大鼠脑出血后基质金属蛋白酶的动态表达及七叶皂苷钠对其表达的影响

目的 观察大鼠脑出血(ICH)后基质金属蛋白酶-2( MMP-2)、MMP-9蛋白动态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系,以及观察七叶皂苷钠对MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 Wistar大鼠250只随机分为4组:正常对照组10只、假手术组、ICH组和七叶皂苷钠治疗组各80只,于制模后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、120 h、7 d、15 d 8个时间点,测定各组血肿周围脑组织含水量、MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果 治疗组神经功能缺损较ICH组明显改善,尤以6 h～7 d时明显(P<0.01～0.05);6～120 h各治疗组血肿周围脑组织含水量较ICH组明显减少(P<0.01～0.05);ICH后MMP-2蛋白表达在6 h达到高峰,12 h时下降,与正常对照组相比具有统计学意义 (均P<0.01),治疗组MMP-2蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少(均P<0.01);ICH后MMP-9蛋白表达在6 h开始上升,24～48 h达高峰,72 h时下降,与正常对照组相比,具有统计学意义(均P<0.01),其表达水平与血肿周围脑组织含水量呈正相关 (r=0.949, P<0.05);治疗组MMP-9蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少(均P<0.01).结论 大鼠ICH后MMP-2、MMP-9蛋白的表达是ICH后早、中期脑水肿形成主要因素,七叶皂苷钠能降低MMP-2、MMP-9蛋白表达和脑组织含水量,对ICH具有保护作用.     

MMP-2/9与脑出血后脑水肿的关系探讨

目的 探讨MMP-2／9与脑出血后脑水肿的关系。方法 采用胶原酶复制大鼠脑出血模型．通过免疫组化和原位杂交技术测定血肿周围脑组织中MMP-2／9的mRNA和蛋白表达，同时进行脑水含量和渗出脑血管外EB量的测定。结果 大鼠脑出血后血肿周围有明显的脑水肿发生和EB含量显著增加．均于24～48h达高峰。正常和假手术组可见极少量MMP-2蛋白和mRNA阳性染色细胞；而无MMP-9的表达。模型组出现大量MMP-2／9蛋白和mRNA阳性染色细胞；且MMP-9蛋白和mRNA表达在24～48h达高峰，与脑水含量和EB含量呈正相关。结论 大鼠脑血肿周围早期存在MMP-2／9的表达上调，其可能促进了出血后血管源性脑水肿的形成。     

脑出血后血脑屏障通透性的变化及七叶皂苷钠的影响

目的:动态观察大鼠实验性脑出血后血脑屏障通透性的变化及采用七叶皂苷钠治疗后对其的影响。方法:采用胶原酶复制大鼠脑出血模型,通过测定渗出脑血管外的EB量来评价血脑屏障通透性的变化及七叶皂苷钠对其的影响。结果:模型组各时点血肿周围区EB含量与对照组相比明显增高,且随时间延长而显著增加,并在6～96小时内与脑组织含水量呈正相关。用七叶皂苷钠治疗后,治疗组各脑区EB含量有下降,其中绝大部分脑区有显著下降。并存在一定量效关系,呈负相关。结论:脑出血后血肿周围区血脑屏障通透性受到严重破坏。七叶皂苷钠可能具有恢复毛细血管正常通透性,稳定血脑屏障通透性的作用。     

七叶皂甙钠对脑出血大鼠血肿周围TNF-α及Bcl-2表达的影响

目的 研究七叶皂甙钠对脑出血大鼠血肿周围TNF-α及Bcl-2表达的影响.方法 实验大鼠随机分为模型组、七叶皂甙钠治疗组,采用自体股动脉血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,分别于术后24 h、72 h 2个时间点取脑组织,应用免疫组化方法检测血肿周围组织TNF-α及Bcl-2的表达情况.结果 模型组大鼠脑血肿周围组织TNF-α及Bcl-2的表达明显高于治疗组,经七叶皂甙钠治疗后其表达水平明显下降.Bcl-2的表达低于治疗组.结论 七叶皂甙钠可以抑制脑出血炎症因子的表达,减轻脑损伤程度.     

