卵巢上皮癌细胞SKOV3通过分泌外泌体促进单核巨噬细胞分化为肿瘤相关巨噬细胞的研究

目的:研究上皮性卵巢癌细胞SKOV3分泌的外泌体(exosomes)能否调控单核巨噬细胞分化为M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs),并进一步参与肿瘤的转移。方法:分离SKOV3细胞外泌体,透射电镜观察形态。卵巢癌细胞外泌体、M-CSF+IL-4和空培养基分别与人外周血CD14+单核细胞共培养3天,观察细胞形态。结晶紫计数单核细胞贴壁率;流式细胞仪检测共培养后单核细胞CD206、HLA-DR的表达情况;ELISA法检测共培养后上清中IL-10和IL-12的含量;体外迁移实验检测肿瘤细胞迁移能力的变化。结果:透射电镜显示,外泌体近似圆形,直径30~80nm。结晶紫计数显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的OD值(分别为0.13±0.06,0.16±0.04)较空培养基组(0.04±0.01)增加,差异有统计学意义(P0.05)。倒置显微镜发现,细胞贴壁,形态类似巨噬细胞。流式结果显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的单核细胞CD206(分别为71.86±5.62、99.27±0.32)表达水平升高,HLA-DR(分别为12.71±7.22、3.55±0.27)表达水平降低,与空培养基组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。ELISA检测结果显示,外泌体共培养组和M-CSF+IL-4组的上清IL-10含量(分别为71.72±0.81、82.13±2.11)增加,IL-12含量(分别为34.88±4.75、19.71±4.28)减少,与空培养基组比较,差异有统计学意义(P0.05)。体外迁移实验显示,外泌体刺激单核细胞上清组的肿瘤细胞迁移数(121.58±2.25)明显增加,分别与空培养基对照组、单核细胞上清组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:卵巢上皮癌细胞SKOV3的外泌体可诱导单核巨噬细胞分化极化为卵巢癌腹膜内TAMs表型,从而促进卵巢癌细胞的迁移能力。     

Fn14在上皮性卵巢癌细胞转移中的作用

目的:探讨成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)在上皮性卵巢癌转移中的作用。方法:选取人上皮性卵巢癌细胞株HO8910及其配对高转移能力细胞株HO8910-PM。Western blot法检测HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14表达,以及Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞株后Fn14、Slug、MMP-9蛋白的表达情况。Transwell实验检测细胞株体外迁移和侵袭能力。结果:HO8910-PM细胞的迁移和侵袭细胞数均多于HO8910细胞(P0.05)。HO8910-PM细胞中Fn14表达水平明显低于HO8910细胞(P0.05)。Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞后,细胞内Fn14表达水平上调(5.4±0.314)倍(P0.05),细胞的迁移和侵袭能力明显降低,同时细胞中侵袭转移相关蛋白Slug和MMP-9表达明显下降(P0.05)。结论:Fn14可能通过下调Slug和MMP-9表达进而抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移,Fn14可能为临床治疗上皮性卵巢癌提供新靶标。     

microRNA-622在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的探讨microRNA-622(miR-622)在卵巢上皮性癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。方法收集2003年1月至2016年12月在南方医科大学附属东莞人民医院手术切除的卵巢上皮性癌组织125例、卵巢良性上皮性肿瘤组织45例、正常卵巢组织25例。采用实时荧光定量PCR检测miR-622的表达水平;利用脂质体将miR-622模拟物瞬时转染至SKOV3卵巢癌细胞株,通过Transwell小室装置检测上调miR-622的表达对卵巢癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-622在卵巢上皮性癌组织中的表达水平高于卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织,差异具有统计学意义(P0.05)。miR-622表达水平与卵巢上皮性癌FIGO分期和是否发生淋巴结转移相关(P0.05)。体外细胞实验显示,上调miR-622表达可增强SKOV3卵巢癌细胞株的迁移和侵袭能力。结论 miR-622在卵巢上皮性癌组织中的表达增高,其可能通过促进癌细胞迁移和侵袭,参与卵巢癌的恶性演进。     

