甾体生物转化菌株新月弯孢霉的研究

文章对甾体Ｃ１１β—羟基化生物转化菌株——新月弯孢霉的生长和生物转化特征进行了研究。经过反复筛选，最终选出了一株氢化可的松转化率达３０％的最优菌株。文中描述了新月弯孢霉菌体生长过程中，菌体干重与ｐＨ的变化情况，并通过正交实验确定了该菌株生长的最适培养基配方。经过研究，对新月弯孢霉菌株的生长和生物转化特性及其进行甾体Ｃ１１β—羟基化生物转化过程有了初步的了解。     

大豆提取物和人参与某些药物的相互作用

对氢化可的松代谢为6β-羟-氢化可的松的测定作为非创伤性检查法用于评价肝代谢和临床测定酶的诱导作用。6β-羟-氢化可的松主要通过(可由糖皮质激素诱导的)人肝细胞色素 P450(CYP)同工酶 CYP3A4而形成。在已知酶的诱导下,利福平、苯巴比妥、苯妥英和卡马西平等药物可使病人尿中的6β-羟-氢化可的松或该成分与氢化可的松的比值增加2～4倍。有研究显示,人参皂苷 Rc 明显增     

地塞米松、氢化可的松、氨茶碱、麝香对大鼠肝脏脂质过氧化的影响

目的：探讨地塞米松、氢化可的松、氨茶碱、麝香注射液对Fe^2 -L-半胱氨酸诱导的大鼠肝脏脂质过氧化（LPO）模型的影响。方法：采用细胞匀浆MDA比色法（体外法）测定大鼠肝脏粗线粒体脂质过氧化作用产物丙二醛（MDA）的含量。结果：氢化可的松,麝香可引起MDA升高（P＜0．05）,氨茶碱可使MDA降低（P≤0．01）,地塞米松可使雌性大鼠的MDA降低,雄性大鼠的MDA升高（P≤0．01）,结论：氢化可的松,麝香对大鼠肝脏LPO具有诱导作用,氨茶碱可抑制大鼠肝脏的LPO代谢,地塞米松对大鼠肝脏LPO作用的性别差异较大,对雌性大鼠作用为抑制而对雄性大鼠则起诱导作用。     

新月弯孢霉对重楼皂苷的生物转化

目的寻找选择性水解甾体皂苷C-3位糖链末端糖基的微生物,同时制备甾体皂苷的去糖基衍生物。方法利用新月弯孢霉(3.438 1)培养,对C-3位有双糖基结构的甾体皂苷类化合物重楼皂苷Ⅴ(化合物Ⅰ)、重楼皂苷Ⅵ(化合物Ⅱ)进行生物转化;用反相C18开放柱进行转化产物的分离纯化,波谱方法鉴定其结构。结果新月弯孢霉(3.438 1)均能将化合物Ⅰ和化合物ⅡC-3位糖链末端的鼠李糖水解,转化为单糖基皂苷,转化产物分别鉴定为薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,即延龄草苷(trillin,化合物Ⅲ)和偏诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物Ⅳ)。结论首次发现新月弯孢霉(3.438 1)对重楼皂苷Ⅴ和重楼皂苷ⅥC-3位糖链的末端鼠李糖具有较强的水解能力。     

昆虫细胞色素P450的诱导和抗药性

可诱导性是细胞色素P450酶系的重要特征,经过诱导,昆虫体内P450解毒酶含量增加解毒作用增强,面细胞色素P450参与的杀虫剂抗药性均表现为P450酶活性的增高或酶量的增加,解毒作用增强,二的最大不同在于持续的时间上,了解P450酶系的诱导机制及其与抗药性的关系,对认识P450参与的抗药性的发生发展机制具有重要意义。     

三种免疫抑制剂及氢化可的松与Zn~(2+)、Mg~(2+)Ge-132交互作用时对白细胞吞噬功能的影响

目的：研究氢化可的松、氟美松、羟基脲三种免疫抑制剂对白细胞吞噬活性的直接影响：Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋Ｇｅ－１３２对氢化可的松的拮抗作用。方法：采用改良的人全血化学发光法测定，①三种免疫抑制剂按不同剂量加入测定血中时白细胞的化学发光值，②Ｇｅ－１３２中的Ｇｅ及Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋相当于血浆浓度中Ｇｅ、Ｍｇ、Ｚｎ元素含量的１０倍加５μｇ氢化可的松时白细胞化学发光值。结果：①氢化可的松、羟基脲对白细胞吞噬活性具有直接抑制作用，而氟美松对白细胞吞噬活性在低浓度时具有增强及在高浓度时具有抑制的双效作用；②Ｚｎ２＋使氢化可的松对白细胞吞噬活性的抑制作用加强，而Ｍｇ２＋具有拮抗氢化可的松的抑制作用，有机锗（Ｇｅ－１３２）不影响氢化可的松的抑制作用。结论：①为三种免疫抑制剂量大小与抑制白细胞吞噬功能提供定量关系参考，②为金属元素对免疫抑制剂的拮抗作用提供参考依据     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