β--七叶皂甙钠对实验性脑出血后AQP4表达及脑水肿的影响

目的研究β--七叶皂甙钠对大鼠脑出血后水通道蛋白4（AQP4）表达及脑水肿的影响,探讨β--七叶皂甙钠治疗出血性脑水肿的作用机制。方法在大鼠苍白球注射胶原酶制作脑出血模型,采用干湿重法观察脑水肿的变化;应用免疫组织化学方法检测脑组织AQP4表达。结果脑出血模型大鼠病灶侧脑含水量、血肿周围AQP4的表达水平均明显高于假手术组（均P〈0．01）;各个时间点β--七叶皂甙钠治疗组病灶侧脑含水量以及血肿周围AQP4的表达水平均明显低于对照组（均P〈0．05）;AQP4表达水平与脑含水量呈正相关（r=0.976,P〈0．01）。结论β--七叶皂甙钠能明显减轻脑出血后脑水肿及AQP4的表达,β--七叶皂甙钠可能抑制AQP4的表达而减轻脑水肿。     

大鼠脑出血后脑内TNF-α的表达作用及七叶皂苷钠的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脑出血(ICH)后的作用及七叶皂苷钠对其影响。方法2004年2月~2005年2月在中南大学湘雅医院选择健康成年雌雄不限SP rague-D aw ley(SD)大鼠85只随机分为ICH模型组(M G)20只、治疗组A(TGA)20只、治疗组B(TGB)20只、假手术组(SG)20只和正常对照组(NG)5只,采用胶原酶制作大鼠ICH模型,通过免疫组化法检测血肿周围脑组织中TNF-α蛋白的表达变化,同时检测基质金属蛋白酶-9(MM P-9)的表达;并检测七叶皂苷钠干预后TNF-α的变化。结果TNF-α蛋白在NG和SG表达很少;而在M G出血后6h开始上升,24h达高峰,以后逐渐下降,96h时明显减少(P<0.01);在出血后6~96h TNF-α的蛋白表达量与MM P-9基因mRNA和蛋白表达呈正相关。在七叶皂苷钠治疗组TNF-α的蛋白表达量明显受到抑制,特别是TGB抑制效果更明显,并存在一定的量效关系,呈负相关(P<0.01)。结论ICH后TNF-α的表达水平提高可能有协同诱导MM P-9的表达作用,从而参与了血管源性脑水肿的形成;而七叶皂苷钠抗脑水肿的作用可能通过包括对TNF-α的抑制在内的多种途径来完成的。     

脑出血灶周组织ICAM-1与MMP-9表达的实验研究

目的研究大鼠实验性脑出血后血肿周围脑组织细胞间粘附分子-1（ICAM-1），基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。方法采用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型，免疫组化染色法检测血肿周围脑组织ICAM-1，MMP-9的表达。结果脑出血后6h血肿旁有少量ICAM-1表达阳性细胞，12h开始增多，3d达高峰；脑出血后6h血肿周围就有较多MMP-9表达阳性细胞，2d时阳性细胞最多；脑出血后ICAM-1与MMP-9的表达呈正相关（y=0．768，P〈0．05）。结论血肿周围组织ICAM-1、MMP-9表达上调提示两者可能参与了脑出血后继发性脑损伤。     

大鼠实验性脑出血后脑水肿与MMP-9表达的关系及依达拉奉干预效应的研究

目的 探讨脑出血后脑水肿和MMP-9表达的动态变化及依达拉奉的干预效应.方法 采用立体定向技术制作大鼠脑出血模型,干湿重法测量脑组织含水量和免疫组化法测定脑组织MMP-9的表达.结果 与假手术组比较,脑出血12h时脑组织含水量明显增加(P＜0.05), 72h时达到高峰,随后逐渐下降, 7d时仍高于假手术组(P＜0.05).出血组大鼠脑含水量与血肿周围MMP-9阳性细胞数呈正相关(r=0.846, P=0.034),且差异有统计学意义.(3)治疗组脑含水量和MMP-9阳性细胞数与假手术组比较差异有统计学意义,与出血组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 MMP-9参与了脑出血后脑水肿的形成,依达拉奉对脑水肿有抑制作用.     