宫颈癌细胞分泌外泌体介导上皮-间质转化提高癌前细胞侵袭能力的体外研究

目的:研究宫颈癌细胞Siha分泌的外泌体(Exosomes)能否介导上皮-间质转化(EMT),从而改变癌前细胞Ect1的体外侵袭能力。方法:差速超速离心法分离SihaExo,透射电镜观察形态,Western blot检测标志蛋白表达,共聚焦显微镜观察PKH67染色外泌体的生物学活性。Siha-Exo和PBS分别与Ect1共培养48h后Western blot检测上皮和间质转化标志蛋白的表达,Transwell侵袭实验检测共培养后Ect1体外侵袭能力。结果:Siha-Exo为直径30~100nm的盘状囊泡,特异性表达标志性蛋白CD63和CD81,能够被受体细胞Ect1内吞,具备生物学活性。Western blot结果显示,与PBS组相比,Siha-Exo组下调Ect1细胞中上皮标志蛋白E-Cadherin和β-Catenin的表达,上调间质标志蛋白NCadherin和Vimentin的表达。Transwell侵袭实验显示,与PBS组相比,Siha-Exo组穿透聚碳酯膜的Ect1细胞数明显增多(P=0.01)。结论:Siha-Exo能够介导Ect1发生EMT变化,提高其体外侵袭能力。     

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA(lncRNA)FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平。结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织([15.04±2.24)vs.(2.93±0.39),P0.05]。沉默lnc RNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强([18.38±0.73)%vs.(2.86±0.09)%,P0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低([6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P0.05)。结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。     

长链非编码RNA-HOST2在上皮性卵巢癌中的表达及生物学功能

目的:分析长链非编码RNA-HOST2在上皮性卵巢癌细胞和组织中的表达,探讨HOST2表达与卵巢癌生物学行为之间的潜在关系,为上皮性卵巢癌的靶向治疗提供理论依据和实验数据。方法:选择OVCAR-3上皮性卵巢癌细胞株,用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基常规标准条件下培养,利用实时定量荧光PCR技术检测HOST2的表达,利用siRNA靶向干扰HOST2表达,利用划痕实验、Transwell细胞小室和CCK-8试剂研究HOST2对上皮性卵巢癌细胞迁移、侵袭、增殖和凋亡的影响。结果:HOST2在上皮性卵巢癌中均特异性高表达,但在其他多种常见的恶性肿瘤中表达很低或几乎没有表达。HOST2的表达受抑制后,OVCAR-3细胞的迁移、侵袭和增殖能力均明显减弱,外源性降低HOST2表达能抑制上皮性卵巢癌皮下移植瘤的生长,延长裸鼠生存期。结论:HOST2参与上皮性卵巢癌细胞的迁移、侵袭、增殖等生物学行为,可用于上皮性卵巢癌的靶向治疗。     

抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制

目的：探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA（lncRNA） FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法：利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹（Western blotting）检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2（p-MEK1/2）蛋白的表达水平。结果：lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织[（15.04±2.24） vs. （2.93±0.39）,P＜0.05]。沉默lncRNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强[（18.38±0.73）% vs. （2.86±0.09）%,P＜0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低[（6.68±1.49）μm vs. （12.85±2.56）μm,（25.80±2.59）个 vs. （145.6±5.23）个,均P＜0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低（P＜0.05）。结论：lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。     

间皮素对卵巢上皮性癌细胞生长、粘附和侵袭能力的影响

目的:探讨环境间皮素对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖能力及侵袭粘附能力的影响。方法:用含不同浓度间皮素蛋白的1640培养基培养卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,培养至12,24,36,48h,利用MTT和平板克隆形成实验测定其增殖情况;粘附试验测定细胞粘附能力、Transwell小室体外细胞转移侵袭装置测定SKOV3和OVCAR3的迁移、侵袭能力的改变。结果:间皮素可增强细胞的生长增殖能力,影响卵巢癌细胞的体外粘附、迁移和侵袭能力,间皮素干预组的细胞粘附率、迁移率和侵袭率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:间皮素增强卵巢癌细胞的生长增殖能力及粘附、迁移和侵袭能力。     

