同种骨基质明胶与脱钙骨基质成骨作用的定量比较研究

本实验将同种骨基质明胶和脱钙骨基质植入家兔桡骨大块骨缺损，采用放射学和组织形态学方法定量比较两者的成骨作用，结果表明，骨基质明胶和脱钙骨基质均具有诱导成骨作用，且前者的成骨作用明显强于后者。尤以中早期为明显。作者认为，骨基质明胶比脱钙骨基质更适合作为自体骨的代替材料。     

骨强度与骨基质

骨骼生物力学性能减退是引起骨质疏松脆性骨折最主要的原因之一。传统概念中骨密度对生物力学的影响强度随着临床与基础研究的深入进行而逐渐减低,越来越多的临床证据显示骨密度测量在评估骨折风险和监控治疗效果的局限性,20%~30%椎体松质骨强度变化不能用骨密度的增加解     

生肌液体外诱导成纤维细胞成骨作用的研究

目的：探讨成纤维细胞体外成骨的诱导因素，体外获取大量成骨型成纤维细胞，为骨组织修复提供种子细胞。方法：分离、纯化肉芽组织成纤维细胞，使其生长在含生肌液60g/L、FN40mg/L的条件培养液中。采用生物化学、组织化学和显微观察的方法，检测成纤维细胞的成骨标志。结果：生肌液和FN促进成纤维细胞增殖、胶原合成、骨钙素分泌；生肌液可使成纤维细胞由梭形向圆形或多突形转化，细胞重叠成多层结构，其表面有钙盐堆积，逐渐呈云雾状物质，不断融合扩大形成不透光的结节，经趋骨性四环素特异标记证明为新生骨组织。结论：生肌液可诱导成纤维细胞成骨。     

脱钙骨基质加自体骨髓多能干细胞治疗四肢骨干骨折骨不愈

四肢骨干骨折骨不愈临床处理难度较大，传统植骨治疗疗效不佳。2000年10月-2005年10月，笔者采用脱钙骨基质（DBM）加自体骨髓多能干细胞植入治疗四肢骨干骨折骨不愈26例，疗效满意，现报道如下。     

成纤维细胞成骨作用的研究

成纤维细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）是结缔组织中最重要的一类细胞。近年来,成纤维细胞在免疫系统疾病发生发展中的作用,尤其是在组织纤维化中所起的作用渐受到重视;成纤维细胞与骨形态发生蛋白（ＢＭＧ）及成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）等骨生长因子的关系也逐渐引起人们的兴趣。在骨折修复过程中,以往成纤维细胞的作用被认为是仅能分泌合成胶原纤丝,形成纤维骨痂;近年来,成纤维细胞在骨折愈合过程中参与骨折的修复、形成骨组织的作用已被证实。［１,２］成纤维细胞是除成骨细胞、软骨细胞之外具有成骨潜能的另一类重要细胞。１　…     

补骨颗粒对体内异位成骨影响研究

目的 观察补骨颗粒对体内异位骨形成、血管形成及血管内皮生长因子(VEGF)与骨形成蛋白2(BMP-2)表达的影响,探讨补骨颗粒对骨折愈合的影响机制。方法 将30只SD大鼠按照随机对照原则分为空白组、对照组、补骨颗粒组,每组10只。对照组于股四头肌肌袋中植入灌有VEGF165溶液的缓释泵,给予生理盐水灌胃;空白组和补骨颗粒组于股四头肌肌袋中植入灌有生理盐水的缓释泵,空白组给予生理盐水灌胃,补骨颗粒组给予补骨颗粒3.08 g/kg灌胃。3组均于干预2周后取肌袋区域肌肉,使用4%多聚甲醛固定并通过组织学观察成骨面积、胶原面积及CD31表达量(血管生成数);取干预前和干预2周后血清,应用ELISA法检测VEGF与BMP-2含量。结果 补骨颗粒组的成骨面积明显高于空白组(P<0.05);3组间胶原面积比较差异均无统计学意义(P均>0.05);补骨颗粒组的血管生成数明显多于空白组及对照组(P均<0.05)。干预2周后,补骨颗粒组血清VEGF含量明显高于空白组(P<0.05),血清BMP-2含量明显高于对照组(P<0.05)。结论 补骨颗粒可通过上调VEGF和BMP-2...     

