神经生长因子对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的修复作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的修复作用.方法 分离培养大鼠脑皮质神经元及其微管相关蛋白-2(MAP-2)免疫荧光鉴定;通过台盼蓝拒染色动态观察NGF对神经元的活性的影响;采用机械性离心损伤皮质神经元,观察损伤后神经元的形态改变,并测量损伤前后不同时间段损伤组与损伤加NGF组乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果 培养4、5、6、8天NGF组与对照组进行比较,细胞存活率均有显著差异,P<0.05;损伤组与对照组LDH值比较差异有显著性(P<0.01);损伤组加NGF组与损伤组LDH值比较有显著差异(P<0.05,P<0.01).结论 NGF对皮质神经元有促生长作用;NGF对机械性大鼠脑皮质神经元的损伤具有修复作用.     

米诺环素对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨米诺环素对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法:72只SD雄性大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组),缺血再灌注组(Ir组),米诺环素组(M组),每组各4个时相(6h、12h、24h、72h).采用切除右肾,夹闭左肾动脉45min后恢复灌流建立缺血再灌注损伤模型.测定髓过氧化物酶(NPO)活性及血清肌酐(Scr)水平,以反映中性粒细胞活化及肾功能损害的程度.观察肾组织病理学改变及超微结构变化.结果:缺血再灌注组MPO活性和Scr水平升高,米诺环素组明显低于缺血再灌注组,2组比较差异有显著性意义(P＜0.05,P＜0.01).缺血再灌注组出现明显的肾组织病理学及超微结构损害,米诺环素组上述变化轻于缺血再灌注组.结论:米诺环素对大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用.     

低剂量米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 探讨静脉用低剂量米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及其机制。方法 成年雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和米诺环素干预组(I/R+MC组)。I/R组行大脑中动脉阻塞再灌注术;S组行假手术操作;I/R+MC组在再灌注术后,尾静脉注射3 mg/kg米诺环素,每日2次,持续14 d。缺血再灌注后2 d,采用TTC染色法测定脑梗死体积,伊文思蓝(EB)法评估血脑屏障的通透性,蛋白质印迹法检测缺血侧脑组织内高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1)及离子钙接头蛋白(ionized calcium-binding adaptor molecule 1,Iba1)的表达。分别于再灌注后2、7、14 d,采用改良的神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能。结果 缺血再灌注后2 d,I/R组大鼠脑梗死体积较S组增大,缺血侧脑组织内EB的渗出量、HMGB1和Iba1蛋白表达均较S组明显增加(P<0.05)。与I/R组比较,I/R+MC组大鼠脑梗死体积减小(P<0.05),EB的渗出量、HMGB1和Iba1蛋白表达量降低(P<0.05)。I/R+MC组大鼠的神经功能缺损评分较I/R组下降(P<0.05)。结论 米诺环素可能通过降低大鼠脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积、血脑屏障的通透性及小胶质细胞激活等发挥神经保护作用。     

米诺环素对大鼠脊髓损伤早期TNF-α表达的影响

目的：探讨米诺环素（minocycline）对大鼠脊髓损伤（SCI）早期的保护作用和机制.方法：108只SD大鼠随机分为3组：对照组（A组=36只）、损伤组（B组=36只）和损伤后米诺环素治疗组（C组=36只）,采用改良Allen＇s打击法致伤B组和C组大鼠T8～T11脊髓,对照组不损伤脊髓.治疗组于术后1h腹腔注射米诺环素（90mg/kg）,之后每隔12h给药1次,对照组和损伤组在相同时点腹腔注射相同体积生理盐水.B组和C组于术后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死大鼠取损伤段脊髓标本,A组在相应时间点取相应节段脊髓标本,切片后行HE染色组织病理学检查和免疫组织化学检测TNF-α表达.结果：脊髓损伤早期损伤脊髓取材免疫组化镜检后发现A组大鼠脊髓TNF-α呈弱阳性表达;B组和C组伤后2h即有TNF-α表达,12h达到高峰,之后逐渐下降;B组伤后72h TNF-α表达仍较A组高（P＜0.05）,而C组在伤后72h即恢复到对照组水平（P＞0.05）,C组各时间点TNF-α表达均较损伤组低（P＜0.05）.结论：米诺环素可显著降低脊髓损伤早期组织中TNF-α的表达,为其应用于临床治疗急性脊髓损伤提供实验依据.     