ABC294640抑制卵巢癌侵袭及转移的实验研究

目的:观察ABC294640对人卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:用细胞侵袭小室法(Transwell)检测ABC294640对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;用细胞蛋白免疫印迹(Western blotting)法分析ABC294640对卵巢癌细胞中c-Myc蛋白表达水平的调节作用。建立卵巢癌腹腔移植瘤模型,观察ABC294640对肿瘤体内转移作用的影响及其对体内c-Myc表达的影响。结果:50μmol的ABC294640作用卵巢癌细胞后其侵袭、迁移能力受到显著抑制,细胞中c-Myc蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。在裸鼠腹腔移植瘤模型中,与对照组比较,ABC294640用药组中腹腔转移灶数量显著减少(P<0.01)。肿瘤组织中c-Myc表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:ABC294640能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,其抗肿瘤侵袭转移的作用机制可能与c-Myc蛋白的表达下调有关。     

ABC294640抑制卵巢癌侵袭及转移的实验研究

目的:观察ABC294640对人卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:用细胞侵袭小室法(Transwell)检测ABC294640对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;用细胞蛋白免疫印迹(Western blotting)法分析ABC294640对卵巢癌细胞中c-Myc蛋白表达水平的调节作用。建立卵巢癌腹腔移植瘤模型,观察ABC294640对肿瘤体内转移作用的影响及其对体内c-Myc表达的影响。结果:50μmol的ABC294640作用卵巢癌细胞后其侵袭、迁移能力受到显著抑制,细胞中c-Myc蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。在裸鼠腹腔移植瘤模型中,与对照组比较,ABC294640用药组中腹腔转移灶数量显著减少(P<0.01)。肿瘤组织中c-Myc表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:ABC294640能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,其抗肿瘤侵袭转移的作用机制可能与c-Myc蛋白的表达下调有关。     

卵巢癌中ERH表达及其与临床病理特征的关系

目的:通过检测上皮性卵巢癌(EOC)组织中ERH蛋白表达水平,探讨其作为EOC的治疗靶点和预后生物标记物的可能性。方法:选取2019年1月至2019年3月青岛大学附属医院收治的47例EOC组织、10例正常卵巢组织和10例正常输卵管组织的手术标本,免疫组化法检测EOC、正常卵巢组织和正常输卵管组织中ERH蛋白表达水平,Western blot法和qRT-PCR法验证组织中ERH蛋白和mRNA表达水平。分析ERH表达水平与患者的年龄、临床分期(FIGO分期)、病理分级、组织学类型、淋巴结转移和卵巢癌分型的关系。Transwell实验验证干扰ERH表达对卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果:EOC组织中ERH蛋白和mRNA表达明显高于正常卵巢组织和正常输卵管组织(P0.05)。EOC组织中ERH蛋白高表达与病理分级、淋巴结转移、卵巢癌分型有关(P0.05)。干扰卵巢癌细胞A2780中ERH表达显著降低了细胞的迁移和侵袭能力(P0.05)。结论:ERH蛋白在卵巢癌组织中高表达,干扰卵巢癌细胞的ERH表达可抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移。     

4.1N蛋白抑制人卵巢透明细胞癌细胞迁移侵袭及其机制初探

目的:探讨4.1N蛋白对卵巢透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的调控并初步探讨相关分子机制。方法:应用免疫组化法检测4.1N蛋白在卵巢透明细胞癌组织中的表达缺失状况。建立4.1N稳定转染卵巢透明细胞癌ES-2细胞系,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力的改变。利用qRT-PCR和Western blot法检测紧密连接相关分子(Claudin-4和ZO-1)、上皮-间质转化(EMT)标记物(E-cadherin、Ncadherin和Vimentin)和相关转录因子(Twist、Slug和ZEB-2)及基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-3)表达水平的变化。结果:与卵巢异位的子宫内膜组织相比,卵巢透明细胞癌中4.1N蛋白表达水平显著降低甚至缺失(P0.0001)。过表达4.1N后,ES-2细胞的迁移和侵袭能力显著降低,Claudin-4和ZO-1表达上调,Twist、Slug、ZEB-2、MMP-2和MMP-3表达水平下降。结论:4.1N在卵巢透明细胞癌细胞中可能通过调控紧密连接蛋白、部分上皮-间质转化转录因子和基质金属蛋白酶的表达水平,抑制癌细胞的迁移和侵袭能力,进而参与负性调控卵巢透明细胞癌的演进。     

