尖锐湿疣细胞凋亡与caspase-3、bcl-2的表达

目的探讨尖锐湿疣（CA）细胞凋亡与easpase-3、bcl-2表达及其相互关系。方法对于33例CA、5例巨大CA和8例正常上皮用TUNEL法原位检测角质形成细胞（KC）的凋亡,以免疫组化法检测caspase-3、bcl-2的表达。结果在CA和巨大CA两组之间,凋亡指数（AI）、easpase-3及bcl-2的阳性表达率均无统计学差异（P〉0．05）。CA组的Al与easpuse-3的表达水平呈极显著正相关（r=0．48979,P〉0．0001）,与bcl-2的表达水平呈极显著负相关（r=0．51470,P〉0．0001）,caspctse-3与bcl-2的表达水平呈极显著负相关（r=0．70165,P〉0．0001）。结论CA的KC中存在着明显的细胞凋亡现象,caslxtse-3和bcl-2可能参与了CA细胞凋亡的调节机制。     

扁平苔藓中细胞凋亡研究以及皮损区Bcl-2与Caspase-3的表达

目的:探讨扁平苔藓中细胞凋亡相关因子的表达情况,研究其与扁平苔藓发生的关系。方法:用Tunel原位凋亡检测法检测30例扁平苔藓与10例正常皮肤组织的细胞凋亡情况,并用免疫组织化学法分别检测该30例扁平苔藓与10例正常皮肤组织中Bcl-2、Caspase-3的表达。结果:在扁平苔藓皮损处,Tunel原位凋亡检测结果显示,表皮各层均散在阳性染色,真皮浅层淋巴细胞散在阳性染色,在相同部位Bcl-2主要表达于棘层、颗粒层,同时真皮浅层淋巴细胞亦可见其表达,Caspase-3主要表达于基底细胞、棘细胞及近基底细胞的淋巴细胞;在正常皮肤组织中,凋亡细胞数较扁平苔藓明显减少,Caspase-3、Bcl-2仅少量表达于部分基底细胞。结论:Bcl-2、Caspase-3表达增多可能参与扁平苔藓的发病。     

扁平苔藓中细胞凋亡研究以及皮损区 Bcl-2 与 Caspase-3 的表达

目的:探讨扁平苔藓中细胞凋亡相关因子的表达情况,研究其与扁平苔藓发生的关系。 方法:用 Tunel 原位凋亡检测法检测30 例扁平苔藓与10 例正常皮肤组织的细胞凋亡情况,并用免疫组织化学法分别检 测该30 例扁平苔藓与10 例正常皮肤组织中 Bcl-2、Caspase-3 的表达。 结果:在扁平苔藓皮损处,Tunel 原位凋 亡检测结果显示,表皮各层均散在阳性染色,真皮浅层淋巴细胞散在阳性染色,在相同部位 Bcl-2 主要表达于棘 层、颗粒层,同时真皮浅层淋巴细胞亦可见其表达,Caspase-3 主要表达于基底细胞、棘细胞及近基底细胞的淋巴 细胞;在正常皮肤组织中,凋亡细胞数较扁平苔藓明显减少,Caspase-3、Bcl-2 仅少量表达于部分基底细胞。 结 论:Bcl-2、Caspase-3 表达增多可能参与扁平苔藓的发病。     

索拉非尼诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1与bFGF-2的表达及意义

目的观察索拉非尼体外诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡效应,以及对髓样细胞白血病-1蛋白质(Mcl-1)及人碱性成纤维细胞生长因子-2(bFGF-2)的表达的影响。方法采用不同浓度梯度的索拉非尼作用于人肝癌细胞株HepG2,CCK-8试剂盒测定细胞杀伤效应,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,采用Western blot测定Mcl-1表达,ELISA法检测细胞培养液中bFGF-2的水平。结果与对照组相比,索拉非尼能诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡,呈一定的浓度时间效应(P<0.05),Mcl-1及bFGF-2表达均减少。结论索拉非尼可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导其凋亡,Mcl-1及bFGF-2可能在肝癌细胞的增殖分化中起着重要的作用。     

黑米花青素对大鼠视网膜光化学损伤感光细胞凋亡和Caspase-1表达的影响

目的 探讨黑米花青素(black rice anthocyanins,BRACs)对视网膜光化学损伤(retinal photochemical damage,RPD)感光细胞凋亡及Caspase-1表达的影响.方法 60只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=30)和BRACs组(n=30),均饲以基础...     

