变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测肺癌p53基因8号外显子突变

目的：检测ｐ５３基因８号外显子突变。方法：分别采用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ），对３５例肺癌病人手术切除组织的ｐ５３基因８号外显子（Ｅｘｏｎ８）进行突变检测。结果：采用ＤＧＧＥ检测的突变率为２０％，而ＳＳＣＰ检测的突变率为１１％。ｐ５３基因Ｅｘｏｎ８的总突变率为２３％。结论：ＤＧＧＥ检测ｐ５３基因突变的敏感性高于ＳＳＣＰ。     

内蒙古经典型苯丙酮尿症PAH基因外显子11突变的检测

目的：研究内蒙古地区经典型苯丙酮尿症（PKU）苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因突变的特点和频率，以提高该地区PKU的基因诊断率。方法：应用PCR—SSCP-银染法和DNA直接测序的方法，对22例内蒙古地区PKU病人PAH基因外显子11进行了检测。站果：检出一种已知突变Y356X（TAC→TAA），突变频率为13．6％。结论：内蒙古地区PKU病人PAH基因外显子11的突变频率均高于我国的其它北方人群，也高于云南PKU病人的突变频率，这为内蒙古地区PKU病人PAH基因分析和产前诊断提供了科学依据。     

内蒙古经典型苯丙酮尿症PAH基因外显子7突变的检测及一种新突变的鉴定

目的：探讨内蒙古地区经典型苯丙酮尿症(PKU)基因突变特征，为基因诊断提供依据。方法：应用PCR-单链构象多态性分析技术和DNA直接测序的方法，对22例内蒙古地区PKU病人苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子7内突变进行了检测。结果：共检出4种错义突变；R243Q、R252Q、R261Q及G239D，1种剪接部位突变IVS7nt(2)，突变频率分别为：8／44、1／44、1／44、1／44、1／44。经与国际PAH基因突变数据库比较，确认G239D(G→A)为国际上首次发现的新突变。结论：内蒙古地区PKU病人PAH基因外显子7的突变位点、突变频率和中国东北人群相类似。但与中国南方人群PAH基因突变特点不同，这对提高内蒙古地区基因诊断率有其理论及实用价值。     

变性梯度凝胶电泳检测鲍曼不动杆菌中SHV基因单核苷酸多态性

目的建立变性梯度凝胶电泳（DGGE）检测超广谱β内酰歧酶（ESBL）基因中单核苷酸多态性（SNP）的方法,并获得鲍曼不动杆菌中SHV丛因SNP的资料。方法采用DGGE并结合DNA序列测定,检测了24株SHV基闳刚性的鲍曼不动杆菌SHV基因SNP。结果对这些菌株SHV基因的PCR产物直接进行DGGE电泳时,24例标本均呈现出单一条带,但条带的位置明显不同,可分为A、B两组;对两组标本分别用含GC后夹的引物进行SHV基因PCR扩增后再行DGGE,结果显示各产物均为单一条带,而且每组条带均处于同一位置。测序结果表明两组产物分别为SHV-1b．Like、SHV一18-Like。结论目前该地区鲍曼不动杆菌中SHV基因存在两种型别。通过DGGE,不仅能简便、迅速地获得某种基因的SNP资料,而且有利于高效和经济地筛选出新的核苷酸突变。     

变性梯度凝胶电泳检测轻型血友病甲的基因突变(Arg1689Cys)

血友病甲是一种常见的遗传性出血性疾病,由因子FⅧ缺乏引起。应用聚合酶链反应和变性梯度凝胶电泳技术,在一例轻型血友病甲患者的因子Ⅷ基因第14号外显子3’端发现碱基替换;直接测序表明密码子CGC突变为TGC,导致FⅧ蛋白Arg1689Cys,使凝血活化FⅧ发生障碍。该突变同时产生一个PstⅠ限制性酶切位点,该突变已证实与血友病相关。     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测皮肤癌p53基因突变的比较