靶向阻断CXCR4对卵巢上皮性癌上皮间质转化影响的研究

目的:探讨靶向阻断趋化因子受体4(CXCR4)对卵巢上皮性癌上皮间质转化(EMT)形成及肿瘤侵袭转移的影响。方法:CXCR4拮抗剂AMD3100作用后,采用MTT法、细胞克隆形成能力实验及Transwell侵袭实验分别检测卵巢癌细胞的增殖能力、细胞克隆形成能力及侵袭能力;采用Western blot法检测卵巢癌OVCAR3细胞中CXCR4以及EMT相关蛋白的表达。结果:AMD3100作用后,卵巢癌细胞OVCAR3的增殖能力、细胞克隆形成能力及侵袭能力明显受到抑制,且卵巢癌细胞中随着CXCR4表达的下降,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,而Vimentin、Snail表达则明显下降,且呈浓度依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:CXCR4可能调节EMT相关蛋白的表达,从而抑制卵巢癌的增殖、侵袭及转移能力。CXCR4有望成为治疗卵巢上皮性癌的新靶点。     

OCT4介导FSH促进上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化的探讨

目的:探讨八聚体结合转录因子4(OCT4)与卵泡刺激素(FSH)在上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化中的作用。方法:用梯度剂量的FSH刺激Hey细胞株,应用Western blot法检测OCT4及Snail蛋白的表达。用FSH刺激siRNA(small interfering RNA)干扰Hey细胞中OCT4表达。Western blot法检测上皮间质转化相关标记物的蛋白表达情况,通过划痕实验观察细胞的迁移能力变化。结果:FSH能显著上调Snail的蛋白水平,且存在剂量效应;FSH能显著上调OCT4的蛋白水平,存在剂量和时间效应。FSH刺激后,促进上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化(EMT),细胞迁移能力增强;siRNA干扰降低OCT4的蛋白水平,抑制EMT,细胞迁移能力减弱;并且能减弱FSH对EMT的促进作用及对细胞迁移能力的增强作用。结论:OCT4及FSH均能促进上皮性卵巢癌上皮间质转化,FSH可通过上调OCT4进而调控下游转录因子Snail促进上皮间质转化,OCT4可能是介导FSH促进上皮性卵巢癌上皮间质转化的关键因子之一。     

凝血因子Ⅻ刺激外周血单核细胞对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的 探索凝血因子Ⅻ刺激正常人外周血单核细胞(monocytes,MOs)后对卵巢癌细胞侵袭能力的影响.方法 正常女性外周血来源MOs在体外经Ⅻ因子刺激12h后,以卵巢癌患者腹水来源的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)为阳性对照,通过印度墨汁吞噬实验检测经Ⅻ因子刺激后,MOs吞噬功能的变化;检测经Ⅻ因子刺激后MOs培养上清对卵巢癌细胞系ES-2,SKOV-3,HO-8910体外侵袭能力的影响;采用AP-1、STAT、Inflammation-1、Oncogene-3家族转录因子试剂盒筛选Ⅻ因子可能通过何种细胞信号转导途径激活MOs.结果 (1)卵巢癌腹水来源的TAM和经Ⅻ因子刺激后MOs吞噬印度墨汁的比例分别为0.66±0.04和0.36±0.03,显著高于外周血来源的MOs(0.27±0.018)(P<0.01,P=0.033).(2)卵巢上皮性癌细胞ES-2在MOs+Ⅻ因子组上清为趋化诱导物时侵袭细胞数目为110.9±5.046,略少于腹水组(157.5±14.86),但显著高于使用普通培养基作为趋化诱导物的阴性对照组(39.14±10.91),在MOs+Ⅻ因子组上清中添加Ⅻ抑制剂西妥昔单抗后,侵袭细胞数量减少为42.43±9.097.结论 卵巢癌腹膜内上调的Ⅻ因子可能通过教育和诱导MOs向具有类似TAM特征的M2型巨噬细胞亚型分化,成为加速卵巢癌细胞在腹膜转移的诱导因素之一.     