米诺环素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨米诺环素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。方法：54只雄性SD大鼠随机 分成假手术对照组、缺血再灌注组和米诺环素组,每组18只。米诺环素组在缺血再灌注模型的基础上,自手术前 36 h开始给予米诺环素灌胃给药(45 mg/kg),以后每12 h给药1次(22.5 mg/kg)。再灌注后2,6,24 h检测血清谷丙转 氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平;肝组织行HE染色,观察病理组织学改变并计算评分(根据Suzuki标准);肝组织匀浆检测丙二醛 (malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平;real-time PCR检测肝组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β) mRNA的表达;Western印迹测定Dickkopf-1(DKK-1)和β-连 环蛋白(β-catenin)的表达。结果：再灌注2,6,24 h后,与缺血再灌注组比较,米诺环素处理组血清ALT,AST,LDH 水平,以及肝组织病理学半定量评分、肝组织中TNF-α和IL-1β mRNA水平的表达均降低(均P<0.05);氧化损伤指标 MDA和MPO在肝组织中的含量减少(均P<0.05);米诺环素组DKK-1的蛋白表达下调(P<0.05),β-catenin蛋白表达上调 (P<0.05)。结论：米诺环素可减轻缺血再灌注对肝的损伤,其机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而减轻肝氧 化应激,并抑制促炎性细胞因子的释放。     

低剂量米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 探讨静脉用低剂量米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及其潜在的机制。方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠72只,随机分为假手术组,缺血再灌注组和米诺环素组。缺血再灌注2天,采用TTC染色法测定脑梗死体积,伊文思蓝(EB)法评估血脑屏障的通透性,Western blot法检测缺血侧脑组织内高迁移率族蛋白(HMGB1)及Ibca1的表达。术后第2、7和14 天,采用改良的神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能。结果 缺血再灌注第2天,模型组大鼠脑梗死体积明显增大,缺血侧脑组织内EB的渗出量[(4.40±0.73) μg/g], HMGB1(0.862±0.058)和Iba1(0.325±0.041)蛋白表达较假手术组明显增加(P<0.05)。同缺血再灌注组相比,米诺环素组大鼠脑梗死体积明显减小(P<0.05),EB的渗出量明显降低[(2.71±0.68) μg/g,P<0.05],HMGB1(0.353±0.036)和Iba1(0.137±0.030)蛋白表达明显降低(P<0.05)。米诺环素组大鼠神经功能评分显著下降(P<0.05)。 结论 米诺环素可以通过降低大鼠脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积,血脑屏障的通透性及小胶质细胞的激活等方面发挥神经保护作用。     

灯盏花素对谷氨酸体外诱导大鼠皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨灯盏花素对谷氨酸(Glu)体外诱导原代培养大鼠皮质神经元损伤的作用及机制.方法 通过MTT法观察灯盏花素对Glu诱导神经元损伤的细胞存活率的影响,并结合超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)生化测试及细胞钙影像方法探讨相关作用机制.结果 灯盏花素呈质量浓度依赖性提高Glu诱导神经元损伤细胞的存活率,并拮抗由Glu诱导的[Ca2 ];升高、MDA生成,提高SOD活性.结论 灯盏花素对Glu体外诱导大鼠皮质神经细胞损伤具有保护作用,可能与减轻胞内Ca2 超载、提高神经细胞抗氧化能力有关.     

米诺环素对糖尿病神经痛大鼠模型脊髓神经元和胶质细胞激活的影响

目的 观察米诺环素对糖尿病大鼠神经痛模型脊髓内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞激活状态的影响.方法 54只Wistar雄性大鼠,体重180～220 g,随机分为3组:正常组(N组,n=6)、糖尿病(D组,n=24)、米诺环素治疗组(M组,n=24).D组和M组用链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病神经痛模型.M组自STZ注入前1 d起每天注入米诺环素,N组和D组注入等量磷酸盐缓冲液.于STZ注射后3、7、21、35 d时测定各组机械性缩足反射阈值(MWT).D组和M组在MWT测定结束后随机处死6只大鼠,N组在实验结束时处死全部大鼠.取大鼠腰段脊髓,用RT-PCR 测定抗原癌基因蛋白(c-Fos)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Ⅲ型补体受体(CR3)的表达.结果 与N组相比,D组在STZ注射后7、21、35 d时MWT降低;c-Fos在STZ注射后3 d表达即增加,直至35 d时;GFAP在STZ注射后7 d表达增加,21 d时达到高峰,35 d仍处于较高水平;CR3在STZ注射后7 d表达增加并达高峰,随后回落.与D组相比,M组在STZ注射后21 d和35 d时MWT回升;c-Fos、GFAP和CR3在STZ注射7 d后表达均减弱.结论 在糖尿病神经痛大鼠脊髓内,神经元、星形胶质和小胶质细胞在神经痛形成和维持阶段激活状态各不相同,米诺环素在不同时段抑制神经元、星形胶质和小胶质细胞的激活,并减轻了神经痛.     

