幽门螺杆菌细菌毒素VacA和CagA研究进展

<正>幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,HP)感染很常见,大约一半以上的世界人口感染了HP。HP被认为是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病因,且与胃癌的发生密切相关,WHO将HP列为第1类致病因子。空泡细胞毒素(Vacuolating Cytotoxin,VacA)和细胞毒素相关蛋白(Cytotoxin associated Protcin A,CagaA)是HP的两个重要的毒力因子,在HP的致病过程中起重要作用。重视HP细菌毒素的研究,对消化性溃疡和胃癌的防治都有十分重要的意义。     

聚合酶链反应法测定幽门螺杆菌的VacA、CagA基因

目的用聚合酶链反应法(polymerase chain reaction,PCR)测定食管粘膜和胃窦粘膜中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的两个特征性致病因子细胞毒素相关蛋白(CagA)和细胞空泡毒素(VacA),比较其临床意义.方法对有典型反流症状的患者并经胃镜检查诊断为反流性食管炎(reflax esophagitis,RE)53例作为病例组.无典型反流症状的患者并经胃镜检查诊断为慢性胃炎25例作为对照组,分别取食管下端粘膜和胃窦粘膜各3块,并分别行快速尿素酶试验、病理Hp检查和Hp培养,从食管及胃窦粘膜中分离Hp菌株,应用聚合酶链反应方法行CagA基因、VacA基因检测.结果病例组、对照组中食管粘膜的Hp阳性率分别为14/53(26.4%)、8/5(32%),两者差异无显著性(P＞0.05);胃窦粘膜的Hp阳性率分别为20/53(37.8%)、16/25(64%),两者差异有显著性(P＜0.05);病例组中胃窦粘膜Hp的CagA+检出率(6/20,30%)明显低于对照组(10/16,62.5%)(P＜0.05),而VacA+检出率分别为6/20(30%)、7/16(43.8%),两者差异无显著性(P＞0.05).胃窦粘膜Hp阳性率差异有显著性(P＜0.01).结论CagA、VacA的测定对Hp的分型有指导意义.Hp与RE关系密切,尤其是CagA+的Hp感染可能在RE的发生中有一定的保护作用.     

幽门螺杆菌CagA、VacA基因分型在2型糖尿病患者中的表达与分析

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)不同基因分型在2型糖尿病(T2DM)患者中的表达及临床意义.方法:170例T2DM患者纳入观察组,并将同时期的170例非T2DM患者纳入对照组,比较2组空腹血糖、体质量指数、腰臀比等一般资料;比较2组间Hp感染、Hp细胞毒素相关蛋白、空泡毒素相关蛋白基因型感染的差异性;同时比较观察组中Hp感染患者与非Hp感染患者糖化血红蛋白、空腹胰岛素以及胰岛素敏感指数水平.结果:观察组患者空腹血糖、体质量指数、腰臀比、Hp感染率、糖化血红蛋白以及Hp细胞毒素相关蛋白、空泡毒素相关蛋白阳性率均显著高于对照组(P＜0.01);同时观察组中Hp感染组患者的糖化血红蛋白和空腹胰岛素水平显著高于非感染组,而胰岛素敏感指数则显著低于非感染组(P＜0.01).结论:Hp细胞毒素相关蛋白基因和空泡毒素相关蛋白基因分型在T2DM的发生过程中具有重要意义.     

载体介导的幽门螺杆菌CagA和VacA疫苗的研制现状

幽门螺杆菌感染可引起胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃粘膜相关淋巴瘤以及胃癌等疾病,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。CagA和VacA蛋白是两个有效的疫苗候选分子,本文综述了两歧双歧杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、乳酸乳球菌和根癌农杆菌等载体介导的幽门螺杆菌CagA和VacA疫苗的研制现状。     

幽门螺杆菌CagA基因的克隆

目的 为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌ＣａｇＡ蛋白,建立ＥＬＩＳＡ法检测ＣａｇＡ抗体,克隆幽门螺杆菌ｃａｇＡ基因片段。方法 根据ｃａｇＡ基因序列,设计引物ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段,用Ｔ－Ａ克隆的方法将ＰＣＲ产物克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－Ｔ,并转化大肠杆菌ＪＭＩ１０９。结果 经蓝白斑筛选,ＰＣＲ及限制性内切酶酶切分析,获得ｃａｇＡ基因片段的克隆,序列测定结果与文献报道一致。结论 ＰＣＲ产物可采用Ｔ－Ａ法克     