益肾骨康方促进小鼠体外成骨作用的研究

目的:研究益肾骨康方对小鼠体外成骨作用的影响。方法:Wistar大鼠灌胃益肾骨康方以提取含药血清,以蒸馏水灌胃获取对照血清,作用于体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞。以生长实验、碱性磷酸酶染色实验、茜红素染色实验分别检测益肾骨康方含药血清对生长速率、成骨分化及成骨矿化作用的影响。结果:益肾骨康方含药血清体外可增加骨髓间充质干细胞的生长速率,增加其成骨分化及矿化程度,具有统计学差异(P<0.05)。结论:益肾骨康方对小鼠的成骨有促进作用。     

骨组织工程经多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质富集材料的细胞毒性研究

目的：评价多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质富集材料的细胞毒性，为该材料应用于临床提供实验依据。方法：参照GB／T16886．5—2003-ISO 10993—5：1999标准，将不同浓度的材料浸提液分别与人间充质干细胞（Mscs），成骨细胞（OS）体外复合培养。倒置相差显微镜行细胞形态学观察；MTT比色法测定1、3、5、7d的MSCs增殖活性；金氏比色法检测OS碱性磷酸酶活性。结果：不同时间点、不同浓度材料浸提液培养的MSCs均良好增殖，毒性0～1级；5d后浸提液培养组细胞增殖率优于阴性对照组（P〈0．05），随材料浸提液浓度增加而增加；浸提液培养组OS碱性磷酸酶活性与阴性对照组相比差异无显著性（P〉0．05）。结论：经多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质富集支架材料无细胞毒性，实验浓度范围内利于MSCs增殖，不影响OS的成骨活性。     

丹参对成纤维细胞成骨的扫描电镜观察

目的:阐明丹参对成纤维细胞成骨功能的影响。方法:用皮肤纯化的成纤维细胞作体外培养,分丹参组与对照组,在扫描电镜下观察。结果:0.2%、0.3%浓度的丹参能明显促使成纤维细胞由梭形向鳞片形方向转化,细胞量增多,胶原合成分泌增加,但未见骨结节形成。结论:适当浓度的丹参对成纤维细胞有促增殖、促分化、增加其功能活性的作用,但不能作为诱导因子来诱导成纤维细胞成骨潜能的显示。     

海螵蛸／骨形态发生蛋白质复合材料的研制及其诱导成骨实验研究

将海螵蛸（CB）与骨形态发生蛋白（BMP）结合制成一种CB/BMP复合材料，并分别进行肌肉内和骨组织内诱导成骨试验，将CB/BMP复合材料植入NIH小鼠肌肉后，8天的在材料孔内和表现诱导出软骨，14天形成交织骨21天出现板层和骨髓，将CB/BMP材料植入兔股骨髁间凹腔洞性缺损，经组织学和新骨定量分析结果显示，在植入后2、4、8、12周时CB/BMP材料内新骨量明显多于单纯CB对照侧，表明CB/BMP复合材料能加速新骨的形成和促进骨缺损修复在CB/BMP复合材料中，BMP赋于CB骨诱导活性，而CB则充当BMP的载体和释放系统，使CB/BMP复合物成为一种具有骨传导和骨诱导双重作用的理想骨移植替代材料，值得进一步研究。     

自体红骨髓修复骨缺损的实验研究

目的：探讨自体红骨髓的成骨能力；方法：在成年兔双侧桡骨干中段骨缺损处分别植入无菌生理盐水和自体红骨髓；通过Ｘ线片及组织形态学方法，观察自体红骨髓的成骨过程及修复骨缺损的能力；结果：术后４及８周Ｘ线片结果提示：实验组新骨形成量高于对照组；结论：自体红骨髓有一定修复骨缺损的能力，可加速骨缺损的愈合     