目的：检测皮肤癌p53基因5－8外显子的突变频率,比较变性和梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）检测p53基因突变的敏感性,方法：分别采用DGGE和SSCP,对40例皮肤癌患者手术切除组织的p53基因5－8外显子进行突变检测。结果：皮肤癌p53基因5－8外显子的总突变率为35％,其中鳞状细胞癌（SCC）的突变率为36％,基底细胞癌（BCC）为33％,采用GGE和SSCP检测的突变率分别为33％和25％。结论35％的皮肤癌组织存在p53基因5－8外显子突变。GGE检测p53基因突变的敏感性高于SSCP。DGGE结合SSCP有助于提高突变检出率。     

PCR-ASO技术对苯丙氨酸羟化酶基因外显子突变的分析

目的：检测苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可疑患者的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子７、１１、１２（Ｅ７、１１、１２）区域的点突变。方法：应用ＰＣＲ方法对６例可疑ＰＫＵ患者的ＰＡＨ基因Ｅ７、１１、１２区域进行扩增，再用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记的寡核苷酸探针（ＡＳＯ）杂交技术对其进行分析。结果：其中３例仅与含有Ｒ２４３Ｑ突变的异常探针杂交，不与正常探针杂交，说明其为Ｒ２４３Ｑ突变纯合子。结论：ＰＣＲ－ＡＳＯ探针可以特异地与ＰＡＨ突变位点杂交，是诊断ＰＫＵ的一种准确、可行的方法。     

PCR-变性梯度凝胶电泳技术分析肺炎儿童下呼吸道菌群多样性

目的：初步探讨PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)检测肺炎儿童下呼吸道菌群多样性的作用。方法收集10份培养阳性的患儿肺泡灌洗液2~5 mL,经细菌DNA提取、16S rDNA-PCR后进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析,对优势条带进行测序。结果经培养10份标本中7份鉴定为一种菌感染,3份培养出两种病原菌;经PCR-DGGE分析8份标本出现多条明显条带,2份得到一条条带,共筛选出12个优势条带;DGGE法得到的细菌种类多于培养法。结论 PCR-DGGE可较好地鉴定混合细菌感染性肺炎病原菌并能检测到培养法没有检出的细菌;儿童肺炎主要以肺炎链球菌、大肠埃希菌、草绿色链球菌等病原菌为主。     

变性梯度凝胶电泳在遗传性多发性外生性骨疣基因诊断中的应用

目的:采用检测遗传性多发性外生性骨疣(hereditary multiple exostoses,HME)患者EXT2基因的突变,分析该方法的敏感性及用于HME基因诊断的可行性.方法:收集5个HME家系和3个HME散发患者,利用变性梯度凝胶电泳方法对EXT2基因的所有编码外显子及其旁侧内含子序列进行检测,并对出现异常构象的片段进行DNA测序分析.结果:在两个家系中分别发现了一种 A313T的无义突变和一种319insGT的移码突变.结论:在HME患者中发现了2个EXT2基因致病突变,DGGE可作为基因诊断理想的候选方法.     

肝豆状核变性的临床表型与ATP7B基因第8外显子突变的关系

目的探讨WD患者临床分型和ATP7B基因8号外显子基因突变类型之间的关系。方法对60例首次住院的WD患者进行临床分型,用PCR-酶切法检测60例住院病人和20例健康对照者的ATP7B基因第8外显子的突变率和突变类型。结果典型肝豆状核变性型15例,突变率40%;扭转痉挛型13例,突变率30.8%;假性硬化型19例,突变率31.6%;内脏型与脑-内脏混合型13例,突变率61.5%。各患者组间第8号外显子的突变率无显著性差异,患者各组与正常组间有极显著性差异。结论8号外显子突变是WD的发病原因之一。     