脑出血大鼠血肿周围脑组织含水量与基质金属蛋白酶-9、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1及谷氨酸表达水平的关系

目的 探讨脑出血大鼠血肿周围脑组织含水量与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及谷氨酸表达水平的关系.方法 雄性Wistar大鼠48只,随机分为正常对照组(n=8)、假手术组(n=8)、脑出血组(n=32),脑出血组又分为脑出血后12h、24h、72 h、7d4个亚组,每亚组8只大鼠.采用自体血尾状核注入法制备脑出血模型.采用干湿重法测定脑含水量,免疫组化法检测血肿周围脑组织MMP-9、TIMP-1及谷氨酸的表达.结果 脑出血组各时间点亚组大鼠血肿周围脑组织含水量与MMP-9、TIMP-1及谷氨酸表达水平均显著高于正常对照组和假手术组(均P＜0.01).脑出血组中,72 h亚组大鼠脑组织含水量及MMP-9、TIMP-1表达水平最高(P ＜0.01);24 h亚组大鼠脑组织谷氨酸表达水平最高(P＜0.01).多重线性回归分析结果显示,脑组织含水量(Y)与脑组织MMP-9(X1)及谷氨酸(X3)表达水平呈直线关系,多元回归方程为Y=68.894+0.281X1-0.052X3.结论 脑出血后血肿周围组织含水量及MMP-9、TIMP-1、谷氨酸的表达水平明显增高,MMP-9、谷氨酸在脑出血后血肿周围组织水肿的发生发展中具有重要作用.     

β-七叶皂苷钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后AQP4蛋白表达的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织缺血区AQP4蛋白的表达情况及β-七叶皂苷钠的治疗作用和可能机制。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型。应用干-湿比重法、TTC染色、免疫组化SABC法分别测定脑含水量、脑梗死体积及水孔蛋白4(aquaporin4,AQP4)的表达。结果假手术组AQP4蛋白有轻微的表达,而模型组、治疗组缺血损伤后表达升高,脑含水量增高,梗死脑组织出现,给予β-七叶皂苷钠的治疗组AQP4蛋白的表达下降,脑含水量明显降低,脑梗死体积减少,且β-七叶皂苷钠中高剂量组明显优于低剂量组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注脑组织缺血区AQP4蛋白表达的上调与脑水肿的发生发展与有密切的关系,而β-七叶皂苷钠有抑制脑水肿发生的作用。     

MMP-9抑制剂对脑出血大鼠血管再生的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）对脑出血大鼠血管再生的影响.方法 通过自体血注射制作大鼠脑出血模型,脑出血后第1～7天给予MMP-9抑制剂（盐酸多西环素30 mg/kg,1次/d,灌胃）进行干预,第7天运用Longa评分法进行神经功能评分后,处死动物并取脑,免疫组化法检测CD34抗体标记的血管内皮细胞,测定血肿周围微血管密度（MVD）,并测定脑出血后血肿周围侧脑室附近的室管膜下区（SVZ） MMP-9的表达的灰度值,对结果进行统计学分析.结果 与对照组相比,模型组MMP-9表达增加、MVD增加,而干预组较模型组MMP-9表达减少,MVD增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.干预组较模型组神经功能评分降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 脑出血急性期大鼠抑制MMP-9表达可能对其恢复期血管再生及神经功能修复有促进作用.     

