大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧延迟保护作用的研究

目的：研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧的延迟保护作用及其机制。方法：采用细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量作为心肌细胞受损指标。观察终浓度分别为5、10、20、50μg/m1的大蒜素预处理以及预处理12、24、36h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响，并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂H—7、丝裂素激活蛋白激酶(MAPKs)抑制剂PD 98059对大蒜素预处理的作用。结果：大蒜素能提高细胞存活率，减少LDH漏出和MDA生成。其中20μg/m1浓度作用较强。大蒜素预处理12h后即产生延迟保护作用，24h最强，36h消失。H—7、PD 98059能够完全清除大蒜素预处理的心肌保护作用。结论：大蒜素可以模拟缺血预处理延迟保护作用，其机制涉及PKC及MAPKs信号途径。     

二氮嗪预处理在培养的未成熟鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用

目的　研究线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对培养的未成熟心肌细胞的保护作用。方法　传代培养的未成熟S -D大鼠心肌细胞 ,随机分为对照组、缺氧 /复氧组 (缺氧 3h、复氧 3h)、二氮嗪 (30 μmol/L)组、格列本脲 (10 μmol/L)组、超氧化物歧化酶 (SOD ,3× 10 5U/L) /过氧化氢酶 (CAT ,4 .5× 10 5U/L)组、N - 2乙酰丙酰基甘氨酸 (MPG ,10 0 μmol/L)组。实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)活性、台盼蓝染色法计算细胞死亡率、硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛 (MDA)含量、铈化学染色法观察细胞线粒体结构。结果二氮嗪预处理后细胞死亡率、细胞内MDA含量、培养液中LDH活性较缺氧 /复氧组降低 (P <0 .0 1) ,铈 -氧自由基 (Ce -ROS)形成减少 ;格列本脲、SOD/CAT和MPG可以阻断此保护作用。结论　二氮嗪预处理对未成熟心肌有保护作用 ,这种保护作用与氧自由基有关     

大豆苷元对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察大豆苷元对乳鼠心肌细胞损伤的影响并探讨其机理。方法体外培养乳鼠心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型,测定细胞存活率、上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量。结果大豆苷元10~160μmol/L均能提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率和用MTT法测得的A570 nm值(P<0.01);抑制缺氧/复氧损伤引起心肌细胞的LDH和CK释放;减少MDA的生成,提高SOD的活性,抑制NOS活性,降低NO水平(P<0.05,P<0.01)。结论大豆苷元对乳鼠缺氧/复氧损伤的心肌细胞具有保护作用。     

神经再生素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究神经再生素(NRF)对纯化培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法:采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,观察心肌细胞形态学变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体脱氢酶含量改变,探讨NRF对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。结果:缺氧/复氧损伤后,胞体折光性下降,突起缩短或消失,搏动减弱或消失,NRF各剂量组心肌细胞形态均较缺氧/复氧组明显改善,NRF各剂量组SOD、MDA、线粒体脱氢酶活性与缺氧/复氧组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:神经再生素具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌作用,其机制可能与其抑制心肌脂质过氧化损伤有关。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的研究

目的研究地黄多糖(RPS)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法取出生3天的SD大鼠乳鼠分离心肌细胞,培养72h后分为6组:空白对照组、缺氧/复氧模型对照组、地黄多糖(10、20、40μg/ml)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/ml)干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6h后,通过倒置光学显微镜观察各组细胞形态变化,通过甲基四唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率,通过流式细胞术测定细胞凋亡率;测定各组细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]含量;测定各组细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量。结果与缺氧/复氧模型对照组相比,地黄多糖干预组心肌细胞形态明显好转,细胞存活率明显升高、凋亡率显著降低,培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低,细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,其中以地黄多糖40μg/ml干预组效果最为显著,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论地黄多糖能够有效改善缺氧/复氧损伤心肌细胞形态、提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,提示地黄多糖对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有保护作用。     

