人乳头瘤病毒防治疫苗的应用研究进展

预防性疫苗以人乳头瘤病毒(HPV)晚期结构蛋白L1、L2诱导引发特异性抗体来抵抗HPV感染,治疗性疫苗通过早期HPV基因编码蛋白的抗原表位来产生免疫反应.研发预防性HPV疫苗是防治宫颈癌的一个重要里程碑,其能对抗特定的致癌性HPV型的最初感染,治疗性疫苗对治疗HPV感染相关的宫颈恶性病变带来了契机,但其安全性及远期疗效仍需深入研究.作者探讨了有关HPV感染与宫颈癌流行病学关系、HPV感染与机体免疫反应等妇科肿瘤学的基本问题,着重对HPV防治性疫苗作用机制、生物学特性及其应用现状等作一阐述.     

猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究

目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列。获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导。结果:SDS-PAGE分析表明tunc-pZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在WesternBlot免疫印迹中能被特异性抗体识别。结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能。     

HPV58型E2蛋白表达纯化与多克隆抗体制备

目的:表达纯化重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型E2蛋白,制备多克隆抗体。方法:构建重组质粒p ET-28b-E2,转化至BL21(DE3)p Lys S中诱导表达,包涵体洗涤后经镍柱亲和层析分离得到纯化目的蛋白。用纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗HPV58型E2蛋白多克隆抗体,ELISA分析多克隆抗体的效价,免疫印迹检测抗体的特异性。结果:表达纯化了重组HPV58型E2蛋白,制备了高滴度和高特异性的多克隆抗体。结论:制备的多克隆抗体可用于对HPV58型E2蛋白进行精细B细胞线性表位鉴定。     

治疗性HPV多肽疫苗的研究进展

高危型人乳头瘤病毒(HPV)的感染与宫颈癌密切相关,在子宫颈癌中HPV DNA的检出率达99%以上.高危型HPV E6和E7的表达是维持细胞转化所必需,被认为是HPV的原癌基因,表达于肿瘤进展的各个时期,是至今被选择作为治疗性疫苗理想的特异性靶抗原,这些原癌蛋白可以影响肿瘤特异性免疫应答.HPV疫苗用以预防和治疗宫颈癌已成为近年来的研究热点,本文就治疗性多肽疫苗的研究方法及现状做一综述.     

治疗性HPV多肽疫苗的研究进展

高危型人乳头瘤病毒(HPV)的感染与宫颈癌密切相关，在子宫颈癌中HPV DNA的检出率达99％以上。高危型HPVE6和E7的表达是维持细胞转化所必需，被认为是HPV的原癌基因，表达于肿瘤进展的各个时期，是至今被选择作为治疗性疫苗理想的特异性靶抗原，这些原癌蛋白可以影响肿瘤特异性免疫应答。HPV疫苗用以预防和治疗宫颈癌已成为近年来的研究热点，本文就治疗性多肽疫苗的研究方法及现状做一综述。     

080树突状细胞为基础的疫苗治疗宫颈癌:一项15例患者个体化治疗的临床实验结果

人类乳头瘤病毒(HPV)16,18是宫颈癌中最常见的基因型.HPV16,18的癌基因E6,E7的表达产物是宫颈癌肿瘤细胞的永恒表型.由于宫颈癌肿瘤细胞有强阳性病毒抗原表达,故认为宫颈癌适合进行免疫治疗.研究中15例Ⅳ期宫颈癌患者经PCR-ELASA分析,12例检测出HPV16,3例检测出HPV18.将自体单核细胞衍生而来的树突状细胞(DC)体外加载重组HPV16E7或HPV18E7癌蛋白制成疫苗,对患者按个体化方案进行至少1次免疫接种.治疗前后监测接种的安全性、毒副作用、患者的临床反应、血清学反应(包括血清SCC、CEA水平)及免疫反应(ELISA分析检测抗HPV16,18的E6,E7抗原的抗体水平变化及抗原特异性T分析Th1增殖反应和CTL反应).     