β-七叶皂甙钠治疗脑出血疗效观察

目的:探讨β-七叶皂甙钠对脑出血患者血肿吸收、周围水肿改善及神经功能恢复的影响。方法:将80例脑出血患者随机分为治疗组40例和对照组40例,分别于入组第1、7、21天利用CT测量血肿体积、病灶体积(血肿+水肿带),并行临床神经功能评分(CSS)。治疗组给予0.9%氯化钠注射液250ml加β-七叶皂甙钠注射液20mg,静脉滴注1次/d,连用10天。结果:治疗组病灶体积、血肿体积和CSS均较对照组明显改善(P<0.01),应用β-七叶皂甙钠治疗后第21天病灶体积由(22.8±6)ml变为(10.9±4)ml,血肿体积由(21±6)ml变为(8±5)ml,CSS由23±8变为8±6,对照组第21天病灶体积由(23.4±7)ml变为(21.9±5)ml,血肿体积由(22±6)ml变为(12±6)ml,CSS由24±7变为13±6。两组比较,差异有显著意义(P<0.01)。结论:β-七叶皂甙钠对组织损伤有抗炎、抗渗出及消水肿作用,β-七叶皂甙钠联合甘露醇治疗脑出血促进脑出血患者水肿消退,血肿吸收和神经功能改善,并可减少甘露醇的用量     

脑出血24h后不同蛋白酶激活受体表达的初步筛查

目的初步探讨脑出血后血肿周围组织的不同蛋白酶激活受体（PARs）的表达情况。方法Wistar大鼠20只,随机分为脑出血组（采用2次注血/2次退针法建立脑出血大鼠模型,右侧尾状核注入自体血50μL）和对照组（右侧尾状核注人生理盐水50μL）。术后24h将大鼠处死取脑,制作冰冻切片,采用免疫荧光染色（间接法）检测血肿周围组织PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4阳性细胞的表达情况。结果①脑出血组,出血后24h血肿周围组织PAR-1表达明显增多,与对照组比较P〈0．01。②恼出血组,出血后24hPAR-2主要在血管内皮细胞表达,与对照组比较无明显差异。③脑出血组,出血后24h无PAR-3、PAR-4荧光表达,与对照组比较无明显差异。结论脑出血24h后血肿周围组织PAR-l表达增加。     

大鼠实验性脑出血后脑组织TLR2、NF-B/p65及caspase-3表达变化的研究

目的 研究大鼠实验性脑出血后脑组织TLR2、NF-B/p65及caspase-3在各时间点表达的变化规律,并初步探讨实验性脑出血后三者的动态变化与细胞凋亡的关系,从而探讨TLR2信号通路在实验性脑出血后继发损伤(主要指凋亡)中的作用.方法 将大鼠随机分为脑出血组、假手术组和正常对照组,应用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,分别在不同时间点断头取脑,连续冠状切片作TUNEL染色和免疫组化染色.结果 TLR2、NF-B/065及caspase-3均在实验性脑出血后6h开始增多,1d其表达继续上升,3d达高峰,此后开始下降,持续到7d仍高于对照组(P<0.05),并且与TUNEL阳性细胞的表达变化趋势相一致.结论 TLR2介导的NF-kB信号途径可能参与实验性脑出血后的炎症反应,并可能通过caspase-3介导神经元损伤和凋亡.     