香青兰提取物对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究香青兰提取物对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制.方法:提取香青兰的有效成分,用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立H/R的损伤模型,实验分6组:正常对照组、H/R组、总提取物组、氯仿组、乙酸乙酯组及正丁醇组.采用MTT法测定细胞的存活率,乳酸脱氢酶试剂盒(LDH)测定培养液中LDH的含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及硫代巴比妥酸显色法测定活细胞丙二醛(MDA)的含量.结果:各组细胞活力、吸光度值以及LDH、MDA和SOD含量伺比较,差异均有统计学意义(F=102.312、51.007、24.136、70.281和14.335,P<0.05).与正常对照组比较,模型组LDH、MDA的含量及细胞活力明显升高,SOD活性降低(P<0.05);与模型组比较,香青兰提取物各组的细胞活力降低,LDH和MDA含量增加;氯仿和乙酸乙酯组的吸光度值升高;氯仿、乙酸乙酯和正丁醇组的SOD含量增加(P均<0.05).结论:香青兰提取物对H/R心肌细胞的损伤具有保护作用,此作用可能与抑制脂质过氧化和减少心肌细胞的凋亡有关.     

耐氧对乳鼠心肌细胞的损伤作用研究

目的：探讨缺氧对心肌细胞的损伤作用及其机制，方法：原代培养乳鼠主肌细胞，使其缺氧5，10，20和30分钟，分别检测各时相组心肌细胞内游离钙浓度（[Ca^2 ])，ATP含量以及孵育液中LDH含量，用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率，台盼蓝染色检测细胞活力，原位杂交检测bcl-2基因表达。结果：各缺氧组心肌细胞[Ca^2 ]，孵育液LDH含量，凋亡率及活力明显增加，ATP含量明显降低，缺氧10分钟组心肌细胞bcl-2 mRNA表达明显降低，与对照组相比差异有显著性（P＜0．01），结论：缺氧可引起乳鼠心肌细胞严重受损，bcl-2基因在其损伤过程中起重要作用。     

福辛普利拉对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨福辛普利拉对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用. 方法 取SD新生大鼠(1～3 d)120只,培养成心肌细胞,在培养的第4 d随机分为5组(每次取20只,每组重复6次):正常对照组、缺氧/复氧(A/R)组、福辛普利拉剂量l A/R (F1 A/R)组、福辛普利拉剂量2 A/R(F2 A/R)组、福辛普利拉剂量3 A/R (F3 A/R)组.建立缺氧/复氧损伤模型,以福辛普利拉进行干预,对各组分别观察心肌细胞搏动频率、细胞存活率和培养液中乳酸脱氢酶活性. 结果 ①细胞搏动频率(beat/min): A/R组(11.50±3.39)比正常对照组(99.83±4.22)明显减低(P＜0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组显著加快(P＜0.01),比正常对照组稍慢,但无显著性差异(P＞0.05).②细胞存活率: A/R(26.78±4.25%)组比正常对照组(87.96±2.58)明显降低(P＜0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组明显增高(P＜0.01),与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05).③LDH活性: A/R组(69.50±7.34)比正常对照组(10.33±2.73)明显升高(P＜0.01);福辛普利拉各剂量组比A/R组明显降低(P＜0.01),与正常对照组相比虽有升高但无显著性差异(P＞0.05) . 结论 从细胞水平证实福辛普利拉预处理对心肌细胞对缺氧/复氧损伤具有保护作用.     

预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及其机理探讨

目的观察预处理（ＰＣ）对乳鼠心肌细胞缺氧复氧（Ａ／Ｒ）损伤的影响，并探讨其机理。方法采用心肌细胞Ａ／Ｒ损伤模型，用短暂缺氧进行预处理。结果预处理能提高Ａ／Ｒ后心肌细胞存活率，减少细胞ＭＤＡ产生及ＬＤＨ和蛋白质的漏出，激活心肌细胞ＰＫＣ活性。ＰＫＣ抑制剂完全阻断了ＰＣ的细胞保护作用。结论离体心肌细胞存在ＰＣ保护现象，其保护机理与ＰＫＣ激活有关     

葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的 观察葛根素（puerarin,Pue)对缺氧－复氧损伤造成的大鼠乳鼠心肌细胞脂质过氧化反应的作用。方法 分别测定各个时点对照组、模型组及各给药组（1，0．1，0．01g/L Pue)培养上清中SOD活性和MDA含量，细胞MTT代谢率的变化。结果 缺氧及复氧都可造成SOD活性下降、MDA含量升高及MTT代谢率下降，复氧后2h最为显著（P＜0．01）。3种剂量Pue均能对抗这3个指标的异常变化，但浓度越小，作用越弱。结论 Peu能减轻缺氧时产生的自由基损害，减少SOD的消耗，并可能促进其合成，亦可保护心肌细胞的线粒体功能，这些作用呈剂量依赖趋势。     

ATP sensitive K+ channel may be involved in the protective effects of precon ditioning in isolated guinea pig cardiomyocytes

Objective To develop a cellular model of preconditioning by a brief period of hypoxia in isolated guinea pig cardiomyocytes and to determine whether or not an ATP sensiti ve K(+) (K(ATP)) channel is involved in ischemic precond itioning. Methods Single myocytes were isolated from the ventricle of adult guinea pigs.The expe rimental chamber allowed the cells to be exposed to low O(2)pressure.During h ypoxic preconditioning, the cells were equilibrated with normaxic solution for 1 0 minutes and then exposed to hypoxia for 5 minutes, followed by 10 minutes of re oxygenation.The cells were then subjected to 20-180 minutes of hypoxia and reoxygenation.Ionic currents were studied with the patch clamp technique in w hole-cell and cell-attached configurations. Results A 5-minute hypoxic preconditioning offered a significant protection from cell i n jury in subsequent hypoxia-reoxygenation.After a latency of more than 15 minu tes, hypoxia induced a time-independent outward K(+) current which could be blo cked by 5 μmol/L glibenclamide.At 10 mV, the current increased from 78 ±1 5 pA to 1581±153 pA (P&lt;0.01, n=18).However, the latency to develop K(ATP) channel currents (I(KATP)) was greatly shortened in preconditioned c ells, and the current was increased acceleratively.At 10 mV, the current more than 4 nA was recorded in preconditioning cells.In the single channel record ings, the time interval from the first channel opening to maximum opening was also markedly abbreviated in preconditioned cells.Conclusion Isolated guinea pig cardiomyocytes can be preconditioned with a brief period of hypoxia.This hypoxic preconditioning may modify the K(ATP) channel, and make the channel open more readily during the second hypoxia.     

异氟醚预处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的　探讨麻醉药异氟醚预处理对兔心缺血再灌注损伤的保护作用及机制 .方法　将兔 4 0只造成在体局部心肌缺血再灌注模型 ,随机分成 4组 (n=10 ) .对照组无预处理 ;5 - HD组在缺血前 4 0 min给予 5 - HD5 mg· kg- 1 ;异氟醚预处理组给予 10 m L· L- 1 异氟醚 (呼气末 ) 15 min.异氟醚 +5 - HD组以上述方法同时给予异氟醚和 5 - HD.实验中持续监测左室收缩压 (L VSP)、左室舒张末压 (L VEDP)、左室内收缩压最大上升速率 (+dp/ dtmax)和心率 (HR)的变化 ,再灌注结束后用伊文蓝和 TTC染色法确定缺血和梗死心肌范围 .结果　与对照组和 5 - HD组比较 ,缺血前异氟醚降低 L VSP和+dp/ dtmax(P<0 .0 5 ) ,再灌注期各组血流动力学参数无明显差异 .各组梗死范围占左室质量的百分数分别是 (18± 6 ) % ,(2 0± 9) % ,(7± 4 ) %和 (17± 4 ) % ,与其余 3组比较异氟醚预处理显著降低缺血心肌的梗死范围 (P<0 .0 5 ) .对照组、5 -HD组和异氟醚 +5 - HD组无统计差异 (P>0 .0 5 ) .结论　异氟醚预处理对兔心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ,其机制可能与线粒体 K+ 　 ATP通道有关 .     

