镧离子对碱性磷酸酶的作用

目的 :研究La3+对肝型及肠型碱性磷酸酶活性的影响及作用机制。方法 :采用磷酸苯二钠法测定酶活性 ,荧光滴定监测La3+对碱性磷酸酶内源性荧光的影响 ,由荧光淬灭方程计算La3+在酶分子上的结合数目及结合常数。结果 :La3+可以增强肝型碱性磷酸酶的活性 ,而对肠型碱性磷酸酶有抑制作用。La3+对两种酶反应的动力学参数有不同的影响。发现La3+对肠型碱性磷酸酶的内源性荧光具有淬灭作用 ,说明La3+的结合可以改变酶分子在溶液中的构象。由荧光淬灭方程 ,测得La3+与肠型碱性磷酸酶只有一类 ,约 78个结合位点 ,结合常数为2 .1× 10 4。结论 :La3+对两种碱性磷酸酶具有不同的作用 ;La3+通过改变肠型碱性磷酸酶的构象影响其活性     

基于罗丹明B类荧光探针的Fe3+细胞成像研究

目的:构建一种基于罗丹明B为母体的新型荧光探针,考查其作为荧光探针P的光学性能,发展适合于分析检测细胞内Fe3+的可视化成像分析的荧光探针法.方法:RAW细胞中加入20 μmol/LFe3+孵育30 min后,再在该培养液中加入20 μmol/L探针P,37℃下继续孵育30 min,559 nm激发,收集570～670 nm波段内的荧光信号.结果:探针能够实现对细胞内Fe3+的可视化成像分析.结论:本方法探针容易制备,分析速度快,可实现结果的可视化观测.     

枳实提取液对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的 :探讨枳实提取液 (CAE)对豚鼠心室肌细胞膜L型钙通道电流 (ICa L)的影响。方法 :用酶解法分离单个心室肌细胞 ,采用全细胞膜片钳技术 ,观察枳实提取液对豚鼠心室肌细胞膜ICa L的影响。结果 :①CAE(4×10 3 ,2× 10 2 ,4× 10 2 ,1× 10 1)g/ml增大ICa L,增加率分别为 15 .89%,2 9.0 1%,5 2 .0 3%和 5 9.76 %(P <0 .0 5 )。②CAE 2× 10 1g/ml和 4× 10 1g/ml分别可使峰值ICa L减少 17.33%和 30 .0 9%(P <0 .0 5 )。CAE只改变电流幅度 ,不改变I V曲线形状。结论 :低浓度CAE ,可浓度依赖性的增大豚鼠心室肌细胞L型钙电流 ,有促进钙通道开放的作用。高浓度CAE ,可抑制心室肌细胞L型钙电流 ,有抑制钙通道开放的作用。     

多非替利衍生物CPU 228(V03)抑制豚鼠心室肌细胞L-型钙通道

目的:研究多非替利衍生物CPU 228(V03)对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的抑制作用.方法:在分离的成年豚鼠心室肌细胞上应用全细胞膜片钳技术记录L-型钙电流(Ica.L).结果:(1)CPU 228能浓度依赖性地抑制Ica.L,IC50为0.93 μmol/L.(2)CPU 228在0.33～3.3 μmol/L浓度时使 Ica.L的I-V曲线上移,但不改变I-V曲线形状,对稳态激活曲线及其参数V1/2和k均无明显影响.(3)CPU 228在0.33～3.3 μmol/L浓度时,呈浓度依赖性地使稳态失活曲线左移,V1/2由对照组的-(21.5±2.3)Mv增大到-(40.0±4.3)Mv,k无明显变化.结论:CPU 228能有效抑制豚鼠心室肌细胞的L-型钙通道,其机制可能是作用于L-型钙通道失活态.这可能是其抗心律失常作用优于多非替利,而致心律失常作用较多非替利弱的机制之一.     

