针刺治疗脑梗死大鼠血清的蛋白组学研究

目的：研究针刺治疗对脑梗死大鼠血清蛋白的影响。方法： 雄性SD大鼠20只,线栓法建立脑梗死模型,其中对照组10只,针刺组10只。针刺后1周,取血清,二维电泳分离蛋白,PDQ软件寻找差异表达的蛋白,用MALD I TOF /TOF串联质谱仪分析蛋白质,所得的质谱图通过GPS 软件在MASCOT数据库中检索并鉴定蛋白质。结果： 针刺后血清中有13种蛋白的表达下调,2种蛋白表达上调。选取3种蛋白进行鉴定,针刺后表达下调的蛋白是血清淀粉样蛋白P,表达上调的是丝氨酸蛋白酶抑制剂和白蛋白。结论 针刺可能通过提高丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达和肝合成蛋白的功能对脑缺血起保护作用。     

针刺治疗对脑梗死大鼠血清蛋白的影响

目的研究针刺治疗对脑梗死大鼠血清蛋白的影响。方法雄性SD大鼠20只,线栓法建立脑梗死模型,其中对照组10只,针刺组10只。针刺后1周,取血清,二维电泳分离蛋白,PDQ软件寻找差异表达的蛋白,用MALD I TOF/TOF串联质谱仪分析蛋白质,所得的质谱图通过GPS软件在MASCOT数据库中检索并鉴定蛋白质。结果针刺后血清中有13种蛋白的表达下调,2种蛋白表达上调。选取3种蛋白进行鉴定,针刺后表达下调的蛋白是血清淀粉样蛋白P,表达上调的是丝氨酸蛋白酶抑制剂和白蛋白。结论针刺可能通过提高丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达和肝合成蛋白的功能对脑缺血起保护作用。     

微小病变型肾病综合征激素耐药和敏感的比较尿蛋白质组学研究

目的 研究儿童微小病变型激素耐药与激素敏感型肾病综合征的尿中差异蛋白质表达,鉴定出肾病综合征激素耐药相关蛋白.方法 应用双向电泳相关技术结合基质辅助激光/电离飞行时间质谱仪技术,比较激素敏感和激素耐药微小病变型肾病综合征尿蛋白表达图谱寻找差异蛋白,对差异蛋白质斑点酶切,质谱分析,获得肽质量指纹图,通过蛋白质数据库进行蛋白检索分析.结果 成功地得到儿童微小病变型肾病综合征激素耐药尿蛋白双向电泳图谱.肾病综合征耐药型与激素敏感型蛋白表达比较,发现有30个蛋白质斑点显著差异改变.对14个差异蛋白质斑点酶切,质谱分析结合蛋白数据库检索获得12个蛋白,分别为驱动蛋白家族成员27、磷脂酰丝氨酸转移蛋白、大疱性类天疱疮抗原1异构体、α1蛋白酶抑制剂、Zn-α2糖蛋白、α1B糖蛋白、血清白蛋白前体、结合珠蛋白前体、类驱动蛋白样动力蛋白、白介素1受体相关激酶4、胞质动力蛋白、细胞角蛋白9.与激素敏感蛋白图谱比较,在激素耐药蛋白图谱上蛋白酶抑制剂、α1B糖蛋白、IRAK4表达下调,其余9种蛋白表达上调.结论 上述蛋白的鉴定将对激素耐药治疗靶位和耐药型肾病综合征诊断的分子标志物发现可能有所裨益.     

DS-1-47促着床的靶点分子筛选研究

目的研究筛选DS-1-47促着床的分子靶点。方法采用皮下注射吲哚美辛的方法建立胚泡着床障碍动物模型,动物随机分为正常组(N)、模型组(M)和中药组(Z),运用蛋白组学激光捕获显微切割技术-二维电泳-质谱(LCM-DE-MS)的技术路线研究分析DS-1-47作用前后子宫组织中蛋白分子的变化,筛选得到DS-1-47促进着床的关键分子,从而深入阐明其发挥作用的分子机制。结果 Z组能使11种蛋白质的表达发生明显改变,其中3种蛋白质的表达M组较N组明显下调,Z组较M组明显上调,这3种蛋白质经鉴定分别为肝羧酸酯酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、载脂蛋白A-Ⅰ;另外8种蛋白质的表达M组较N组明显上调,Z组较M组明显下调,蛋白质分别为血液结合素、激肽原-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K、α-1-抗胰蛋白酶1-3、结合珠蛋白、延伸因子-1-Δ、膜联蛋白A5、血清淀粉样蛋白P成分。结论血液结合素、结合珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅰ、膜联蛋白A5、激肽原-1、延伸因子-1-Δ、丝氨酸蛋白酶抑制剂等可能是复方DS-1-47促进着床的重要靶点。     