宫颈癌人乳头瘤病毒疫苗研究现状

人乳头瘤病毒 (HPV)感染与宫颈癌的发生密切相关 ,HPV感染的防治已成为研究热点。目前各种HPV试验疫苗已建立了动物模型和 (或 )已进入临床试验。本文就当前HPV预防性和治疗性疫苗的研究进展及趋势阐述如下。1　预防性疫苗1 1　HPV病毒样颗粒　利用HPV晚期编码基因L1与L2表达于真核细胞中 ,可自行装配成形态与野生型病毒颗粒极为相似的病毒样颗粒 (VLP) ,具有良好的抗原性及免疫原性 ,可诱发高滴度抗体产生 ,是目前最理想的预防性疫苗。理想的预防性疫苗必须具备以下特点 :①必须具有安全、稳定、费用合理并可在粘膜表面产生有效…     

全酿酒酵母HPV16-E7疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E7重组全酿酒酵母疫苗,评价疫苗的免疫效应。方法将HPV16 E7 cDNA亚克隆人酵母表达载体pYES2／NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗,免疫C57BL／6小鼠。ELISA、MTT、LDH法分别检测疫苗诱导的细胞因子、脾淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答水平。结果全酵母疫苗能够有效表达HPV16-E7蛋白;疫苗小鼠免疫,能够刺激脾淋巴细胞增殖,并诱导出Th1型细胞因子和特异性CTL杀伤效应;免疫效果优于单纯HPV16-E7蛋白免疫（P〈0．01）。结论全酵母疫苗既能表达HPV16-E7蛋白,又能有效诱导特异性CTL免疫应答。研究结果为进一步进行疫苗抗肿瘤疗效研究,提供了实验基础。     

HPV_(16)L1-E7重组病毒及其重组质粒免疫后小鼠抗体水平动态变化的研究

目的 :研究人乳头瘤病毒 16型L1 E7重组腺病毒 (rAd5HPV16 L1 E7virus)及其重组质粒 (rAd5HPV16 L1 E7plasmid)经不同途径免疫后小鼠抗体水平的动态变化。方法 :用 2 93细胞扩增rAd5HPV16 L1 E7重组病毒 ,同时制备rAd5HPV16 L1 E7重组质粒 ,分别以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠 ,采用ELISA法测定其血清IgG抗体水平。结果 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒采用不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其中以肌注组产生抗体量最多 ,并且出现最早。结论 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒均能刺激B细胞产生抗体介导的免疫应答 ,免疫途径不同 ,抗体峰值的出现时间亦不同 ,测定抗体的最佳时间亦不同。     

宫颈癌患者外周血HPV16抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞的检测及意义

目的:初步探讨人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌患者细胞免疫状况,了解其外周血抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞的水平.方法:采取免疫荧光标染重组MHC Ⅰ类分子-肽五聚体技术,运用流式细胞术定量检测患者和正常人外周血CD8~+细胞毒性T细胞、记忆性细胞毒性T细胞、活化细胞毒性T细胞及HPV16抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞.结果:宫颈癌患者CD8~+细胞毒性T细胞计数、记忆性细胞毒性T细胞计数、体内抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞计数和对照组比较差异无统计学意义,但活化细胞毒性T细胞计数低于对照组(P=0.322),体外经抗原肽刺激后抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞计数高于对照组(P=0.0068).结论:HPV16 阳性宫颈癌患者外周血中活化细胞毒性T细胞数目减少,表明患者细胞免疫功能受到一定的影响,通过抗原表位有效的诱导是提高患者的特异性细胞免疫功能的重要途径,运用五聚体技术检测宫颈癌患者抗原特异性细胞毒性T细胞,可初步反映患者特异性细胞免疫状态并有利于进行复发和预后分析.     

HPV16 E6/E7与结核杆菌HSP70 N端重组DNA免疫对BALB/C小鼠免疫应答的影响

目的 :探讨HPV16 (人乳头状瘤病毒 16 )E6 /E7(原癌基因E6 /E7型 )以及与HSP70N端重组DNA免疫小鼠后 ,小鼠体内免疫应答的变化。方法 :以HPV16E6 /E7为基础的DNA疫苗免疫小鼠 ,并经酶联免疫吸附实验 (ELISA)及逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测小鼠脾淋巴细胞产生的TH1/TH型细胞因子及血清抗体。结果 :HPV16DNA疫苗免疫组小鼠 ,其脾淋巴细胞IL 2及IFNγ的分泌量明显较对照组增加 (P <0 0 1) ;HPV16E6 /E7与HSP70N端重组后疫苗免疫小鼠 ,E6 HSP70N组产生的IFNγ量比重组前高 (P <0 0 1) ,其余重组组产生的IFNγ量及所有重组组产生的IL 2均较重组前低 (P <0 0 1) ,而各重组组产生的抗体水平较重组前低 (P <0 0 5 )或无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 :以HPV16E6 /E7为基础的DNA疫苗能增强小鼠的细胞免疫反应 ,对体液免疫几乎无影响。HPV16E6 /E7与结核杆菌HSP70N端重组后的疫苗与重组前比较不增强细胞免疫反应 ,不影响体液免疫反应。     

