PRDM14在肺癌细胞系中的表达

目的检测PRDM14在肺癌细胞系中的表达及分布情况。方法采用RT-PCR技术和免疫荧光方法分别检测人支气管上皮细胞系(HBE)和6个肺癌细胞系中PRDM14mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示PRDM14与GAPDH电泳条带的平均光密度比值在肺癌细胞系中显著高于HBE细胞系(P0.001);免疫荧光结果显示PRDM14蛋白表达的平均荧光强度在肺癌细胞系中高于HBE细胞系(P0.05),PRDM14蛋白荧光信号主要定位于细胞浆。结论 PRDM14在HBE细胞系低表达,在肺癌细胞系高表达,主要分布于细胞浆,PRDM14可能在肺癌的发生发展中发挥作用。     

5-aza-2dC诱导白血病细胞分化及对Annexin A1/A2表达和甲基化状态的影响

目的：观察甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞分化及对膜联蛋白A1/A2(Annexin A1/A2)表达和甲基化状态的影响。 方法：瑞氏染色和流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞分化的影响;RT-PCR法检测药物处理HL-60细胞前后Annexin A1和A2基因mRNA的表达水平;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测药物处理HL-60细胞前后Annexin A1和A2基因启动子区域CpG岛的甲基化水平。 结果：5-aza-2dC处理后HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,细胞向成熟分化,且在0.5 μmol/L时其促分化作用最明显;Annexin A1和A2基因在HL-60细胞中低表达,0.5 μmol/L 5-aza-2dC处理HL-60细胞72 h后,Annexin A1和A2基因mRNA表达水平明显上调,而其启动子区域CpG岛甲基化水平明显降低。结论：5-aza-2dC具有促进白血病细胞分化的作用,Annexin A1和A2基因启动子去甲基化可能与5-aza-2dC诱导白血病细胞分化有关。     

蛋白质组学技术分析5-aza-2dC处理白?∠赴鸋L-60前后的差异表达蛋白质

目的：研究甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞HL-60细胞蛋白质表达谱的影响，探讨5-aza-2dC抗急性髓系白血病作用机制。方法：采用二维凝胶电泳（2-DE)技术分离5-aza-2-dC处理与未处理HL-60细胞的总蛋白质，PDquest 图像分析软件识别差异蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点。 然后采用Western 印迹检测差异蛋白质半乳糖凝集素1（Galectin-1） 在药物处理与未处理HL-60细胞中的表达水平。结果： 建立了5-aza-2dC 处理与未处理HL-60 细胞蛋白质的2-DE 图谱，识别了35个差异表达的蛋白质点，鉴定了27个差异表达的蛋白质，其中包括Galectin-1在内的21个蛋白质在5-aza-2dC 处理后的HL-60 细胞中表达上调，6个蛋白质表达下调或缺失。Western 印迹结果证实Galectin-1在5-aza-2dC 处理HL-60细胞中表达上调。结论：21个表达上调蛋白质的编码基因可能是HL-60细胞的甲基化失活基因，它们可能与急性髓系白血病发病以及5-aza-2-dC抗人急性髓系白血病细胞作用有关     

Wip1在肺癌细胞中的作用机制初探

目的: 检测Wip1及相关蛋白在肺癌细胞中的表达情况,探讨Wip1在肺癌发生中的作用机制。方法: Western blotting检测各种细胞(肺腺癌细胞A549、肺鳞癌细胞NCI-1299、大细胞肺癌细胞 NCI-H460和正常支气管上皮细胞HBE)中Wip1、 p53、p-p53、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达。结果: A549、NCI-1299和H460细胞中Wip1蛋白的表达均高于HBE细胞(P<0.05);各种肺癌细胞间Wip1蛋白的表达无明显差异(P>0.05);p-p53和p-p38 MAPK蛋白在肺癌细胞中的表达低于HBE细胞(P<0.05);肺癌细胞中Wip1表达增加,p-p38 MAPK和p-p53表达降低,存在着Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡。结论: 肺癌细胞(A549、NCI-1299、H460)中存在Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡。这可能是Wip1在肺癌中的致癌机制之一。     