幽门螺杆菌VacA和CagA抗体与胃十二指肠疾病关系的探讨

目的 :探讨幽门螺杆菌 (HP)的VacA和CagA抗体与胃十二指肠疾病之间的关系。方法 :采用免疫印迹法检测 2 0 0例胃十二指肠疾病患者血清中的VaCA和CagA抗体。结果 :VacA和CagA抗体在 2 0 0例患者中的检出率分别为 37.0 %、73.0 % ;在慢性胃炎 (CG)、消化性溃疡 (PU)、胃癌 (GC)患者中 ,VacA和CagA抗体的阳性率分别为 33.0 % ,31.0 % ,6 2 .5 %与 6 2 .9% ,76 .1% ,96 .9%。CG组与PU组比较 ,差异无显著性 (P <0 .0 5 ) ,GC组与CG、PU组比较 ,差异有显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :VacA和CagA抗体在不同胃十二指肠疾病中的检出率有差异 ,但不能作为区分HP感染致不同胃十二指肠疾病的单一指标。     

中药头花蓼对幽门螺杆菌CagA及VacA表达的影响

目的:观察中药头花蓼对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylori)细胞毒素相关蛋白(cytotoxin-associated protein,CagA)和空泡毒素(vacuolating cytotoxin,VacA)表达的影响.方法:HpyloriATCC700392接种于含头花蓼的哥伦比亚血平板上为实验组,同批未经药物作用的H.pyloriATCC700392为对照组,分别提取两组细菌的RNA和蛋白,用Real-time PCR定量检测头花蓼作用后cagA和vacA的mRNA表达,ELISA检测蛋白表达量.结果:经头花蓼作用的实验组与对照组相比,H.pylori的CagA和VacA蛋白表达水平分别降低了36.4％、55.1％(P＜0.05),cagA和vacA的mRNA表达水平分别降低了69％、51％ (P＜0.05).结论:头花蓼可能通过下调ca-gA和vacA的mRNA和蛋白的表达来发挥其对H.pylori的抑制作用.     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性相关性研究

目的 通过对临床分离的幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）进行培养和药敏试验,结合基因检测的方法,探讨Hp的毒力基因VacA多态性与其耐药性之间的关联。方法 采集120例消化道疾病患者的胃黏膜组织,进行Hp分离培养和药敏试验,同时对Hp阳性且有抗生素耐药结果的菌株进行核酸提取,PCR检测Hp毒力基因VacA s区和m区的基因型。采用χ²检验对Hp毒力基因的类型与其抗生素耐药性间相关性进行评价。结果 56例患者经Hp培养阳性,阳性率46.7%。其中克拉霉素耐药率达到了28.6%。s1/m2型的菌株中,克拉霉素耐药率为43.5%,而s1/m1型的菌株中,克拉霉素耐药率为18.2%,两者之间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论 s1/m2型菌株比s1/m1型菌株更容易产生克拉霉素耐药性,VacA基因可能与Hp对克拉霉素产生耐药性相关。     

检测VacA、CagA在幽门螺杆菌相关性消化道疾病中的价值

浙江中医学院(310016)楼锦新报道 上消化道疾病与感染幽门螺杆菌(Hp)有关。能表达细胞学泡毒素(VacA)和毒素相关蛋白(CagA)的Hp菌株是高毒力株。浙江医院的研究人员为探讨上消化道疾病严重程度与高毒     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性.方法 从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验.结果 108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为93.8%(15/16).对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacA s1a型.结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中.本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacA s1a型.     

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系.方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H.pylori,PCR测定VacA基因型.结果:108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性为85株(79%),VacA s1b阳性22株(20%),VacA m1阳性29株(27%),VacA m2阳性77株(71%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为94%(15/16).结论:H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中,无s2型.     

血清VacA,CagA检测在幽门螺杆菌相关性上消化道疾病中的价值

本文用免疫印迹法测定了64例幽门螺杆菌(HP)相关性上消化道疾病患者血清中VacA和CagA抗体的阳性率。结果提示VacA和CagA阳性的毒力菌株为57.8％。建议在选择HP根治治疗时先进行HP毒力菌株的测定,以减少治疗费用及耐药菌株的产生。     