海藻、甘草及其相伍用对小鼠肝药酶的影响

目的：研究海藻、甘草单煎液及其不同比例合煎，单煎后混合液以及单体A、B；C、D、E对小鼠肝药酶的影响。方法：取小鼠随机分组，分别ig给药，qd,连续4d后禁食20h，处死取肝脏，称重后制成匀浆，紫外分光光度计于450nm,490nm波长下测其光密度值，计算肝匀浆中细胞色素P－450的含量。结果：甘草、甘草与海藻合煎液及单体A，B，C，D，E均能显著提高小鼠肝匀浆中细胞色素P－450的含量，而海藻，甘草与海藻单煎后混合液未能提高小鼠肝心浆中的细胞色素P－450的含量。结论：甘草，甘草与海藻合煎液及单体，A，B，C，D，E均能显著提高小鼠肝匀浆中细胞色素P－450的含量，对肝药酶有诱导作用。     

葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶表达的调控作用

目的：探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶（aromatase P450,P450arom）表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法：将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测药物对RL95-2细胞P450arom mRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2（PⅡ）转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载体pGL3-Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL95-2细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RT-PCR及Western blotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果：与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450arom mRNA表达（P〈0.01）,抑制作用在6、12 h较显著（P〈0.01）。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒（-1 017,-763,-543,-234-＋8 bp）。瞬时转染系列质粒至细胞中,于12 h后加入葛根素（10-7mol/L）刺激,又12 h后检测荧光蛋白水平。结果表明,-763--543 bp间的活性被抑制（P〈0.05）,通过转录因子分析找到了-410/-401 bp的AP-1（c-jun/c-fos）。利用RT-PCR、Western blotting及荧光素酶活性检测发现葛根素（10-7mol/L）对AP-1（c-jun/c-fos）的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论：低浓度葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP-1（c-jun/c-fos）的影响。     

双波长分光光度法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氢化可的松的含量

目的：双波长分光光度法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氢化可的松的含量。方法：以水为溶剂,在248、308.7mm处进行测定。结果：氢化可的松在0-10删范围内,浓度与吸收度差值呈良好的线性关系。氢化可的松的平均回收率为99．70％,RSD为0．29％（n=9）。结论：本方法简便、快速、准确可靠,可用于供试品中氢化可的松的含量测定。     

氢化可的松抑制白细胞介素1α诱导的角膜基质细胞胶原降解

目的：探讨氢化可的松在白细胞介素1α(IL-1α)诱导的角膜基质细胞降解中的作用。 方法：利用角膜基质细胞三维胶原凝胶表面添加纤维蛋白溶酶原（0.06 μg•L^-1)、不同浓度的IL-1α（0、0.1、1.0、10.0 μg•L^-1）及IL-1α（10 μg•L^-1）与不同浓度的氢化可的松（0、1、10、100 mmol•L^-1）,在MEM培养液中培养24 h后,通过测定培养上清液中的羟脯氨酸（HYP）的量作为胶原降解的活性单位。 结果：在存在纤维蛋白溶酶原的情况下,随着IL-1α浓度的升高,HYP含量增加, IL-1α 0.1、1.0和10.0 μg•L^-1组与对照组比较及各剂量组间比较,差异均有显著性（P<0.025或P<0.05）;在存在纤维蛋白溶酶原、IL-1α（10 μg•L^-1）的情况下,随着氢化可的松质量浓度的增加,HYP含量减少,氢化可的松1、10、100 mmol•L^-1组与对照组（0 mmol•L^-1）比较及各剂量组间比较,差异均有显著性（P<0.025或P<0.05）。 结论：氢化可的松具有抑制IL-1α诱导的角膜基质细胞胶原降解的作用。     