人乳头瘤病毒感染的致癌机制

人乳头瘤病毒 (HPV)感染是诱发宫颈癌的首要启动因素 ,90 %以上的宫颈癌组织携带高危HPVDNA ,其中HPV16型占6 0 %以上。HPV编码 6～ 8个早期蛋白 (E1～E8)和 2个晚期蛋白 (L1～L2 ) ,其中E5、E6和E7是其致癌的关键。E5蛋白 :HPV16E5蛋白分布于高尔基体、内质网和细胞膜上 ,能与多种细胞生长因子受体结合刺激细胞增殖 ,如表皮生长因子受体 (EGF R)、血小板生长因子受体 (PDGF Rβ)和集落刺激因子I受体 (CSF 1R)。E5蛋白可使主要组织相容性复合物I(MHC I)分子滞留于高尔基体 ,从而干扰病毒抗原的递呈 ,是HPV建立持续性感…     

一种多价精子抗原表位肽的设计与合成

目的 :开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 :选择小鼠精子 /睾丸特异性抗原 SP1 7、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性 T细胞表位作为骨架 ,按一定连接方式设计、合成新抗原 3 5肽 ,并与等量弗氏佐剂混悬后免疫雌性 BALB/c小鼠。结果 :在 43 0 A固相自动肽合成仪上成功地合成了 3 5肽 ,并经 HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达 95 %以上 ;新抗原免疫小鼠后获得的特异性抗血清可识别小鼠、大鼠及人睾丸组织蛋白提取物中相应分子量的蛋白质 ,且血清中特异性 Ig G抗体滴度最高达 1∶ 6 0 0 0 ,阴道粘膜冲洗液中特异性 Ig A抗体滴度最高达 1∶ 3 0 0。结论 :由含有两种特异性精子抗原、具有特异性氨基酸序列的新抗原所制备的抗血清可识别两种天然抗原 ,并在小鼠体内激发出较理想的特异性体液免疫 ,从而为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础     

HPV58型E1^E4蛋白的表达纯化和多克隆抗体的制备

目的:构建pRSET-A\E1^E4原核表达载体,获得E1^E4蛋白的多克隆抗体。方法:在BL21(DE3)细胞中诱导E1^E4融合蛋白表达,收集包涵体经过镍柱纯化后免疫新西兰白兔,获得的抗血清经硫酸铵沉淀法纯化得到抗体。结果:经Western blotting检测表明制备的E1^E4蛋白多克隆抗体特异性较好。结论:成功获得了纯化的E1^E4蛋白抗体,有助于后续HPV58型E1^E4蛋白功能和B细胞抗原表位的研究。     

人卵透明带蛋白huZP3a~(22～176)和huZP3b~(177～348)肽段在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的:探索将huZP3a22~348蛋白编码基因拆分成两段,分别表达的可行性,并研究表达产物的免疫原性。方法:用PCR技术, 将去N-端信号肽和C-端跨膜区的huZP322~348蛋白编码基因拆成大小相近的两段, 以完整阅读框的形式分别重组插入热诱导型pBV221的多克隆区。结果:大肠杆菌分别特异地表达了可单独或复合应用的huZP3a22~176和huZP3b177~348,在经过抗人ZP3不同抗原区合成肽抗体的蛋白印迹鉴定后, 用改良的制备性PAGE方法分离纯化这两种表达产物。同时用兔抗猪ZP IgGs蛋白印迹试验表明, huZP3a和pZP3b的几个共同线性抗原表位都存在于其肽链的前半区域。结论:通过基因重组技术可获得足够量的huZP3a和huZP3b,这为开展huZP3a和huZP3b的免疫原性以及huZP3诱发人精子顶体胞吐的功能域等研究奠定了基础。     