幽门螺杆菌CagA基因和细胞因子在致病中的作用

目的幽门螺杆菌（Ｈｐ）与活动性胃炎、消化性溃疡关系密切。而ＣａｇＡ基因被认为是幽门螺杆菌的毒力标志。探讨ＣａｇＡ基因型幽门螺杆菌和细胞因子——肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、白细胞介素（ＩＬ－６、ＩＬ－８）在上消化道疾病中的作用。方法（１）用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对１１８例胃十二指肠患者的胃粘膜进行ＣａｇＡ基因检测。（２）用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定胃粘膜培养上清中ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－８的含量。结果６７例Ｈｐ感染患者中５０例检出ＣａｇＡ基因。其中１５例十二指肠溃疡患者全部检出ＣａｇＡ基因，１０例胃溃疡患者中８例检出ＣａｇＡ基因，４２例慢性胃炎中２７例检出ＣａｇＡ基因。Ｈｐ阳性组的胃粘膜培养上清中ＴＮＦ－α、ＩＬ－８、ＩＬ－６的含量显著高于Ｈｐ阴性组（Ｐ＜０．０１），ＣａｇＡ＋Ｈｐ组胃粘膜培养上清中ＩＬ－８的浓度显著高于ＣａｇＡＨｐ组（Ｐ＜０．０１）。ＴＮＦ－α与ＩＬ－８、ＩＬ－６呈正相关。ＴＮＦ－α、ＩＬ－８、ＩＬ－６的浓度在有Ｈｐ感染的消化性溃疡和慢性胃炎之间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。组织学表明，ＣａｇＡ＋Ｈｐ与胃粘膜的中性粒细胞浸润程度有关，而与肠化生、腺体萎缩，不典型增生的程度无     

免疫印迹法检测幽门螺杆菌及VacA和CagA抗体在上消化道疾病中意义的研究

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）与上消化道疾病的关系。方法：采用免疫印迹法,对慢性胃炎１７４例（其中浅表性胃炎６２例,弥漫性胃窦胃炎５７例,多灶性萎缩性胃炎５５例）和十二指肠溃疡５４例患者血清Ｈｐ进行检测分析,对Ｈｐ阳性的１３２例慢性胃炎和５０例十二指肠溃疡患者进行ＶａｃＡ、ＣａｇＡ抗体检测。结果：慢性胃炎１７４例中检测出Ｈｐ阳性１３２例,阳性率为７５．８６％（其中浅表性胃炎Ｈｐ阳性率为７５．８１％,弥漫性胃窦胃炎为７８．９５％,多灶性萎缩性胃炎７２．７３％）;十二指肠溃疡患者Ｈｐ阳性率为９２．５９％。在１８２例Ｈｐ阳性者中ＶａｃＡ、ＣａｇＡ抗体检测出阳性率为５３．８５％,而慢性胃炎与十二指肠溃疡有显著的差异。结论：提示Ｈｐ感染与上消化道疾病的发生有重要的生物学意义。     

幽门螺杆菌及其CagA基因感染与胃癌关系的研究

目的:通过检测胃癌和浅表性胃炎组织幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)和细胞毒素相关蛋白基因(CagA),探讨Hp 及CagA基因与胃癌相关性及Hp形成胃癌的可能机制.方法:应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色和血清Hp CagA抗体检测Hp,用PCR检测Hp CagA基因.结果:慢性浅表性胃炎、胃癌组织中Hp检出率分别为45.9%和54.8%,两者差异无显著性(P>0.05),两种组织中Hp CagA检出率分别为35.3%和77.5%,两者差异有显著性(P<0.005).结论:胃癌组织与浅表性胃炎组Hp感染相比差异无显著性,胃癌组织中Hp CagA基因检出率明显高于浅表性胃炎组,Hp CagA基因与胃癌有一定相关性,Hp CagA基因可能涉及胃癌的形成机制.     

幽门螺杆菌空泡毒素基因分型

目的：探寻幽默门螺杆菌（Hp）基因分理方法。方法：用自行设计的引物对16株临床分离Hp和2株标准菌的空泡毒素基因vaeA进行扩增,用7种限制性内切酶对基因扩增产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析;对18株Hp VacA活性进行检测。结果：18珠Hp的VacA扩增产物达2.7kb左右,但并不完全相同;HeaⅢ酶切电泳可将18株Hp的VacA基因分为12种谱型。未发现与VacA表达相关的谱型。结论：VacA基因的PCR产物经HeaⅢ酶切RFLP分型可作为Hp基因分型较理想的选择,但不能反映毒素活性的表达情况。     

幽门螺杆菌CagA基因的原核表达及抗原性测定

目的：合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的 CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性。方法：选取前期研究确定的与胃癌相关的H.pylori CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-CagA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性。结果：设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列（AF289435）基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100%;含pET32a-CagA的BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后能表达CagA融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,融合蛋白相对分子质量大小与预期一致(45 kD);Western印迹检测结果显示该融合蛋白可与抗H.pylori全菌抗体结合反应。结论：本实验构建的原核表达系统表达的CagA融合蛋白具有良好的抗原性,为临床胃癌相关H.pylori菌株的筛选和针对性治疗奠定了基础。