三氧化二砷诱导豚鼠QT间期延长及其对L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对豚鼠心脏QT间期的影响,并初步探讨其对L型通道蛋白mRNA表达的影响.方法 将豚鼠随机分为4组,分别为正常对照组、As2O3大、中、小剂量组.实验组豚鼠静脉给予不同剂量的As2O3(大剂量组1.6mg/kg、中剂量组0.8mg/kg和小剂量组0.4mg/kg),分别测量不同时间点的心电图,观察QTc(校正的QT间期)的变化.提取心肌组织总RNA,用RT-PCR方法观察As2O3对豚鼠心肌L型Ca2 通道蛋白mRNA表达的影响.结果 在2h的观察时间内,0.8mg/kg和1.6mg/kg As2O3分别使QTc从对照组的(324±20)ms延长到(368±29)ms(P＜0.01)和(388±31)ms(P＜0.01).RT-PCR结果显示1.6mg/kg As2O3可以使豚鼠心肌L型钙通道mRNA表达增强(与对照组相比,P＜0.01).结论 As2O3可引起豚鼠心脏QT间期延长,其机制可能与增强L型钙通道蛋白mRNA表达有关.     

弓形虫速殖子细胞质了钙浓度的测定

目的　研究弓形虫与宿主细胞之间相互作用的钙通道机制。　方法　以急性期感染小鼠腹水收集的RH株刚地弓形虫速殖子为材料 ,采用荧光染料 Fura- 2与细胞质游离钙结合 ,通过荧光分光光度计技术和 SuperIon Probe Software计算机软件测定弓形虫速殖子细胞质游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)。　结果　正常弓形虫速殖子[Ca2 + ]i为 (2 0 5 .0 2± 18.6 ) nm ol/ L,符合文献报道的静息状态下真核细胞 [Ca2 + ]i浓度范围。　结论　本方法简便、易行 ,相对费用低 ,适用于国内实验室     

生物标记用NaYF4∶Yb3+,Er3+荧光探针的紫外上转换发光

目的:开发980 nm激发紫外上转换发光的纳米粒子.方法:采用热解法合成NaYF4∶Yb3+,Er3+;通过TEM、XRD和荧光光谱等方法对样品进行形貌、结构和发光性能的表征,研究紫外上转换发光性能.结果:NaYF4∶Yb3+,Er3+纳米材料可产生波长为321、380和410 nm的紫外上转换发光.结论:980 nm二极管激光器可激发NaYF4:Yb3+,Er3+纳米粒子产生紫外上转换发光.     

SIF细胞内儿茶酚胺性质的显微分光光度术分析

采用一种简化了的Bjorklund方法,直接根据荧光团的表观激发光谱特征对豚鼠腹腔神经节SIF细胞内儿茶酚胺(CA)的性质进行鉴别,在进行了甲醛诱发荧光(FIF)反应,随后用盐酸处理5分钟后,SIF细胞内的CA荧光团的最高激发峰由420nm变为350nm;390/350nm激发峰比值也降至1以下。这一变化与在同一条件下在标准蛋白膜上记录的去甲肾上腺素(NA)荧光团的特征是一致的;而与多巴胺荧光团的光谱行为有明显差异。结果表明,这些SIF细胞中的CA主要是NA。     

钙预处理联合钙通道拮抗剂对未成熟心肌的保护作用

目的:观察预处理和钙通道拮抗剂及两者联合应用后对未成熟心肌的保护作用.方法:选取周龄为2～3周的新西兰大白兔32只随机分为4组:缺血再灌注组(I/R),钙预处理组(CP),钙通道拮抗剂组(CCB)及钙预处理+钙通道拮抗剂组(CP+CCB).建立Langendorff离体心脏模型,各组分别采用不同的处理方法,记录观察心脏功能指标以及其它各项生化指标.结果:与其他组相比,钙预处理+钙通道拮抗剂(CP+CCB)组能明显改善左心室收缩功能(P＜0.01),降低心肌酶的水平,减轻心肌的水肿程度,显著升高ATP及SOD活性(P＜0.01),明显减少心肌细胞内Ca2+及MDA的含量(P＜0.01或P＜0.05).结论:钙预处理联合钙通道拮抗剂可增强对未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用,机制可能是:激活PKC,抑制T型钙离子通道,减少心肌Ca2+内流,减轻心肌细胞Ca2+超载;提高机体抗氧化活力及清除体内自由基能力.     