Intracerebral hemorrhage induces macrophage activation and matrix metalloproteinases

Intracerebral hemorrhage (ICH) is characterized by parenchymal hematoma formation with surrounding inflammation. Matrix metalloproteinases (MMPs) have been implicated in the pathogenesis of neurological diseases defined by inflammation and cell death. To investigate the expression profile and pathogenic aspects of MMPs in ICH, we examined MMP expression in vivo using a collagenase-induced rat model of ICH. ICH increased brain MMP-2, -3, -7, and -9 mRNA levels relative to sham-injected (control) animals in the vicinity of the hematoma, but MMP-12 (macrophage metalloelastase) was the most highly induced MMP (>80-fold). Immunohistochemistry showed MMP-12 to be localized in activated monocytoid cells surrounding the hematoma. In vitro studies showed that thrombin, released during ICH, induced MMP-12 expression in monocytoid cells, which was reduced by minocycline application. Similarly, in vivo minocycline treatment significantly reduced MMP-12 levels in brain. Neuropathological studies disclosed marked glial activation and apoptosis after ICH that was reduced by minocycline treatment. Neurobehavioral outcomes also were improved with minocycline treatment compared with untreated ICH controls. Thus, select MMPs exhibit increased expression after ICH, whereas minocycline is neuroprotective after ICH by suppressing monocytoid cell activation and downregulating MMP-12 expression.     

实验性脑出血大鼠脑内Caspase-3mRNA的表达作用研究

目的动态观察实验性脑出血大鼠脑内血肿周围神经细胞凋亡情况和Caspas-3蛋白及mRNA表达水平的变化,探讨脑H{血后血肿周围神经细胞损伤机制。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、假手术组和脑出血模型组,分为术后3h,6h,12h,24h,48h,3d,5d,7d共8个时相点,采用尾状核注射自体非抗凝动脉血复制大鼠脑出血模型,术后制作冰冻切片,对切片进行TUNEL染色,以及Caspase-5免疫组化和原位杂交染色,之后利用图像分析仪,观察阳性细胞数。结果脑出血后3h血肿周围尚无凋亡细胞出现,6h有凋亡发生,以后逐渐增多,3d达高峰后逐渐下降,生理盐水对照组仅有少量TUNEL阳性细胞。假手术组及生理盐水对照组3h无Caspase-3蛋白和mRNA表达,生理盐水对照组6h以后有少量表达,脑出血模型组在6hCaspase-3蛋白和mRNA开始表达,3d时Caspase-3的蛋白达到高峰,5d以后逐渐下降,24hCaspase-3mRNA表达达高峰,5d以后逐渐下降。脑出血后血肿周围脑组织Caspase-3蛋白的表达与TUNEL阳性细胞数呈正相关（r=0．515,P〈0．05）;Caspase-3蛋白表达与mRNA表达呈正相关（r=0．625,P〈0．05）。结论脑出血后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与,在出血后6h发生凋亡,第3天达高峰。Caspase-3的表达在Caspase-5蛋白水平变化趋势与脑m血后细胞凋亡的趋势一致,Caspase-3的mRNA水平的表达高峰时间先于Caspase-3蛋白的表达及凋亡的发生,提示Caspase-3的表达决定脑出血后细胞凋亡的发生,在脑出血后细胞凋亡中起促进作用。     

凝血酶对大鼠脑内MMP-9、MMP-2表达的影响

目的探讨凝血酶对大鼠脑内MMP-9、MMP-2表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组及实验组。实验组脑内注入凝血酶,在不同时间点采用干湿重法测脑水含量,免疫组化方法检测脑内MMP-9、MMP-2的表达。假手术组注入等量生理盐水。结果脑组织水含量在凝血酶注入后6h开始增加,3d达高峰。MMP-9阳性细胞在注射凝血酶后6h即开始表达增加,与对照组相比差异显著(P<0.01),3d达高峰,随后持续下降。阳性微血管数也有相似的变化趋势。MMP-2阳性细胞在注射凝血酶后1d才开始有少量表达,后持续增多,5d达高峰,随后有所下降,但14d仍有明显表达,与对照组相比差异显著(P<0.01)。阳性微血管数也有相似的变化趋势。结论凝血酶在脑出血后脑水肿及脑组织损伤中起了关键的作用,MMP-9、MMP-2参与了急性期脑水肿、炎症反应等过程,MMP-2在损伤修复中可能有重要作用。