BAG2基因影响A549细胞增殖的机制研究及其临床意义

目的:研究Bcl-2相关抗凋亡基因2(Bcl-2-associated athanogene,BAG2)对人肺腺癌A549细胞增殖能力的影响及作用机制,并探讨其临床意义。方法:以Western blot法分析BAG2在A549细胞与正常上皮细胞系HBE中的蛋白表达水平;在体外以RNA干扰(RNAi)技术敲低A549细胞中BAG2基因的表达,并采用CFSE染色结合流式细胞术、WST-1法和Western blot法对A549细胞增殖和细胞周期相关蛋白进行评价。此外,我们利用q PCR检测BAG2在肺癌组织c DNA芯片中的表达情况,同时分析了GEO数据库中BAG2表达与肺癌患者预后之间的关系。结果:与HBE细胞比较,A549细胞中BAG2的表达显著升高(P0.05);干扰BAG2基因后,A549细胞在48 h和72 h时点时增殖均被抑制;在48 h时点,干扰BAG2可导致细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1表达显著下调(P0.05)。在人肺癌组织中,BAG2基因表达显著高于癌旁组织,并与肺癌患者生存预后呈显著负相关(P0.01)。结论:BAG2基因可能通过上调细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1影响A549细胞的增殖,其表达量与肺癌患者预后呈显著负相关。     

microRNA-182 inhibits the proliferation and invasion of human lung adenocarcinoma cells through its effect on human cortical actin-associated protein

Lung cancer is one of the main causes of cancer death worldwide. The cortactin gene, CTTN, may play a pivotal role in the proliferation and invasion of tumors. A microRNA (miR-182) was cloned and used to study the expression of CTTN and its regulatory effects on the proliferation and invasion of the lung cancer cell line, A549. Cortactin protein and CTTN mRNA expression decreased in A549 cells that were transfected with the miR-182 expression plasmid. A cell proliferation assay indicated that miR-182 expression affected cell cycle regulation and suppressed proliferation of lung cancer cells in vitro. In addition, xenograft experiments confirmed the suppression of tumor growth in vivo, which was due to the promotion of apoptosis. In conclusion, endogenous mature miR-182 expression may have an important role in the pathogenesis of lung cancer through its interference with the target gene CTTN by epigenetic modification.     

过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。     

PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

CXCR4启动子的条件复制型腺病毒对肺癌细胞的靶向杀伤作用

目的:构建CXCR4启动子的条件复制型腺病毒载体CRAd-CXCR4-GFP,探究CRAd-CXCR4-GFP对肺癌细胞的靶向杀伤效应。方法:PCR法扩增人CXCR4-E1A基因并克隆至穿梭质粒p DC316-GFP,将骨架质粒p BHG-lox-E1,3Cre和重组质粒p DC316-CXCR4-GFP共转染293细胞,产生重组腺病毒CRAd-CXCR4-GFP并扩增,扩增后进行PCR鉴定和腺病毒滴度测定;real-time PCR检测5种肺癌细胞株CXCR4的mRNA表达,筛选出表达最高的A549细胞;将CRAd-CXCR4-GFP和Ad-NULL分别转染A549细胞,检测两者转染后CXCR4启动子活性和腺病毒复制数;将CRAd-CXCR4-GFP和Ad-NULL分别转染A549细胞和16HBE细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,CCK-8检测各组细胞活性。结果:成功构建重组质粒p DC316-CXCR4-GFP,与骨架质粒p BHG-lox-E1,3Cre共转染293细胞后第11天可见片状绿色荧光;PCR表明目的基因CXCR4-E1A已成功整合在重组腺病毒基因组中;测定重组腺病毒滴度为1×1013PFU/L;CRAd-CXCR4-GFP转染A549细胞后E1A的mRNA和E4表达较Ad-NULL组明显上升;与Ad-NULL组和空白对照组相比,CRAd-CXCR4-GFP组前4 d A549细胞凋亡率和活性无明显差异,第5天细胞凋亡率明显增加,细胞活性明显降低,各组间5 d内16HBE细胞的细胞凋亡率和细胞活性均无明显变化。结论:成功构建条件复制型腺病毒表达载体CRAd-CXCR4-GFP,该载体对肺癌细胞具有靶向杀伤作用。     

miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。     

黄芪甲苷通过调节细胞自噬增强贝伐单抗在肺癌细胞系A549中抗肿瘤作用机制的研究

目的：验证黄芪甲苷可以通过调节细胞自噬增强贝伐单抗对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响,讨论黄芪甲苷在A549中的抗肿瘤作用机制。方法：MTT方法检测黄芪甲苷单药以及与贝伐单抗联合应用对A549细胞增殖能力的影响。Western blot方法分别检测黄芪甲苷以及贝伐单抗处理A549后自噬相关蛋白P62和LC3的表达水平。RT-PCR方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞内侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达情况。ECIS方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞黏附与迁移能力的变化。结果：MTT检测结果显示,100 mg/L的黄芪甲苷与750 mg/L的贝伐单抗联合应用对A549细胞的活力有显著的抑制作用,两药联合应用组与对照组相比差异有统计学意义,P值为0.0009。Western blot检测结果显示,黄芪甲苷能够通过影响自噬通路P62和LC3的表达从而抑制自噬的发生。RT-PCR方法显示黄芪甲苷能显著抑制侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达,黄芪甲苷组与对照组相比差异有统计学意义,P值分别为0.0001和0.001。ECIS结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移。结论：体外研究结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移和侵袭,这一过程是通过抑制细胞自噬的发生,而贝伐单抗有较弱的促进自噬发生的作用,当两者联合时较单用贝伐单抗更强的抗肿瘤细胞增殖的作用。     

千金藤素通过调节miR-150和miR-182促进A549细胞凋亡

目的:探讨千金藤素对人肺癌A549细胞生长的影响及可能机制。方法:千金藤素处理A549细胞后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;real-time PCR检测微小RNA(miR)-150、miR-182、p53 mRNA和FOXO1 mRNA的表达变化;通过软件预测miR-150和miR-182的下游靶基因;采用Western blot法分析细胞中p53和FOXO1蛋白表达的变化。结果:在千金藤素作用下,A549细胞生长受到抑制,凋亡率明显增加;千金藤素作用后,细胞内miR-150和miR-182的表达水平显著下降;在10μmol/L的千金藤素作用后,细胞内p53和FOXO1的表达水平升高,而在30μmol/L时,细胞内p53和FOXO1的表达水平降低;在细胞内转染miR-150后,p53表达明显减少,而转染miR-182后,FOXO1表达显著降低。结论:千金藤素能够抑制A549细胞生长,促进A549细胞凋亡,可能是通过抑制miR-150和miR-182表达发挥作用;而miR-150和miR-182可能分别通过下调p53和FOXO1的表达发挥作用。     

人肺腺癌细胞系与支气管上皮细胞系差异蛋白质组学研究

目的:通过对肺腺癌细胞系A549细胞和正常上皮细胞系HBE蛋白组成差异的分析,寻找与肺癌发生、发展相关的差异蛋白,为进一步阐明肺癌发病机制提供更多有价值的信息;为诊断或者预后提供候选分子标记物。方法:运用固相pH梯度双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)分析技术筛选出A549细胞和支气管上皮细胞系HBE间表达水平显著差异的蛋白,并且利用免疫印迹方法对筛选的标记物蛋白进行验证。结果:筛选出21个差异蛋白,涉及到细胞的代谢、蛋白质修饰、细胞运动,通道蛋白和信号转导调控等方面。鉴定并且验证在A549细胞中显著高表达热休克蛋白27(HSPB1)。结论:肺腺癌细胞系与正常支气管上皮细胞系蛋白质表达存在显著差异,其中肺腺癌中高表达HSPB1可能在肺腺癌癌变过程中发挥重要作用,本结果为进一步寻找肺腺癌癌变蛋白标志物奠定了基础。     

miR-107 靶向NID2 通过Notch 信号通路调控肺癌细胞的增殖侵袭

目的:miR-107 靶向NID2 调控Notch 信号通路影响肺癌的侵袭和增殖。方法:免疫组化检测NID2 在肺癌组织和正常肺组织中的表达;PCR 检测miR-107 在肺癌组织中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107 对NID2 转录活性的影响;肿瘤细胞成球实验检测miR-107 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的迁移能力的影响;Western blot 检测过表达miR-107 后Notch 信号通路的蛋白表达水平。结果:和正常肺组织比较,NID2 在肺癌组织中表达较高;miR-107 在肺癌组织中表达明显降低;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-107 可以直接调控NID2 的转录活性;过表达miR-107 后,肺癌细胞A549 的增殖、侵袭和迁移能力明显降低;过表达miR-107 后,Notch1、hes-1、presenilin1 蛋白表达下调。结论:miR-107靶向NID2 的表达,通过Notch 通路调控肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-210 调控Mex3B 蛋白对肺癌细胞侵袭和增殖的影响