NIT-Ⅵ对豚鼠右心室乳头状肌慢反应动作电位的影响

目的 :观察尼群地平衍生物NIT -Ⅵ对离体豚鼠右心室乳头状肌慢反应动作电位 (SAP)的影响。方法 :离体豚鼠右乳头状肌经含异丙肾上腺素或组织胺的高K+ 台氏液 (K+ 浓度 2 5mmol/L)灌流诱发SAP后 ,采用累积浓度给药法依次给予NIT -Ⅵ 3× 10 -9mol/L ,3× 10 -8mol/L和 3× 10 -7mol/L。采用标准玻璃微电极技术记录慢反应动作电位。记录给药前后的SAP振幅 (APA) ,0期最大除极速率 (vmax) ,复极 5 0 %和 90 %的时程 (APD5 0和APD90 )。结果 :NIT -Ⅵ 3× 10 -9mol/L、3× 10 -8mol/L、3× 10 -7mol/L可明显降低高钾除极时异丙肾上腺素、组织胺等诱发的SAP的APA、vmax,缩短APD5 0和APD90。结论 :NIT - 6具有阻断心肌钙通道的作用     

多非力特对豚鼠心室肌细胞的电生理作用

目的探讨多非力特对心肌细胞电生理作用的特点。方法（1）应用膜片钳全细胞技术记录单个豚鼠心室肌细胞膜延迟整流性钾流（IK）,观察不同浓度多非力特对IK的影响,并探讨IK的快速激活成分（IKr）的电生理特性。（2）标准微电极技术记录豚鼠右室乳头肌细胞动作电位,观察不同浓度多非力特灌流前后动作电位各参数的变化。结果（1）多非力特0.01～0.5μmol/L呈浓度依赖性抑制IK的时间依赖性外向钾流（IK.time）和尾电流（IK.tail）,但浓度再增大至1μmol/L后,此抑制作用趋于最大。对-20mV钳制电压下IK.time、IK.tail的抑制程度比＋50mV时更明显（P〈0.05或0.01）。（2）通道动力学分析发现,多非力特1μmol/L使IK.tail快失活过程消失,慢失活时间常数无明显变化（P〉0.05）。（3）多非力特敏感的电流成分在-40mV开始呈电压依赖性快速激活,峰值电压为0,开始出现内向整流,其IK.tail也呈电压依赖,无内向整流,但膜电位达＋20mV后达饱和,以上均符合IKr的特点。（4）多非力特对动作电位的影响：0.5和1.0μmol/L浓度下可使动作电位时程（APD30、APD90）均明显延长（P〈0.05或〈0.01）,且呈反转频率依赖性。结论多非力特对IK的作用符合特异性IKr阻滞剂的特点,并呈反转频率依赖性延长APD,是其抗心律失常作用的电生理基础。     

白屈莱红碱对高糖培养的乳鼠心肌细胞形态和功能的影响

目的探讨蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱对高糖培养的乳鼠心肌细胞形态和功能的影响,以及PKC-α、β2,NF-κB,C-fos的表达水平及活性的变化。方法建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成低糖（5mmol／L）、高糖（25.5mmol／L）和高糖（25.5mmol／L）＋不同浓度（1、8μmol／L）白屈菜红碱组,分别观察比较各组乳鼠心肌细胞搏动情况,测定心肌细胞直径：应用Western blot法检测并比较各组乳鼠心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达水平。结果高糖组心肌细胞搏动频率、细胞直径以及PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达水平均明显高于低糖培养组（均p〈0.05）;加入不同浓度的白屈菜红碱后,高糖组乳鼠心肌细胞搏动频率、细胞直径以及PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达水平均明显降低（P〈0.05）,并呈现浓度依赖性特征。结论白屈菜红碱能够抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞形态和功能的改变,并能抑制PKC-α、PKC-β2、NF-κB和C-fos的表达和活性,对高糖环境中的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与PKC／NF-κB／c-fos途径有关。     

乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流的影响

【目的】观察乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流（ICa,L）的影响。【方法】采用蛋白酶消化的成年兔单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICa,L的作用。【结果】（1）乙醇抑制ICa,L峰值，24mmol／L和240mmol／L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICa,L的电流一电压（I—V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。【结论】致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICa,L具有明显抑制作用。可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。     

黄芪皂甙对豚鼠心室肌细胞动作电位的作用

目的研究黄芪皂甙（saponins of astrag—alus,SA）对豚鼠心室肌细胞动作电位（AP）的作用。方法实验采用标准玻璃微电极细胞内记录心室肌细胞动作电位（AD）。结果应用9A20mg／L后心室肌细胞动作电位的幅度从给药前的（69.31±6．07）mV降低到（57．37±368）mV（n=6,p〈0．05）;动作电位时程（APD40）从给药前的（263.38±16.56）ms延长到（284.55±21．21）ms（n=6,P〈0.05）。应用SA40mg／L后心室肌动作电位的幅度从给药前的（71.37±56.54）mV降低到（47．23±8.67）mV（n=6,p〈0.05）;动作电位时程（APD90）的从给药前的（238．31±13.28）ms延长到（314.64±27．36）ms（n=6,p〈0.05）。结论SA可以降低心室肌动作电位幅值延长动作电位时程,并且有一定的剂量依赖性。     