米诺环素对急性缺血性脑卒中神经保护作用的研究进展

米诺环素是一种四环素类抗生素,在脑缺血、脑创伤、神经变性疾病(如帕金森病、多发性硬化等)动物模型中显示了抗炎、抗凋亡和神经保护作用。由于它对血-脑脊液有较高的通透性,安全性高,并可以延长治疗时间窗,成为了理想的治疗脑卒中的候选药物。现就米诺环素对急性缺血性卒中的作用机制、动物试验及临床研究结果进行综述,为其在临床的应用提供参考。     

米诺环素对大鼠和小鼠脑外伤的部分保护作用

目的：研究半合成四环素类药物米诺环素对中枢神经损伤的保护作用。方法：在大鼠开放性脑外伤、小鼠闭合性脑外伤和脑冷冻伤3种脑损伤模型，于手术前2d开始，每天2次预先给予米诺环素45mg／kg ip；手术前30min及手术后1h，各给药1次；手术后第1、2天，每天给药1次。观察手术后行为学变化，14d后计算脑损伤面积及神经元数量。结果：米诺环素对大鼠开放性脑撞击伤，除了加快肢体功能（爬板角度）恢复外，对其他指标无明显作用；对小鼠脑闭合伤，能抑制神经元减少，但对行为学变化无明显作用；对小鼠脑冷冻伤，能减少死亡率及损伤面积，对神经元减少的作用不明显。结论：米诺环素对不同动物的不同脑外伤有部分保护作用。     

体外培养大鼠脑皮层神经元机械性损伤模型的建立

目的: 建立体外培养大鼠脑皮层神经元机械性损伤模型. 方法: SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d,微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元,依划割程度不同分为轻、中、重3组,对照组除不进行机械性划割,其余处理同损伤组,伤后不同时间点(10, 30 min, 1, 3, 6, 12, 24 h)检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量. 结果: 伤后30 min起,损伤轻、中、重组细胞存活率较对照组明显降低,且随损伤程度加重,细胞存活率下降(P<0.05),24 h达高峰,伤后30 min起LDH含量较对照组增加(P<0.05). 结论: 微量移液器塑料滴头机械性划伤操作简便,能较好模拟脑损伤后神经元损伤机制,造成神经元不同程度损伤,利于观察和研究神经元损伤及周围神经细胞反应,是一种较好的体外神经元损伤模型.     

丁苯酞对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的观察丁苯酞对缺氧／复氧诱导的大鼠原代培养皮层神经元损伤的干预作用。方法原代培养Wistar大鼠皮层神经元,建立缺影复氧损伤的皮层神经元模型。实验分为5组：正常对照组、缺氧／复氧模型组、0．01μmol／L丁苯酞组、0．1μmol／L丁苯酞组、1．0μmol／L丁苯酞组。各组细胞进行相应的干预并孵育后,用CCK-8比色法观察神经元细胞活力,用激光共聚焦显微镜观察标记有荧光染料Fluo-3／AM的神经元细胞内游离钙离子浓度的变化。结果丁苯酞可抑制缺氧／复氧诱导引起的神经元细胞活力下降,且呈一定的浓度依赖;丁苯酞还可抑制细胞内游离钙离子浓度的升高,丁苯酞0．01,0．1,1．0μmol／L组与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论丁苯酞可部分拮抗缺氧／复氧诱导的大鼠原代培养皮层神经元的钙超载,可能是丁苯酞对神经毒作用发挥保护作用的重要机制。     

CBD和尼莫地平对培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 研究一种神经营养物质CBD和尼莫地平（Nimodipine,Nim）联合应用对培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用。方法 分别采用谷氨酸化学或机械划痕创伤性损伤培养大鼠皮层神经元,根据培养细胞台盼蓝活力计数和培养上清乳酸脱氢酶（LDH）检测评估损伤程度。结果 CBD和Nim单独应用时,对谷氨酸和创伤介导的培养皮层神经元损伤有中等程度的保护作用,与单独损伤未加保护性药物组相比较有显著性差异（P<0.01）。CBD和Nim联合会用时,保护作用比单独应用明显增强（P<0.01）。结论 CBD和Nim联合应用有明显的协同作用。     