龟甲胶中杂质成分驴皮源、牛皮源和重金属元素的含量分析研究＊

目的 对不同公司五批次龟甲胶样品中的杂质性成分驴皮源、牛皮源和重金属含量进行检测分析。方法 采用高效液相色谱-质谱联用法（Liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）对龟甲胶中的牛皮源和驴皮源成分进行检测，原子吸收光谱法（Atomic Absorption Spectroscopy，AAS）对重金属汞、砷、铜、镉、铬、铅进行含量检测。结果 湖南A公司的龟甲胶样品中牛皮源和驴皮源的检测结果均为阴性，其他三家公司含有驴皮源或牛皮源成分。用原子吸收法测定各公司龟甲胶样品中重金属的含量，根据进出口绿色行业标准，本实验中的结果显示各样品龟甲胶中的重金属含量均在合格范围内，未见明显超标产品。结论 本文的检测方法简便、专属性强，检测得湖南A公司的龟甲胶不含驴皮源和牛皮源成分，且重金属含量均在要求范围内，表明龟甲胶产品较为优质可靠。     

明胶壳聚糖西咪替丁缓释微囊的制备和体外释放度研究

 目的 将明胶与壳聚糖用作微胶囊的壁材,制备西咪替丁缓释微囊。 方法 以明胶用量（A）、壳聚糖用量（B）、戊二醛用量（C）等三因素三水平进行L₉（34）正交实验,从累积释放度方面考察,优选最佳工艺配方。结果 对微囊释放度影响作用较大的因素顺序是B＞A＞C,选出最佳处方工艺为A₂B₃C₁。结论 以明胶与壳聚糖制备的含西咪替丁药物微囊具有良好的缓释作用。     

糖骨康胶囊对糖尿病大鼠骨质影响的实验研究

目的 :观察糖骨康胶囊对糖尿病大鼠骨质改变的影响。方法 :将 5 0只 SD大鼠随机分为正常组、模型组、糖骨康组 ,以 STZ造模 ,糖骨康组在造模基础上灌服糖骨康胶囊药粉 ,正常及模型组灌服蒸馏水 ,每日 1次 ,连续 7周。结果 :糖骨康组能降低血 Ca、Mg、P、AKP及尿 Ca、P含量 (P<0 .0 5 ) ,提高模型大鼠的骨密度 (P<0 .0 5 )及骨矿含量 (P<0 .0 5 )。结论 :糖骨康胶囊对糖尿病大鼠骨质钙盐丢失有一定防治作用     

密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响

目的:探讨白细胞介素-1(IL-1)诱导的破骨细胞性骨吸收过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA 的表达及补肾中药密骨片的调控作用。方法:从出生24 h 的乳鼠长骨中分离破骨细胞,从1月龄大鼠长骨中分离骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和骨髓基质细胞、破骨细胞培养系。在重组 IL-1α(rhIL-α)作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养20 h,计数骨吸收陷窝数及测算陷窝面积;并采用原位杂交技术研究破骨细胞 MMP-9 mRNA 的表达。结果:在基质细胞存在的条件下,IL-1可使骨吸收活性提高2～4倍,MMP-9 mRNA 呈高表达;而用密骨片药液处理后,MMP-9 mRNA 表达下降,作用呈量效关系。结论:密骨片可对抗 IL-1对基质细胞的影响,抑制破骨细胞重要的蛋白分解酶 MMP-9的表达而减少骨吸收。     

葛根总黄酮对去卵巢大鼠骨密度及骨钙影响的实验研究

目的:观察葛根总黄酮防治骨质疏松的作用及机理。方法:选取雌性SD大鼠60只,随机分为6组,每组10只。除假手术组外其他5组建立去卵巢大鼠的骨质疏松模型,低剂量组予葛根总黄酮水溶液,50mg·kg-1;中剂量组予葛根总黄酮水溶液,100mg·kg-1;高剂量组予葛根总黄酮水溶液,200mg·kg-1;雌激素组予力维爱1.25mg·kg-1;假手术组及模型对照组予蒸馏水灌胃。3月后测定各组大鼠骨重量、骨密度及骨钙含量。结果:葛根总黄酮低、中、高剂量组及假手术组、雌激素组大鼠的右股骨重、左股骨骨密度及右股骨骨钙含量与模型对照组比较,差异均有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:葛根总黄酮可有效地防治雌性大鼠的骨质疏松,其机理可能与其具有雌激素效应有关。     