线粒体ATP敏感钾通道在低氧预处理抗低氧性肺损伤中的作用

目的 探索线粒体ATP敏感钾通道在低氧预处理抗低氧性肺损伤中的作用。方法 利用线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-HD和开放剂DE采用离体肺灌流方法造成大鼠肺预缺氧／缺氧损伤模型。30只大鼠随机分成5组：对照组、缺氧组、低氧预处理（HPC）＋缺氧组、Diazoxide（DE）＋缺氧组、5-HD＋HPC＋缺氧组。通过形态学观察,灌流液总蛋白含量测定,以及肺干湿重比测定,反映各组肺受损程度。结果 与单纯缺氧组相比,DE＋缺氧组及HPC＋缺氧组肺泡及肺组织充血水肿和红细胞渗出明显减轻,肺干／湿重比较大,灌流液蛋白含量较低（P〈0．05）,而5-HD＋HPC＋缺氧组与缺氧组无显著差异（P〉0．05）。结论 肺线粒体ATP敏感钾通道在低氧预处理抗低氧性肺损伤中具有保护作用。     

低氧预适应对离体星形胶质细胞缺氧/复氧耐受性的影响

目的 研究低氧预适应对体外培养的鼠脑星型胶质细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法 通过检测细胞MTT代谢活性、细胞凋亡率以及超微结构变化探讨低氧预适应对于神经胶质细胞缺氧/复氧损伤的影响;细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)等检测初步研究可能机制.结果 低氧预适应后48、72 h给予缺氧/复氧细胞产生了一定程度耐受,与缺氧/复氧损伤组比较,细胞代谢活性有所上升.以低氧预适应后48 h给予缺氧/复氧刺激进行后续实验,与缺氧/复氧损伤组比较,凋亡率下降,SOD活性增高,MDA值较低,透射电镜下细胞结构正常细胞较多.结论 低氧预适应能够提高鼠脑星形胶质细胞缺氧/复氧耐受性,可能与SOD活性增高对抗缺氧/复氧过程中产生的氧自由基对细胞的损伤有关.     

七氟醚和缺氧预适应诱导乳鼠心肌细胞HSP70表达的改变

目的 :探讨七氟醚预适应和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞热休克蛋白 70表达的影响。方法 :第 2代培养心肌细胞随机分为正常对照组 (C组 )、缺氧 /复氧组 (A/R组 )、缺氧预适应组 (IP组 )和七氟醚预适应组 (S组 ) ,每组均缺氧 2h ,复氧 48h。分别取复氧 0 ,1,12 ,2 4,36和 48h的细胞 ,用免疫组化染色检测HSP70 表达并进行图象分析。结果 :在各个时间点 ,S组和IP组间的HSP70 表达均显著高于A/R组和C组 (P <0 .0 1) ,A/R组的HSP70 表达略高于C组 ,S组和IP组间的HSP70 表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。随着复氧时间的延长 ,S组和IP组间的HSP70 表达从 1h开始增加 ,2 4h表达最强 ,与 1h相比差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :七氟醚预处理和缺氧预处理均可诱导乳鼠心肌细胞HSP70 在延迟相呈高表达 ,提示HSP70 参与了七氟醚预适应和缺氧预适应的延迟保护相。     

ROS-mediated ERK activation in delayed protection from anoxic preconditioning in neonatal rat cardiomyocytes

Background The activation of extracellular signal-regulated kinase1/2 (ERK1/2) has been shown to be important signaling pathway in the ischemic preconditioning (IPC) response. Recently, some studies suggest a key role for the mitochondrial ATP-sensitive potassium channel (mKATP) as both a trigger and an end effector of acute and delayed protection of IPC. Hence, this study was undertaken to elucidate the relationship between mKATP and ERK1/2 in the delayed protection mechanism of anoxic preconditioning (APC). Methods An APC model was established using cultured neonatal rat cardiomyocytes. Pharmacological agents ［diazoxide, 5-hydroxydecanoate (5-HD), 2-mercaptopropionylglycine (MPG), and PD98059］ were used to modulate mKATP and ERK1/2 activation. Cellular injury was evaluated by measuring cellular superoxide dismutase (SOD) activity, cell viability, and lactate dehydrogenase (LDH) release. The generation of cellular reactive oxygen species (ROS) and the activation of ERK1/2 were determined at different time points starting from the beginning of preconditioning with anoxia or diazoxide (an mKATP opener). Results Cell viability and SOD activity in the APC ［(81.9±11.4)%, （13.6 ± 3.7） U/L］ and diazoxide ［(79.2±12.4)%, （16.5±4.6） U/L］ groups were significantly higher than in the anoxia/reoxygenation (A/R) ［(42.2±7.3)%, （8.8±2.8） U/L］ group (all P&lt;0.01). LDH activity in the APC group ［(101.9±18.9) U/L］ and diazoxide group ［(97.5±17.7) U/L］ was significantly lower than in the A/R group ［(250.5±43.6) U/L］ (all P&lt;0.01). Both APC and diazoxide simultaneously facilitated intracellular ROS generation and rapid ERK1/2 activation. But the effects of APC and diazoxide were remarkedly attenuated by 5-HP (an mKATP blocker) and by MPG (a free radical scavenger). In addition, the ERK1/2 inhibitor PD98059 also abolished the cellular protective effects induced by diazoxide. Conclusion mKATP may mediate ERK1/2 activation during anoxia preconditioning by generating ROS, which then triggers the delayed protection of APC in rat cardiomyocytes.     