西比灵对神经元损伤的保护作用

目的：探讨西比灵对神经元损伤的保护作用机制。 方法：采用H2O2建立离体培养大鼠皮层神经细胞损伤模型,利用八木法(TBA法)测定丙二醛（MDA）、二苯胺法测DNA断裂率,同时观察乳酸脱氢酶（LDH）泄漏率的变化、西比灵对上述指标的影响及其在体外与自由基的相互作用。 结果：与H2O2损伤组比较,西比灵可明显降低H2O2对神经元的过氧化损伤作用,LDH泄漏率、DNA断裂率明显降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量明显下降(P<0.01),而且随着西比灵浓度的提高羟自由基清除率明显升高。 结论：西比灵不但可防止Ca²⁺过量跨膜进入细胞内,而且对神经元过氧化损伤具有明显保护作用。     

神经生长因子对脊髓减压病神经损伤的修复作用研究

目的：研究神经生长因子对脊髓减压病神经损伤的修复作用。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、安全减压组、生理盐水（NS）组、神经生长因子（NGF）治疗组、高压氧（HBO）暴露组、NGF与HBO联用组,建立大鼠脊髓减压病模型,采用酶联免疫实验（ELISA）定量检测比较各组大鼠出舱6、24、48、72h肿瘤坏死因子（TNF-α）的蛋白表达。结果：NGF治疗组TNF-α浓度在6、24、48、72h均明显低于生理盐水组（P〈0．05）,HBO治疗组TNF-α浓度在24、48、72h也明显低于生理盐水组（P〈0．05）。NGF与HBO联用组TNF-α的浓度在24、48、72h均显著低于单纯NGF治疗组和HBO暴露组（P〈0．05）。结论：神经生长因子和高压氧治疗可以抑制脊髓减压病大鼠TNF-α的蛋白表达,NGF与HBO联合治疗的效果明显优于单纯NGF治疗或HBO暴露。     

丹参川芎嗪注射液对低糖低氧/复供损伤大鼠皮层神经元的保护作用

目的:通过建立新生大鼠的原代皮层神经元低糖低氧/复供损伤模型,探讨丹参川芎嗪注射液对缺血缺氧条件下神经细胞的保护作用.方法:选用新生大鼠的皮层神经元为研究对象,利用Na2S2O4与细胞共孵育造成神经细胞低糖低氧损伤,观察皮层神经元一般形态学及凋亡相关形态学的改变、检测神经元存活率、神经细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)活性、...     

雌激素对氧糖剥夺诱导神经元损伤的保护作用

目的 探讨雌激素对氧糖剥夺诱导新生大鼠皮质神经元损伤的保护作用.方法 将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用雌激素预处理加OGD/R处理,各组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况,采用细胞免疫组化方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达.结果 ①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数目显著少于B组,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论 雌激素可明显提高OGD/R后神经元的存活率,使GAP-43、BDNF表达增加,抑制神经元凋亡,实现神经元损伤的保护作用. Abstract： Objective To explore the protective effects of estrogen on injury induced by OGD/R(oxygen-glucose deprivation/rehabilitation of oxygen-glucose) in neonatal rats.Methods Cortical neurons cultured for 7 days were randomly divided into group A (normal control group),group B (OGD/R, alone) and group C (pretreatment with estrogen-17βE2,and OGD/R). Then detect cell survival rate by MTT colorimetry, count the apoptotic neurons by TUNEL, observe the expression of growth associated protein(GAP-43), brain-derived neurotrophic factor (BDNF) using immunocytochemical on each time point after OGD/R 0,1, 6, 12, 24 h of each group. Results ①Compared with group A, the cell survival rate in group B decreased, the survival rate was increased in group C due to pretreatment of estrogen. ②The apoptotic neurons in group B were more than those in group A, and it was less in the group C than in group B after OGD/R 6,12,24 h. ③The expression of GAP-43, BDNF was increased in group B,and it was higher in group C than group B after OGD/R 6,12,24 h. Conclusions The study indicated that estrogen could improve the survival rate of neurons after OGD/R, increase expressions of GAP-43, BDNF,inhabit neurocyte apoptosis,and these mechanisms play neuroprotective effects.