新生儿神经管畸形的血清蛋白组学研究

目的 寻找神经管畸形新生儿血清中异常表达的蛋白质。 方法 通过二维凝胶电泳分离神经管畸形新生儿及正常新生儿血清,用PDQuest图像软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点,用MALDI TOF/ TOF串联质谱仪分析蛋白质,所得的质谱图通过GPS软件在Mascot数据库中检索并鉴定蛋白质。结果 筛选出35个表达差异的蛋白质点,其中有8个蛋白质点表达上调,27个蛋白质点表达下调。选取四个蛋白质点进行鉴定,其中结合珠蛋白前体表达升高, HP protein, 血清载脂蛋白A-1前体及immunoglobulin heavy constant gamma 1三种蛋白表达均降低。 结论 神经管畸形可以导致血清中多种蛋白的的异常表达。     

急性脑缺血模型大鼠的血浆蛋白质组学研究

目的 探讨急性脑缺血模型大鼠与正常对照之间的血浆蛋白质变化.方法 用线拴法制备脑缺血大鼠模型,缺血2h后采集模型组与空白对照组的大鼠血浆,利用双向电泳、图像分析、质谱鉴定蛋白质组学技术进行分析.结果 鉴定出C-反应蛋白、触珠蛋白、血清淀粉样蛋白P在脑缺血大鼠血浆中表达上调,血清前白蛋白表达下调.结论 所鉴定蛋白可能与脑缺血有一定相关性.     

基于“同病异治”的大肠癌不同证候血清蛋白组学探索研究

目的利用双向凝胶电泳和质谱分析对辅助治疗期大肠癌脾气虚证、胃阴虚证、平和证型患者血清蛋白质组进行分析,探索同一疾病不同证候的血清蛋白质表达差异。方法选取辅助治疗期大肠癌脾气虚证、胃阴虚证患者各8例,以大肠癌平和证型患者6例作为对照组,采集清晨空腹血清标本,通过亲和层析法去除血清高丰度白蛋白和免疫球蛋白,运用Cy Dye荧光染料进行标记,并设立内标,上样于同一胶中进行双向凝胶电泳分离,电泳结束后分别用488 nm、530 nm、633 nm波长激光激发扫描获得不同样品的蛋白质组图谱,所得蛋白质图谱应用De Cyder 6.5软件进行分析,选择蛋白质表达水平上升或下降120%以上的差异蛋白质进行质谱鉴定及生物信息学分析。结果在大肠癌辅助治疗期不同证候中筛选出13个表达有显著差异的蛋白质,其中7个蛋白质被确定:血红素前体、α-1-B-糖蛋白、色氨酸羟化酶-1、结合珠蛋白在胃阴虚证、脾气虚证患者血清中表达均上调,而富含亮氨酸的α-2-糖蛋白-1表达均下调。胰蛋白酶抑制剂HI30、转甲状腺素蛋白在胃阴虚证患者中表达上调,但在脾气虚证患者中表达无显著差异。结论大肠癌辅助治疗期脾气虚证、胃阴虚证形成存在不同的分子基础,可以作为辨证论治的潜在客观指标,胃阴虚证的产生可能与胰蛋白酶抑制剂HI30、转甲状腺素蛋白上调有关。     

阳和汤对急性乳腺炎大鼠蛋白质组的影响

目的探究阳和汤对急性乳腺炎大鼠蛋白质组的影响,从而探索阳和汤治疗急性乳腺炎可能的途径。方法采用双向凝胶电泳(2-DE)对实验对照组、模型组、青霉素组和阳和汤组大鼠血清进行蛋白分离,经过图像分析识别差异表达蛋白质,由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到差异表达蛋白的肽指纹图,用蛋白质数据库(SwissProt)搜索匹配的蛋白质。结果所获2-DE图谱分离效果较好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,分别属于炎症相关蛋白、物质代谢相关蛋白和肿瘤相关蛋白,青霉素组的差异蛋白有三个上调,九个下调,阳和汤组的差异蛋白全部下调。结论阳和汤治疗急性乳腺炎可能与下调炎症相关蛋白、物质代谢相关蛋白和肿瘤相关蛋白有关。     