苦豆子总碱对豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩功能的影响

目的观察苦豆子总碱对豚鼠离体胆囊平滑肌运动功能的影响并初步探讨其作用机制。方法将28只豚鼠随机分为7组,每只豚鼠胆囊制备3条肌条,共84条。将12条胆囊肌条置于灌流肌槽内,采用累积加药方式,苦豆子总碱终浓度分别为1．00×10^-5、1．10×10^-4和1．10×10^-3mmol·L^-1。按随机法将其余72条胆囊肌条分为6组：阿托品＋苦豆子总碱组、酚妥拉明＋苦豆子总碱组、异搏定＋苦豆子总碱组、苯海拉明十苦豆子总碱组、消炎痛＋苦豆子总碱组、六烃季铵＋苦豆子总碱组,每组12条。分别加入拮抗剂阿托品10^-6mmol·L^-1、酚妥拉明10^-6mmol·L^-1、异搏定10^-7mmol·L^-1、苯海拉明10^-6mmol·L^-1、消炎痛10^-6mmol·L^-1、六烃季铵10^-5mmol·L^-1后2min再依次加入前述累积加药苦豆子总碱溶液。通过FT-100生物张力传感器将信号输出BL-420E^＋生物机能实验系统记录标本的张力、收缩波平均振幅及收缩频率的变化值。结果苦豆子总碱1．10×10^-4和1．10×10^-3mmol·L^-1可使胆囊平滑肌肌条张力增高（P〈0．01）;异搏定（10^-7mmol·L^-1）能明显降低苦豆子总碱（1．10×10^-4和1．10×10^-3mmol·L^-1）对豚鼠胆囊平滑肌条收缩张力的影响（P〈0．01）。表明苦豆子总碱拮抗异搏定抑制钙离子的内流。结论苦豆子总碱可提高胆囊肌条的张力,这种作用可能与Ca^2＋通道有关。     

Blocking effect of puerarin on calcium channel in isolated guinea pig ventricular myocytes

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｗｈｅｔｈｅｒＰｕｅｒａｒｉｎ（Ｐｕｅｒ）ｈａｓｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎＬｔｙｐｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌＭｅｔｈｏｄｓ　ＷｅｕｓｅｄｗｈｏｌｅｃｅｌｌｒｅｃｏｒｄｉｎｇｏｆｐａｔｃｈｃｌａｍｐｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｔｏａｎａｌｙｓｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｃｕｒｒｅｎｔｉｎｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｍｙｏｃｙｔｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆｇｕｉｎｅａｐｉｇｈｅａｒｔｓｂｙｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅＲｅｓｕｌｔｓ　Ｉ…     

Effects of Arecoline on Calcium Channel Currents and Caffeine—induced Calcium Release in Isolated Single Ventricular Myocyte of Guinea Pig

Summary The effects of Arecoline (Are) on calcium mobilization were investigated. In isolated single ventricular myocyte of guinea pig, patch clamp whole cell recording techniques were used to record the current of L-type calcium channel and cytosolic Ca²⁺ level (Ca²⁺i) labeled with fluorescence probe Fluo-3/AM was measured under a laser scanning confocal microscope. Results revealed that Are (3–100 μmol/L) could inhibit L-type calcium current in a concentration-dependent manner and the value of IC₅₀ was 33.73 μmol/L (n=5). In the absence of extracellular calcium, the resting levels of [Ca²⁺]i was not affected by Are (n=6,P>0.05), but pretreatment with Are (30 μmol/L) could significantly inhibit the [Ca²⁺]i elevation induced by caffeine (10 mmol/L,n=6,P<0.01). It was concluded that Are could inhibit not only calcium influx through L-type calcium channel but also calcium release from sarcoplasmic reticulum. This project was supported by a grant from Natural Sciences Foundation of China (No. 39670661).     