龙葵碱调控 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达及 caspase-3 活性诱导HepG2 细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的作用机制。方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法 (TUNEL 法) 检测 DNA 断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达,比色法检测 caspase-3 活性的变化。结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL 法发现龙葵碱高、中、低剂量组 HepG2 细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明 0.4、2、10 μmol/L 龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h 凋亡率分别为 4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高 caspase-3 活性,下调 Bcl-2 蛋白表达,上调 Bax 蛋白表达。结论 龙葵碱通过降低 Bcl-2/Bax 的值,激活 caspase-3 酶活性诱导 HepG2 细胞凋亡。     

三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡中survivin、bcl-2的表达

[目的]探讨三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡作用及其机制。[方法]光镜下观察三七皂苷R1作用下HL-60细胞形态,采用MTT比色法观察三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR检测凋亡调节基因survivin、bcl-2mRNA的表达。[结果]三七皂苷R175-1200μg.ml-1可抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性。三七皂苷R1作用后人白血病细胞株HL-60细胞呈现凋亡特征,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高,凋亡率随作用剂量的增高而升高。RT-PCR检测可见三七皂苷R1150μg/ml作用下survivin、bcl-2mRNA表达减少。[结论]三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因survivin、bcl-2的下调有关。     

硫化砷诱导K562细胞凋亡中Bcl-2和Bax的表达

目的　研究 Bcl- 2和 Bax在硫化砷诱导的 K5 6 2细胞凋亡中的表达 ,探讨其在硫化砷诱导的细胞凋亡中的作用 .方法　 K5 6 2细胞经一定剂量硫化砷作用特定时间后 ,MTT法检测细胞生长、增殖状态 ,光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况 ,S- P免疫组化染色检测 Bcl- 2、Bax的表达并进行图像分析 .结果　硫化砷对 K5 6 2细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用 ;175～ 14 0 0μg· L- 1 硫化砷作用 18～ 14 4 h后 ,K5 6 2细胞出现凋亡细胞的形态学改变 ;免疫组化染色表明 K5 6 2细胞低表达 Bcl- 2蛋白 (A值为 0 .15 2± 0 .0 2 3,阴性对照 A值 0 .10 8± 0 .0 12 ) ,硫化砷处理后对其表达无明显影响 (A值为 0 .138± 0 .0 2 8,P>0 .0 5 ) .硫化砷作用后 ,Bax蛋白的表达量 A值由 0 .2 4 0± 0 .0 13增加到 0 .316± 0 .0 2 1(P<0 .0 1) .结论　硫化砷可抑制 K5 6 2细胞的生长和增殖并诱导其发生凋亡 ,其机制可能与 Bax蛋白上调有关 .     

半胱氨酸蛋白酶8在姜黄素诱导人肺癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨姜黄素对人肺癌细胞(SPG-Al)抗癌作用机制。方法 采用细胞培养、荧光显微镜、细胞凋亡检测、原位杂交等技术。结果 姜黄素处理后的癌细胞，光镜下可见有细胞脱壁，悬浮培养液中；荧光镜下可见细胞核破碎，裂解成大小不等的凋亡小体；20μmol/L姜黄素作用24h凋亡率达43．67％，人肺癌细胞半肮氨酸蛋白酶8mRNA表达明显增高。结论 姜黄素可诱导人肺癌细胞凋亡，其作用机制可能与半胱氨酸蛋白酶8表达增高有关。     

Upregulation and activation of caspase-3 or caspase-8 and elevation of intracellular free calcium mediated apoptosis of indomethacin-induced K562 cells