树突状细胞为基础的疫苗治疗宫颈癌：一项15例患者个体化治疗的临床实验结果

人类乳头瘤病毒(HPV)16，18是宫颈癌中最常见的基因型 HPV16，18的癌基因E6，E7的表达产物是宫颈癌肿瘤细胞的永恒表型。由于宫颈癌肿瘤细胞有强阳性病毒抗原表达，故认为宫颈癌适合进行免疫治疗。研究中15例Ⅳ期宫颈癌患者经PCR—ELASA分析，12例检测出HPV16，3例检测出HPV18。将自体单核细胞衍生而来的树突状细胞(DC)体外加载重组HPV16E7或HPV18E7癌蛋白制成疫苗，     

人乳头瘤病毒预防性疫苗及其策略展望

宫颈癌是中国女性最常见的肿瘤之一.人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌及其癌前病变的必要因子.HPV的病毒样颗粒(由HPV病毒基因组L1基因编码)可产生中和抗体,其结果是HPV病毒样颗粒的注射可有效地预防某个HPV型别的感染.由于HPV16和18两个型别在宫颈癌中具有较高的流行率,这两个型别的病毒样颗粒已被开发成为预防性...     

卵巢上皮性癌抗独特型抗体6B11T细胞表位的鉴定

目的 鉴定卵巢上皮性癌(卵巢癌)抗独特型抗体6B11的T细胞表位,探讨其诱导抗卵巢癌细胞免疫的分子基础.方法 利用表位预测和12结合力分析实验筛选6B11的互补决定区(CDR)人白细胞抗原(HLA)A0201结合肽.以负载肽的抗原递呈细胞刺激HLA-A2阳性的自体淋巴细胞,获得特异性细胞毒淋巴细胞(CTL),经51Cr释放实验确定6B11的CTL表位.以6B11特异性CTL为反应细胞、负载肽的树突状细胞为刺激细胞,经细胞增殖实验确定6B11的辅助性T细胞(Th)表位.经细胞因子含量测定和干扰素(IFN)γ分泌细胞频数分析,进一步验证获得的表位.结果 6B11轻链可变区CDR3肽(VL CDR3)诱导的CTL能杀伤靶抗原阳性的卵巢癌细胞,该杀伤作用能被抗人主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类分子抗体阻断,具有MHC-Ⅰ类分子依赖性,为6B11的CTL表位.6B11重链可变区CDR3肽(VH CDR3)能诱导6B11特异性CTL的增殖,该增殖作用大部分能被抗人MHC-Ⅱ类分子抗体阻断,具有MHC-Ⅱ类分子依赖性,为6B11 Th表位.6B11及其表位联合诱导的CTL与卵巢癌细胞共育后均分泌高水平白细胞介素(IL)2(分别为1630、1503 ng/L)、IFN-γ(分别为5620、5421 ng/L)和低水平IL-4(分别为253、274 ng/L),且存在特异性IFN-γ分泌细胞,细胞频数分别为196个/1 ×106个T细胞和184个/1×106个T细胞.结论 6B11具有模拟卵巢癌抗原的CTL和Th表位,对于抗独特型抗体作为抗肿瘤疫苗应用具有重要的理论和实践价值.     

人乳头瘤病毒疫苗预防宫颈癌的应用

宫颈癌严重危害女性健康,现已明确人乳头瘤病毒(HPV)感染是其主要致病因素。HPV通过机体的细微损伤入侵,HPV E6和E7癌蛋白中的1种或2种持续表达是高危型HPV感染致瘤的关键所在,检测高危型HPV感染及病毒癌蛋白仍不能有效预防宫颈癌。研究者们正着手研制针对HPV的病毒疫苗,从源头预防HPV感染,以期实现宫颈癌的一级预防。目前已有针对HPV16/18型的二价疫苗Cervarix和针对HPV16/18/11/6型的四价疫苗Gardasil的认证上市,预防性HPV疫苗已在全球范围内推广使用并取得显著效果。新一代预防性HPV疫苗在解决疫苗的成本、持久性和广谱免疫问题上取得突破性进展,宫颈癌有望成为人类抗肿瘤史上第一个可以预防的癌症。综述近年HPV的生物学特性、致病机制及预防性HPV疫苗的应用研究与现状。     

宫颈癌治疗性疫苗研究进展

宫颈癌与高危型人乳头状瘤病毒（HPV）的关系密切。新近的分子生物学业,免疫学业,多肽生化学学科的发展,迅猛地推动了宫颈癌治疗性疫苗的研究。治疗性疫苗包括重组蛋白疫苗,多肽疫苗,嵌合疫苗,核酸疫苗等。其中重组蛋白疫苗,多肽疫苗已进入I期临床试验。