SAP患者外周血PINK1/Parkin的表达及与凋亡因子的相关性研究

目的 研究重症急性胰腺炎患者外周血PINK1/Parkin的表达及与凋亡因子的相关性。方法 收集64例急性胰腺炎患者,其中22例轻症急性胰腺炎(MAP)、20例中度重症急性胰腺炎(MSAP)、22例重症急性胰腺炎(SAP),采用qPCR检测入院24 h内外周血细胞中PINK1、Parkin的mRNA表达水平,ELISA检测血清Cyt-C、Caspase-3蛋白水平。以24例同期健康体检者做正常对照组。结果 与正常对照组、MAP组、MSAP组比较,SAP组外周血细胞PINK1 mRNA、Parkin mRNA表达明显下降(P<0.05);而正常对照组、MAP组、MSAP组组间两两比较,PINK1 mRNA及Parkin mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。MAP组、MSAP组、SAP组患者血清中Cyt-C、Caspase-3水平显著高于正常对照组(P<0.05);MSAP组、SAP组患者血清中Cyt-C、Caspase-3水平高于MAP组(P<0.05);SAP组患者血清中Cyt-C水平高于MSAP组(P<0.05),而Caspase-3水平升高,...     

高脂血症相关性急性胰腺炎大鼠蛋白质组学分析

目的 探讨高脂血症对大鼠急性胰腺炎的损伤机制.方法 对高脂饮食SD大鼠和正常饮食SD大鼠均分别予雨蛙肽腹腔注射和牛磺胆酸钠胰管注射,建立4组动物模型:高脂血症急性水肿性胰腺炎组、高脂血症急性坏死性胰腺炎组、正常血脂急性水肿性胰腺炎组和正常血脂急性坏死性胰腺炎组,每组5只,采用相差双向电泳(2D-DIGE)和MALDI串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)检测差异蛋白质,并采用免疫组化验证差异蛋白质表达.结果 高脂血症急性水肿性胰腺炎和高脂血症坏死性胰腺炎动物模型胰腺组织有典型组织病理学改变.通过DeCyder图像分析软件进行匹配,高脂血症急性坏死性胰腺炎组与正常血脂急性坏死性组分析到59个差异点,39个差异点经质谱成功鉴定,23个点在高脂血症急性坏死性胰腺炎组上调,16个点下调.高脂血症急性水肿性胰腺炎组与正常血脂急性水肿性组分析到12个差异点,7个差异点经质谱成功鉴定,2个点在高脂血症急性水肿性胰腺炎组上调,5个点下调.差异蛋白质主要包括代谢酶类(脂肪酶、淀粉酶、α1抗胰蛋白酶等),内质网应激和钙代谢相关蛋白质[葡萄糖调节蛋白(GRP)78、热休克蛋白(HSP)60、蛋白二硫键异构酶等],以及与DNA损伤修复、细胞凋亡、循环障碍、信号传导通路等相关蛋白质.淀粉酶和GRP78免疫组化验证结果与电泳结果一致.结论 应用相差凝胶电泳和二级质谱的蛋白质组学手段筛选到内质网应激、细胞凋亡等相关蛋白质在高脂血症急性胰腺炎中的差异表达.高脂血症对急性胰腺炎的损伤加重通过多种途径,内质网应激相关蛋白质可能作为高脂血症相关急性重症胰腺炎的早期预警信号和临床治疗新靶点.     

宫颈永生化细胞和癌细胞胞膜差异蛋白质组学研究

目的建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞（H8细胞株）和宫颈癌细胞（CaSKi细胞株）胞膜蛋白双向电泳图谱,寻找特征性的差异蛋白点。方法提取两种细胞胞膜蛋白质进行双向凝胶电泳（2-dimensronal gel electrophore-sis,2-DE）,建立电泳图谱,然后筛选出差异点进行基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱（matrix-assisted laser desorption/i-onization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS/MS）分析,鉴定出蛋白质。结果获得了分辨率和重复性均较好胞膜蛋白2-DE图谱,并分析找出了13个的差异蛋白点,对其中3个显著差异点进行质谱分析和初步鉴定。结论建立了H8和Caski细胞胞膜蛋白2DE图谱,并初步发现LRC8D、EDAR、MTX1蛋白在宫颈癌前病变和宫颈癌细胞胞膜中存在差异表达,为宫颈癌及癌前病变的诊断及癌变机制提供了帮助。     