LHPP对上皮性卵巢癌恶性行为的影响及其机制研究

目的:探讨磷酸化磷酸组氨酸无机焦磷酸酶(LHPP)对上皮性卵巢癌恶性行为的影响及其机制。方法:选择2016年9月至2019年9月在青岛市市立医院留存的上皮性卵巢癌及正常卵巢的新鲜组织和石蜡切片,采用免疫组化法检测LHPP在上皮性卵巢癌和正常卵巢组织中的表达;应用CCK-8增殖实验和平板克隆实验检测LHPP对卵巢癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测对细胞侵袭、迁移能力的影响;蛋白印迹法检测上皮间质转化(EMT)相关生物标志物的表达。结果:LHPP在卵巢癌组织中的表达水平显著高于正常卵巢组织(P0.01),上皮性卵巢癌中LHPP蛋白的表达水平与手术病理分期、组织学分级、肿瘤糖类抗原125(CA_(125))水平明显相关(P0.05),而与患者年龄是否50岁、病理类型和肿瘤直径均无关(P0.05)。高表达LHPP组的卵巢癌细胞生长速度、克隆形成数、穿膜细胞数明显高于对照组。高表达LHPP后,上皮表型标志物表达下调,而间质表型标志物表达上调。结论:LHPP在上皮性卵巢癌中高表达,可能通过调控EMT过程,促进卵巢癌细胞的增殖、侵袭及迁移,有望成为上皮性卵巢癌的预后标志物及临床治疗靶点。     

颗粒蛋白前体诱导上皮间质转化促进上皮性卵巢癌细胞侵袭和迁移的研究

目的研究颗粒蛋白前体(PGRN)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达差异及其促进EOC发展的分子机制。方法搜集2008年1月到2011年12月在山东大学齐鲁医院就诊的良性上皮性卵巢肿瘤、上皮性卵巢癌患者肿瘤组织的石蜡切片,采用免疫组织化学染色的方法检测PGRN在良性卵巢上皮性肿瘤、EOC中的表达差异;采用Transwell小室方法检测PGRN对EOC细胞侵袭、迁移能力的影响;运用Western Blot法探讨PGRN促进肿瘤细胞侵袭、迁移的分子机制。结果 PGRN在良性上皮性卵巢肿瘤组免疫组化评分:(3.2941±1.0317)分,在EOC组免疫组化评分:(8.5500±0.7014)分(P0.001)。在EOC组中PGRN的表达与Snail的表达呈正相关(P0.01)。Transwell结果显示在SK-OV-3细胞中敲低PGRN后,穿至小室膜下层的细胞数比对照组明显减少(P0.05)。Western Blot结果显示在SK-OV-3细胞中敲低PGRN后,E-cadherin、ZO-1表达显著增强,N-cadherin、Vimentin、Snail、p-AKT、p-mT OR表达明显降低(P0.05)。结论 PGRN可能通过激活Akt/mT OR/Snail信号通路诱导EOC细胞发生上皮间质转化(EMT),进而促进肿瘤细胞的侵袭、迁移。     