壮骨伸筋胶囊对去势大鼠骨密度及骨代谢的影响

目的:研究壮骨伸筋胶囊(Zhuanggu Shenjin capsules,ZSJ)对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度及骨代谢的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:将72只SD大鼠按随机分为假手术组(12只)和造模组(60只),模型组采用摘除大鼠双侧卵巢,将去卵巢大鼠随机分为模型组、阳性药结合雌激素组、壮骨伸筋胶囊高、中、低剂量组(5.42,2.71,1.36 g·kg~(-1)),每组12只。连续ig 13周,每周连续ig 6 d,实验结束,取血和骨组织,测定骨密度及血清中血钙(Ca),碱性磷酸酶(ALP),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP),雌二醇(E2),骨钙素(BGP),降钙素(CT)的变化;甲苯胺蓝染色观察骨组织病理学。结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨密度,血清E2含量明显降低,大鼠血清ALP,TRAP,BGP含量明显升高(P0.05,P0.01),子宫系数明显降低(P0.01),骨组织病理学观察显示模型组骨小梁稀疏,骨小梁间有断裂并且分离,间隙增大,排列紊乱,骨板层结构疏松,骨质疏松特征明显;与模型组比较,壮骨伸筋胶囊高、中剂量组能够显著增加模型大鼠的骨密度(P0.01),增加模型鼠血清E2含量(P0.05),降低模型大鼠血清ALP,TRAP,BGP含量(P0.05),但是对血钙和CT作用却不明显,骨组织病理学观察显示骨组织结构趋于完整。结论:壮骨伸筋胶囊能提高去卵巢骨质疏松大鼠骨密度,提高雌激素水平,改善骨代谢水平,从而起到防治骨质疏松的作用。     

淫羊藿素和脱水淫羊藿素对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究

 目的 比较研究淫羊藿素和脱水淫羊藿素对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone marrow stromal cells,rBMSCs成骨性分化的影响。方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以1×10-5 mol·L-1的淫羊藿素和脱水淫羊藿素对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿素组、脱水淫羊藿素组以及不加药的对照组之间碱性磷酸酶（ALP活性、ALP阳性克隆数（colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-F_ALP、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR法检测IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果 淫羊藿素可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-F_ALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌,而脱水淫羊藿素并未表现出类似效应。结论 淫羊藿素促进rBMSCs成骨性分化的活性显著高于脱水淫羊藿素,可能是二者异戊烷链上的构型差异,导致淫羊藿素的生物活性强于脱水淫羊藿素,提示我们可以通过对药物进行化学结构的改造,增强药效,降低毒性,从而研究开发出新型抗骨质疏松药物。     

龟甲对糖皮质激素性骨质疏松大鼠腰椎和胫骨骨密度、骨强度的影响

目的观察龟甲对糖皮质激素性骨质疏松大鼠腰椎、胫骨骨密度和骨强度的作用差异。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和龟甲组,每组12只。模型组、西药组和龟甲组皮下注射地塞米松制造骨质疏松模型。造模后西药组用阿仑膦酸钠63 mg/kg灌胃,每7天1次;龟甲组用龟甲30 mg/(kg·d)灌胃,每天1次;空白组和模型组用0.9%氯化钠溶液2 ml灌胃,每天1次。各组均给药3个月。分别于给药前及给药2个月、3个月检测各组大鼠腰椎、胫骨骨密度和骨强度,计算给药3个月时西药组与龟甲组骨密度及骨强度改善率。结果龟甲组给药2、3个月腰椎、胫骨骨密度,胫骨骨强度均升高,给药3个月腰椎骨强度亦升高(P<0.05或P<0.01)。给药3个月时,西药组、龟甲组腰椎骨密度、骨强度及胫骨骨密度、骨强度均高于模型组(P<0.05或P<0.01);龟甲组腰椎骨密度低于西药组(P<0.05),而腰椎骨强度及胫骨骨密度、骨强度与西药组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药3个月后,龟甲组腰椎骨密度改善率为8.08%,胫骨骨密度改善率为8.30%,腰椎骨强度改善率为44.67%,胫骨骨强度改善率为30.58%。结论龟甲对糖皮质激素性骨质疏松大鼠腰椎、胫骨骨密度和骨强度均有改善作用,且对腰椎骨强度改善作用优于胫骨,对二者骨密度改善作用相当。