大定风珠治疗脑出血恢复期阴虚动风证证效关系的蛋白质组学研究

目的 通过鉴定并分析脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）恢复期阴虚动风证患者大定风珠对证、镇肝熄风汤非对证治疗与健康对照组比较外周血单个核细胞（peripheralblood mononuclear cells,PBMCs）差异表达的蛋白质,从方证对应的角度寻找脑出血恢复期阴虚动风证的证效关系蛋白质,并探讨脑出血恢复期阴虚动风证的本质内涵.方法 分离对照组、脑出血恢复期阴虚动风组、脑出血恢复期阴虚动风对证治疗及非对证治疗组外周血单个核细胞,利用双向凝胶电泳技术建立各组的PBMCs 蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0 软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS 质谱仪获得肽质量指纹图谱,用Mascot 软件搜索数据库鉴定部分差异表达蛋白质.结果 经双向凝胶电泳和图像分析,筛选出的24 个差异表达蛋白质点中共有12 个得到鉴定,其中脑出血恢复期阴虚风动证组与健康对照组比较,5 个蛋白表达上调,4 个蛋白表达下调,1 个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证大定风珠对证治疗组与健康对照组比较,7 个蛋白表达无明显差异,2 个蛋白表达下调,2 个蛋白表达上调,1 个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证镇肝熄风汤非对证治疗组与健康对照组比较,6 个蛋白表达下调,3 个蛋白表达上调,1 个蛋白表达缺失.结论 初步鉴定了脑出血恢复期阴虚动风证对证与非对证治疗方证效应的相关蛋白,这些蛋白功能涉及应激、细胞代谢、细胞迁移、信号转导、细胞骨架等;大定风珠对证治疗则能有效地调节多个异常表达的蛋白,非对证治疗则使蛋白表达明显异常,体现了中医辨证论治、方证相应的科学性.     

吗啡耐受大鼠脊髓蛋白质组双向电泳图谱的建立与差异蛋白鉴定

目的：建立吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织蛋白质组双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图 谱,比较分析吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织中蛋白质组的变化和差异表达,鉴定出差异表达的蛋白质点并进行验证。 方法：将16只鞘内置管雄性SD大鼠随机分为吗啡耐受组(MT组,n=8)和生理盐水组(NS组,n=8),取其腰段脊髓组织 蛋白以固相pH梯度等电聚焦(immobilized pH gradients isoelectric focusing,IPGIEF)为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯 酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)为第二向进行2-DE,应用PDQuest分析 软件对考马斯亮蓝染色的2-DE图谱进行图像分析,对差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并利用Mascot查询软件搜索Swiss- Prot数据库进行生物信息学分析。采用蛋白质印迹法验证部分差异蛋白。结果：MT组和NS组大鼠脊髓组织2-DE图谱 中各分离出约1 000个清晰的蛋白质点,其中明显差异表达的蛋白有36个。采用MALDI-TOF-MS分析,并利用Mascot查 询软件搜索Swiss-Prot数据库,共搜索到14个蛋白质,与NS组比较,MT组中表达下调的蛋白质点有2个,表达上调的 蛋白点有12个。采用蛋白质印迹法对其中的NADH脱氢酶及伽玛烯醇化酶蛋白质点进行验证,结果与蛋白质组学结 果一致。结论：初步建立了吗啡耐受大鼠脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱,证明吗啡耐受可以引起脊髓中多种蛋白 质的表达改变。     

人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的差异蛋白质组分析

目的 分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法 利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析高低转移性细胞株SW620和SW480蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选大肠癌转移相关蛋白质。结果 MalenieⅢ软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好。SW620检测到(1316±62)个蛋白点,平均匹配率82%;SW480检测到(1332±74)个蛋白点,平均匹配率80%;蛋白点分布以PI4~7、相对分子质量20000~70000范围内最多。两种细胞株25个差异蛋白点(SW62014个、SW48011个)胰酶胶内酶解、质谱分析获得23张肽质量指纹谱;数据库查询结果高度匹配已知蛋白质3个,初步匹配已知蛋白质或片段14个。在这些差异表达的蛋白质中,部分与基因转录、细胞周期、信号转导、细胞凋亡有关,可能参与大肠癌的分化、增殖、侵袭、黏附和转移等多种生物学行为。结论 人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620和SW480的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示大肠癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。     