高糖对大鼠心肌细胞NMDA受体表达、胞内钙和超氧自由基水平的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对心肌细胞促离子型谷氨酸受体亚型NMDA受体（NMDAR）表达、胞内钙水平以及活性氧自由基产生的影响.方法 分离新生（1～3天）大鼠心室肌细胞,心肌细胞与不同浓度葡萄糖（对照组葡萄糖浓度5mmol/L,高糖组葡萄糖浓度33mmol/L）共孵育24 ～ 72h后,用Western blot法检测心室肌细胞NMDAR1和NMDAR2B亚单位的表达水平,活细胞工作站检测胞内Ca2＋水平,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量.结果 与对照组细胞相比,高浓度葡萄糖使心肌细胞的NMDAR2B的表达水平明显上调（P＜0.05）,而NMDAR1的表达则降低.经高糖处理的心肌细胞在收缩时胞内钙水平高于对照细胞,高糖处理使心肌细胞的ROS水平升高,而用MK-801选择性阻断NMDAR可明显降低由高糖所致的胞内ROS增高（与高糖组对比,P ＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖可上调乳鼠心肌细胞NMDAR2B及下调NMDAR1的表达,并增加细胞内Ca2＋水平及ROS的生成,而阻断NMDAR可抑制ROS的生成.提示NMDAR可能参与糖尿病性心肌损害。     

葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞自噬的影响

目的观察葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞自噬的影响。方法建立体外培养乳鼠心肌细胞模型,随机分成对照组（5．5mmol／L）,高糖组（25mmol／L）,对照＋雷帕霉素组（100nmol／L）,高糖＋雷帕霉素组（100nmol／L）。分别测定各组心肌细胞面积;用RT-PCR检测心肌肥大标记基因[心房利钠肽（ANP）、β-肌球蛋白重链（13-MHC）]表达情况;运用Western印迹检测自噬标记性蛋白微管相关蛋白3（LC-3）的表达。结果（1）高糖组心肌细胞肥大相关指标较对照组升高,高糖组LC-3的表达较对照组减低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）高糖＋雷帕霉素组心肌细胞肥大相关指标较对照＋雷帕霉素组升高,高糖＋雷帕霉素组LC-3较对照＋雷帕霉素组减低,但差异均无统计学意义。（3）高糖＋雷帕霉素组心肌细胞肥大相关指标较高糖组减低,高糖＋雷帕霉素组LC-3表达较高糖组升高,差异均有统计学意义。结论（1）培养基中葡萄糖浓度升高可导致心肌细胞肥大,同时合并有心肌细胞自噬水平的下降。（2）在高糖培养基中加入雷帕霉素可升高心肌细胞的自噬水平,同时抑制高糖导致心肌细胞肥大效果。（3）培养基中葡萄糖浓度升高导致心肌细胞肥大的效果可能与心肌细胞自噬水平的改变相关。（4）结合本实验的研究结果,自噬在糖尿病性心肌病方面可能起一定作用。     

安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的：通过研究安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响，以探讨其抗心律失常的作用机制。方法：采用膜片钳全细胞记录技术记录了安律胶囊对单个豚鼠心室肌细胞钾电流的影响。结果：①安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使IK1幅值从给药前的（-2．06±0．29，nA）降低到（-1．95±0．34、-1．67±0．43和-1．62±0．25，nA），大剂量具有显著的统计学意义（P〈0．05）；在对IK1时效关系的实验中，在200斗g／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值钾电流为（-1．60±O．27,nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（-1．56±0．35，-1．34±0．26和-1．26±0．29，nA），无统计学意义（P〉0．05）。②安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使Ito1幅值从未给药时的（1．14±0．17，nA），降低到（1．13±0．17、1．10±0．16和1．06±0．13，nA），但无统计学意义（P〉0．05）。③安律胶囊清膏2、20、200μg／L可剂量依赖性的降低Ik，分别使Ik幅值从给药前的（1．45±0．15，nA），降低到（1．42±0．15、1．29±0．10和1．20±0．11，nA），中剂量组具有显著的统计学意义（P〈0．05），大剂量具有极为显著的统计学意义（P〈0．01）；在对Ik时效关系的实验中，在200μg／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值电流为（1．45±0．15，nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（1．21±0．10，1．20±0．12和1．11±0．13，nA），无统计学意义（P〉0．05）。结论：安律胶囊对IK1有-定的阻滞作用且可剂量依赖性的阻滞Ik，但不具有时间依赖性，对Ito1无阻滞作用，这是其抗心律失常作用的机理之一。