目的:探讨miR-210 和Mex3B 蛋白对肺癌细胞侵袭和增殖能力的影响。方法:运用qPCR 检测miR-210 在正常肺组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR 检测Mex3B 在肺癌组织、癌旁组织中的表达;qPCR 检测miR-210 在不同肺癌细胞株中(A549、H1299、H1650 和H358)的表达水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-210 对Mex3B 转录的影响;细胞活性实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞活性的影响;平板克隆实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-210 的表达对肺癌细胞株A549 的侵袭能力的影响。结果:和癌旁组织比较,miR-210 在肺癌组织中表达明显增高,和癌旁组织比较,Mex3B 在肺癌中表达较低,双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-210 可以直接调控Mex3B 的转录活性,抑制miR-210 的表达活性后,A549 肺癌细胞的细胞活性受到一定的抑制;抑制miR-210 后,肺癌细胞株A549 的侵袭和增殖能力明显降低。结论:miR-210 可以靶向调控肺癌细胞的侵袭和增殖能力。     

X线电离辐射通过上调c-Myc表达促进肺癌A549细胞上皮间质转化

目的:探讨电离辐射对肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其可能机制。方法:采用不同剂量(0 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy)的X射线分别照射肺癌A549细胞不同时间,通过倒置显微镜观察X射线照射12 h、24 h和48 h时肺癌A549细胞形态的改变;Western blot检测X射线照射12 h与24 h时EMT相关蛋白vimentin、N-cadherin及E-cadherin和转录因子c-Myc的表达。结果:照射后肺癌A549细胞轮廓不清,突起增多,边缘不规则且呈煎蛋样塌陷,以8 Gy X射线照射48 h时肺癌A549细胞上皮间质化形态最明显。与0 Gy照射剂量对照组相比,vimentin虽然于4 Gy剂量照射12 h时下调,但是处理24 h时各剂量照射组vimentin均表现为上调,其中2 Gy剂量照射组其上调最明显(P0.01);与0 Gy照射剂量对照组相比,1 Gy、2 Gy及4 Gy照射组照射肺癌A549细胞24 h后其N-cadherin表达上调(P0.05);各照射剂量对肺癌A549细胞E-cadherin表达没有显著影响。照射24 h后肺癌A549细胞c-Myc表达上调,以4 Gy剂量照射组表达差异最明显(P0.01)。结论:X线电离辐射可能通过上调c-Myc表达促进肺癌A549细胞发生上皮间质转化。     

PDK1对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)对肺癌细胞株A549生物学特性的影响及其潜在的作用机制。方法:采用Western blot和real-time PCR检测肺正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞(H460、SPCA1和A549)中PDK1的表达水平。利用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中PDK1的表达,然后分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力及凋亡的变化;Western blot检测增殖及周期相关蛋白的表达和Akt/Fox O1信号通路的活性。最后通过Akt信号通路特异性激动剂胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)进一步验证PDK1和Akt/Fox O1信号通路的相互作用。结果:相较于肺正常上皮细胞BEAS-2B,肺癌细胞中的PDK1均呈高表达(P0.05)。干扰A549细胞中PDK1的表达后,细胞活力显著降低,周期进程缓慢,而细胞凋亡显著增加。Western blot实验结果显示,干扰PDK1后,细胞中cyclin D1、CDK4、p-Rb、Bcl-2、p-Akt及胞浆中p-Fox O1的含量显著下降,P27、cleaved caspase-3及核内Fox O1的蛋白水平显著升高(P0.05)。预先给予Akt激动剂IGF-1可部分逆转干扰PDK1对Akt/Fox O1信号通路的影响,并增加A549细胞的活力(P0.05)。结论:干扰人肺癌细胞株A549的PDK1可通过抑制Akt/Fox O1信号通路而调控周期及凋亡相关因子的表达,发挥生长抑制及凋亡促进作用,提示PDK1可作为肺癌的潜在诊疗靶点。     

Pen ch 13 allergen induces secretion of mediators and degradation of occludin protein of human lung epithelial cells