Background A nonsteroidal anti-inflammatory drug, indomethacin, has been shown to have antileukemic activity and induce leukemic cell opoptosis. This study was to elucidate the mechanism of indomethacin-induced K562 cell apoptosis. Methods K562 cells were grown in RPMI 1640 medium and treated with different doses of indomethacin (0μmol/L, 100μmol/L, 200 μmol/L, 400μmol/L, 800μmol/L) for 72 hours. The cells were harvested, and cell viability or apoptosis was analyzed using MTT assay and AO/EB stain, combining laser scanning confocal microscopy (LSCM) technique separately. For the localization and distribution of intracellular caspase-3 or caspase-8 protein, immunofluorescence assay was carried out. To reveal the activation of caspase-3 or caspase-8 in indomethacin-treated cells, Western blot detection was used. The change in intracellular free calcium was determined by Fluo-3/ Am probe labeling combined with LSCM. Results Indomethacin could lead to K562 cell apoptosis and inhibit cell viability in a concentration-dependent manner. An increased expression of intracellular caspase-3 or caspase-8 was observed at higher doses of indomethacin (400-800μmol/L). Western blot results showed upregrulation and activation in both caspase-3 and caspase-8 protein. Under indomethacin intervention, the levels of intracellular free calcium showed a significant increase. Blocking the activity of cyclooxygenase did not abolish the effects of indomethacin on K562 cell apoptosis. Conclusions Activation and upregulation of caspase-3 or caspase-8 protein were responsible for Indomethacin-induced K562 cell apoptosis. Variation of intracellular free calcium might switch on the apoptotic pathway and the proapoptotic effect of indomethacin might be cyclooxygenase-independent.     

胃肠MALT淋巴瘤API2-MALT1融合基因表达对肿瘤细胞增殖和凋亡相关蛋白的影响

目的　探讨胃肠道粘膜相关淋巴组织来源的结外边缘区 B细胞 (MAL T)淋巴瘤中 API2 - MAL T1融合基因表达对凋亡相关蛋白 API2、Caspase3表达及肿瘤细胞增殖活性的影响。方法　用 RT- PCR和巢式 PCR结合 ,检测肿瘤组织中 API2 - MAL T1融合基因的表达 ;根据有否该融合基因 m RNA表达将 33例病例分组 ,用免疫组化染色检查肿瘤组织中 Ki6 7、API2和 Caspase3蛋白的表达。结果　 16例胃肠 MAL T淋巴瘤检出 API2 -MAL T1m RNA的表达 ,检出率 4 8.4 %。融合基因表达组 API2平均面积 (2 1177.30± 6 171.71) μm2 和单位平均面积 (2 9.81± 7.4 0 ) μm2 均较未表达组〔(3432 5 .6 5± 6 5 77.0 0 ) μm2 和 (37.84± 8.5 5 )〕μm2 显著降低 ,两组 IOD值无明显改变 ;Ki6 7和 Caspase3两组间无明显差异。结论　 API2 - MAL T1表达与 API2蛋白的表达下调有关 ,API2的下调对 Caspase3影响不明显 ,融合基因表达对肿瘤细胞增殖活性无明显影响     

caspase-3在神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达

目的:探讨caspase-3在1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium , MPP+)诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达.方法:建立MPP+诱发中脑神经细胞凋亡模型,通过免疫组织化学染色及RT-PCR检测方法,检测原代培养的16 d胎鼠的中脑多巴胺能神经元中caspase-3的表达.结果:在正常组和细胞凋亡组(MPP+组)的caspase-3在蛋白质和基因水平均有表达,但在细胞凋亡组中表达强度明显高于正常对照组,二者差异具有显著性.caspase-3的蛋白酶抑制剂Ac-DEVD-CHO可降低caspase-3的表达.结论:caspase-3参与MPP+诱发的多巴胺能神经元的凋亡过程,并起关键作用,以MPP+为诱导剂建立的中脑神经细胞凋亡模型可用于研究与帕金森病(Parkinson disease, PD)有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物.     