hsa-miRNA-200c在肝转移型卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义

目的探讨人类微小RNA-200c(hsa-mi RNA-200c)在卵巢上皮性癌组织中的表达情况,及其与卵巢上皮性癌转移能力的关系。方法采用茎环实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Quantitative PCR),检测2010年10月至2011年5月广东省人民医院的73例卵巢上皮性癌、30例良性卵巢上皮肿瘤及30例正常卵巢组织中hsa-mi RNA-200c的表达。研究于2017年12月至2018年3月开展。分析hsa-mi RNA-200c与临床病理特征的相关性,进一步分层分析73例卵巢上皮癌中13例发生肝转移组、60例非肝转移复发组has-mi RNA-200c的表达情况。过表达或敲低hsa-mi RNA-200c,检测卵巢癌细胞侵袭迁移能力的变化。结果卵巢上皮性癌组中hsa-mi RNA-200c的相对表达量382.18±15.22均高于良性卵巢上皮性肿瘤组35.61±1.42及正常卵巢组4.43±2.23,差异有统计学意义(P0.01),后两组间差异无统计学意义(P0.05)。hsa-mi RNA-200c在临床分期晚期(670.91±16.88vs. 129.52±33.3,P0.035)、淋巴结转移阳性(529.54±75.24 vs. 175.85±49.80,P0.004)和发生远处转移的卵巢上皮性癌中低表达,其中在发生肝转移的卵巢癌组织中显著低表达(377±15.31vs. 28.22±9.14,P0.009)。在预后较好的子宫内膜样卵巢癌组中高表达(浆液性353.89±12.51 vs.黏液性267.93±11.43 vs.子宫内膜样腺癌802.41±31.53,P0.05),与其他病理类型及组织分化程度无关(P0.05)。transwell小室侵袭实验显示,hsa-mi RNA-200c与卵巢癌细胞侵袭迁移能力呈负相关(P0.01)。结论 hsa-mi RNA-200c在卵巢上皮性癌的发生发展中可能具有双重调节的作用,其低表达与晚期卵巢上皮性癌、淋巴结转移、肝转移和不良预后密切相关。     

PRMT5对卵巢癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响

目的:研究精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)对卵巢癌A2780及SKOV3细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其可能机制。方法:设计并体外合成靶向PRMT5的siRNA序列(si P)及阴性对照序列(si C),分别转染卵巢癌细胞A2780、SKOV3。Brd U掺入实验检测细胞增殖能力;Transwell小室技术检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测PRMT5降调后E-cadherin蛋白表达变化。结果:转染si P后,卵巢癌细胞中PRMT5表达明显降低。A2780细胞中,si P组的Brd U阳性率明显低于si C组[(11.7±1.5)%vs(33.3±1.5)%,P0.001];SKOV3细胞中,si P组的Brd U阳性率明显低于si C组[(18.0±2.0)%vs(35.3±1.5)%,P0.001]。A2780和SKOV3细胞中,si P组的迁移和侵袭细胞数均显著少于si C组和N组,差异均有统计学意义(P0.001)。Western blot法显示,转染后72h,si P组中E-cadherin蛋白表达明显上调。结论:PRMT5参与了卵巢癌细胞的生长增殖和迁移侵袭的过程,干扰其表达能显著减慢细胞的增殖,减弱其迁移和侵袭能力。PRMT5可能通过调控E-cadherin表达参与卵巢癌细胞的迁移和侵袭过程。     

内皮前体细胞转染TRAIL基因后治疗卵巢上皮性癌的实验研究

目的探讨内皮前体细胞(EPC)转染TRAIL基因后对卵巢上皮性癌细胞的体外杀伤作用。方法采用细胞表面特异性标志物CD133磁珠分离法,从脐血中分离EPC,并进行体外培养、扩增和鉴定。构建带有TRAIL基因的质粒(即TRAIL质粒),用脂质体将TRAIL质粒转染入EPC,酶标法测定培养上清液中EPC分泌的TRAIL蛋白的表达水平,流式细胞仪分析其对卵巢上皮性癌细胞的促凋亡作用。结果采用磁珠分离法可从脐血中分离出EPC,EPC占分离后细胞总数的(84±3)%。成功构建TRAIL质粒,转染TRAIL质粒后EPC分泌的TRAIL蛋白水平增加,转染72 h时可达532.8pg/m l;而仅转染脂质体及转染绿色荧光蛋白者为12.4及9.2 pg/m l。将转染TRAIL质粒后的EPC培养上清液与卵巢上皮性癌细胞共同孵育24 h后,卵巢上皮性癌细胞凋亡率最高可达24.1%。结论TRAIL基因转染EPC后,可使EPC分泌的TRAIL蛋白水平增加,并诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡。提示,EPC可作为基因治疗的靶向性载体,有望应用于卵巢上皮性癌的治疗。