大鼠心肌细胞低氧预处理与低氧后处理血红素氧化酶-1水平的比较

目的比较低氧预处理和低氧后处理对大鼠心肌细胞血红素氧化酶-1水平的影响。方法将培养的心肌细胞分为四组:对照组、低氧预处理组、低氧后处理组和联合组。分别测定各时间段细胞上清液中LDH水平和HO-1水平。结果低氧预处理组和低氧后处理组LDH的水平明显低于对照组(均P<0.01),HO-1水平明显高于对照组(均P<0.05)。联合组LDH的水平及HO-1水平与低氧预处理组、低氧后处理组差异没有显著性(均P>0.05)。结论该研究结果提示低氧预处理和低氧后处理对心肌细胞的保护作用部分是通过HO-1水平增加来实现的,同时也说明二者很可能是通过同一传导通路来实现心肌细胞的保护作用。     

缺氧预处理对脑缺血大鼠脑电图的影响

目的：观察缺氧预处理后脑缺血大鼠的脑电图(EEG)变化,探讨脑电活动改变在脑缺血耐受中的作用。方法：60只雄性Wistar大鼠被随机分为3组：①窒息心停跳组 (ACA组,n=20）,大鼠遭受窒息性心跳停止,1 min后复苏;②缺氧预处理+窒息心停跳组 (HP+ACA组,n=20）,在窒息性心停跳前24 h预先给予大鼠1 min的缺氧预处理4次,每次间隔5 min;③缺氧预处理组 (HP组,n=20）,只给予4次缺氧预处理。观察各组大鼠窒息后心跳停止时间（TCA）、开始复苏后自主循环恢复时间（TROSC）、死亡率和复苏后神经功能评分 (NDS) ,记录预处理及缺血期间EEG变化。结果：ACA组和HP+ACA组大鼠死亡率分别为30%和5%（P<0.01）;与ACA组比较,HP+ACA组TCA明显延长而TROSC明显缩短(P<0.01),复苏后24、48和72 h的NDS明显改善 (P<0.01),窒息后EEG等电位时间、复苏后EEG出现时间和连续EEG出现时间均明显缩短 (P<0.05)。结论：缺氧预处理可通过调整大鼠脑电活动诱发脑缺血耐受作用。     

脑神经生长素对新生儿缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的：探讨脑神经生长素对新生儿缺血缺氧性脑病（HIE）脑损伤的保护作用。方法：选取本院新生儿科收治的98例 HIE 新生儿采用随机数字表法分为试验组和对照组各49例,两组患儿均采用常规治疗,试验组加用脑神经生长素治疗,两组患者均治疗7d 后观察临床效果。结果：治疗后第7d、第14d 两组患儿的 NBNA 评分均显著高于治疗第1d 和对照组;试验组患儿治疗3个月、6个月的 MDI、PDI 评分均显著的高于对照组患儿;试验组患儿治疗有效率81.63%显著高于对照组的63.27%。结论：脑神经生长素辅助常规疗法对 HIE 患儿脑损伤具有显著的保护作用,有利于患儿远期智能发育。