穿破石对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

细胞色素P450（cytchrome P450，CYP450）是一类参与内源性和外源性化合物代谢的酶。由CYP450酶系作用的药物生物转化是药物代谢的重要环节,同时许多药物又对CYP450酶系活性有抑制或诱导作用，也是四氯化碳（CCl4）在体内进行代谢活化的主要酶类。     

三种免疫抑制剂及氢化可的松与Zn^2＋,Mg^2＋Ge—132交互作用时对？…

目的：研究氢化可的松、氟美松、羟基脲三种免疫抑制剂对白细胞吞噬活性的直接影响：Ｚｎ＾２＋、Ｍｇ＾２＋、Ｇｅ－１３２对氢化可的松的拮抗作用。方法：采用改良的人全血化学发光法测定，①三种免疫抑制剂按不同剂量加入测定血中时白细胞的化学发光值。②Ｇｅ－１３２中的Ｇｅ及Ｚｎ＾２＋、Ｍｇ＾２＋相当于血浆浓度中Ｇｅ、Ｍｎ、Ｚｇ元素含量的１０倍加５μｇ氢化可的松时白细胞化学发光值。结果①氯化可的松、羟基脲对白细胞     

激素和干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长影响的研究

为了解氢化可的松和干扰素α－２ｂ对瘢痕疙瘩浸润，增生和老化各部分成纤维细胞的影响是否相同，对６例瘢痕疙瘩不同部位和６例正常皮肤成纤维细胞在培养基中加入氢可的松（０．１ｍｇ／ｍｌ和０．５ｍｇ／ｍｌ）及干扰素α－２ｂ（１０００μ／ｍｌ）后的增殖情况下初步研究，结果：氢化可的松浓度为０．１ｍｇ／ｍｌ时，所有细胞均被抑制，当氢化可的松浓度升至０．５ｍｇ／ｍｌ时，几乎氖的细胞均不能存活，干扰素α－２ｂ对瘢痕     

固定化黑根霉细胞及其在甾体转化上的应用

我们对固定化黑根霉细胞及其对16,17环氧黄体酮的11α-羟化反应进行了研究。黑根霉细胞用聚丙烯酰胺、海藻酸盐以及琼脂包埋等方法进行固定,并测定了它们的11α-羟化率。用聚丙烯酰胺等方法包埋的固定化细胞不显示转化能力,琼脂颗粒的机械强度差,仅海藻酸钙包埋的细胞显示转化能力。在本实验条件下,用海藻酸钙固定的黑根霉细胞酶活力回收率达65％(假设游离细胞酶活力为100％),使用次数10次以上,以培养液作为转化介质,因为有利于菌体的生长及辅酶的再生。     

不同剂量氢化可的松诱导大鼠阳虚状态的Ridit分析

目的：氢化可的松诱导的大鼠阳虚模型是目前较为公认的阳虚证模型,然而对氢化可的松剂量的选择尚未有统一结论。由于氢化可的松剂量可能是影响造模成功与否的重要因素,为比较不同造模剂量下模型状态的异同,在分析本实验室前期建立的多批不同剂量氢化可的松诱导大鼠阳虚状态模型数据的基础上,本文引入Ridit分析法,对大量实验数据进行挖掘,分析剂量对于模型的影响。方法：收录2.5、3.75、10和20mg/kg4个剂量氢化可的松造模的共27批实验数据,标准化后进行数据资料类型转化,继而运用Ridit分析法,计算并比较神经-内分泌系统、免疫系统、肝肾功能和物质能量代谢系统等方面的共19个指标的变化趋势。结果：从模型整体状态考察,2.5、3.75、10、20mg/kg4个剂量氢化可的松建立的阳虚模型之间差异不明显,提示造模剂量的改变不会对该模型状态造成显著改变。从指标变化趋势角度看,不同指标在不同剂量下表现出一定差异,例如性腺轴激素雌二醇和睾酮在2.5mg/kg剂量下与正常组比较差异较大,更能体现阳虚状态的特点;免疫系统指标免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和物质能量代谢系统指标三酰甘油、总胆固醇则分别在3.75和10mg/kg剂量下有更明显的变化,提示需根据预期研究的生理生化指标确定与之相匹配的造模剂量。结论：Ridit分析有利于不同剂量下氢化可的松阳虚模型状态的综合分析,该法也为阳虚模型状态的深入研究奠定了基础。     

