小体;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳上可见典型的“阶梯状”：     

人肝癌血管内皮细胞分离培养、鉴定及比较

目的 建立人肝癌血管内皮细胞(TEC)分离培养方法并鉴定比较.方法 采用CD105、CD31抗体交联免疫磁珠方法优化分选TEC并传代培养;通过形态观察、功能实验、流式检测及实时聚合酶链反应(real-time PCR)等验证比较.结果 CD105+TEC呈细长"纤维条索状",CD31+TEC则呈"梭形";流式检测TEC表达CD68和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)低于5%,排除巨噬细胞和成纤维细胞污染,PCR检测CD105+TEC、CD31+TEC甲胎蛋白mRNA显著低于肿瘤细胞HepG2(P＜0.01),表达水平低于HepG2的1/8,排除肿瘤细胞污染;95%以上阳性分选细胞呈乙酰化低密度脂蛋白摄取实验阳性;增殖实验检测CD105+TEC和CD31+TEC生长48 h的吸光度值分别为0.45±0.04和0.35±0.02(P＜0.05),CD105+TEC增殖能力强于CD31+TEC;TEC在Matrigel胶中可形成毛细管网状结构,CD31+TEC强于CD105+TEC.结论 CD105、CD31抗体交联免疫磁珠分选法均可分离得到高纯度人肝癌TEC.

Abstract：

Objective To isolate, identify and compare vascular endothelial cells derived from human hepatocellular carcinoma (HCC). Methods Modified immunomagnefic methods using magnetic beads conjugated with anti-CD105 and anti-CD31 antibody were used to isolate tumor-derived endothelial cells (TEC), namely CD31 +TEC and CD105 +TEC. CD31 +TEC and CD105 +TEC were cultured in vitro,identified and compared by morphological appearance, functional characterization, flow cytometry and realtime polymerase chain reaction (PCR) analyses. Results The isolated CD105 + TEC presented "fibrous bands" appearance while CD31 + TEC presented "fusiformis" appearance. Macrophages, fibrocytes, and tumor cells contamination was excluded. Surface CD68 and α-SMA expression was less than 5%. Alpha fetoprotein expression was significantly lower in CD31 + TEC and CD105 + TEC than that in HepG2 cells ( P ＜0. 01 ), and the expression level was less than 1/8 folds of HepG2 cells. Internalization of acetylated lowdensity lipoprotein was positive in more than 95% of isolated cells. The absorbance (A) values of CD105 +TEC and CD31 + TEC grown for 48 h were 0. 45 ± 0. 04 and 0. 35 ± 0. 02 respectively ( P ＜ 0. 05 ). Proliferation of CD105 + TEC was significantly more active than CD31 + TEC when cultured in the serum supplemented with medium for 24, 48, and 72 h. The isolated cells could form capillary-like tubes on Matrigel matrix, stronger capability of CD31 + TEC than CD105 + TEC. Conclusion CD31 + TEC and CD105 + TEC can be conveniently purified by modified immunomagnetic methods.     

反应停对人肝细胞癌生长侵袭的作用

目的 观察反应停对人肝细胞癌（HCC）血管生成和肿瘤生长侵袭的干预作用。方法 建立高转移潜能人肝癌裸鼠肝原位移植模型，随机分成4组。各组模型自建立次日起分别经腹腔注射0．5％羧甲基纤维素钠（CMC）、反应停（200mg／kg体重）、紫杉醇（13mg／kg体重）、反应停（200mg／kg体重）＋紫杉醇（13mg／d）。给药第30天处死裸小鼠，观察肿瘤生长、转移情况，分别用免疫组织化学和半定量逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）的方法检测癌组织CD34和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达并记录微血管密度（MVD）。结果 反应停组肿瘤重量、体积均与空白对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。各药物处理组肺转移灶计数、MVD和VEGF均低于对照组，以联合用药组最为显著。结论 反应停对HCC生长无明显抑制作用，但能抑制肿瘤血管生成并降低肺转移。     

转染胸苷磷酸化酶基因对肝癌细胞的双重影响

目的 探讨转染胸苷磷酸化酶(TP)cDNA对肝癌细胞SMMC-7721药理及生理作用的影响。方法构建包含TP cDNA全长的真核表达载体,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TP mRNA表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测药物的敏感性,Boyden小室法检测诱导内皮细胞移动的能力,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 阳性转染克隆(SMMC-7721-pTP)与转染空载体(SMMC-7721-vec)相比,TP mRNA表达水平由0.48±0.06升高至2.09±0.16(P<0.01);氟铁龙的IC50则由(162.25±11.03)μmol／L降至(56.81±9.85)μmol／L(P<0.01);凋亡细胞百分比由(6.36±1.97)％降至(3.76±0.50)％;诱导内皮细胞穿过微孔滤膜的数目则由122±35升高至275±29(P<0.01)。结论转染TP cDNA能够提高SMCC-7721细胞对5-FU前体药物的敏感性,但同时具有抑制细胞凋亡和诱导内皮细胞移动能力增强的不良作用。转染TPcDNA的途径无治疗肝细胞癌的潜在临床价值。