BACKGROUND: Alkaline serine proteases from six prevalent airborne Penicillium and Aspergillus species have been identified as a group of major allergens (group 13). After entering human airways, the allergens are in initial contacts with respiratory epithelial cells. The purpose of this study is to investigate interactions between the Pen ch 13 allergen from P. chrysogenum and human lung epithelial cells. METHODS: A549 cells, 16HBE14o- cells and primary cultures of human bronchial epithelial cells (HBEpC) were exposed to purified Pen ch 13 and mediators released into culture supernatants were assayed with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits. Cleavage of occludin in 16HBE14o- cells was analysed by immunofluorescent staining of whole cells and immunoblot analysis of whole cell extracts. Fragments generated by incubating Pen ch 13 and a synthetic peptide carrying the occludin sequence were analysed by mass spectrometry. RESULTS: Pen ch 13 induced productions of prostaglandin-E2 (PGE2), interleukin (IL)-8 and transforming growth factor (TGF)-beta1 by A549 cells, 16HBE14o- cells and primary cultures of HBEpC. The protease activity of Pen ch 13 is needed for the induction of PGE2 IL-8, TGF-beta1 and cyclo-oxygenase (COX)-2 expression. A tight junction protein occludin of 16HBE14o- cells can be cleaved by Pen ch 13 at Gln202 and Gln211 which are within the second extracellular domain of the protein. Conclusion: Pen ch 13 may contribute to asthma by damaging the barrier formed by the airway epithelium and stimulating the release of mediators that orchestrate local immune responses and inflammatory process from HBEpC.     

熊果酸通过调节miRNA-133a抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭

目的:探讨熊果酸(ursolic acid,UA)是否通过调节miRNA-133a影响肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力。方法:MTT法检测细胞活力;real-time PCR法检测UA干预和转染miRNA-133a mimics及inhibitor后细胞中miRNA-133a的表达;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:UA可显著抑制肺癌A549细胞的活力(P0.05),随着给药剂量的增加,UA对肺癌细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,UA作用于肺癌A549细胞24 h后的IC50为31.04μmol/L。在不同浓度的UA作用下,肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P0.01)。Real-time PCR实验结果显示,在10、20μmol/L UA作用24 h后,A549细胞内miRNA-133a的表达显著高于溶剂对照组(P0.01);细胞瞬时转染miRNA-133a mimics后可上调A549细胞中miRNA-133a的表达,而转染miRNA-133a inhibitor后下调A549细胞中miRNA-133a的表达(P0.01)。肺癌A549细胞转染miRNA-133a mimics后,细胞活力、迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P0.01);相反,转染miRNA-133a inhibitor后,细胞活力、迁移和侵袭能力明显增强(P0.01)。结论:UA能抑制肺癌A549细胞活力、迁移和侵袭,其作用机制可能是通过上调miRNA-133a介导来实现的。     

Insulin-like growth factor binding protein-related protein 1 (IGFBP-rP1) has potential tumour-suppressive activity in human lung cancer

The expression of insulin-like growth factor binding protein-related protein 1 (IGFBP-rP1) is decreased in various tumours, but the role of IGFBP-rP1 in lung cancer is not yet clear. In this study, IGFBP-rP1 expression in lung cancer cell lines was evaluated and reduced expression of IGFBP-rP1 was found. In tissue microarrays containing 138 primary tumours and 20 normal lung tissues analysed by immunohistochemistry, 58 tumours (42%) exhibited no expression of IGFBP-rP1, while all 20 normal lung tissues showed high expression. In squamous cell lung cancer, low expression of IGFBP-rP1 was significantly linked to high-grade tumours. Treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine restored the expression of IGFBP-rP1 in three of four lung cancer cell lines. Sequencing of PCR products of sodium bisulphite-treated genomic DNA from the three lung cancer cell lines revealed a heterogeneous methylation pattern in the region of exon 1 and intron 1. Stable transfection of IGFBP-rP1 full-length cDNA into the H2170 lung cancer cell line led to increased expression of IGFBP-rP1 protein. IGFBP-rP1-positive transfectants exhibited remarkably reduced colony-forming ability in soft agar, suppression of tumour growth rate in nude mice, and increased apoptotic cell number as well as activated caspase-3 expression level. The data suggest that IGFBP-rP1 is a tumour suppressor inactivated by DNA methylation in human lung cancer.