华北地区苯丙氨酸羟化酶基因的RFLP单体型与突变位点分析

本文分别分析华北地区28个苯丙酮尿症(PKU)家系苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因限制酶切片段长度多态性(RFLP),及42个PKU家系PAH基因外显子3(Arg~(111)→终止码)及外显子6(Tyr~(204)→Cys)突变位点。RFLP单体型分析表明,华北地区人群中约77％的正常染色体与79％的PKU突变基因染色体与单体型4相关,同时发现两种新的单体型——单体型49与单体型50;在群体中只有37％的个体为单体型杂合子,并可提供连锁分析所需的信息。应用聚合酶链反应(PCR)及寡核苷酸探针杂交法检测42个PKU家系PAH基因外显子3(Arg~(111)与外显子6(Tyr~(204)的突变位点,结果表明两者分别占华北地区PKU点突变的3.6％与9.5％。     

中国北方人PAH基因外显子6，12的突变研究

目的：检测北方人中苯丙酮尿症（ＰＫＵ）Ｋ本丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子６,１２中的突变。方法：应用聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳及直接测序方法,检测突变。结果Ｌ：中国北方人３４例ＰＫＵ患者外周血ＤＮＡ中鉴定ＰＡＨ基因外显子６,１２中的３种突变,Ｙ２０４Ｃ,Ｑ２３２Ｑ和Ｒ４１３Ｐ,其频率分别为５．９％,４．４％,５．９％。结论：本实验提示Ｑ２３２Ｑ可能为中国北方人中较常见的一种新突变,并可能为协     

苯丙酮尿症患儿PAH基因Exon 7单链构型多态性分析

应用非放射性的微型非变性聚丙烯凝胶电泳,对苯丙酮尿症病人的PAH基因Ex-on 7的PCR扩增产物进行了单链构型多态性分析。结果发现,在被检标本中存在四种不同的电泳迁徙率。DNA顺序分析证明,它们分别与 Exon 7片段中不同的碱基改变相对应。这说明突变碱基种类的不同,所引起的单股核苷酸链构型变化也有差异,结果导致不同的泳动速度,据此可对PKU做出基因诊断。     

检测苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复顺序进行苯丙酮尿症产前诊断

目的：应用聚合酶链反应检测苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因内高度多态的短串联重复顺序（ＳＴＲ），以兹建立简便易行的苯丙酮尿症（ＰＫＵ）产前诊断方法，杜绝苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患儿的出生，提高人口质量。方法：通过ＰＣＲ技术，对８个经典型ＰＫＵ家系２５个成员的ＳＴＲ等位片段进行了分析，完成８例ＰＫＵ高危胎儿的产前基因诊断。结果：１例胎儿患ＰＫＵ，２例胎儿正常，４例胎儿为突变ＰＡＨ等位基因携带者。结论：提出了易于推广的开展ＰＫＵ产前基因诊断的方案     

中国先天性心脏病Nkx2.5基因突变筛查及关联研究

目的探讨Nkx2.5基因突变和单核苷酸多态性(SNPs)与中国先天性心脏病(CHD)患儿的相关性。方法应用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对110例CHD患儿及110例正常对照者的Nkx2.5基因外显子1及其侧翼进行突变检测,并对其SNP进行基因分型,分析单个位点的等位基因和基因型频率是否与CHD有关。结果在Nkx2.5基因外显子1中,CHD组及对照组均未发现有任何突变位点,仅在CHD组找到1个新的SNPs;这个新的SNPs位于上游63碱基,其基因型频率在VSD组及TOF组和对照组之间的分布差异有统计学意义(χ2=34.021,df=2,P<0.01;χ2=15.233,df=2,P<0.01),等位基因频率在VSD组及TOF组和对照组之间的分布差异亦有统计学意义(χ2=24.813,df=1,P<0.01;χ2=7.146,df=1,P<0.01)。结论Nkx2.5基因突变与中国先天性心脏病之间无相关,Nkx2.5基因上的SNP与中国先天性心脏病中室间隔缺损和法洛四联症之间存在显著的相关性。     