AGAP2-AS1对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究AGAP2-AS1在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法从美国TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库结直肠数据下载结肠癌患者的RNA-Seq数据。通过TCGA数据库获得356例结直肠癌,145例健康样本,通过定量实时PCR(Polymerase Chain Reaction)检测结直肠癌细胞和正常肠黏膜上皮细胞AGAP2-AS1表达水平。用siRNA(Small interfering RNA)抑制结直肠癌细胞中AGAP2-AS1的表达,再次分析其细胞增殖、凋亡的改变。结果 AGAP2-AS1在结肠癌组织和细胞中表达均显著增加。抑制AGAP2-AS1后肿瘤细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P0.05)。结论 AGAP2-AS1在结肠癌细胞系中高表达,抑制AGAP2-AS1表达可抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)及其在细胞凋亡中的作用

白细胞介素β转化酶,即ICE,与线虫死亡基因产物Ced-3蛋白相似,目前已发现14种ICE类似物,Alnemri将ICE家族统一命名为Caspase(Cystein-asparate protease,半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶),Caspase以结构酶原形式广泛存在于细胞。Caspase酶原主要经细胞色素C及死亡受体激活。Caspase活性中心含半胱氨酸,其选择性裂解底物天冬氨酸后残基,通过对蛋白激酶、核酸酶及细胞骨架的裂解,Caspase可激活特定信号系统,产生核皱缩,DNA片段形成等凋亡现象,最终导致细胞死亡,Caspase特异性抑制剂可抑制此作用。许多基因与Caspase参与的凋亡有关。     

Bcl-2基因转染对小鼠心脏移植中细胞凋亡的影响与作用机制的研究

目的探讨Bcl-2基因转染在小鼠心脏移植急性排斥反应模型中对心肌细胞凋亡的影响和作用机制。方法通过TDT介导的原位末端标志(TUNEL)、DNA阶梯及Western免疫印迹(WesternBlot)等检测方法,分析了小鼠心脏移植模型急性排斥反应时细胞凋亡的情况,并结合心脏移植急性排斥反应的组织学分级,探讨了心肌细胞凋亡在急性排斥反应中的作用。同时应用免疫组织化学染色(SABC法)分析活化型Caspase3蛋白的表达,探讨了Bcl2基因转染对心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。结果与同种异体移植组比较,Bcl2基因转染后能显著减少急性排斥反应中的心肌细胞凋亡现象,同时,活化型Caspase3蛋白的表达从9.75±2.71被下调到3.56±0.62(P<0.01)。结论小鼠心脏移植急性排斥反应过程中存在心肌细胞的凋亡。它是小鼠心脏移植急性排斥反应中心肌组织损伤的主要机制,Bcl2基因转染能有效地抑制心肌细胞的凋亡,可能主要通过阻断细胞凋亡信号传导途径的中下游阶段,达到阻止Caspase3蛋白酶活化而发挥抗心肌凋亡作用。     

Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨Caspase8在TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡中的作用及机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测TRAIL、Caspase8抑制剂（zIETD—FMK）＋TRAIL对CHP212细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定caspase8相对活性；应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果CHP212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感，存在时间和剂量依赖性；随TRAIL作用时间的延长，Caspase8活性逐步升高。于作用16h达高峰。zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8活性增高。     

Mcl-1在阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用。方法采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性。结果骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化。结论阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关。     

腺苷诱导HepG2细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9的活性变化

目的:探讨腺苷诱导HepG2肝癌细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化,确定caspase-3,-8,-9在腺苷诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法:用3 mmol/L腺苷处理HepG2细胞,作用48 h后,用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪定量检测凋亡细胞细胞比例;分别作用0,12,24,36,48 h,用荧光比色法检测HepG2细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9的活性变化,Western-blotting法检测caspase-3的活性片段;并检测加入caspase-3抑制剂后经3 mmol/L腺苷作用48 h后细胞凋亡变化情况。结果:3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞48 h,检测到(27.5±2.1)%的细胞出现凋亡,而对照组仅有(1.1±0.1)%的细胞出现凋亡(P<0.01)。3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞12 h后caspase-3活性开始升高,于36 h达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),而caspase-8,-9活性无明显变化。3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞36 h后Western-blotting分析发现caspase-3被蛋白酶水解切断后形成的17 kU活性片段。使用caspase-3抑制剂30 min后,再经3 mmol/L腺苷作用48 h,肝癌细胞凋亡比例明显下降,抑制剂组与腺苷组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:在腺苷诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-3被活化,caspase-8和-9没有被活化,caspase-3可能参与了腺苷诱导的HepG2肝癌细胞凋亡。