感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白分析

目的获得并分析感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白.方法利用二维电泳方法分别分离感染约氏疟原虫前后的大劣按蚊血淋巴蛋白,进行考马斯亮蓝染色,并利用PDQuest 2D Elite软件分析和比较凝胶结果;对感染约氏疟原虫前后的差异表达蛋白进行质谱分析,获得肽质量指纹图谱;利用Mascot软件系统,在Swiss-Prot等数据库中检索和分析所获得的肽质量指纹图谱.预测差异表达蛋白的生物学特性和在卵囊黑化中的功能.结果获得了分辨率和重复性均较好的二维电泳图,感染组凝胶可见120个蛋白点,正常组凝胶可见95个蛋白点,二者比较分析后发现有37个差异蛋白点;质谱分析获得3个肽质量指纹图谱,于蛋白数据库检索后未发现匹配分值很高的相关蛋白,其中差异蛋白点1与冈比亚按蚊一蛋白具有较高的同源性.结论获得了感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异蛋白和部分差异蛋白的相关信息,这为从蛋白水平认识蚊媒和疟原虫的相互关系和更深入地利用大劣按蚊-约氏疟原虫模型开展卵囊黑化的相关研究奠定了基础.     

血清蛋白双向凝胶电泳-质谱分析诊断早期肺腺癌的临床研究

目的分析肺腺癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质,从而寻找肺腺癌早期特异性的诊断指标。方法用固相IPG梯度双向凝胶电泳分离肺腺癌患者及正常人血清总蛋白,用PDQuest凝胶图像软件分析,以识别差异蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF—MS）分析获得肽质量指纹图,然后利用Mascot查询软件搜寻数据库鉴定蛋白质。结果①获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。②经PDQuest7．1软件匹配分析,共筛选出22个差异的蛋白点,对7个差异蛋白点进行胶内原位酶解-质谱指纹图分析,获得了7张肽质量指纹图谱,查询数据库鉴定出1个蛋白质-血清淀粉样蛋白A（SAA）。结论①固相pH梯度双向凝胶电泳分离血清总蛋白获得了重复性较好的双向电泳凝胶图谱。②肺腺癌患者血清和正常人血清的蛋白质组表达存在明显差异,这些差异蛋白点为进一步建立人肺癌的2-DE数据库奠定了基础。③SAA蛋白很可能是肺癌的一个潜在标志物。     

联用2-DE和MALDI-TOF-MS技术筛查胃癌组织和血清中的差异蛋白质

目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）分离组织和血清总蛋白,经硝酸银染色,分析选取有表达差异的蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白.结果 获得重复性和分辨率较好的胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,经MALDI-TOF-MS鉴定得到20种蛋白,在7例（58.3%）肠型胃癌组织中均有硒结合蛋白1（SBP1）表达,KIAA基因家族蛋白在弥漫型胃癌组织和血清中均有表达.结论 建立了弥漫型肠型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,获得了差异蛋白质点,为寻找胃癌的特异蛋白质作为胃癌肿瘤标志物奠定了基础.     

63例轻重型急性胰腺炎患者动脉血气及电解质分析

目的：探讨急性胰腺炎（AP）患者电解质及血气的变化。方法：将63例AP患者分为轻症组（MAP）和重症组（SAP），分析发病48小时内采集的动脉血气及电解质变化。结果：SAP组的PaCO2、PaO2、HCO3^-明显低于MAP组（P〈0．05），pH和阴离子间隙（AG）两组无显著差别。在酸碱代谢方面，以呼吸性碱中毒或呼吸性碱中毒并代谢性酸中毒最常见，其次为代谢性酸中毒、呼吸性酸中毒并代谢性酸中毒、代谢性碱中毒。电解质紊乱以低血钙为主。结论：AP患者低氧血症、酸碱平衡及电解质紊乱在ARDS、MODS发生前即已存在，低氧血症可能是一种早期的MODS信号，通过进行动脉血气及电解质的监测，进行早期干预，对预防MODS的发生，降低病死率有重要的临床意义。     

正常心肌缺血与糖尿病心肌缺血大鼠蛋白质组的差异

目的：运用蛋白质组学方法比较正常与糖尿病性大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌蛋白质组表达图谱的差异。方法：将SD大鼠随机分为心肌缺血再灌注组（IR组）和糖尿病心肌缺血再灌注组（DMIR组）。分别取各组左心室心肌蛋白进行二维电泳及凝胶染色后,用ImageMaster 2D Platinum软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异蛋白点。结果：二维电泳结果显示,IR组心肌蛋白二维电泳图谱与DMIR组相比共有29个显著差异点,其中6个点表达上调,6个表达下调,17个表达不匹配。结论：IR组与DMIR组大鼠心肌的二维电泳结果显示蛋白表达图谱有明显差异,但其差异蛋白为何种蛋白、起何种功能需要进一步的质谱数据进行分析。