Identification of CFTR Gene Mutations in Chinese Patients with Congenital Obstructive Azoospermia

Objective To analyze the frequency and hot spot of CFTR gene mutations in Chinese patients with congenital obstructive azoospermia Materials & Methods Mutations in CFTR exon 2,3,4,5,6a,8,10,11,12,13,15A 17b, 19A,20,21and 23 were detected. PCR-single strand conformation poly-morphism (SSCP) and direct sequencing were performed on 32 patients with congenital bilateral absence of the vas deferens (CBAVD), 17 patients with congenital unilateral absence of the vas deferens (CUAVD) and 50 normal Chinese.Results No CFTR gene mutations were detected in 50 normal Chinese. One CBAVD patient exhibited an abnormal band on SSCP for exon 10 of the CFTR gene and subsequent DNA sequencing showed a 3 bp deletion at position 1 653～ 1 655, which caused the deletion of a single amino acid, phenyalanine, in codon 508, i. e. , △F 508. A shift mutation was detected in another CBAVD patient in exon 2, a 1 bp deletion at position 225, 225 delC. One CUAVD patient exhibited an abnormal band on SSCP for exon 17 b of CFTR gene. Subsequent DNA sequencing showed a C-to-A transversion at position 3 295, which led to a predicted change of Leusine (codon 1 055,CUU) to Isoleucine (codon AUU), L1055I.Conclusion CFTR mutation could be detected in Chinese patients with congenital obstructive azoospermia. But no hot spots of mutations are discovered. 225 delC and L1055I are identified as two novel mutations, which are found only in Chinese.     

STGC3基因表达上调对CNE2细胞系蛋白质表达谱的影响

目的　采用蛋白质组学方法,分析STGC3基因高表达对CNE2细胞系蛋白质表达谱的影响。方法　应用脂质体转染技术,将pcDNA3.1 ( + ) STGC3的表达质粒导入鼻咽癌细胞系CNE2 ,经G41 8筛选、RT -PCR技术鉴定阳性克隆,建立稳定高表达STGC3的细胞系;采用双向凝胶电泳分离CNE2、pcDNA3.1 ( + ) CNE2和pcDNA3.1 ( + ) STGC3 CNE2细胞的总蛋白质,图像扫描后用ImageMaster软件进行比较分析,识别差异表达的蛋白质点。结果　CNE2、pcDNA3.1 ( + ) CNE2和pcDNA3.1 ( + ) STGC3 CNE2细胞的蛋白质点分别为675±2 7、660±2 3和662±1 8个,蛋白质点主要分布在等电点为3.5～8.5、分子量为2 2～80kD的范围内。去除空白载体所致的蛋白质的差异后,在pcDNA3.1 ( + ) STGC3 CNE2细胞系中,确立了1 5个上调的蛋白质点和8个下调的蛋白质点。结论　STGC3基因高表达能引起鼻咽癌细胞系CNE2的蛋白质表达谱改变,此结果为进一步研究STGC3基因的抑瘤分子机制提供了很好的实验资料。     

PCR—DGGE扫查胰高糖素受体基因的实验条件研究

为确定聚合酶链反应一变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）扫查胰高糖素受体（ＧＣＧ－Ｒ）基因的主要实验条件,对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ扫查ＧＣＧ－Ｒ基因各个外显子时其最适ＰＣＲ反应条件、变性剂浓度范围和电泳时间进行了研究。结果表明,当引物富含ＧＣ碱基时最适ＰＣＲ反应条件与扩增无ＧＣ－ｃｌａｍｐ之ＤＡＮ片段略有不同,不同碱基组成及不同片段长度的ＤＮＡ分子其在ＤＧＧＥ系统中所需的变性剂浓度范围和电泳时间不尽相同