实验性2型糖尿病大鼠睾丸Leydig细胞形态和睾酮合成功能的改变

目的：研究糖尿病时睾丸的组织病理学变化及睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮合成功能的改变。方法：雄性成年SD大鼠20只，随机分为正常对照组10只、糖尿病组10只。后一组给以高脂饮食加小剂量（25mg／kg）链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病大鼠模型，12周后处死。用光镜及电镜观察大鼠睾丸的组织形态学改变；逆转录-PCR法检测睾丸组织类固醇激素合成灵敏调节蛋白（steroidogenic acute regulatory proteins，StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）及17a-羟基化酶／17，20-裂解酶（P450c17）mRNA含量；酶联免疫吸附法测定血清中睾酮和黄体生成素（leutelnizing hormone，LH）含量。结果：糖尿病大鼠光镜下主要表现为Leydig细胞数量减少，体积变小：透射电镜下主要见到Leydig细胞萎缩：睾丸组织的StAR mRNA和P450scc mRNA含量糖尿病组低于正常对照组（P〈0．05），P450c17含量糖尿病组较正常对照组差异无显著性（P〉0．05）；与正常对照组相比血清中睾酮和LH含量降低（P〈0．05）。结论：成年期2型糖尿病可以引起大鼠睾丸Leydig细胞功能降低，形态结构改变。     

不同诱导因子对 MT-5细胞表达 HBsAg 的影响

对经 HBV-DNA 转染的 MT-5细胞的培养条件进行观察。发现重金属离子Zn 和 Cd 对 MT-5细胞表达 HBsAg 有诱导作用,而咖啡因、地塞米松、氢化可的松、丙酸睾丸酮、苯丙酸诺龙对 MT-5细胞的 HBsAg 均无诱导作用。     

八味锡类散对小鼠恶唑酮结肠炎的治疗作用及其机制

目的：观察八味锡类散对小鼠恶唑酮结肠炎的治疗作用,并探讨其作用机制。 方法：32只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、氢化可的松灌肠液组和八味锡类散组。除空白对照组外,各组小鼠均以3%恶唑酮（溶于50%乙醇）灌肠诱导结肠炎。灌肠后第2天开始,空白对照组和模型组以0.15 mL 0.9%羧甲基纤维素钠溶液灌肠,八味锡类散组以0.15 mL八味锡类散灌肠（0.2 mg/g）,氢化可的松灌肠液组以0.15 mL氢化可的松灌肠液灌肠（0.02 mg/g）,每日1次,连续给药5 d。每日进行疾病活动指数（disease activity index,DAI）评分,5 d后处死小鼠,进行结肠大体和组织学损伤的评估,免疫组织化学法检测结肠组织中occludin、Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）和核转录因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的表达情况,酶联免疫吸附测定法检测结肠组织中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的含量。 结果：八味锡类散组DAI和结肠大体、组织学损伤计分的改善较模型组显著（P〈0.05）,八味锡类散组和氢化可的松灌肠液组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。八味锡类散组结肠组织中TLR4、NF-κB表达和TNF-α含量较模型组减少（P〈0.05）,occludin表达较模型组增加（P〈0.05）,八味锡类散组和氢化可的松灌肠液组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论：八味锡类散能有效缓解恶唑酮诱导的小鼠结肠炎,疗效与氢化可的松相似。其作用机制可能与上调紧密连接蛋白occludin的表达,增强结肠黏膜屏障功能,下调异常增高的TLR4表达,减少NF-κB的激活,最终下调炎性细胞因子TNF-α的表达并改善结肠黏膜屏障功能有关。     

骨关节炎Ⅰ号预防氢化可的松所致兔软骨细胞损伤作用

目的：探讨骨关节炎Ⅰ号预防氢化可的松对软骨细胞的损伤作用。方法：用3—4周兔关节软骨,经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,经阿尔辛蓝、甲苯胺蓝染色鉴定后,在软骨细胞培养体系中分别加入不同浓度的骨关节炎Ⅰ号与氢化可的松的混合液,通过倒置显微镜观察软骨细胞形态变化,用MTT比色法观察软骨细胞OD值的变化。结果：1．25,2．5mg／ml氢化可的松培养24h的软骨细胞严重损伤或死亡。1．25mg／ml氢化可的松与150mg／ml骨关节炎Ⅰ号混合液培养的软骨细胞,以及2．5mg／ml氢化可的松与300mg／ml骨关节炎Ⅰ号混合液培养的软骨细胞生长均良好。MTT检测结果与软骨细胞形态观察一致。结论：骨关节炎Ⅰ号具有预防氢化可的松对软骨细胞的损伤作用。